Revision Bibliografica Sobre Los Microorganismos Biodegradadores de LDPE y Sus Efectos en El Material

REVISIÓN BIBLIOGRAFICA SOBRE LOS MICROORGANISMOS
BIODEGRADADORES DE POLIETILENO DE BAJA DENSIDAD Y SUS

EFECTOS EN EL MATERIAL
Nelson Ricardo Acuña Molina
UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSE DE CALDAS

FACULTAD DE CIENCIAS Y EDUCACION
PROYECTO CURRICULAR DE LICENCIATURA EN QUÍMICA
BOGOTA D.C.
2017
REVISIÓN BIBLIOGRAFICA SOBRE LOS MICROORGANISMOS
BIODEGRADADORES DE POLIETILENO DE BAJA DENSIDAD Y SUS
EFECTOS EN EL MATERIAL
Nelson Ricardo Acuña Molina
TRABAJO DE GRADO PARA OPTAR POR

EL TÍTULO DE LICENCIADO EN QUÍMICA
Directores:
Jorge Alonso Leyva Rojas Dr.rer.nat
Josué Anselmo García Ortiz MSc.
Codirector:
Mario Sánchez Rodríguez PhD.
UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSE DE CALDAS

FACULTAD DE CIENCIAS Y EDUCACION
PROYECTO CURRICULAR DE LICENCIATURA EN QUÍMICA
BOGOTA D.C.
2017
I
Nota de Aceptación
Presidente del Jurado
Jurado
Jurado
Bogotá D.C. (01, marzo, 2017)
II
Dedicatoria
A mi madre y a todos los

maestros que incentivaron, y
potenciaron mi curiosidad y
amor a la ciencia, asi como
también a aquellos que me
guiaron y ayudaron para adquirir
mis conocimientos y habilidades
científicas.
III
AGRADECIMIENTOS
Le agradezco a mi madre por su apoyo constante, a mis profesores por todas

sus enseñanzas en especial a mis directores y codirector Jorge, Josué y
Mario por su esfuerzo y apoyo, a todos mis amigos que con sus consejos y
sugerencias contribuyeron de alguna manera en la realización de este
trabajo, en especial a David Leonardo Castilla y a Néstor Alexander
Zambrano que amablemente aportaron por medio de sus revisiones y
sugerencias.
IV
CONTENIDO Pág.
Lista de tablas X
Lista de Figuras XI
Lista de Gráficas XIII
Lista de Anexos XIV
Abreviaturas XV
Glosario XVI
1. RESUMEN 1
2. INTRODUCCIÓN 2
3 OBJETIVOS 2
3.1 Objetivos general 2
3.2 Objetivos específicos 3
4. ANTECEDENTES Y JUSTIFICACIÓN 3
4.1. Definición del problema 3
4.2. Reseña histórica 4
4.3 Alternativas para el control del LDPE 5
4.3.1 Enterramiento en rellenos sanitarios del LDPE 5
4.3.2 La incineración del LDPE 5
4.3.3 La Pirólisis del LDPE 6
4.4. Políticas de reciclaje 6
4.4.1 Problema ambiental causado por el LDPE 7
5 MARCO TEÓRICO 7
5.1 Polímeros 8
5.1.1 Plásticos 8
5.1.2 Poli olefinas 8
5.1.2.1.1 El polietileno (PE) 8
5.1.2.1.2 Clasificación del PE 8
5.1.2.1.2.1 Polietileno de baja densidad (LDPE) 9
5.1.2.1.2.2 Polietileno lineal de baja densidad o (LLDPE) 9
5.1.2.1.2.3 Polietileno de alta densidad (HDPE) 9
5.1.2.1.2.4 Causas de la Inercia química del polietileno 10
5.2 Biopolímeros sustitutos del LDPE 10
5.2.1 Biopolímeros naturales 10
5.2.2 Biopolímeros sintéticos 10
5.2.3 Bioplásticos 11
5.2.3.1 Bioplásticos totalmente biodegradables 11
5.2.3.2 Bioplásticos biofragmentables 11
5.3 Biorremediación 11
5.3.1 Biodegradación de polietileno de baja densidad 11
(LDPE)
5.3.1.1 Biodeterioración 12
5.3.1.2 Asimilación 12
V
5.3.2 Factores a tener en cuenta en la biodegradación 12
del LDPE
5.3.2.1 Ruta de la biodegradación del LDPE 13
5.3.2.2 Iniciadores y aceleradores del proceso de 15
biodegradación, degradación abiótica
5.3.2.2.1 Fotólisis 15
5.3.2.2.2 Oxidación térmica 16
5.3.2.2.3 Oxidación mecano química 16
5.3.2.2.4 Mecanismos de despolimerización 16
5.3.2.2.4.1 Iniciación 16
5.3.2.2.4.2 Propagación 17
5.3.2.2.4.3 Terminación 17
5.3.3 Microorganismos reportados que degradan el 17
polietileno
5.3.3.1 Hongos como agentes degradadores de LDPE 21
5.3.3.2 Bacterias como agentes degradadores de LDPE 21
5.3.3.3 Consorcios microbianos 21
5.3.3.4 Enzimas reportadas 22
5.3.3.5 Biodegradación aerobia y anaerobia 23
5.3.3.5.1 Reacción básica de biodegradación de tipo 23
aeróbico
5.3.3.5.2 Reacción básica de biodegradación de tipo 23
anaeróbico
5.3.3.6 Efecto en la biodegradación en la humedad del 23
medio
5.3.3.7 Efecto del pH en el medio 24
5.3.3.8 Efecto de la temperatura 24
5.3.4 Aditivos utilizados para potenciar la degradación 25
del LDPE
5.3.4.1 El polietileno de baja densidad LDPE con almidón 25
5.3.4.2 Aditivos pro-oxidantes 26
5.3.4.3 Aditivos comerciales 29
5.3.4.4 Biosurfactantes vinculados en la biodegradación 33
del LDPE
5.3.4.5 Sustitutos biodegradables del LDPE 34
5.3.4.5.1 Los polihidroxi alcanoatos PHA 34

5.3.4.5.2 Almidón termoplástico 35
5.4 Técnicas y métodos utilizados en el estudio de la 36
biodegradación del LDPE
5.4.1 Técnicas instrumentales utilizadas para estudiar la 38
5.4.1.1 Técnicas espectrofotométricas, microscópicas y 40
espectrométricas para el estudio de la degradación
del LDPE
VI
5.4.1.1.1 Microscopia electrónica de barrido SEM 41
5.4.1.1.2 Microscopia de fuerza atómica 41
5.4.1.1.3 Espectroscopia UV – visible 41
5.4.1.1.4 Espectroscopia infrarroja con transformada de 42

Fourier (FTIR)
5.4.1.1.5 Espectroscopia de resonancia magnética nuclear 42
NMR
5.4.1.1.6 Desorción láser asistida por la matriz con detección 42
de masas por tiempo de vuelo MALDI-TOF MS
5.4.1.1.7 Espectrometría de plasma inductivamente acoplada 43
a Emisión Óptica ICP-OES
5.4.1.1.8 Espectroscopia de difracción de rayos x (XRD) 44
5.4.1.1.9 Espectrometría fluorescencia de rayos x (XRF) 44

5.4.1.1.10 Espectroscopia de resonancia paramagnética 44
electrónica EPR
5.4.1.1.11 La espectroscopia de absorción atómica (AAS) 45
5.4.1.2 Técnicas cromatográficas para el estudio de la 45
degradación del polietileno de baja densidad LDPE
5.4.1.2.1 Cromatografía de gases acoplado a masas GCMS 45
5.4.1.2.2 Cromatografía de líquidos de alta eficiencia HPLC 46
5.4.1.2.3 Cromatografía de exclusión por tamaño o de 46
permeación en gel
5.4.1.3 Técnicas de análisis de sus propiedades 47
mecánicas: Pruebas de tensión tensile test
5.4.1.3.1 Resistencia a la tensión 47
5.4.1.3.2 Módulo de tensión y la elongación hasta la ruptura 47
5.4.1.4 Técnicas de análisis térmico 47
5.4.1.4.1 Calorimetría diferencial de barrido DSC 48
5.4.1.4.2 Análisis térmico mecánico y dinámico DMTA 48
5.4.1.4.2.1 Análisis termo gravimétrico TGA 49
5.4.2 Métodos y pruebas utilizados en los estudios de 49
biodegradación del polietileno de baja densidad
LDPE
5.4.2.1 Métodos principales de cultivo de microorganismos 52
degradadores de LDPE
5.4.2.2 Medios para la realización de las pruebas 53
5.4.2.2.1 Pruebas de campo (In situ o in vivo) con medios 53
naturales
5.4.2.2.2 Pruebas de simulación con medios seminaturales 53
5.4.2.2.3 Pruebas de laboratorio (In vitro) 53
5.4.2.3 Los inóculos 53
5.4.2.3.1 Cultivos con inóculos amplios o de consorcios 53
5.4.2.3.2 Cultivos microbianos axénicos 53
VII
5.4.2.3.3 Medios líquidos 53
5.4.2.3.4 Medios sólidos 54
5.4.2.4 Pretratamientos del LDPE 54
5.4.2.4.1 Aclimatación natural 55
5.4.2.4.2 Aclimatación artificial / pruebas de laboratorio 55
5.4.2.4.2.1 Ruptura por hidrólisis 55
5.4.2.4.2.2 Oxidación térmica 55
5.4.2.4.2.3 Procedimiento de foto degradación 55
5.4.2.4.2.4 Procedimiento de termo degradación 55
5.4.2.5 Pruebas de biodegradación 55
5.4.2.5.1 Prueba de enterramiento en suelo 55
5.4.2.5.2 Prueba de compostaje 56
5.4.2.5.3 Prueba de biodegradación en cajas Petri 56
5.4.2.5.3.1 Formación de zonas claras 56
5.4.2.5.4 Prueba de platos con hongos 56
5.4.2.5.4.1 Método de inoculación 56
5.4.2.5.5 Prueba de biodegradación In-vitro 57
5.4.2.5.5.1 Prueba de cultivo líquido 57
5.4.2.5.5.2 Prueba de toxicidad 57
5.4.2.5.6 Pruebas de hidrofobicidad 57
5.4.2.5.6.1 La prueba BATH (Bacterial Adhesion to 57
Hidrocarbons)
5.4.2.5.6.2 Prueba de salado SOT (por sus siglas en inglés: 58
salting out test)
5.4.2.5.6.3 Estudios de absorción de agua 58
5.4.2.5.6.1 Prueba del ángulo de contacto con agua 58
5.4.2.5.7 Pruebas de enzimas 58
5.4.2.5.8 Pruebas de evolución de gas (CO2 or CH4) 58
5.4.2.5.8.1 La prueba Sturm 59
5.4.2.5.8.2 Radiomarcación 59
5.4.2.5.8.3 Prueba de respiración 59
5.4.2.5.9 Prueba de la pérdida de masa 59
5.4.2.5.9.1 Porcentajes de degradación del LDPE reportados 60
por algunos estudios
5.4.2.5.10 Pruebas físicas de la biodegradación 61
5.4.2.5.10. Índice de fluidez 61
1
5.4.2.6 Pruebas de identificación microbiana 62
VIII
5.4.2.6.1 Viabilidad del biofilm microbiano 62
5.4.2.6.2 Pruebas de caracterización preliminar 62
5.4.2.6.3 Pruebas de identificación especifica 62
5.4.2.7 Productos de la biodegradación 62
5.5 Metodología propuesta 63
5.5.1 Test de viabilidad cuenta de microorganismos 64
viables por dilución en placa
5.5.1.1 Obtención de muestra y selección de los 65
microorganismos degradadores de LDPE en medio
líquido SM
5.5.1.2 Identificación preliminar 65

5.5.1.3 Pruebas preliminares de identificación de hongos 66
5.5.1.4 Ensayo de biodegradación in vitro 67
5.5.2 Prueba de pérdida de masa 67
5.5.3 Identificación específica 67
5.5.3.1 Técnica polimorfismos de longitud de los 69
fragmentos de restricción (RFLP)
5.5.4 Pruebas instrumentales 69
5.5.4.1 Aplicación del FTIR al estudio de la biodegradación 69
del LDPE
5.5.4.1.1 Variantes de la técnica 69
5.5.4.1.1.1 La espectroscopia FT-IR ATR 69
5.5.4.1.1.2 FT-IR reflectancia difusa (DRIFT) 70
5.5.4.1.2 Índices de cuantificación de la oxidación 70
5.5.4.1.2.1 Índice de carbonilo (CI) 70

5.5.4.1.2.2 Índice vinilo (𝐼V) 70
5.5.4.1.2.3 Porcentaje (%) de cristalinidad del LDPE 70
5.5.4.2 Cromatografía de gases acoplada a 71
espectroscopia de masas GCMS
5.5.4.2.1 Cuantificación de la producción de CO2 71
6 ANÁLISIS 72
7. CONCLUSIONES 77
8. RECOMENDACIONES 78
9. BIBLIOGRAFÍA 79
IX
LISTA DE TABLAS
No Pág.
Tabla 1 Microorganismos biodegradadores de LDPE 18
Tabla 2 Enzimas involucradas en la biodegradación del 22
polietileno
Tabla 3 Clasificación esquemática de los diferentes medios 24
ambientes en que ocurre la biodegradación del
LDPE
Tabla 4 Estudio sobre la biodegradación del LDPE con 26
prooxidantes
Tabla 5 Aditivos del polietileno de baja densidad (LDPE) 26
Tabla 6 Algunos aditivos comerciales reportados 29
Tabla 7 Susceptibilidad del polietileno modificado con 32
bionolle
Tabla 8 Biosurfactantes producidos por distintos 33
microorganismos
Tabla 9 Sustitutos del Polietileno de baja densidad (LDPE) 35
Tabla 10 Técnicas utilizadas para estudiar la degradación del 38
Polietileno de baja densidad (LDPE)
Tabla 11 Principales técnicas de análisis térmico 48
Tabla 12. Test y métodos de cultivo usados para evaluar la 49
Tabla 13 Revisión de los métodos para el estudio de la 54
degradación del LDPE
Tabla 14 Posibles residuos de la biodegradación 62
Tabla 15 Resultados en cifras de los elementos estudiados 73
Tabla 16 Reactivos requeridos con sus respectvas 105
concentraciones
Tabla 17 Listado de sustancias para los medios y pruebas 111
Tabla 18 Procedimientos sugeridos para la siembra 114
Tabla 19 Relación entre género y resultados obtenidos en las 115
pruebas bioquímicas
Tabla 20 Algunas características preliminares bacterianas 116
Tabla 21 Algunas características preliminares bacterianas 117

Tabla 22 Técnicas de muestreo para espectrometría FT-IR 119
para el análisis del LDPE
Tabla 23 Condiciones óptimas de corrida cromatográfica 120
X
LISTA DE FIGURAS
Pag.
Figura 1 a Polietileno lineal de baja densidad (LLDPE) 9
Figura 1 b Polietileno de baja densidad (LDPE) 9
Figura 1 c Polietileno de alta densidad HDPE 9
Figura 2 Factores que afectan la biodegradación del LDPE 13
Figura 3 Rutas hipotéticas de transformación del polietileno 14

hasta su total mineralización
Figura 4. Biodegradación del PE por β -oxidación 14
Figura 5 Iniciadores de la oxidación del PE 15
Figura 6 Mecanismo de ruptura hemolítica o fotólisis 16
Figura 7 Iniciación a partir de un agente metálico 16
Figura 8 Propagación de la foto oxidación 17
Figura 9 a Mecanismos de oxidación siguiendo las reacciones 17

Norrish tipo 1 y 2
Figura 9 b Oxidación para la formación de ácidos grasos o 17

esteres
Figura 10 Técnicas y métodos disponibles para el estudio de la 37
degradación del LDPE
Figura 11 Esquema metodológico básico propuesto 64
Figura 12 Métodos preliminares de identificación metabólica 66
Figura 13 Metodología a realizar para la identificacion específica 68
Figura 14 Procedimiento para el aislamiento de los 100

microorganismos biodegradadores de LDPE
Figura 15 Procedimiento para el cultivo, el aislamiento y la 101
identificación de los microorganismos degradadores
de LDPE
XI
Figura 16 Procedimiento para aislar los microorganismos 102
degradadores de LDPE y su posterior propagación
para realizar la extracción del DNA
Figura 17 Ensayo de biodegradación in vitro 103
Figura 18 Método propuesto es el registrado por Mahaku 104
Figura 19 Método tomado para extraer ADN es la registrada por 105

El centro internacional de agricultura tropical-CIAT
Figura 20 Cuantificación del DNA microbiano 105
Figura 21 Propuesta metodológica para realizar la técnica RFLP 106
Figura 22 Identificación bacteriana utilizando, prueba de agar 107

LIA, Kligler, tioglicolato y triptófano
Figura 23 Pruebas de identificación microbiana, pruebas de 108
almidon, TCI, catalasa oxidasa
Figura 24 Pruebas de descarboxilación de lisina ornitina, 109
fenilalanina deaminasa
Figura 25 Pruebas RM VP, OF y fermentación de glucosa 110
Figura 26 Medidas a tener en cuenta para la preparación de la 118

muestra cuenta una muestra blanco, de PE no tratado
en las pruebas, y un control negativo
Figura 27 Método propuesto para analizar el PE degradado 119
Figura 28 Metodología para el análisis de la evolución de CO2 121
usando GCMS
Figura 29 Cromatograma donde se muestran los gases que 120
pueden ser cuantificados por CG-DCT
Figura 30 Metodología para el análisis de metabolitos usando 121
GCMS
XII
LISTA DE GRÁFICAS Pág.
Gráfica 1. A Variación de la producción de mundial de 4

plásticos desde 1950 hasta 2010
Gráfica 1. B Variación de la producción de mundial de 4
plásticos desde 1950 hasta 2013
Gráfica 2. Proporción de géneros reportados que se 75
encuentran vinculados con la biodegradación de
(LDPE)
Gráfica 3. Técnicas más utilizadas para estudiar la 76

XIII
LISTA DE ANEXOS Pág.
ANEXO A1. Aislamiento y cuenta de los microorganismos 100

biodegradadores de LDPE
ANEXO A2. Cultivo de microorganismos biodegradadores de 101
LDPE
ANEXO B. Purificación de microorganismos biodegradadores 102
de LDPE
ANEXO C Prueba de biodegradación de LDPE 103
ANEXO D Extracción de DNA de hongos 104
ANEXO E. Extracción de DNA de bacterias 105
ANEXO F. Discriminación entre grupos microbianos utilizando 106
RFLP
ANEXO G1. Pruebas de identificación bacteriana 107
ANEXO H Listado de sustancias para los medios y pruebas 111
ANEXO I Procedimiento sugeridos para la siembra 114
ANEXO J1 Tabla de características preliminares bacteriana 115
ANEXO J2 Características preliminares bacterianas 116
ANEXO J3 Características preliminares bacterianas 117
ANEXO K1 Procedimiento para el análisis del polietileno 118
usando FTIR
ANEXO K2 Procedimiento para el análisis del polietileno 119
usando FTIR
ANEXO L1 Cuantificación de la producción de CO2 e 120
identificación de metabolitos
ANEXO L2 Cuantificación de la producción de CO2 e 121
identificación de metabolitos
XIV
ABREVIATURAS
AFM: Microscopio de fuerza atómica. (del inglés Atomic Force

Microscopy)
CI: Carbonyl Index
CL: Chimio Luminicence
DSC: Diferential Scaning Calorimetry
EA: Elemental Analizer
ESR: Electron spectroscopy resonance
FTIR-ATR: free time infrared Attenued total refractance
FTIR: Free time infrared
GCMS: Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry
HPLC: High Phase Liquid Cromatography
HDPE: High density polyethylene
IV: Vinyl Index
ICP-OES: inductively coupled plasma-optical emission
spectroscopy
LDPE: low density polyethylene
LLDPE: Linear low density polyethylene
MALDI-TOF: Matrix assisted Laser Desorption time of flight
NMR: Nuclear Magnetic Resonance
OM: Optical microscopy
PBS: Polybutylene succinate
PBSA: Poly Butylen Succinate Adipate
PCL: Polycaprolactone
PC: Polycarbonate
PCR: Polymerase Chain Reaction
PE: Polyethylene
PES: Polyethylene Succinate
PET: Poly ethylene tereftalate
PHB: Polihidroxibutirato
PHBV: Poli-3-hidroxibutirato-co-3-hidroxivalerato
PMMA: Poly methyl metacrilate
PP: Polypropylene
PS: Polyestyrene
PVC: Polyvinylchloride
RFLP: Restriction Fragment Lenght Polymorphisms
SEC: size exclusion chromatography
SEM: Scanning electron microscopy
TGA: Thermogravimetric analysis
TLC: Thin lawyer chromatography
UVS: Ultraviolet Spectroscopy
XRD: X-Ray Difraction
XV
GLOSARIO
BIODEGRADACIÓN: es un proceso gradual de descomposición o

acumulación causado por seres vivos, los cuales llevan a un cambio
químico y estructural de las sustancias o materiales orgánicos e inorgánicos
contaminantes.
BIOCOMPATIBILIDAD: En 1987, la sociedad europea de biomateriales
definió la biocompatibilidad como la habilidad de un material de actuar con
una adecuada respuesta al huésped en una aplicación específica.
BIOFILM: Es una formación celular junto a los productos metabólicos de
tales células que crecen en la superficie de un material o sustancia.
BIOREMEDIACIÓN: Es un tipo de biotecnología denominada biotecnología
verde caracterizada por el uso de seres vivos o sus productos metabólicos
para el control de contaminantes.
BIOSURFACTANTES: son un grupo heterogéneo de metabolitos
secundarios, producidos por seres vivos, principalmente por hongos y
bacterias. Estas moléculas tienen propiedades emulsificantes y dispersantes,
disminuyen la tensión superficial del agua de 72 a 25 mN/m
aproximadamente.
BIOTECNOLOGÍA: La biotecnología se define como: "Cualquier aplicación
técnica que usa sistemas biológicos, organismos vivos o sus derivados, para
fabricar o modificar productos o procesos para un uso específico” [1]. La
biotecnología ha existido desde que la raza humana utilizó por primera vez la
fermentación para hacer pan, queso y vino [1].
POLÍMERO BIODEGRADABLE: no especifica el tiempo y las condiciones
bajo las cuales el polímero se degrada, solo indica que es degradable.
CLONACIÓN: obtención de una población homogénea de células por el
aislamiento de colonias individuales repetidas. De esto también se obtienen
en forma pura cualquier número moléculas de DNA recombinante portadas
por tal célula, el término es también usado en este contexto (frecuentemente
como clonación de genes) y por una mayor extensión (con menor
justificación) para las reacciones usadas en estas construcciones de tales
recombinantes [2].
CROMÓFOROS: son los grupos funcionales que absorben ciertas
longitudes de onda del espectro visible y refleja otras.
COMPOSTABLE: material que se degrada en condiciones de compost, y
cuyo nivel de biodegradación debe ser de al menos un 90% y debe ser
logrado en menos de seis meses de acuerdo a la European standard on
compostable packaging materials, EN13432.
ENLACE COVALENTE: es una unión de dos o más átomos de elementos
distintos, que se caracteriza por que los electrones externos de enlace son
compartidos de forma simétrica.
XVI
FOTOLISIS: ruptura de un enlace mediante la energía transferida por
fotones (luz) altamente energética, ejemplo UV.
FUENTE DE CARBONO: es el material o sustancia que provee a los
microorganismos de carbono, ejemplo: el polietileno.
METABOLITO: producto bioquímico generado en el metabolismo celular.
MINERALIZACIÓN: acción natural de transformación de compuestos
químicamente complejos a otros de poca o ninguna complejidad.
MONÓMERO: una estructura mínima o básica que se puede unir para formar
una cadena o macro estructura.
OLEFINA: compuestos químicos a base de carbono y que poseen enlaces
dobles.
POLÍMERO: es una macromolécula o aglomeración de muchos monómeros
los cuales están unidos por enlace covalente.
PROOXIDANTES: sustancias químicas que en virtud de su naturaleza
química generan reacciones de oxidación.
RADICALES LIBRES: son especies que contienen electrones de valencia
desapareados los cuales son bastante reactivos.
RELAJACIÓN: procesos de pérdida de viscoelasticidad, son fenómenos
cinéticos, también denominado dispersiones. Cuando un material polímero
se desplaza de su equilibrio por efecto de solicitaciones externas, el sistema
tiende a volver a su estado inicial al cesar éstas.
TERMOPLÁSTICOS: son plásticos que son reformables o remoldeables
cuando se les aplica una temperatura y presión.
TRANSICIÓN VÍTREA: se define como la temperatura a la cual un polímero
amorfo (o la región amorfa de un polímero parcialmente cristalino) cambia de
una situación de ser duro y relativamente quebradizo a una condición
viscosa y gomosa.
VISCOELASTICIDAD: cuando los materiales poliméricos disipan
(calentándose o deformándose) una parte de la energía con que se les
excita.
XENOBIÓTICO: sustancia de origen antropogénico y que puede afectar
negativamente a los seres vivos.
XVII
1. RESUMEN
El uso irracional y la resistencia a la degradación ambiental son las causas de

que el polietileno de baja densidad (LDPE del ingles low density polyethylene)
se acumule, lo que genera un grave problema medioambiental [3], debido a
esto se han hecho investigaciones en la búsqueda de soluciones al problema,
siendo las más importantes el sustituir completamente el LDPE o acelerar su
proceso de biodegradación.
El presente trabajo es un estudio bibliográfico en el cual se recopilan, comparan
y organizan amplia y sistemáticamente los aspectos más relevantes reportados
sobre la biodegradación del polietileno de baja densidad (LDPE) en los cuales
están incluidos: los microorganismos capaces de utilizarlo como fuente de
carbono; las enzimas utilizadas y la comparación de sus eficiencias a partir de
la pérdida de masa, considerando las condiciones en las que se realizaron
dichas pruebas; todas las técnicas de análisis disponibles, los aditivos o
sustitutos existentes; Finalmente se propone una estrategia metodológica de
identificación de los microorganismos y cuantificación de la biodegradación que
sea adecuada para su implementación local.
Palabras clave:
Polietileno de baja densidad, biodegradación, microorganismos, pruebas

espectroscópicas y microscópicas.
ABSTRACT
Irrational use and resistance to environmental degradation are the causes of
Low Density Polyethylene (LDPE) accumulating, which generates a serious
environmental problem [3], due to this research has been done in the search for
solutions to the problem, the most important being to completely replace the
LDPE or accelerate its biodegradation process.
The present work is a bibliographical study in which the most relevant aspects
reported on the biodegradation of low density polyethylene (LDPE) are
collected, compared and organized in a broad and systematic way, including:
microorganisms capable of being used as a source of carbon ; The enzymes
used and the comparison of their efficiencies from the loss of mass, considering
the conditions under which the tests were performed; All available analytical
techniques, existing additives or substitutes; Finally, a methodological strategy
for the identification of microorganisms and the quantification of biodegradation
that is adequate for their local implementation is proposed.
Keywords:
Low density polyethylene, biodegradation, microorganisms, spectroscopic and
microscopic proofs.
1
2 INTRODUCCIÓN
Globalmente se desechan 57 millones de toneladas anuales de polietileno de

baja densidad LDPE, (por lo menos para el año 2005) [4]. Tan solo en Bogotá
se desecha un estimado de 428 toneladas anuales, y este material puede tardar
entre 100 y 1000 años para degradarse, por lo que su acumulación genera
graves problemas [5]. Como forma de afrontar este desafío los investigadores
han tomado dos enfoques principales: la búsqueda de posibles sustitutos o
aditivos y el desarrollo de tecnologías y/o biotecnologías que permitan la
biodegradación acelerada del polímero.
Como posibles sustitutos se encuentran los biopolímeros alternativos como el
polihidroxibutirato (PHB), sin embargo aún poseen altos costos de producción
que los hacen poco competitivos [6, 7], actualmente, los esfuerzos se dirigen a
la búsqueda de sustratos de menor costo [6, 7]. Otro biopolímero muy utilizado
es el almidón, debido a que es altamente biodegradable, no obstante también
tiene limitaciones como su baja resistencia a la humedad, baja procesabilidad e
incompatibilidad con algunos polímeros hidrofóbicos [8].
Entre las tecnologías desarrolladas se encuentra la pirólisis pero es muy cara y
consume mucha energía y la incorporación de aditivos estimulantes del proceso
de biodegradación al LDPE, como ejemplos están el almidón, la celulosa, los
prooxidantes y surfactantes los cuales contrarrestan su inercia y resistencia al
ataque microbiano [9, 10, 11] sus inconvenientes esta en que aumentan los
costos y generan residuos potencialmente contaminantes, a diferencia de las
antes mencionadas la biotecnología es una alternativa popular por sus bajos
costos y su relativo bajo impacto ambiental, su único inconveniente es el largo
tiempo que aún se toma en degradar el LDPE.
Los investigadores que han estudiado la biodegradación del LDPE en todas sus
etapas y condiciones, se han apoyado en técnicas físico-químicas e
instrumentales, tales como: propiedades mecánicas, microscopia de
fluorescencia, espectroscopia infrarroja (FTIR), o cromatografía de gases
acoplada a espectrometría de masas (GCMS), entre muchas otras, ya sea para
identificar los microorganismos degradadores y sus enzimas, los productos
intermedios o finales y la velocidad de la biodegradación.
3 OBJETIVOS
3.1 OBJETIVO GENERAL
 Realizar una revisión bibliográfica sobre la biodegradación del polietileno,

en el cual se analicen las técnicas actuales en el estudio de la
biodegradación del polietileno de baja densidad, además de aquellos
microorganismos que naturalmente lo degradan, y a partir de los
resultados proponer una metodología viable, que permita identificar los
microorganismos biodegradadores del LDPE y su eficiencia.
2
3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Realizar una revisión bibliográfica sobre los estudios de la

biodegradación del LDPE.
 Aportar una propuesta metodológica que permita identificar los
microorganismos que degradan el LDPE, aislados en los rellenos
sanitarios y humedales ubicados en la sabana de Bogotá, incluyendo su
posible eficiencia degradadora, que sea viable, rápida y eficiente
teniendo en cuenta las condiciones de los centros de estudio de
Colombia.
4 ANTECEDENTES Y JUSTIFICACIÓN
4.1 DEFINICIÓN DEL PROBLEMA

En el mundo la producción de plásticos para el año 2014 alcanzó la cifra de
311 millones de toneladas, entre estos los polímeros más utilizados están el:
polietileno (PE), polipropileno (PP), poli cloruro de vinilo (PVC), polietileno-
tereftalato (PET), poli estireno (PS), policarbonato (PC), y poli metil metacrilato
(PMMA) (Plexiglás) [12]. (Ver Grafica 1) Estos siete polímeros componen cerca
del 98% de todos los polímeros y plásticos encontrados en la vida diaria [12], de
los cuales el 39,5% se utiliza en empaques desechables [13, 14]. De la
producción total, el polietileno y el polipropileno componen el 48%. [15]. Y de
acuerdo estimaciones son desechadas aproximadamente 57 millones de
toneladas anuales de polietileno [16, 17]. El polietileno (PE) al igual que todos
los demás plásticos posee una vida de alrededor de 1000 años y debido a que
su velocidad de degradación o porcentaje de reciclaje es mucho menor que su
producción y eventual desecho se genera su acumulación en ríos, mares y
suelos, amenazando la diversidad biológica global, ya gravemente afectada.
Para conocer los efectos de su acumulación (ver problema Ambiental
causado por el polietileno PE no reciclado).
América latina produjo en el 2014 el 5 % de la producción total [14], siendo el
polietileno el de mayor demanda con un 37%, y el 9% corresponde al LDPE [5],
gran parte será desechado y terminara en los ecosistemas naturales, y
considerando que América Latina cuenta con el mayor número de países más
ricos en biodiversidad [18], se puede entender la magnitud del problema. En
Colombia el 14% de todos los residuos que se arrojan corresponde a desechos
plásticos [19]. El polietileno de baja densidad al ser un xenobiótico representa
una amenaza para los ecosistemas colombianos los cuales poseen el segundo
lugar en biodiversidad con 56.343 especies [20], por lo que es crucial que se
tomen medidas pertinentes para que esta no se vea afectada. En Bogotá en el
2005 la unidad ejecutiva de servicios públicos-UESP (actualmente unidad
administrativa especial de servicios públicos-UAESP) juntó a la universidad de
los Andes estimó que para ese año llegaron 950 toneladas de materias primas
reutilizables MPR, de los cuales el 45% (428) correspondían a residuos
3
plásticos, de éstos la mayor cantidad correspondía al polietileno de alta
densidad HDPE (por sus siglas en ingles High density polyethylene) [5, 21] y
para el año 2011 entre los residuos sólidos residenciales el polietileno
correspondía al 62% [5].
Gráfica 1 a Variación de la producción de mundial de plásticos desde 1950 hasta 2010, tomada
de [22]; 1. b Variación de la producción de mundial de plásticos desde 1950 hasta 2013. Basada
en los datos de PlasticsEurope del 2010 y 2013 [23, 14].
4.2 Reseña histórica

Durante 60 años, desde la primera mitad del siglo XX el crecimiento de la
producción ha sido exponencial como lo muestran las Gráficas 1a y 1b.
Actualmente presenta un crecimiento anual del 1,5% de acuerdo a Plastic
Europe [14].
Comúnmente se había pensado que los plásticos no eran tóxicos para el medio
ambiente y no se consideraban xenobióticos, por lo que no se hacían estudios
o campañas para su minimización y control, se desmintió en estudios hechos en
la década de los setenta, en los que se demostró la presencia de partículas
pequeñas de plástico en la superficie del mar Sargasso en 1971, que causaban
la muerte a muchos seres vivos que las ingerían [24, 25], en los ochentas y
noventas se había demostrado concluyentemente que los plásticos estaban
muy lejos de ser inofensivos.
Los primeros estudios sobre la biodegradación del polietileno se remontan al

año 1980 por los investigadores AC Albertsson [9] y ZG banhidi, los cuales
muestran la realización de estudios sobre la producción de 14CO2 por los
hongos Fusarium rodolens. Acremonium kiliense, Aspergillus versicolor y
Verticillium lecanii que eran alimentados con láminas de polietileno de alta
densidad HDPE marcadas con 14C, con lo cual confirmaban que el plástico era
la fuente de carbono. Posteriormente en 1991 se encontró que las especies
Streptomyces badius 252, Streptomyces, setonii 75Vi2, y viridosporus de
Streptomyces T7A producían una enzima extracelular degradadora de
4
polietileno puro o con aditivos, como almidón, pro oxidantes, también se
descubrió que eran enzimas degradadoras de lignocelulosa [26] [27].
En 1998 Iiyoshi y colaboradores [28] demuestran la biodegradación del PE
por los enzimas lignina peroxidasa, manganeso peroxidasa y la fenol oxidasa o
lacasa, basados en varios estudios hechos sobre biodegradación de lignina
entre los cuales se podrían nombrar los hechos por Kirk TK, Farrell RL en 1987
[29].
Los bioplásticos no son nada nuevo, los primeros producidos datan de 1845,
cuando se produjo por primera vez el ácido poli láctico (PLA), un poliéster
termoplástico, hecho a partir de la fermentación de productos agrícolas como
almidón de maíz, La Dow químicos revivió la producción de PLA en 1950, pero
los altos costos de producción detuvieron su uso masificado [30].
En 1980, la British chemical industries (ICI) desarrolló Biopol, un bioplástico a
partir de los polímeros poli hidroxialcanoatos PHA que son producidos por
muchas especies de bacterias a partir de azucares de plantas o aceites, pero
una vez más, la ICI fue incapaz de producir biopol de forma económica como
para competir con plásticos convencionales [30]. Monsanto compró Biopol a ICI
en 1996 [30]. En 1998. Monsanto descontinuo la operación de producción de
bioplasticos debido a los altos costos y las limitadas oportunidades comerciales
[30]. Monsanto vendió sus acciones a la U.S. bioscience company, Metabolix
que inició investigaciones y desarrollo de procesos de manufactura de plásticos
a base de PHB a bajos costos [30]. En el 2006, metabolix se unió a la gigante
agricultora Archer Daniels Midland para comercializar un bioplásticos
denominado Mirel compañía que lidera la producción y venta de bioplásticos
para productos de uso diario, tanto de larga vida como desechables [30], claro
está, a precios más caros que los producidos con plásticos a partir de materias
petroquímicas. Por otro lado otros autores afirman que los siguientes PHA el
Poli (butileno Succinato) (PBS), poli (etileno Succinato) (PESu), o el copolímero
poli (butileno Succinato -co-butilen adipato (PBSA), son miembros de un grupo
denominado comercialmente como ‘Bionolle’ inventados por Showa Denko
(Japón) in 1990. [31, 32, 33, 34, 35, 36]. Durante el presente siglo veintiuno, ha
habido toda una explosión de investigaciones en torno a éste tipo de materiales,
de los cuales se ha basado parte de esta investigación.
4.3 Alternativas para el control del LDPE

4.3.1 Enterramiento en rellenos sanitarios del LDPE
El enterramiento tiene asociadas sus propias limitaciones, como que la tierra
permanece inutilizable por un largo periodo de tiempo, de no ser por eso la
tierra se podía utilizar para la agricultura y otras actividades relacionadas [37].
La tasa de degradación del polietileno es muy lenta en los rellenos, debido a
que es un ambiente anaerobio, siendo degradado en alrededor de 500 años
[38, 39].
4.3.2 La incineración del LDPE
Es común en países en desarrollo, hacer esto libera gases como: CO, CO2,
PAHs, CCl4, dioxinas y furanos, etc. causantes de enfermedades como el
5
cáncer de pulmón, ataques cardiacos y desordenes respiratorios como el asma.
[40, 41, 42], Los productos finales de la incineración son cenizas y gases. Se
estima que la huella de carbono del LDPE o polietileno es cercana a 6 kg CO 2
por kg de plástico [43].
4.3.3 La pirólisis del LDPE

Una forma de eliminación de los residuos plásticos es a través de la pirolisis,
muchos investigadores han estudiado la pirolisis del polietileno [44, 45]. La
pirólisis con plasma es un método efectivo para destruir el polietileno de una
manera ambientalmente amigable. El método usa una antorcha de plasma en
un ambiente carente de oxígeno. El método tiene lugar a muy altas
temperaturas (usualmente entre 325°C - 850°C). Las variaciones en
temperatura durante la pirólisis causan la producción diferentes gases. Por lo
tanto, a baja temperatura, usualmente los gases que se producen son: dióxido
carbono, etileno, propileno, monóxido de carbono, butadieno y metano,
mientras que, a altas temperaturas se producen adicionalmente: dióxido de
carbono, monóxido de carbono y etileno, benceno, metano e hidrógeno [38, 46].
Sus inconvenientes son los altos costos por el elevado consumo energético y
las tecnologías.
4.3.4 Políticas de reciclaje

El reciclaje como hábito, debe ser parte de las buenas costumbres de toda
nación, desafortunadamente se estima que solo el 1% del plástico desechado a
nivel mundial se recicla [14], aunque existen ejemplos alentadores de que si es
posible su máxima recuperación mediante el reciclaje, por ejemplo en el 2012
en el continente europeo la recuperación de energía alcanzó el 62% a través
del reciclaje, siendo uno de los mejores índices de reciclaje [14].
En la actualidad el reciclaje disminuye los impactos negativos y la demanda de
materias primas vírgenes. Aunque cabe mencionar que existen múltiples
restricciones, por lo que no es una solución íntegra para la problemática
ambiental y entre estos inconvenientes están:
 Los termoplásticos pueden no ser reciclados si están tan contaminados
que es más costoso limpiarlos que botarlos [5].
 Los plásticos pierden sus buenas cualidades a medida que son
reciclados, debido a las reacciones químicas, por lo que en la práctica el
reciclaje se limita a unas cuantas veces.
 El reciclaje no deja mucha ganancia y a veces es nula, por lo que solo
es viable cuando hay mucha ganancia de por medio.
 La separación de los plásticos no es tan fácil, debido a que no todos los
plásticos son iguales se requiere personal capacitado, lo cual no es
barato [5].
6
4.4 Problema ambiental causado por el LDPE
Se ha informado la muerte de animales terrestres y acuáticos debido al
consumo o atrapamiento en bolsas de polietileno [32]. El polietileno bloquea su
tracto digestivo, también se sabe que los restos del polietileno no digerido
después de la muerte de los animales son de nuevo ingeridos por algún otro
animal lo que le ocasiona la muerte, y el ciclo continúa [47]. El polietileno no
digerido es responsable de varios problemas en animales entre los que se
podría mencionar:
 Dificulta el proceso digestivo, el proceso de fermentación y el correcto
mezclado de los alimentos en el estómago [47].
 El polietileno ingerido bloquea la apertura entre el omaso y retículo que
llevan a la muerte del animal si el polietileno no se retira [47].
 La impacción: debido a la acumulación de una gran cantidad de rumen
las bolsas de polietileno conducen a una ruminotomía [47].
 El timpanismo: debido al bloqueo del retículo y omaso con el polietileno,
la acumulación de gases del rumen llevan a la muerte del animal si no se
quita apropiadamente [47].
 La inmunosupresión: la acumulación de polietileno en el estómago de los
animales (la vaca) lleva a una sensibilidad aumentada a las infecciones
como el septicemia hemorrágica [47].
Debido a la polución “blanca” en el medio ambiente marino, mínimo 267

especies están siendo afectadas en las que se incluyen todos los mamíferos,
tortugas marinas (86%) y aves marinas [48].
Quizá como material no sea químicamente tóxico, pero en los productos

plásticos pueden existir monómeros residuales no unidos químicamente,
agentes polimerizántes, productos de degradación, los cuales se podrían filtrar
en los alimentos, podrían ser los ftalatos que son plastificantes usados para
hacer a los plásticos suaves y flexibles como por ejemplo el bisfenol A, el Di-2-
Etil Hexil ftalato (DEHP), di-n-butil ftalato (DBP)y el butil bencil ftalato (BBP), los
cuales están asociados a anormalidades reproductivas, tal como un bajo conteo
de esperma, cambios hormonales, engrandecimiento de las glándulas de la
próstata, anormalidades en el número de cromosomas en los óvulos y cambios
precancerosos en el seno y la próstata, obesidad y resistencia a la insulina [49].
El enterramiento de las bolsas y láminas de polietileno en el suelo provoca

fenómenos como la obstrucción del agua, provocando la pérdida de fertilidad y
devastación del suelo para el cultivo agrícola [32, 11].
5 MARCO TEORICO
A continuación se presentarán brevemente los conceptos más importantes en

este estudio.
7
5.1 Polímeros
Son sustancias macromoleculares, lo que significa que tienen un alto peso
molecular y que se forman por la unión de unidades moleculares discretas
denominadas monómeros, las cuales están unidos entre sí mediante enlace
covalente.
5.1.1 Plásticos
Son polímeros sintéticos generalmente de naturaleza química hidrófoba, que
normalmente poseen una alta durabilidad y resistencia, suelen no tener un
punto de fusión fijo y poseen en determinado intervalo de temperaturas
características flexibles y moldeables. Se calcula que pueden tardar entre 100 y
1000 años para degradarse dependiendo del tipo de plástico [42, 40, 50]. La
american Society for testing materials (ASTM) define plástico como:
“Cualquier material de un extenso y variado grupo que contiene como elemento
esencial una sustancia orgánica de gran peso molecular, siendo sólida en su
estado final; ha tenido o puede haber tenido en alguna etapa de su manufactura
(fundido, cilindrado, prensado, estirado moldeado, etc.) diferentes formas de
fluidificación, junta o separada, de presión o calor”.
5.1.2 Poli olefinas

Las poli olefinas son polímeros saturados compuestos exclusivamente por
carbono e hidrogeno y tienen un amplio rango de aplicaciones. Son ejemplos el
polipropileno PP y el polietileno PE, cuya fórmula general es CnH2n donde “n”
es el número de átomos de carbono, estos son los más usados por la
versatilidad que presentan y además son producidos a partir de materias
primas petroquímicas baratas [29].
5.1.2.1.1 El polietileno (PE)

El polietileno es un termoplástico compuesto exclusivamente por carbono e
hidrogeno, cuya formula general es [CH2CH2CH2]n que es un tipo común de
plástico, debido a muchas de sus cualidades y propiedades [51]. Algunas de las
cuales son: cristalinidad 50 a 60%, temperatura de fusión entre el rango de 110-
115 °C. Aunque existen múltiples tipos de PE pueden ser clasificados por un
rango de densidad 0.910-0.940 [g/cm3] [52].
5.1.2.1.2 Clasificación del PE

El polietileno al igual que cualquier polímero no posee un único grado de
cristalinidad, e incluso una sola muestra puede poseer varios grados de
cristalinidad agregados, sin embargo el polietileno tradicionalmente y por
cuestiones mecánicas, de apariencia y practicidad se puede clasificar en tres
tipos básicos de acuerdo a su grado de polimerización:
8
5.1.2.1.2.1 Polietileno de baja densidad LDPE
Su estructura es muy ramificada (en cerca de 2% de los átomos de carbón)
[51]. Su peso molecular es de 100.000-300.000 [g/gmol] y su densidad es de
0,90-0,91 [gr/cm3] siendo el de menor densidad y esto se ve reflejado en sus
cualidades reológicas, se usa en la fabricación de bolsas desechables.
5.1.2.1.2.2 Polietileno lineal de baja densidad o (LLDPE)

El cual es una variante poco ramificada, se podría clasificar como de
cristalinidad intermedia, con un valor de 0,915 g/cm 3 siendo relativamente
compacto.
5.1.2.1.2.3 Polietileno de alta densidad (HDPE)

Su estructura presenta el mayor grado de linealidad, su peso molecular es de
200.000-400.000, [g/gmol] y su densidad es de 0,94-0,97 0,91-0,94[gr/cm3],
debido a esto es un material muy rígido y fuerte siendo usado en la fabricación
de canecas plásticas.
a)
1000
b)
c)
4000
1000
Figura 1 estructuras del polietileno, a) polietileno lineal de baja densidad
(LLDPE); b) polietileno de baja densidad (LDPE);c) pol ietileno de alta densidad
HDPE.
9
5.1.2.1.2.4 Causas de la Inercia química del polietileno
De acuerdo a Arutchelvi [53], el polietileno pero también las poliolefinas en
general son materiales inertes no susceptibles a la biodegradación por las
siguientes razones:
 Por los esqueletos hidrofóbos, que consisten en largas cadenas de

carbono, los cuales poseen una gran resistencia frente a la hidrólisis.
 En algunos casos por la adición de antioxidantes y estabilizantes durante
su manufactura.
 Alto peso molecular.
 Alta densidad de empacamiento.
 Su presencia reciente en el planeta es causa de que las enzimas de los
microorganismos no hayan evolucionado completamente para degradar
el material sintético [54, 32]. Sin embargo la evolución en la especificidad
de las oxidoreductasas secretadas por los microorganismos es
relativamente rápida [55, 31].
5.2 Biopolímeros sustitutos del LDPE

Los biopolímeros son materiales totalmente degradables, que dependiendo de
su origen pueden ser denominados biopolímeros naturales o sintéticos.
5.2.1 Biopolímeros naturales
Los biopolímeros naturales son materiales macromoleculares sintetizados por
las plantas, los animales, los hongos o bacterias, los naturales son comúnmente
utilizados como fuente de energía o como andamiaje estructural, son
rápidamente degradados, entre estos están: los ácidos nucléicos, las proteínas,
la celulosa, los ácidos murámicos, la amilosa, la amilopectina y muchos más.
5.2.2 Biopolímeros sintéticos
Los biopolímeros sintéticos son materiales macromoleculares sintetizados por
el hombre, los biopolímeros antropogénicos tienen la cualidad de ser
biocompatibles y biodegradables.
10
5.2.3 Bioplásticos
Son materiales plásticos sintéticos, semisintéticos o naturales con
características similares a los plásticos tradicionales, pero con la ventaja de ser
degradables, pueden ser mezclas de polímeros sintéticos con naturales, o
pueden ser plásticos totalmente sintéticos, pero degradables, por ejemplo
están: el polietileno de baja densidad y el almidón termo plástico LDPE + TS
(del inglés: thermoplastic starch) o el poliácido glicólico (PGA) (del inglés poly
glycolic acid), el poliácido láctico PLA (del inglés poly lactic acid) y el
polihidroxibutirato PHB, los tres últimos mencionados son poliésteres y por lo
tanto son susceptibles a la hidrólisis de sus enlaces éster, de acuerdo a su
composición y velocidad de degradación pueden ser agrupados en dos grandes
clases [56].
5.2.3.1 Bioplásticos totalmente biodegradables

La sociedad americana para las pruebas y materiales (ASTM) (del inglés
American Society for Testing and Materials) y la organización internacional de
estándares (ISO) (del inglés International Standards Organization) define
plásticos degradables como:
“Aquellos que sufren un cambio significativo en la estructura química bajo
condiciones ambientales específicas. Estos cambios resultan en una pérdida de
propiedades físicas y mecánicas, medidos por métodos estándar. Los plásticos
biodegradables sufren degradación por la acción de microorganismos naturales
tales como bacterias, hongos, y algas” [12].
5.2.3.2 Bioplásticos biofragmentables
Los biopolímeros biofragmentables son mezclas de materiales, no son
completamente biodegradables, están compuestos de un componente
completamente degradable y un componente capaz de ser biodegradado,
ejemplo: polietileno y almidón, aunque estos tipos de mezclas de polímeros no
son completamente biodegradables, son efectivos para la reducción del
volumen de residuos de plásticos por fragmentación [57].
5.3 Biorremediación
Comprende la aplicación de agentes biológicos, principalmente
microorganismos como catalizadores biológicos para degradar, desintoxicar o
acumular productos químicos contaminantes.
5.3.1 Biodegradación de polietileno de baja densidad (LDPE)

El término “biodegradabilidad de polietileno” condujo a una confusión entre los
científicos de polímeros y los microbiólogos, originados por el hecho de que
11
para los científicos de polímeros, la degradación significa la perdida de las
propiedades físicas, mientras que para los microbiólogos es la completa
mineralización del material [55]. De acuerdo a una nueva definición el término
biodegradación incluye los factores bióticos y abióticos los cuales actúan
sinérgicamente para descomponerlo en materia orgánica [31].
En un sentido estricto el LDPE se degrada por lo tanto es biodegradable, pero

de acuerdo a Ohtake et al 1998 [58] una lámina de LDPE de 60µm se tarda
completamente en degradar 300 años, y de acuerdo a muchas publicaciones
esta estimación implica una tasa constante de biodegradación que es poco
realista [31], por lo que se puede considerar prácticamente no biodegradable,
sin embargo si se modifica su estructura, o se dan las condiciones óptimas,
utilizando microorganismos aptos para su degradación es posible disminuir su
tiempo de vida drásticamente. La biodegradación es un proceso complejo por lo
que en su actual concepción esta dividida en dos etapas:
5.3.1.1 Biodeterioración
Es una etapa extracelular, caracterizada por la acción en conjunto de los
microorganismos y los factores abióticos que en conjunto dan como resultado
una fragmentación del LDPE en oligómeros y en el cambio químico del
polímero (oxidación) [31]. (Ver mecanismos de despolimerización.)
5.3.1.2 Asimilación
Posteriormente cuando estos oligómeros tienen el tamaño suficiente para ser
trasportados al citoplasma, los microorganismos los integran a las rutas
metabólicas donde son mineralizados [31].
5.3.2 Factores a tener en cuenta en la biodegradación del LDPE

Muchos microrganismos pueden degradar el LDPE, y para entender como lo
hacen hay que analizar: las enzimas liberadas, la hidrofobicidad, tanto de las
mismas enzimas como de las paredes celulares de las células microbianas y las
sustancias potenciadoras que liberan, como biosurfactantes, sin embargo
cuando se investiga la biodegradabilidad del LDPE, el efecto del ambiente no se
puede ignorar, para sobrevivir y prosperar se requieren que existan ciertas
condiciones o variables que afectan la actividad microbiana y por lo tanto la
biodegradación del LDPE, tales como: la disponibilidad de oxígeno, la cantidad
disponible de agua, la temperatura, el ambiente químico (pH, electrolitos, etc.)
[59], también hay que adicionar las características físicas químicas del LDPE, lo
cual se puede esquematizar en el siguiente mapa conceptual:
12
Figura 2 Factores que afectan la biodegradación del LDPE adaptada de [60, 61]
5.3.2.1 Ruta de la biodegradación del LDPE

Como tal no hay un solo mecanismo o una sola ruta, debido a que el proceso
de la biodegradación es complejo y puede iniciarse de múltiples maneras,
puede recorrer múltiples procesos o reacciones, de hecho en un principio la
comunidad de investigadores estaba dividía por la condición en que debería
estar el polímero para que pudieran actuar los microorganismos, algunos creían
que era necesario la reducción del peso molecular y otros que atacaban sin
importar el peso molecular [11, 62], posteriormente se comprobó que no es
necesario bajos pesos moleculares para que inicien la degradación pero si lo
facilita, además la mayoría de estudios lo hacen con cepas puras, lo cual es
improbable que ocurra naturalmente [63], (como se puede ver en la tabla 1),
son consorcios enteros los que participan en la biodegradación, y la
biodiversidad de éstos varía de acuerdo al tipo de ambiente, por ejemplo: el
suelo, mar, composta, lodo activado, etc. [64]. El mecanismo exacto es difícil de
reconstruir, sin embargo se puede simplificar o esquematizar. La
biodegradación del LDPE ocurre por dos mecanismos básicos: la hidro
biodegradación y la oxobiodegradación [47], esos mecanismos dependen del
13
grado de oxidación del material y del tipo de aditivo adicionado, el cual puede
ser almidón o pro oxidantes. Como resultado de los trabajos reportados se
realizó un mecanismo de biodegradación hipotético el cual se muestra a
continuación.
Figura 3 Rutas
hipotéticas de
transformación del
polietileno hasta su
total mineralización
basada en los
artículos de [63, 45,
68].
Figura 4 Biodegradación del PE por β -oxidación Fuente [65]
14
5.3.2.2 Iniciadores y aceleradores del proceso de biodegradación, la
degradación abiótica
La mineralización del polietileno inicia con una degradación abiótica u
oxidación (ver Figura 5 ), que es causada por el medio ambiente,
principalmente por la luz y las condiciones del entorno, tales como el pH, la
salinidad, la disponibilidad de oxígeno, el estrés físico, la humedad, la
temperatura, etc [42]. Facilitando el posterior ataque microbiano, a continuación
se mencionara brevemente los más importantes.
Figura 5 iniciadores de la oxidación del PE
5.3.2.2.1 Fotólisis
El LDPE es un polímero de baja degradabilidad porque esta principalmente
compuesto de enlaces C–C and C–H (𝜎 enlaces) cuya energía de enlace es del
orden de 300–600 kJ/mol [66].
El principio de degradación establece que la cantidad de energía absorbida por
una molécula debe exceder la energía de enlace.
La energía de la radiación UV-A no es suficiente para romper los enlaces
químicos del LDPE y causar la degradación del polímero [66]. La radiación UV-
B (320-280) es particularmente eficiente en causar foto daño al LDPE y
polímeros sintéticos [66]. La radiación UV-C tiene energía suficiente para
romper los enlaces 𝜎, pero la que es emitida por el sol es absorbida por la
atmosfera y no alcanza la Superficie de la tierra [67].
De acuerdo a Baljit Singh, Nisha Sharma, la radiación UV-B cercana de la luz
solar (290nm) posee la energía suficiente para romper los enlaces C-C 375
kJ/mol y C-H 420 kJ/mol del LDPE los cuales son equivalentes a una radiación
UV-B de 320nm y 290nm respectivamente, el proceso conduce a la formación
de radicales libres [68]. (Ver Figura 6).
15
5.3.2.2.2 Oxidación térmica
Al igual que en la fotólisis, la termo degradación produce radicales libres que
atacan el polímero, pero en la oxidación térmica el ataque ocurre al azar y no
en los extremos terminales tal como ocurre durante la fotólisis, por ello la termo
degradación puede empezar tanto en el interior como en la superficie, haciendo
que el proceso sea más rápido [68], debido a que el LDPE es un polímero de
adición (por radicales libres), el mecanismo de despolimerización corresponde
al inverso de la polimerización y ocurre rápidamente a temperaturas de 200°C o
mayores.
5.3.2.2.3 Oxidación mecano química

Los agentes oxidantes como el ozono, el oxígeno o con ácido nítrico atacan las
cadenas generando radicales libres, comprobado por Yamada-Onodera [69],
hay estudios que indican que cuando el material es sujeto a estrés mecánico
como: rotura, molido, rasgado y estirado se generan radicales libres y para
demostrarlo se utilizó la espectroscopia de espín electrónico [70, 68].
5.3.2.2.4 Mecanismos de despolimerización

5.3.2.2.4.1 Iniciación
La fotólisis o termólisis inicia el proceso de formación de radicales como se
verá a continuación:
Figura 6 mecanismo de ruptura hemolítica o fotolisis imagen tomada de [68].
Las reacciones se facilitan con la adición de catalizadores como metales de

transición, por ejemplo: el hierro (Fe), cobalto (Co), manganeso (Mn) y titanio
(Ti) entre otros, muchos polietilenos comerciales contienen compuestos
metálicos como impurezas, a continuación se muestra el mecanismo que
ocurre. [68].
Figura 7 Iniciación a partir de un agente metálico, imagen tomada de [68].
16
5.3.2.2.4.2 Propagación
El proceso se propaga cuando los radicales C* reaccionan con oxígeno
formando el radical peróxido, el cual a su vez ataca cualquier compuesto que
ofrezca electrones y posiblemente protones formándose un ácido o un éster en
el proceso y un nuevo radical. (Como se muestra en la Figura 8).
Figura 8 Propagación de la foto oxidación. Adaptado de [68].
5.3.2.2.4.3 Terminación
Los grupos carbonilo actúan como cromóforos que permiten una iniciación de
más radicales debido a que absorben en el UV cercano [68]. Posteriormente
ocurre una ruptura de las cadenas por medio de las reacciones tipo Norrish 1 y
2 (Ver Figura 9a), finalmente terminan con la formación de fragmentos que
contienen grupos funcionales como alquenos, alcoholes, esteres y ácidos
carboxílicos, estos son utilizados por enzimas microbianas para su
metabolización y final mineralización.
Figura 9a.
Mecanismos de
oxidación,
reacciones
Norrish tipo 1 y
2, imagen
basada de [68];
6 b. Oxidación
para la
formación de
ácidos grasos o
esteres,
adaptado de
[96]
Actualmente muchos fabricantes de polietileno PE realizan un tratamiento

posterior al proceso de fabricación induciendo la formación de alquenos y
carbonilos en las cadenas para acelerar su degradación, replicando lo que
ocurre cuando se expone al medio ambiente.
5.3.3 Microorganismos reportados que degradan el polietileno

Muchos microorganismos degradan el LDPE cuando las condiciones
ambientales favorecen esta acción [51]. Se han publicado muchos estudios
17
sobre biodegradación del polietileno, a continuación se presenta una
recopilación de todos los microorganismos reportados o/y utilizados en los
estudios de biodegradación del LDPE:
Tabla 1 microorganismos capaces de degradar el LDPE reportados en la literatura. Tabla
adaptada de [19, 71, 53, 42, 29, 63]
Dominio Genero Especie Referencias
1 bacteria Acinetobacter baumannii [72, 73, 74]
ursingii [75]
sp [76]
2 Bacteria Acanthopleurob pedís [77]
acter
3 Fungi Acremonium kiliense [78, 79]
4 Bacteria Achromobacter denitrificans [80]
5 Fungi Alternaria alternata [81, 82]
6 Bacteria Arthrobacter, sp [83, 84]
paraffineus [65, 85]
defluvii [86]
viscosus [72]
koreensis [32]
7 Fungi Aspergillus: versicolor [78, 40, 79, 87, 88]
brasiliensis [89]
sp [90, 87, 67, 91, 50, 92, 93, 51]
flavus [76, 11, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 40]
[101, 89, 102]
fumigatus 0 [99, 103, 89]
glaucus [11, 104, 76, 105]
niger [76, 106, 11, 107, 104, 108, 95, 109, 110, 111]
[112, 97, 99, 105, 100, 101, 89, 102, 31, 113]
[91, 114, 115, 116, 33]
nidulance [76, 11, 50]
terreus [103, 101, 102, 31, 88, 41, 115]
cremeus [11]
candidus [11]
ornatus [89, 11]
japonicus [97, 101, 102]
awamori [72]
tamarii [101]
oryzae [117, 95, 94]
8 Fungi Aureobasidium pullulans [31, 115, 118]
9 Bacteria Bacillus sp [11, 93, 89, 16, 119]
aerius [77]
pumilus [120, 72, 84]
brevies [121]
cereus [122, 123, 84, 71, 124, 99, 125, 105, 77]
circulans [126, 121]
halodenitrific [120]
ans
amyloliquefai [72, 127, 128, 129, 130]
ens
amylolyticus [86]
megaterium [122]
mycoides [72, 131, 132]
sphaericus [71]
licheniformis [133]
subtilis [122, 76, 107, 86, 99, 134, 132]
thuringiensis [72]
18
weihensteph [135]
anensis
10 Bacteria Bacterium te68R [77]
11 Bacteria Brevibacillus borstelensis [122, 126, 136]
parabrevis [73]
sp [137, 138]
12 Bacteria Burkholderia cepacia [135]
13 Fungi Candida sp [99]
14 Fungi Cephalosporiu sp [100]
m
15 Fungi Chaetomiu globosum, [124, 106]
m sp [98]
16 Fungi Cladosporium cladosporioid [47, 139, 96]
es
cladosporioid [47, 96, 140]
es
17 Fungi Curvularia sp [141]
senegalensis [118]
lunata [82]
18 Bacteria Delftia acidovorans [142]
19 Bacteria Desulfotomacul nigrificans [48]
um
20 Bacteria Diplococcus sp [11, 89]
21 Bacteria Escherichia coli BL21 [32, 135, 134, 136]
22 Bacteria Enterobacter asburiae [119]
23 Bacteria Flavobacterium sp [142]
24 Fungi Fusarium sp [100, 97, 90, 99, 143, 91, 82]
solani [103, 118]
25 Fungi Geotrichum sp
26 Fungi Glioclodium virens [111, 72, 106]
27 Fungi Helminthospori sp [100]
um
28 Fungi Humicola sp. [144]
29 Fungi Hyalodendron sp [145]
30 Bacteria Listeria sp [16]
31 Bacteria Lysinibacillus. sp [92]
32 Bacteria Microbacterium paraoxydans [146]
MK3 (DQ31 [147]
8884),
sp [147, 77]
33 Bacteria Micrococcus luteus [76, 72]
sp [16, 11, 99]
lylae B-429 [72, 105]
34 Fungi Moraxella sp [11, 104, 89]
35 Fungi Mortierella alpina [96]
subtilissima [72]
36 Fungi Mucor ruxii [94]
sp. [97, 99, 102]
circinelloides [40]
37 Fungi Nigrospora sp [100]
38 Fungi Nocardia steroids GK [47]
911
asteroides [47, 96, 139]
39 Fungi Paecilomyces variotti [112, 31, 148, 115]
40 Bacteria Paenibacillus macerans [72]
41 Fungi Penicillium sp [97, 67, 99, 76, 100, 93, 144]
simplicimus [69, 149, 82]
frequentans [131]
19
pinophilum [109, 111]
ochrochloron [31, 115]
funiculosum [112, 106, 31, 115, 33]
implicatum [100]
42 Fungi Phanerochaete chrysosp [150, 13, 151, 13, 111, 152, 105, 153, 154]
orium
chrysosporium ME- [28]
446
43 Fungi Pleurotus ostretus IZU-15413 [155, 105]
44 Bacteria Proteus vulgaris [76]
45 Bacteria Pseudomonas: aeruginosa [107, 142, 146, 99, 156, 105, 128, 157]
[147, 77, 75]
citronellolis [73, 158]

chlororaphis [159]
sp [83, 137, 32, 160, 158, 50, 104, 137, 125, 76]
[93, 138, 89, 99, 161, 11]
putida (KT2440 [156, 107, 128, 162]
ATCC 47054) S3A [147, 77]
MK4 (DQ31 8885) &
PW1 (EU741 798),
syringae DC3000 [156]
ATCC 10862
stutzeri [163]
fluorescens [72, 113, 75]
alcaligenes [48]
otitidis [77]
redolens [78, 9, 164, 165, 79]
46 Fungi Pullularia pullulans [106]
47 Fungi Pycnoporus sanguineus [166]
48 Bacteria Rahnella aquatilis [72]
49 Bacteria Ralstonia sp [142, 137]
50 Bacteria Rhodococcus: ruber C208, [167, 168, 169]
rhodochrous [170, 47, 96, 139]
erythropolis [142, 171]
sp [142, 138]
51 Fungi Rhodotorula sp [145]
52 Fungi Scopulariopsis brevicaulis [31, 115]
53 Bacteria Serretia marscence [172, 105]
54 bacteria Shewanella putrefaciens [32]
55 Fungi Sporotricum pullverulentum [173]
56 bacteria Staphylococcus aureus [76, 99, 113]
epidermidis [174]
xylosus [72]
sp [16, 11, 104, 89, 175]
piogens [99]
cohnii [72]
57 bacteria Stenotrophomo sp [142]
nas
58 bacteria Streptococcus lactis, [76]
sp [11, 104, 89]
aureus B-324 [105]
59 bacteria Streptomyces: viridosporus T7A [151, 176, 112, 153]
setonii 75Vi2 [151, 176, 112, 153]
sp [94, 104, 50, 89]
coelicoflavus [177]
badius 252 [151, 176, 112, 153]
20
60 Fungi Trametes versicolor IFO7043 [28]
versicolor ISU15413 [28]
61 Fungi Trichoderma viride [178, 31, 115]
hamatum [130]
62 Fungi Verticilium lecanii [78, 79]
63 bacteria Vibrio sp [16, 179]
Se han reportado muchos microorganismos, los cuales pertenecen a bacterias,

actinomicetos y hongos filamentosos, de los cuales muchos aún son especies
desconocidas, pero aun así, son estudios relativamente nuevos e insuficientes
para dar conclusiones finales, por lo que no hay razón para creer que sean
todos los microorganismos degradadores existentes de LDPE, seguramente
aún existen muchos por descubrir.
5.3.3.1 Hongos como agentes degradadores de LDPE

De acuerdo a Volke-Sepulveda los hongos producen algunos polisacáridos que
ayudan a colonizar el material [109]. Los autores Kim y Rhee [34]. Seneviratne
[131], Kershaw y Talbot [180], Shah [181, 182] han encontrado que los hongos
liberan proteínas hidrófobas que se ligan a la superficie del LDPE, producen
mayor cantidad de biomasa, sobreviven a condiciones de baja disponibilidad de
nutrientes, bajo pH y humedad [69], también es una ventaja la distribución y
habilidad de penetración de las hifas, la ubicuidad de los mismos, lo cual se
comprueba en el gran número de géneros encontrados, además de la altísima
frecuencia con que se encuentran.
5.3.3.2 Bacterias como agentes degradadores de LDPE

Algunos investigadores han visto buenos resultados en la biodegradación de
LDPE usando bacterias, por ejemplo se ha aislado Rhodococcus ruber (C208)
capaces de degradar 0,86% por semana [183], cuya habilidad es atribuida a la
hidrofobicidad de su superficie o membrana [167] [106]. Merina Paul Das y
Santosh Kumar encontraron una alta hidrofobicidad (37-42) % en bacillus
Amyloliquefaciens, y posteriormente probaron su capacidad para degradar
LDPE realizando la prueba de variación de la pérdida de masa [129],
encontrando porcentajes del 11 al 16 % en dos meses lo que significa que
perdía un 2% por semana [127]. En algunas especies de Pseudomonas
lograban una pérdida de peso por encima del 20% en LDPE durante 120 días,
por lo tanto se degradaba a un ritmo de 1,25% por semana. [156, 158]. Por
ejemplo Shah [181] encontró que las P. aeruginosa biodegradaron LDPE a un
nivel de 35%.
5.3.3.3 Consorcios microbianos
Muchos investigadores concuerdan en que ya sean bacterias u hongos, la
utilización de consorcios microbianos ofrece considerables ventajas sobre el
uso de cultivos puros en la degradación de LDPE [120, 82]. Probablemente
debido a la habilidad multifuncional y su mayor robusteza a las fluctuaciones
ambientales [120, 82].
21
Algunos autores definen las comunidades microbianas o consorcios como
asociaciones de múltiples especies que coexisten en un mismo nicho. En los
consorcios microbianos los microrganismos trabajan en forma multidisciplinar
sobre el LDPE degradandolo en sus monómeros. De aquí que la actividad de
los consorcios permite incrementar la degradación del polietileno [82].
5.3.3.4 Enzimas reportadas

Las enzimas son causantes directas e indirectas de la oxidación biótica
del polietileno de baja densidad LDPE y otros plásticos, todas son enzimas
extracelulares o también conocidas como exoenzimas, son secretadas por las
células microbianas (ver tabla 2) las cuales catalizan la formación de una o
varias reacciones en la superficie del LDPE, tales como son: la oxidación, la
reducción, hidrólisis y esterificación. Los autores Seneviratne [131],
Kershaw y Talbot [180], Shah [181, 184] demostraron que los hongos
liberan enzimas hidrófobas que se ligan a la superficie también hidrófoba
del LDPE, igualmente para las bacterias, como un resultado de esta
investigación se presenta un listado de las enzimas reportadas en los
estudios realizados sobre la biodegradación del polietileno.
Tabla 2 Enzimas involucradas en la biodegradación del polietileno.

Enzimas Características y organismo fuente Referencias
Alcano Fue encontrada en bacterias G.
hidrolasa (EC thermodenitrificans y P. aeruginosa que degradan [32]
1.14.15.3) el petróleo y el PE.
Obtenida de Pleurotus ostreatus PLO6 y probada
Celulasa [155]
en PE oxodegradables.
Gelatinasa Rompe las estructuras poliméricas hidrófilas. [16]
Probada en PE oxodegradables, encontrada en:
Rhodococcus ruber, Trametes versicolor,
Lacasa (EC
Curvularia lunata, Alternaria alternata, Penicillium [169, 124, 155, 173, 82, 29]
1.10.3.2)
simplicissimum Sporotrichum pullvurulentum y
Fusarium sp.
Lignina Rompe enlaces C-C, encontrado en Sporotrichum
[28, 81, 173, 29]
peroxidasa pullvurulentum
Rompe los ácidos grasos producidos por otras
Lipasa [16, 185]
enzimas.
Fueron purificadas de los hongos Phanerochaete

Chrysosporium, Bjerkandera adusta, Curvularia
manganeso
lunata, Alternaria alternata, Penicillium
peroxidasa [28, 186, 124, 155, 173, 82, 29]
simplicissimum, Sporotrichum pullvurulentum y
(MnP)
Fusarium sp. Usando DSC, EM se demostró que
degradan PE,
Xilanasa Probada en PE oxodegradables [155]

Amilasa Ataca la matriz de almidón [134, 16]
Todas son exoenzimas, algunas usan oxígeno o peróxido para generar grupos
carbonilo o hidroxilo en la superficie del material, otras hidrolizan los
copolímeros almidón polietileno y otras rompen enlaces C-C, o C-C=O.
22
Cabe mencionar que hasta la fecha ningún trabajo ha realizado un estudio
enfocado y detallado sobre las enzimas, su clasificación, la identificación de las
estructuras primarias, secundarias y terciarias, formas de interacción con el
sustrato, tiempo de acción, condiciones de acción, genes codificadores, etc.,
por lo que aún hay importantes vacíos por llenar..
5.3.3.5 Biodegradación aerobia y anaerobia

Los ambientes en donde ocurren las rutas metabólicas de biodegradación
durante el proceso de asimilación, se pueden clasificar básicamente por la
disponibilidad de oxígeno en el medio, el cual puede ser:
5.3.3.5.1 Reacción básica de biodegradación de tipo aeróbico

La reacción aerobica requiere como sumidero de electrones al oxígeno, el cual
se reduce a agua, es teóricamente la más exotérmica, y probablemente es la
mejor y más común para acelerar el proceso de biodegradación del LDPE.
La ecuación que representa el proceso de oxidación es la siguiente:
𝑂𝑙𝑖𝑔𝑜𝑚𝑒𝑟𝑜𝑠 + 𝑂2 → 𝐶𝑂2 + 𝐻2 𝑂 + 𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 + 𝑟𝑒𝑠𝑖𝑑𝑢𝑜(𝑠)
5.3.3.5.2 Reacción básica de biodegradación de tipo anaeróbico

Es una reacción que ocurre sin la necesidad de oxígeno, suele liberar metano
como producto final, el proceso ocurre básicamente como se presenta en la
siguiente ecuación:
𝑂𝑙𝑖𝑔𝑜𝑚𝑒𝑟𝑜𝑠 → 𝐶𝑂 2 + 𝐶𝐻4 + 𝐻2 𝑂 + 𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 + 𝑟𝑒𝑠𝑖𝑑𝑢𝑜(𝑠)
En el caso de los géneros Pseudomonas sp y Brevibacillus sp, Ambika Devi ha

sugerido que la biodegradación anaeróbica es mucho más importante, debido a
que veinticinco géneros de bacterias que degradan hidrocarburos se aislaron en
el medio ambiente marino aislado del oxígeno atmosférico [80].
5.3.3.6 Efecto en la biodegradación en la humedad del medio
A su vez estos dos tipos de ambientes pueden ser subdivididos de acuerdo a

la cantidad de humedad existente dando las siguientes categorías:
 Ambientes acuáticos: ríos, mares, lagos, reservas subterráneas etc [187,

188].
 Ambientes sólidos o secos: zonas de compost, reservas forestales,
botaderos, etc.
El contenido de humedad en el sustrato tiene un efecto directo sobre el

crecimiento de los microorganismos, por ejemplo un estudio en el que se usó el
hongo Pycnoporus sanguineus para degradar LDPE pudo crecer más rápido y
23
de forma más intensa en el sustrato compuesto por 67% de polímero y 33% de
sorgo a 22°C [189], que era el de mayor humedad.
Tabla 3 clasificación esquemática de los diferentes medios ambientes en que ocurre la
biodegradación del LDPE, tomada de [59]
Acuático Seco
Aeróbico Plantas aeróbicas de tratamiento Suelos de superficie
de aguas residuales. Residuos orgánicos en platas de
Aguas de superficie : ríos y lagos, compostaje
ambientes marinos Residuos en botaderos a cielo abierto
Anaeróbico Plantas anaerobias de Sedimentos en lo profundo del océano
tratamiento de aguas residuales Rellenos sanitarios
Rumen de herbívoros Biogasificacion
Digestión anaeróbica
Lodos anaerobios
5.3.3.7 Efecto del pH en el medio

El valor del pH es un factor clave para la supervivencia y actividad de los
microorganismos, generalmente esta entre 6 y 8 de acuerdo a ASTM D 5988
[177].
En un estudio se encontró que un género de actinomicetos, las bacterias
termófilas streptomyces coelicoflavus NBRC 15299 presentan un amplio rango
de tolerancia al cambio del pH que va de 5 a 10 [177]. Lo interesante es que
durante la actividad biodegradadora disminuye el pH a un valor de 5,6 en 24
días por lo que el microorganismo debe ser altamente tolerante a pH bajos.
Para la Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas aeruginosa y Acinetobacter
ursingii, todas bacterias mesófilas cuando se cultivaron en un medio con pH de
7,2 después de 7 días a 30°C, lo acidificaron a 6.41, 6.45, 6.52, las demás
cepas sin identificar también acidificaron los medios, en un estudio en el que se
usaron las bacterias Pseudomona putida S3A se encontró que el pH óptimo
estaba en 6,5 en el cual alcanzó el mayor crecimiento en siete días [162]. Los
hongos son naturalmente más resistentes a medios ácidos y por lo tanto a pH
bajos degradan más rápidamente el LDPE, como lo presentan Nanda S, Sahu
S, Abraham J [137], en donde exponen a los hongos Phanerochaete
chrysosporium y a las bacterias Pseudomonas aeruginosa a medios en
condiciones de pH: 4 y a temperatura ambiente, con agitación regular por ocho
meses [137], el porcentaje de degradación fue de 50% para los hongos
Phanerochaete chrysosporium y 35% para las Pseudomonas aeruginosa, los
hongos se desarrollan rápidamente en los medios con LDPE, y las bacterias
que logran degradarlo soportando tales condiciones probablemente sean
acidófilas o al menos tolerantes a pH bajos.
5.3.3.8 Efecto de la temperatura

La temperatura óptima para la degradación parece distinta para cada especie
microbiana, sin embargo es común que sean temperaturas relativamente altas,
24
en varios artículos revisados las temperaturas óptimas correspondieron a
valores desde los 28 a 55°C.
Las bacterias termófilas Streptomyces coelicoflavus NBRC 15299 soportan
variaciones de temperatura desde los 12°a los 42°C, sin embargo su
temperatura para la degradación óptima fue de 28±2°C [177].
Para las bacterias Pseudomonas putida S3A se encontró que la temperatura
óptima estaba en 37°C [162].
En un estudio en el que se usó el hongo Pycnoporus sanguineus para degradar
LDPE el crecimiento se midió por porcentaje de invasión del sustrato,
encontrando que a 22°C, el porcentaje de invasión superó el 90% en un lapso
de 21 días, mientras que cuando la temperatura de crecimiento fue de 10°C, el
máximo crecimiento llegó apenas a un 32% [189]. En un estudio con tres
muestras de hojuelas de LDPE pre tratadas con radiación ultravioleta durante
68h, fueron incubadas por separado a 37°C, 46°C y 55ºC durante un mes, en
presencia de Bacillus borstelensis, la temperatura en la que se presentó el
mayor grado de biodegradación (14,2%) fue a 55°C [136].
5.3.4 Aditivos utilizados para potenciar la degradación del LDPE
Existen múltiples productos variantes del PE que contienen pro-oxidantes o
aditivos biodegradables a continuación se mencionaran algunos.
5.3.4.1 El polietileno de baja densidad LDPE con almidón

El almidón es un polímero con alto valor como aditivo, en los estudios de
biodegradación del LDPE la reducción de su alta hidrofobicidad mediante la
inyección de almidón para la producción de LDPE biodegradable es una
alternativa muy popular debido a que el almidón es natural y económico.
La mezcla del almidón y el LDPE al ser hidrófila los microorganismos fácilmente
acceden a su matriz y la degradan con enzimas como amilasas las cuales
realizan un mecanismo tipo hidrodegradación [190, 191, 192]. El almidón está
compuesto de amilosa y amilopectina, la cantidad de estos componentes es
diferente entre varias fuentes de almidón, la proporción de estos dos tiene un
efecto en el comportamiento del producto [115], entre mayor contenido de
amilosa aumenta la elongación y la fuerza de la mezcla [193], probablemente
debido a que es un almidón de menor ramificación, permite una mayor
cristalinidad de la mezcla, Sin embargo, su uso tiene limitaciones debido a que
ésta mezcla posee baja resistencia a la humedad, baja procesabilidad e
incompatibilidad [6].
También se ha probado mezclas de otros polímeros naturales con el LDPE, tal
es el caso del yute [194], el inconveniente de usar tales aditivos corresponde al
de disminuir sus propiedades mecánicas, siendo probado por autores como
Lee y Obasi [190] [195]. Causando una disminución de la resistencia a la
tensión y reducción de la elongación, con lo cual se torna quebradizo y frágil
25
debido a la pobre adherencia a la matriz del aditivo y la aglomeración de sus
partículas.
5.3.4.2 Aditivos pro-oxidantes

Los pro-oxidantes incluyen compuestos poliinsaturados, iones de metales de
transición y complejos tales como tiocarbamatos [196].
Los aditivos que contienen pro oxidante sufren reacciones tipo foto
degradación, termo degradación y quimio degradación, entre los compuestos
fotos sensibilizadoras están: sales de metales, quinonas, benzofenol,
benzofenonas etc.) se forman radicales que posteriormente generan grupos
carbonilo que pueden ser utilizados por los microorganismos [9], (ver
mecanismos de despolimerización) si el pro oxidante es un metal de
transición como los esteres de metales como el Hierro, Cromo, Manganeso,
entre otros la oxidación es secuencial [117], incrementan la ruptura del LDPE en
un proceso que se denomina degradación oxidativa, tornando el material
quebradizo y fragmentado, además el proceso es dependiente de las
condiciones medioambientales como la cantidad de luz solar, humedad, pH, etc.
Y también sus altos costos y sus propiedades limitadas restringen su uso [197].
Tabla 4 estudio sobre la biodegradación del LDPE con prooxidantes, adaptado de [117]
Título Condiciones Tiempo Ensayo Porcentaje Referencias

(Meses) degradado
Effect of Tratado con 3 Control 0
prooxidants On estearato de 3 UV 18 [117]
biodegradation Fe, Co, Mn, y 3 Estearato Mn + UV 47.2
of polyethylene Ti, UV y A. 3 Estearato Ti + UV 41.6
(LDPE) by oryzae
indigenous 27°C a 120 3 Estearato Fe + UV 36.1
fungal isolate, rpm 3 Estearato Co + UV 34
Aspergillus 3 Sin UV 5
Oryzae
En el estudio denominado efecto de los prooxidantes en la biodegradation del

polietileno (LDPE) por el aislamiento de hongos endogenos, Aspergillus oryzae.
En el cual realizan pruebas de degradación de LDPE tratado con estearato de
Fe, Co, Mn, y Ti, además se irradia con UV y se usa como sustrato para cultivar
el hongo A. oryzae, a 27°C a 120 rpm, por los resultados arrojados no hay duda
de que el uso de proxidantes acelera el proceso de biodegradación, pero
adicionalmente para ver los buenos resultados es necesario exponer el
material a algún agente físico como la radiación UV.
Tabla 5 Aditivos del Polietileno de baja densidad (LDPE).
Aditivos composición del Ventajas Desventajas Referencias

material
Anhidrido PE-g-MA Compatibilizante Costoso aun [115, 198]
Maleico
Alcohol LLDPE/PVA Es el único polímero con Costoso aun [179]
Polivinilo un esqueleto carbono -
26
carbono que es
biodegradable bajo ambas
condiciones aeróbica y
anaeróbica
Policaprolactona Policaprolactona y alta biodegradabilidad Ninguna [64, 193]
LDPE Su estructura cristalina es
similar a la del polietileno.
Oxido de OP/ PHB Por su baja resistencia al Homopolímero [199, 200]
polietileno- poli impacto se mezcla y de puro es muy
hidroxibutirato esa manera se potencia quebradizo tiene
sus cualidades y además pobres
potencia la biodegradación propiedades
mecánicas y es
Costoso
PHBV LDPE/PHBV Polímero Natural puro es muy [148, 193]
( p o l i ( 3 - h id r biodegradable quebradizo pero
oxibutirato (Producido por menos que el
- c o- microrganismos) es menos PHB tiene
hidroxivalerato) quebradizo que su pobres
homopolímero el PHB y propiedades
sus propiedades físicas y mecánicas y es
térmicas dependen el Costoso
grado de contenido de HV
Colágeno El colágeno En un porcentaje del 20- Porcentajes [57]
hidrolizado hidrolizado y el 30% permite obtener mayores tienen
polietileno de baja laminas transparentes, efectos
densidad cohesivas y flexibles que adversos a las
son caracterizadas por cualidades
tener respuestas térmicas reológicas del
y mecánicas satisfactorias material, la
extracción de la
sal es compleja
y afecta la
mezcla PE-HC
Trazas esteara Los cuales El tipo de [112, 201, 65, 85, 122, 117, 202, 170, 155, 133]
de tos de pueden metal y su [157, 203]
metale Fe3+, Aumentar la concentració
s de Mn2+ velocidad de n puede
transic esteara oxidación por el variar de
ión : to de oxígeno del aire y acuerdo al
Fe, Co2+ la escisión de las proveedor
Mn, acetilac cadenas de PE comercial,
Co, Ti etonato bajo la influencia requiere
de de la luz y / o exposición
Co2+, calor. Partículas lumínica,
11-9Z, de Titanio foto efectos de
12Z- catalíticas. toxicidad
Octade para los
ca-9, microbios
12- (Partículas
dihidrox de Titanio).
i-10,13 [157]
dihidrox
iactade
caneat
o
Cobalto
(II)
nano-
TiO2
foto
27
cataliza
dor
Aditivos Fe, Co, Ni, Contiene múltiples grupos Experimental [197]
multifuncionales contiene grupos: funcionales que hacen que
o en inglés alcohol, alcano, sea fotosensible, posee
(Multi functional enlaces dobles, efectos lubricantes y
aditives) ácido carboxílico. plastificantes, potencia la
biodegradación sin afectar
los parámetros de
procesabilidad.
Almidón Las Aceleració Baja: resistencia [204, 94, 8, 65, 191, 13, 205, 206, 207, 153]
termopl proporcion n de la a la humedad, y [106, 176, 137, 188, 190, 208, 209, 115, 116]
ástico es pueden biodegrada Procesabilidad,
TPS (del variar pero ción, incompatibilidad
ingles por lo Mejora de con el PE
Thermo general se alguna de Hidrofóbicos.
plastic encuentran sus
Starch) en un 12% propiedade
de almidón s
y 88% de mecánicas.
LDPE
Aceite mineral LDPE + aceite Se obtiene una A [106]
mineral. colonización más la concentraciones
pérdida de peso a una mayores a 0,05
concentración de 0,05%. tiene un menor
efecto en la
degradación del
rápida
incrementa en
un 50% PE.
Aceite vegetal Triacil Gliceroles Los Triglicéridos contienen [179]
ácidos insaturados que son
más susceptibles a la
autoxidación.
Celulosa LDPE/celulosa Potencia la biodegradación No presenta las [210] [194]
Se usó Yute, por facilitar el ataque de mismas
madera celulasas. cualidades
reológicas.
Glicerol El glicerol/LDPE/ Facilita la biodegradación y Costo [211, 208, 115, 179]
Almidón. cumple la función de
plastificante.
Maleato o Maleato/LDPE/ Se usa como Aumenta [190, 211, 208, 198]
MAPE biopolímero compatibilizante. los costos
PP PP/HDPE Los dos son muy Bajo [201]
Mezcla de resistentes al ataque condiciones de
polipropileno y po bacteriano por lo que no enterramiento
Ietileno de alta potencia la se alteran las
densidad biodegradación. propiedades
mecánicas.
poliol- modificación Es mucho más compatible Aumenta los [8]
glucósidos química del con el LDPE y favorece la costlas s
almidón por biodegradación.
glucosilación y
posterior
transesterificación
con el
aceite de
higuerilla
Cera de abeja, PE/Cera de abeja Es natural, hidrofóbica, y Genera [79, 211, 198]
Cera La cera de abeja biodegradable. problemas en
28
es 14% grandes
hidrocarburos, cantidades
35% mono (10%) cuando
ésteres, 3% di se realiza la
esteres, y 12% plastificación por
ácidos grasos su bajo punto de
libres. fusión
Parafina PE/parafina Proporciona Gran Pierde parte de [211]
Parafina estabilidad térmica y sus buenas
comercial. potencia la hidrofobicidad. cualidades
Mezcla de reológicas y
alcanos entre los fisicoquímicas.
20 a 40 carbonos
Pectina Pectina/PE [208]
HP Polietileno e Biodegradación de 35% Biodegradación [94]
hidrolizado de con una aceptable de 50% con una
proteína PE/HP resistencia a la tensión pobre
20% y 40%. resistencia a la
tensión
Ricinoleico LDPE/RLCD Acelera la biodegradación No son [133]
linoleato de de LDPE conocidas las
Cobalto cantidades
exactas que se
obtuvieron para
las pruebas.
Ácido poli LDPE/PLA Potencia la biodegradación Solo se han [12]
láctico hecho estudios
en escala de
laboratorio y
probablemente
aumente los
costos.
Los microorganismos inicialmente atacan los polímeros biodegradables, que

contiene El LDPE, incrementando la porosidad y el área superficial, lo que
acelera su subsecuente biodegradación [132].
5.3.4.3 Aditivos comerciales

En el mercado existe un gran número de aditivos comerciales, con marca
registrada que aseguran acelerar la degradación del polietileno, a continuación
se enlistaran algunos encontrados:
Tabla 6 algunos aditivos comerciales reportados
Aditivos Características o Ventajas Desventajas Referencias

comerciales composición del material
Biopol PHB Biodegradable Caro [53]
Nature Películas de polietileno que Perdida peso: Perdida de [62]
grad Plus, NP contiene 9 % de almidón y NP=36% resistencia a
pro-oxidante comercial LDPE≈2,004% la tracción:
(éster de ácido graso HDPE≈1.0% NP=82.76%,
autooxidables, agentes (36 semanas) LDPE=13.04
catalíticos y de metales de %
transición). HDPE=5.33
%
29
TDPATM. Metal estearatos (Fe, Ce, Han demostrado Requiere [212]
TDPA®. Co) Y ácido cítrico biodegradarse en que el [47, 213, 139,
(típicamente Co) y almidón materiales no material 202, 196, 203]
la degradación ocurre tóxicos en un rango reciba luz
debido a la reacción del de tiempo solar para
plástico con el oxígeno del comprendido desde poder ocurrir
aire (oxodegradación), unos pocos meses el proceso
también se inicia por a algunos años, de
exposición a los rayos dependiendo de la degradación.
ultravioleta (UV formulación del
degradable), altas aditivo
temperaturas y/o esfuerzos En 2 años será
mecánicos. degradado
Fabricante: EPI
Renatura hierro estearato y Sus características De acuerdo [214]

combinación de lo hacen ideal para a un estudio
estabilizantes/antioxidante ser adicionado al su
s fabricante Nor-X PE biodegradaci
Industries ón
posiblement
e no
requiere que
ocurra en
condiciones
anaerobias
Reverte paquete de foto- inhibición Altamente amplía la Requiere [214]
No revelado, paquete de gama de plásticos que el
ión prodegrable metálico y a la que puede material
promotores de servir como aditivo reciba luz
biodegradación (celulosa PP, PE, PS, PET, solar para
micronizada )Fabricante ABS De acuerdo a poder ocurrir
Wells Plastics Limited un estudio su el proceso
biodegradación de
posiblemente no degradación
requiere
condiciones
anaerobias
D2W® Contiene estearatos de Paquete de aditivos De acuerdo [215, 214]
Metales (típicamente Mn) y que activan la oxo- a un estudio
estabilizantes degradación del su
Fabricante Symphony polietileno luego de biodegradaci
Environmental un periodo de ón no ocurre
tiempo en
preseleccionado. condiciones
Los aditivos son anaerobias
incluidos durante el
proceso de
extrusión
Addiflex® PE oxodegradables aseguran producir Requiere [216]
hechos a partir de la oxo-degradación que el
carboxilato de Metales del material hasta material
como (Fe, Mn, Cu, Co, en un 90% su reciba luz
Ni),almidón, CaCO3; biodegradación solar para
estearato, manganeso es posiblemente no poder ocurrir
identificado como AddiFlex requiere el proceso
HE condiciones de
Fabricante Add-X anaerobias degradación
Biotech
Biopack el material se degradará posiblemente no requiere que [217]
30
debido a compuestos requiere el material
bioactivos que atraen a condiciones reciba luz
colonias de anaerobias solar para
microorganismos poder ocurrir
el proceso
de
degradación,
EcoSafe plásticos oxodegradables y Paquete de aditivos Elevan el [218]
biodegradables de que activan la oxo- costo de
composición no disponible degradación del producción y
polietileno luego de venta y
un periodo de requiere
tiempo condiciones
preseleccionado. aerobias
Ecoflex Aliphatic/aromatic 5-95% Elevan el [53]
polyester completamente costo de
biodegradable producción y
venta
Mater-Bi PCL/Starch (60:40w/w) La biodegradación Elevan el
con Mater-Bi fue costo de
del 75-88% en producción y
todas las pruebas. venta
Master 20% de MB La degradación fue Es una [188]
Batch de 26% después de velocidad de
20 meses degradación
poco
satisfactoria
aun.
Actimais PE+ aditivos prooxidantes Acelera la Elevan el
(SMS Trioplast) biodegradación costo de
producción y
venta y
requiere
condiciones
aerobias
ECM Biofilms Composición no disponible Permiten a los Aumenta los [219]
microorganismos costos de
producir las producción y
enzimas y ácidos venta
que atacan las
moléculas de
hidrocarburos de
cadena larga y los
mineralizan.
POLYCLEAN Masterbatch y contiene Acelera la Elevan el [176, 151]
6% almidón, (Fe, Zn, Ni, biodegradación costo de
y/o Mn), aceite de soya y producción y
maíz. venta
DPE Polietilenos degradables degradable por UV su
Estearatos de metales de y oxidación, biodegradaci [220]
transición fabricante PDQTM6, ón
Willow Ridge Plastics, posiblement
USA) e no ocurre
en
condiciones
anaerobias
Oxobiodegradab LDPE y BPE 10 (10 % Cambia su fuerza su [123][131, 221]
le aditive aditivo oxobiodegradable tensil en un biodegradaci
) fabricados por KK 17.036% y ón
Polycolor India Ltd, reducción en el posiblement
31
Ángulo de e no ocurre
Contacto. 17.4º en
condiciones
anaerobias
biodegradable Composición desconocida PE-OXO no sufre [66]
polyethylene Probablemente contenga, reacciones de
(PE-BIO), metales de transición y fotoxidación durante
oxodegradable algunos compuestos los primeros 30 días
polyethylene orgánicos pros oxidantes. de exposición al
(PE-OXO) UV-B, debido al
contenido de
agentes pro
oxidantes, metales
de transición, los
cuales causan
Inhibición de la
descomposición de
los hidroperóxidos
bajo el efecto de
radiación UV-B.
[Tween 60, Polysorbato Permite una mejor No tiene un [106, 136]
80 or 85 interacción entre efecto
(Sigma) los biodegradad
microorganismos y or si no se
sus enzimas y el dan las
material condiciones
L0235 Desconocido UV Elevan el [126]
fotosensibilizador costo de
producción y
venta
Bionolle Poli (butileno Succinato) Son totalmente Elevan el [31, 32, 33]
(PBS), poli (etileno biodegradables costo de
Succinato) (PESu), o el compatibles con el producción y
copolímero poli (butileno PE y PP venta
Succinato -co-butilen posiblemente no
adipato (PBSA) requiere
condiciones
anaerobias ni luz
Scott–Gilead Metal ditiodicarbamato De acuerdo a un Elevan el [214]
Technology estudio su costo de
biodegradación producción y
posiblemente no venta
requiere
condiciones
anaerobias ni luz
Muchos de estos aditivos se han puesto a prueba en trabajos como los que
realizaron S. Łabużek, B. Nowak, J. Pająk [33], sobre la adición de Bionolle a
las láminas de polietileno, las cuales fueron preparadas con 60% (wt/wt) de
Bionolle grado 3001 [33], reportando los siguientes resultados:
Tabla 7 susceptibilidad del polietileno modificado con bionolle, tomado de [33]
Condiciones (Mes) Aspergillus niger Penicillium

Titulo funiculosum
The Las láminas Peso perdido
32
Susceptibility de polietileno LDPE LDPE LDPE LDPE [33]
of Polyethylene fueron modificado modificado
Modified with preparada con 0.33 0 1.04 0 6.08
Bionolle to
60% (wt/wt) de 0.66 0.09 1.14 0.13 30.28
Biodegradation
by Filamentous Bionolle grado 1 0.14 2.26 0.14 49.22
Fungi 3001. 1.33 0.29 3.49 0.23 75.06
2 0.33 6.12 0.27 93.44
3 0.81 7.53 0.35 100
Se puede notar claramente en la Tabla 7 que el polietileno modificado con

bionolle es degradado rapidamente por ambas especies de hongos, lo cual
demuestra la eficacia de este tipo de productos.
En el artículo denominado Biodegradación de polietileno por las Bacterias
termófilas Brevibacillus borstelensis con LDPE con y sin pro-oxidante (L0235) e
irradiado con Ultravioleta por 60 h antes de la incubación a 50°C [222]. Los
cuales después de un mes presentaron los siguientes resultados: LDPE sin
aditivo y con UV obtuvo un 6,2 ± 0,3% de degradación, LDPE con L0235 y con
UV presentó un 7,8 ± 0,8% de degradación, LDPE sin aditivo y sin UV
presentó un 2,5 ± 0,3% de degradación, y finalmente LDPE con L0235 y sin UV
presentó un 5,6 ± 0,5% de degradación, demostrando la importancia de la
adición de estas sustancias en el proceso de degradación.
Probablemente sigan apareciendo cada día nuevas marcas y productos, de esa

forma se impulse la caída de sus precios y la mejora de los aditivos.
5.3.4.4 Biosurfactantes vinculados en la biodegradación del polietileno

Al ser el polietileno apolar o Hidrofóbico no puede ser fácilmente atacado por
los microorganismos [223]. Y de acuerdo a Yutaka T, la adherencia de los
microorganismos a la superficie del LDPE, seguida por la colonización de la
superficie expuesta es el mayor mecanismo involucrado en la degradación
microbiana del plástico LDPE [64]. La adición de Biosurfactantes potencia la
biodegradación, por ser éste un tenso activo que disminuye la tensión
superficial entre la membrana celular y el LDPE, además se ha descubierto que
ciertos microorganismos producen tales compuestos, por ejemplo las
Pseudomonas auroginosa. producen ramnolípidos, (ver Tabla 8) sin embargo
se ha demostrado que si se quiere potenciar la biodegradación se puede
adicionar surfactantes artificiales tales como Tweed 60/80 [106, 136].
Los surfactantes biológicos poseen múltiples ventajas sobre sus contrapartes
manufacturadas químicamente, incluyendo baja toxicidad, efectividad a
temperaturas extremas, pH y salinidad [224].
Tabla 8 Biosurfactantes producidos por distintos microorganismos, adaptado de [223]
Tipos de surfactantes producidos Microorganismos
Glucolípidos Pseudomona aeuroginosa, Rhodoccocus erythrópolis,
Nocardia erithropolis
Ramnolípidos, lípidos Manosil eritritoles Micobacterium sp, Pseudomona aeuroginosa
(MEL), Celobiolípidos, Soforolípidos, etc.
Lipopeptidos, lipoproteínas, Surfofactin, Bacillus licheniformis, Serratia marcescen,
33
Artrofactina, Ptisolvina, viscosinamida, etc. Pseudomonas fluorescens, Bacillus subtilis, Bacillus
brevis, Bacillus polymixa.
Acidos grasos, fosfolípidos, lípidos Corynebacterium lepus, Nocardia erythropolis,
Neutros Thiobacillus thiooxidans
Surfactantes poliméricos Acinetobacter calcoaceticus, Candida tropicalis,
Candida lipolytica, Pseudomonas fluorescens,
Pseudomona aeuroginosa
Surfactante Particulado Acinetobacter calcoaceticus.
5.3.4.5 Sustitutos biodegradables del LDPE

Se han descubierto y comercializado múltiples sustitutos biodegradables del
polietileno de baja densidad, estos son polímeros biológicamente degradables
(biopolímeros), con características similares, inferiores o mejores en ciertos
aspectos, que las del LDPE [192], estos biopolímeros ofrecen beneficios
ambientales tales como biodegradabilidad, contribuye a disminuir los gases de
efecto invernadero y renovabilidad del material base [194, 225]. Además se
han descubierto microorganismos como el Bacillus megaterium, capaces de
sintetizar polímeros biodegradables como el PHB [145, 226].
5.3.4.5.1 Los polihidroxialcanoatos PHA

En la actualidad se han hecho polímeros biodegradables muy estudiados como
el Poli (butileno Succinato) (PBS), poli (etileno Succinato) (PESu), o el
copolímero poli (butileno Succinato -co-butilen adipato (PBSA), los cuales son
miembros de un grupo denominado comercialmente como ‘Bionolle’ [31, 32, 33].
y a su vez éstos y muchos más hacen parte de la familia de polímeros
denominada los polihidroxialcanoatos (PHAs), que en la actualidad están
compuestos por más de 150 tipos, todos son poliésteres alifáticos
biodegradables con fórmula general monomérica de −[O-CH(R)-CH2-CO]−,
donde las propiedades varían de acuerdo al sustituyente alquilo (R), por
ejemplo el polímero alternativo polihidroxibutirato PHB, que en virtud a que su
sustituyente (R) es el grupo metilo posee una alta cristalinidad, cuyo valor es
superior al 50%, cobrando gran importancia en el campo de la industria durante
los últimos años, por sus propiedades físico-químicas y ha sido considerado
como un posible sustituto de plásticos derivados del petróleo como el polietileno
de baja densidad LDPE, sin embargo es posible que existan otros con mejores
cualidades, por ejemplo los estudios de H-S. Kim revelaron que el PBSA se
degrada mucho más rápido que el PBS [35].
Otros candidatos para sustituir al LDPE o ser buenos aditivos son la
policaprolactona (PCL), el ácido poli láctico (PLA) y el ácido poliglicólico (PGA).
Algunos estudios han demostrado que la mezcla de biopolímeros como P (HB-
3)/ poli (propiolactona), P (HB-3)/poli (etilen adipato), y P (HB-3)/poli (3-
hidroxibutirato-co-3-hidroxivalerato) (PHBV) aceleran la biodegradación
comparadas con cada polímero puro, lo cual puede ser atribuido a el proceso
de separación de fases de los componentes de la mezcla [148].
34
5.3.4.5.2 Almidón termoplástico
El almidón puro posee un punto de fusión superior a su punto de
descomposición por lo que no se puede moldear, pero cuando se mezcla con
un plastificante como el glicerol o los polioles, puede ser procesado bajo alta
presión y temperatura, y este se denomina almidón termoplástico (TPS) [208],
pero la cantidad de plastificante es importante, la interacción es débil cuando
está en un porcentaje inferior al 10% por lo que se torna frágil pero cuando es
superior al 20% se mejora su flexibilidad y elongación. Cuando es expuesto a
bajas temperaturas o a plastificantes poliólicos sufre retrogradación que es la
restructuración de los enlaces. Se ha utilizado almidón de muchas fuentes
entre las cuales están: papa, frijol mung, cascara de maní, tapioca, maíz etc.
[190, 208, 116, 115, 198, 182].
A continuación se presenta como resultado de esta revisión un listado de los
posibles sustitutos que han sido probados en múltiples estudios sobre
biomateriales y su biodegradación.
Tabla 9 sustitutos del Polietileno de baja densidad (LDPE)

Sustitutos Características o Ventajas Desventajas Refere
composición ncias
Policaprol Se comporta de forma Biodegradabilidad Es muy soluble en [193]
actona similar a plásticos Su estructura muchos solventes
(PCL) como polietileno y cristalina es orgánicos, transición
polipropileno, similar a la del vítrea baja, baja
transición vítrea polietileno. resistencia mecánica.
-60°C, resistencia Relativamente
mecánica 23MPa, barato alto
punto de fusión (PF) porcentaje de
(60-65) °C. elongación:700%
Poli ácido Es el poliéster más Tiene excelentes De aplicaciones [193]
glicólico simple, es altamente propiedades médicas limitadas por
(PGA) (del cristalino, con una mecánicas su baja solubilidad y
inglés valor de 45-55%, su elevada tasa de
polyglicoli prácticamente degradabilidad
c acid) insoluble en cediendo productos
compuestos orgánicos, ácidos, sus
tiene un alto punto de copolímeros tienen
fusión PF (220-225°C), más usos.
transición vítrea (tv) de
35-40°C
Ácido poli Hidrofóbico por el Es más resistente Es quebradizo y de [30]
láctico grupo radical lateral a la hidrólisis que pobre resistencia a la
(PLA) (del CH3 transición vítrea el PGA, buenas temperatura
inglés de 63.8°C, resistencia propiedades
polylactide a la tensión de mecánicas.
acid) 32.22MPa
similar al polietileno y Insoluble en agua Caro de producir y [227,
Polihidroxi polipropileno,PF:180° no tóxico, Natural pobres propiedades 199,
butirato C tv: 55°C biodegradable mecánicas 200,
(PHB) cristalinidad mayor a biocompatible comparables al PLA, 228,
50% piezoeléctrico puro es quebradizo, 193]
termoplástico susceptible a la
35
elastómerico termodegradación a
temperaturas cercanas
al punto de fusión
Poli Copolimero, pf: 108°C, Altamente El copolímero puro es [193]
hidroxibuti tv: -5°C a 20°C cristalino quebradizo pero
rato co menos que PHB
valerato
(PHBV)
Plastarch Almidón, los enlaces Biodegradable Inferiores cualidades [53,
thermopla glucosídicos rompen a resistente al mecánicas, 211,
stic starch 150°C y a 250°C los calor, barato quebradizo, 208,
(TPS) gránulos colapsan higroscópico, amorfo 193]
Poli(Butile Poliéster de ácido Características Los microorganismos [53,
no succínico y etilenglicol, mecánicas que lo degradan tienen 229]
Succinato) PF:(90-120)°C, tv:- comparables a una distribución
(PBS) 45°C a -10°C entre el las del limitada, depende
Poli PE y PP, porcentaje polipropileno PP fuertemente de los
(Etileno de elongación 330%, el polietileno baja factores ambientales,
Succinato) Resistencia a la densidad LDPE, insuficiente
2
(PES) tensión de 330kg/cm buena biocompatibiliad y
procesabilidad bioactividad.
mejor que PLA y
PGA
Poli (p- Poliéster de p- Buenas Es más caro que el [193]
dioxanona dioxanona (tv): propiedades PBS
)(PPDO) -10°C-0°C mecánicas,
muchos
microorganismo
lo degradan.
Si bien el polietileno puro es muy buen material y sus cualidades son difíciles de
igualar, en la actualidad existen cuantiosas opciones de aditivos comerciales y
no comerciales, todas novedosas y que poco alteran sus cualidades originales,
acelerando su proceso de biodegradación, siendo positivo para el ambiente y la
economía de las empresas basadas en estas poli olefinas, además es posible
encontrar una gran cantidad de muy buenos sustitutos altamente
biodegradables y biocompatibles, pero existen aún los siguientes
inconvenientes:
Casi todos los aditivos del polietileno de baja densidad LDPE y los biopolímeros
alternativos en desarrollo son de 2.5 a 10 veces más caros, lo que implica que
los esfuerzos se dirijan a la búsqueda de sustratos de menor costo [6, 67].
Las propiedades físico químicas de los biopolímeros alternativos
frecuentemente restringen su uso [67], siendo necesario una mejora aún en
éstos.
5.4Técnicas y métodos utilizados en el estudio de la

Existe una gran variedad de técnicas que permiten analizar la biodegradación
del polietileno de baja densidad LDPE, desde múltiples perspectivas, todas se
basan en principios fisicoquímicos y permiten estudiar variables específicas,
36
que en conjunto proporcionan un amplio y profundo panorama sobre su
degradación a través del tiempo.
Todas las técnicas están adaptadas en métodos específicos, mucho de los
cuales están estandarizados, facilitando de esa manera determinar la validez y
la reproducibilidad de los experimentos. Muchas de las técnicas permiten
analizar los cambios ocurridos en el material, por efecto de los
microorganismos o los factores abióticos, en estos últimos se incluyen los pre
tratamientos y los aditivos, el rango de posibilidades de estudio es muy amplio,
abarcando desde: el daño superficial, el cambio químico, la variación del peso
molecular y de sus propiedades físicas, etc. la selección de las técnicas
depende de factores como: costos, sensibilidad, necesidades, tiempo, etc. A
continuación en la Figura 10 se dividen de acuerdo al tipo de cambio, principio
y propiedades estudiadas.
Figura 10 tecnicas y métodos disponibles para el estudio de la degradación del LDPE,

adaptado de [230, 42]
Alternativamente se han desarrollado métodos que se enfocan en el estudio de

los microorganismos, muchos de las cuales se basan en múltiples técnicas
tales como la microscopia de fluorescencia, la electroforesis, la PCR y la
microscopía óptica tradicional, la cromatografía de gases etc., siendo muy útiles
37
para conocer: los microorganismos que pueden utilizar el polietileno de baja
densidad (LDPE) como fuente de carbono y de energía, también los cambios
que ocurren en las poblaciones microbianas a través del tiempo, por ejemplo:
las enzimas liberadas, los metabolitos producidos, los cambios en la biomasa a
través de todas las etapas de crecimiento, etc.
5.4.1 Técnicas instrumentales utilizadas para estudiar la biodegradación
del (LDPE)
En la siguiente tabla se enlistan muchas de las técnicas que se han utilizado en
el estudio de la biodegradación del polietileno de baja densidad LDPE y las
otras variantes del polietileno.
Tabla 10 Técnicas utilizadas para estudiar la biodegradación del Polietileno de baja densidad LDPE
Técnica Nombre permite obtener Referencia
AAS Espectroscopia de absorción Permite determinar la [203]

atómica (del inglés: Atomic concentración de un elemento las
absortion spectroscopy) de las impurezas de los
catalizadores o aditivos, se basa en
la ley de Lambert beer.
AFM Microscopia de fuerzaEl efecto de la [71, 160, 231, 119]
atómica, (del inglés: Atomic biodegradación en la
Force Microscopy) superficie del PE
DMTA o DMA análisis Dinámico térmica Fuerza mecánica, elongación a [154, 57]
mecánica falla y módulo del polímero
DSC Calorimetría por escaneo Temperatura de fusión y de Transición vítrea
diferencial (del inglés:[106, 168, 16, 147, 110, 85, 65, 109, 111, 71]
Differential Scanning [169, 112, 65, 201, 205, 232, 233, 126, 234, 235]
calorimetry) [67, 189, 197, 115, 198, 57, 179]
EFM Microscopia de Crecimiento de la [117, 139, 41]
epifluorescencia biomasa [96, 47, 160, 119]
(Epifluorescence
microscopy)
Electroforesis Electroforesis Determinación de la especie de [132, 32, 80,
microorganismo y sus proteínas, 130]
también para el aislamiento de
plásmidos.
EA Analizador Permite determinar el [67, 196, 80, 197]
elemental(Elemental contenido de carbono
Analyzer)
EDS Espectroscopía de Permite encontrar la composición [157]
dispersión de electrones elemental (aditivos) de una
(Electron dispersion muestra de polímeros
Spectroscopy)
ESR o EPR Espectroscopia de Estructura de los metabolitos y [70]
resonancia paramangenetica reactividad de los intermedios
electrónica (Electron spin
resonance)
ESI-MS Electron Spray Ionization ion identificación de macromoléculas [80, 119]
trap Mass Spectroscopy como proteínas y metabolitos
FTIR-ATR Espectroscopia infra roja Cambios químicos, Cristalinidad.
o con transformada de
FTIR Fourier
(Fourier Transformed infra- [156, 168, 65, 111, 236, 109, 122, 96, 231, 208]
red spectroscopy with [127, 126, 106, 120, 16, 174, 83, 67, 62, 90]
Atenued refractance) [232, 110, 233, 207, 235, 188, 170, 117, 47, 105]
38
[95, 149, 139, 135, 93, 145, 166, 237, 92, 202]
[124, 132, 31, 196, 238, 84, 189, 155, 69, 211]
[41, 119, 11, 158, 123, 133, 148, 221, 197, 116]
[198, 66, 173, 82, 162, 57, 74, 179, 157, 33]
GCMS Cromatografía de gases CO2 evolución y [65, 131, 143, 90, 87, 65, 111, 109, 236, 47]
acoplada a espectroscopia Caracterización [79, 165, 51, 156, 122, 28, 131, 93, 80, 41]
de masas de los [74]
(Gas Chromatography subproductos de
coupled with mass la biodegradación.
spectroscopy) Y también la
degradación
Tanto térmica
como foto lítica.
HT-GPC o SEC Cromatografía de Distribución del Peso molecular Densidad, ángulo
HT-SEC permeación en gel (gel de contacto, viscosidad, distribución del peso
permeation chromatography, molecular.
size exclusion [67, 176, 85, 65, 69, 47, 239, 169, 112, 154]
chromatography) [149, 79, 96, 153, 170, 196, 119]
[104, 149, 151, 69]
HPLC Cromatografía líquida de alto Peso molecular y poli [196, 155]
desempeño (High dispersidad, metabolitos como
performance liquid lípidos
chromatography)
Instron universal Tensiómetro, cambios mecánicos, elongación tensión
test machine u otro Extensómetro [163, 67, 176, 71, 72, 160, 13, 240, 191, 155]
[205, 232, 233, 206, 207, 94, 125, 188, 156, 151]
[117, 11, 123, 28, 95, 190, 92, 62, 31, 196]
[197, 116, 198, 57, 179, 33]
ICP-OES Espectroscopia de emisión Para determinar la existencia [67]
dual de plasma y óptica de otros elementos traza
(inductively coupled plasma- como metales.
optical emission
spectroscopy)
MALDI-TOF MS Espectroscopia de masas Técnica de espectroscopia de [65]
con Matriz asistida por masas que permite
desorción laser con tiempo identificar Metabolitos
de vuelo (Matrix assisted generados y las proteínas
Laser Desorption time of para la identificación
flight) microbiológica
OM Microscopia Visualización de los [154, 131, 102, 87, 132, 241, 91, 148, 81, 33]
óptica microorganismos
para una
identificación
preliminar
NMR Resonancia magnética Determina los aditivos [170, 96, 196,
Nuclear 80]
PCR Reacción en Cadena de la Clonación de los genes [32, 84, 80, 155, 242, 158, 123, 128, 130]
polimerasa (Polimerase vinculados con la
chain reaction) biodegradación,
ejemplo: alcano
hydroxylase gene alkb
SEM Microscpia electronica de Erosión superficial(morfología)
escaneo Scanning electron [32, 106, 40, 117, 174, 67, 90, 147, 65, 109]
microscopy [47, 239, 111, 96, 143, 155, 112, 65, 191, 167]
[205, 139, 232, 233, 206, 234, 125, 188, 51, 156]
[168, 127, 93, 101, 166, 237, 92, 102, 202, 124]
[31, 196, 238, 170, 211, 208, 41, 119, 158, 123]
[133, 148, 81, 209, 77, 116, 129, 82, 57, 179]
[157, 33]
TGA Análisis Temperatura de [106, 168, 196, 238, 84, 80, 211, 208, 119, 158]
39
Termo fusión y de [197, 57]
gravimétrico Transición vítrea,
también de
descomposición
térmica o
degradación.
TLC Cromatografía de capa fina Caracterización de los [65, 105]
(Thin lawyer subproductos de la
chromatography) degradación.
UVS Espectroscopia de Determinación de la [117, 65, 160, 134, 124, 126, 238, 231, 73, 163]
ultravioleta y concentración de [128, 197, 127, 129, 75, 82]
visible (UV-visible biomasa o de la
spectrophotometry actividad de una
) enzima y la pureza
del DNA
XRD Difracción de rayos x(X- Ray difracción) [111, 152, 109, 65, 92, 80, 155, 179, 157]
XSP (Estructura cristalina y amorfa) del polímero y [119]
WAXS sus aditivos
SAXS X- RAY Photoelectron Spectroscopy [65]
(EDXA) Wide angle X-ray scattering [65]
(EDXMA) Espectroscopia de rayos x en ángulo pequeño [93]
(EDAX) Small angle X-ray spectroscopy9+
energy dispersive X-ray analysis (or energy
dispersive X-ray microanalysis)
XRF Fluorescencia de Rayos X, es un analizador de elementos para [170]
determinar aditivos
5.4.1.1 Técnicas espectrofotométricas, microscópicas y espectrométricas

para el estudio de la degradación del LDPE
De todas las técnicas encontradas, gran parte son técnicas

espectrofotométricas microscópicas y espectrométricas, las cuales se basan en
la interacción entre la materia (el polietileno de baja densidad LDPE) y la
energía, cada uno de los sus átomos, absorbe, difracta o refleja la energía que
se emite por las distintas fuentes, como son: los fotones de las distintas
radiaciones electromagnéticas, (microondas, infrarrojas, visibles, ultravioletas,
rayos X, etc.,) flamas (energía térmica), los electrones acelerados, etc., las
cuales excitan sus electrones emitiendo señales que son registradas por
detectores y procesados en ordenadores para ser finalmente analizados, de
esta manera proporcionan datos relevantes sobre el material, como son: la
composición química, cristalinidad, morfología superficial, análisis de los
aditivos proporcionados, formación de radicales u otras especies y en la
observación de los microrganismos que atacan el polietileno de baja densidad
LDPE etc., todas estas técnicas son no destructivas, exceptuando las
espectrométricas, todas son versátiles y muy sensibles, y todos los grandes
avances en los estudios sobre biodegradación de LDPE no serían posibles sin
la utilización de las técnicas espectrofotométricas, espectrométricas y
microscópicas, a continuación se mencionara algunas.
40
5.4.1.1.1 Microscopia electrónica de barrido (SEM)
El microscopio electrónico de barrido, conocido por sus siglas en ingles SEM,
utiliza electrones en lugar de luz para formar una imagen. Para lograrlo, el
quipo cuenta con un dispositivo (filamento) que genera un haz de electrones
para iluminar la muestra, después los electrones que interactuan con la
superficie de la misma se capturan con detectores que transforman esas
señales en información valiosa como las formas, textura y composición química
de sus constituyentes [243].
La microscopia electrónica de barrido (SEM) tiene diversas aplicaciones en los
estudios de la biodegradación del polietileno de baja densidad. Porque permite
apreciar la morfología superficial de las capas del polímero, de esa manera se
pueden ver los pequeños cambios superficiales y la colonización microbiana,
las pequeñas imperfecciones estructurales, las separaciones entre diferentes
polímeros, etc. Las muestras son generalmente cubiertas con polvo de oro o
algunos iones metálicos antes de la examinación con SEM. La técnica de
presión variable SEM es útil en la observación directa sin ningún tipo de
metalización de la superficie a una adecuada magnificación [244].
5.4.1.1.2 Microscopia de fuerza atómica
La microscopía de fuerza atómica o AFM es un método para ver una superficie
en su integridad. El método se aplica a materiales sintéticos, suaves y duros
también a estructuras biológicas (tejidos, células, biomoléculas) [245].
5.4.1.1.3 Espectroscopia UV - visible

Todas las moléculas orgánicas e inorgánicas absorben en el ultravioleta y el
visible, cuyas longitudes de onda medida en nanómetros, van desde los
(200nm a los 800nm), siendo ésta la energía necesaria para excitar sus
electrones, cuando se registra su absorbancia en todas las longitudes de onda
pertenecientes al UV-visible se genera una huella única para cada molécula
(espectro), además la intensidad de la absorbancia es directamente
proporcional a la concentración, de acuerdo a la ecuación de Lambert Bourger
Beer, el espectrómetro UV- visible permite observar tanto el espectro como su
intensidad de esa manera puede identificar las moléculas y cuantificarlas.
La espectroscopia UV- Visible es una técnica muy poderosa, por su increíble
versatilidad, puesto que unida a otras técnicas como la quimioluminicencia CL y
la cromatografía de capa fina TLC, permite un sin número de usos, entre los
cuales están: la identificación de microorganismos por medio de la quimio
taxonomía, análisis de viabilidad o crecimiento de biomasa, análisis de la
actividad enzimática, actividad metabólica, cuantificación de proteínas y ácidos
nucleicos, permite evaluar la hidrofobicidad de la superficie celular de acuerdo a
la turbidez (prueba BATH), etc.
41
5.4.1.1.4 Espectroscopia Infrarroja con transformada de Fourier (FTIR)
La espectroscopia infrarroja con transformada de Fourier (FT-IR) utiliza el hecho
de que las moléculas orgánicas absorben determinadas frecuencias en el
infrarrojo que son características de su estructura. Dichas absorciones son
frecuencias de resonancia, es decir, la frecuencia de la radiación absorbida
coincide con la frecuencia del enlace o del grupo que vibra.
La espectroscopia infrarroja con transformada de fourier FTIR permite
incontables aplicaciones entre las que están: La elucidación de estructuras
químicas y físicas, la observación de puentes de hidrógeno, la detección de
grupos terminales, el análisis de las reacciones de degradación, el análisis del
comportamiento de entrecruzamiento de las moléculas y el análisis de la
composición de copolímeros en forma líquida y sólida etc [244].
5.4.1.1.5 Espectroscopia de resonancia magnética nuclear (NMR)
El fenómeno de la resonancia magnética es consecuencia de que existen
sistemas físicos (átomos, iones, núcleos, etc.) que poseen momento
magnético permanente. En presencia de un campo magnético, ese momento
interactúa con el campo y se produce desdoblamiento en los niveles
energéticos del sistema (efecto zeeman) [246].
La NMR Permite determinar la fracción soluble, la fuerza de tensión y los
cambios en el peso molecular, es un método indirecto de evaluación porque no
da ninguna idea de los cambios químicos del polímero. La espectroscopia NMR
(1H and 13C NMR) es el método más versátil que se puede usar como
herramienta analítica para muchos estudios de biodegradación del polietileno
de baja densidad LDPE [184, 244].
5.4.1.1.6 Desorción láser asistida por la matriz con detección de masas por
tiempo de vuelo MALDI-TOF MS
En la técnica de análisis (MALDI) (matrix-assisted laser desorption/ionization), el
analíto es primero cristalizado en una matriz con un gran exceso de un
compuesto, usualmente un ácido orgánico débil absorbente de ultravioleta (UV),
después del cual se le dispara radiación laser a la mezcla analíto matriz,
resultando en la vaporización de la matriz la cual porta el analíto.
Subsecuentemente la matriz absorbe la energía del láser y ioniza la muestra
puesto que le quita o dona electrones, por lo que la ionización es indirecta [247],
el analizador es de tipo de tiempo de vuelo o TOF (del inglés time of flight).
La MALDI permite una vaporización no destructiva y una ionización de
pequeñas y grandes biomoléculas, proporcionando una caracterización del
peso molecular y la distribución de las masas moleculares de los distintos
productos de la degradación del polietileno.
42
Permite la identificación de microorganismos biodegradadores de LDPE,
mediante el análisis de proteínas, principalmente ribosomales, a partir de
colonias o directamente de muestras a través de la creación de un espectro de
masas el que es específico para cada especie [248]. La implementación de
MALDI-TOF MS es sencilla, necesitando sólo un par de días para la
capacitación del personal, la identificación es rápida y el costo por cada muestra
es inferior al costo de otros métodos diagnósticos [248]. Esta tecnología ha
demostrado ser confiable, específica y rápida para la identificación de distintas
bacterias aeróbicas y anaeróbicas [248].
5.4.1.1.7 Espectrometría con Plasma Inductivamente acoplada a Emisión
Óptica ICP-OES
La espectroscopia con plasma inductivamente acoplada (ICP/OES) es una
herramienta poderosa para la determinación de metales en una variedad de
diferentes matrices de muestras [249]. La técnica se basa en la emisión
espontanea de fotones de los átomos y iones que han sido excitados en una
descarga de radiofrecuencia RF [249]. Presenta la mayor sensibilidad al
detectar hasta ultra trazas (ppq-ppb) [250].
En esta técnica una muestra liquida es inyectada bajo una fuente de plasma de
argón inducido por radiofrecuencia, usando una variedad de nebulizadores o
alguna técnica de introducción de muestras [249].
La ICP/OES puede ser acoplada a la cromatografía de gases (GC) o a la
cromatografía liquida de alto-desempeño (HPLC), lo que potencia el
desempeño de las técnicas cromatográficas y aumenta su sensibilidad, por lo
tanto es útil para la determinación de los metales presentes en el polietileno,
pertenecientes a impurezas, aditivos o catalizadores [249].
5.4.1.1.8 Espectroscopia de difracción de rayos x, XRD
La espectroscopia de difracción de rayos x (XRD) se fundamenta en que
cuando un haz monocromático de rayos x se enfoca en un cristal, éste forma
patrones de difracción y estos patrones reflejan las características
fisicoquímicas de las estructuras del cristal [251].
La espectroscopia de difracción de rayos x permite identificar, la
microestructura, el tamaño de los cristales y la orientación de las cadenas de
polietileno, también permite cuantificar el grado de cristalinidad del polietileno,
pues ningún polietileno es 100% cristalino (polimorfismo), siendo esto
importante porque la biodegradación se facilita en las regiones amorfas, y
también la cristalinidad misma varia en virtud del proceso de deterioro, de esta
manera se siguen los pasos del proceso de biodegradación [252].
43
5.4.1.1.9 Espectrometría Fluorescencia de rayos X, XRF
La microscopia de fluorescencia se involucra la emisión de un fotón de rayos X
después de la ionización del átomo por un haz primario de rayos X, el fotón de
rayos X del tubo impacta la muestra donde interactuara con un electrón de las
capas internas del átomo, sacando el electrón del orbital, este espacio vacío se
llena prontamente por un electrón de las capa superior, este electrón tiene una
mayor energía que el electrón que lo remplaza, esta energía en exceso se
expulsa en forma de rayos x con una longitud de onda específica para el átomo
[250].
La técnica XRF permite encontrar elementos que van desde el Sodio al Uranio,
en estado sólido o líquido, en forma de capas delgadas o bulbosas, con un
amplio y dinámico porcentaje, requiere mínima preparación, es no destructiva,
permite un análisis rápido y multi elemento, es transportable a el campo de
análisis, bajos costos de mantenimiento y operación. Permite el estudio de
metales traza en el polietileno de baja densidad LDPE con muy buena
sensibilidad y un costo relativamente bajo [250].
5.4.1.1.10 Espectroscopia de resonancia paramagnética electrónica
EPR
La espectroscopia paramagnética electrónica EPR es una forma de
espectroscopia de absorción de microondas, en la cual las transiciones se
inducen entre los niveles de energía de zeeman de electrones no apareados
[253].
Mientras que la NMR es una técnica espectroscópica estándar para la
determinación estructural de las moléculas, la estrechamente relacionada
espectroscopia EPR es aun escasamente conocida por muchos científicos
[254].
Esta discrepancia es originada por la carencia de sistemas naturales
paramagnéticos debido a el hecho de que la formación de enlaces químicos es
inherentemente acoplado al emparejamiento de dos electrones y como
resultado general un espín electrónico de cero, S= 0 [254].
El método está restringido a unos pocos sistemas paramagnéticos como son,
los complejos de metales de transición y los radicales libres, únicos que
poseen un electrón residual, siendo esto ventajoso por la selectividad que
presenta [254].
Cuando hay una ruptura de los enlaces covalentes en una molécula de
polietileno de baja densidad LDPE, se forman radicales libres inestables cuyo
carácter paramagnético los hace fácil de detectar e identificar con la EPR,
siempre y cuando la concentración de radicales este en los límites de
sensibilidad (̴1012 radicales) [253].
44
5.4.1.1.11 La espectroscopia de absorción atómica (AAS)
La espectroscopia de absorción atómica AAS por sus siglas en inglés Atomic
absortion spectroscopy, es una técnica analítica que mide la concentración de
los elementos. La absorción atómica es tan sensible que puede medir valores
menores a partes por mil millones de gramo (µg dm-3) en una muestra. La
técnica utiliza las longitudes de onda de luz absorbidas específicamente
absorbidas por un elemento. Las que corresponden a las energías necesitadas
para promover electrones de un nivel de energía a otro de mayor energía [255].
Se aplica en el análisis de los elementos traza presentes en el polímero.
5.4.1.2 Técnicas cromatográficas para el estudio de la degradación del
polietileno de baja densidad LDPE
La definición de la IUPAC (unión internacional de química pura y aplicada) de
cromatografía es:
“Un método físico de separación, en el que los componentes a separar se
distribuyen en dos fases, una estacionaria y otra que se mueve en una dirección
definida” [256].
Estos compuestos químicos, pueden ser compuestos orgánicos de moderada
masa molecular tales como ácidos grasos y muchos otros metabolitos, también
polímeros tales como ácidos nucleicos, proteínas o cadenas
macromoleculares, como las que componen el polietileno de baja densidad, por
lo tanto son muy utilizadas en los estudios sobre la degradación del polietileno
de baja densidad LDPE, porque permiten estudiar el cambio en la longitud de
las cadenas del polietileno de baja densidad LDPE, identificar microorganismos
solamente observando su perfil de ácidos grasos, analizar sus enzimas y el
material genético y hasta cuantificar la mineralización del polietileno, la
cromatografía se clasifica en cromatografía de partición y adsorción, siendo la
de partición en fase estacionaria líquida y la de adsorción en fase estacionara
sólida, aunque este trabajo no pretende un estudio de tallado de estas técnicas,
se mencionaran brevemente algunas de estas.
5.4.1.2.1 Cromatografía de gases acoplada a masas GCMS
La cromatografía de gases GC es un método cromatográfico común que se
basa en las diferencias en comportamiento de partición entre un flujo de fase
móvil y una fase estacionaria en orden de separar compuestos orgánicos o
inorgánicos volátiles o semivolatiles [244]. Es una de las técnicas más versátiles
y ubicuas en los laboratorios por ser sencilla, rápida, eficiente y sin lugar a duda
su aporte en el estudio de la biodegradación del LDPE es excepcional, por que
con esta técnica se pueden separar mezclas muy complejas, [257].
La GC técnica se usa para la identificación y cuantificación de monómeros o
solventes residuales en el LDPE, para el análisis de componentes volátiles o
impurezas, para la verificación de los niveles de aditivos en el LDPE, para la
45
cuantificación de contaminantes traza, para el análisis de los productos finales
de la biodegradación como el CO2, CH4, para el análisis de otros metabolitos
generados por los microorganismos, etc., un numero de detectores
especializados están disponibles, incluyendo ionización en flama FID (del inglés
flame ionization), emisión atómica AED (del inglés atomic emission), flama
fotométrica FPD (del inglés flame photometric) y conductividad térmica TCD (del
inglés thermal conductivity). Adicionalmente está disponible la espectrometría
de masas (MS), que permite una gran flexibilidad en evaluaciones cualitativas y
cuantitativas del polietileno [258], cuando se acopla con la espectroscopia de
masas como sistema de detección, es posible la identificación de virtualmente
todos los eluados con una muy alta sensibilidad, creando un sistema analítico
muy poderoso [257].
5.4.1.2.2 Cromatografía de líquidos de alta eficiencia HPLC
La técnica HPLC es el análogo de la cromatografía de gases pero, en fase
liquida, el secreto de su éxito son las partículas pequeñas y uniformes que
producen poca difusión arremolinante y su máxima transferencia de masa,
además permite analizar compuestos poco volátiles o estables [257].
La cromatografía liquida de alta presión (HPLC) es ampliamente usada para
separar moléculas en base a su tamaño. El principio de la técnica es que las
moléculas mayores eluirán primero, a medida que estas pasan a través de los
espacios en la columna, mientras más pequeñas sean estas eluiran
posteriormente porque estas tomaran mayor tiempo en pasar atravesar los
poros in el gel. La HPLC se usa para analizar los productos de la degradación
metabólica de los xenobióticos. Pudiéndose observar los productos de
biotransformación como son: el estireno, epoxistireno, fenilacetaldehido, y 2-
feniletanol etc. Los cuales fueron detectados por la cromatografía líquida de
alta presión en fase reversa [244].
5.4.1.2.3 Cromatografía de exclusión por tamaño o de permeación en gel
Es un método en el que la fase estacionaria es una malla o criba molecular, se
usa en columnas abiertas con alimentación por gravedad para separaciones
de preparación, y para separaciones de alta eficiencia [257]. Estas mallas son
carbohidratos poliméricos y acrilamidas que tienen una red abierta formada por
el entrecruzamiento de cadenas poliméricas, son hidrófilas, por lo que son
capaces de absorber agua e hincharse, causando la abertura de su estructura
[257]. El grado de entrecruzamiento determina el tamaño de los poros [257].
Las moléculas más grandes no penetraran en los poros por lo que eluirán más
rápido, y solo las más pequeñas quedaran atrapadas en los poros
permaneciendo en la malla.
La cromatografía de permeación en Gel (GPC) o cromatografía exclusión por
tamaño (SEC) se usa en la determinación de la distribución de las masas
46
moleculares del polietileno de baja densidad para determinar los cambios en el
peso molecular después de la biodegradación [244].
5.4.1.3 Técnicas de análisis de sus propiedades mecánicas: Pruebas de
tensión tensile test
También conocida como test de tensión, son probablemente los tipos de
pruebas más fundamentales que se pueden realizar en cualquier material, las
pruebas de tensión son simples, relativamente baratas, y completamente
estandarizadas, mediante la tensión a cualquier material se puede determinar
como el material reacciona ante las fuerzas aplicadas, se analiza la resistencia
a la tensión, conociendo que tanto se estira [30]. Las propiedades mecánicas
son medidas con el módulo de elasticidad, la resistencia a la tensión y la
elongación del material, obtenidas a partir de los ensayos de tracción en la
maquina universal de ensayos Instron. La cual ha sido estandarizada en la
norma ASTM D638 “método test estándar para las propiedades de los
plásticos”. El deterioro del polietileno de baja densidad LDPE se puede evaluar
por el cambio en sus propiedades reológicas, estas propiedades dependen
directamente en el peso molecular del polímero, su cristalinidad y la presencia
de las ramificaciones y los efectos de cruzamiento, etc., [259].
5.4.1.3.1 Resistencia a la Tensión

Se mide como la fuerza medida por la celda de carga al tiempo de ruptura
dividido por la sección del área cruzada original de la muestra al punto de
sección cruzada mínimo.
5.4.1.3.2 Módulo de Tensión y la elongación hasta la ruptura
El Módulo de Tensión es la pendiente de la porción lineal de la curva estrés –
tensión, y la elongación de él espécimen hasta la ruptura se mide en términos
de su longitud inicial (L0) y longitud final
(L1), y es dado como:
𝐸𝑙𝑜𝑛𝑔𝑎𝑐𝑖ó𝑛 ℎ𝑎𝑠𝑡𝑎 𝑙𝑎 𝑟𝑢𝑝𝑡𝑢𝑟𝑎
(𝐿1 − 𝐿0 )
= ∗ 100
𝐿0
5.4.1.4 Técnicas de análisis térmico
El análisis térmico comprende el estudio de la evolución de las propiedades de
una muestra o compuesto cuando es sometida a un calentamiento a altas
temperaturas.
Es una familia de técnicas denominadas análisis térmico, los miembros usados
en los estudios de biodegradación del LDPE son: la calorimetría de escaneo
diferencial DSC (del inglés differential scanning calorimetry), el análisis termo
gravimétrico TGA (del inglés thermo gravimetric analysis), y el análisis térmico
mecánico y dinámico DMTA (del inglés dynamic mechanical analysis). Sin
47
embargo existen muchas técnicas más, a continuación se en listan algunas
técnicas de análisis térmico.
Tabla 11 principales técnicas de análisis térmico, tomada de [260]
Propiedad Técnica Abreviación

Masa Termo gravimetría TG
Temperatura Análisis Térmico diferencial DTA
Entalpia Calorimetría diferencial de barrido DSC
Propiedades mecánicas Análisis termo mecánico TMA
Propiedades ópticas Termo microscopia
Propiedades magnéticas Termo magnetometría
Propiedades eléctricas Termo electrometría TM
Propiedades acústicas Termo sonometría TS
Evolución de gas Análisis térmico de emanación ETA
radioactivo
Evolución de partículas Análisis de termo partículas TPA
Todas las técnicas de análisis térmico son usadas para caracterizar una amplia
variedad de materiales, entre los que se encuentran los polímeros
termoplásticos como el LDPE.
5.4.1.4.1 Calorimetría diferencial de barrido DSC
La calorimetría diferencial de barrido DSC (del inglés Diferential Scanning
Calorimetry) permite el estudio de aquellos procesos en los que se produce una
variación de entalpia, por ejemplo determinación de calores específicos, puntos
de ebullición y de fusión, pureza de compuestos cristalinos, entalpías de
reacción y determinación de otras transiciones de primer y segundo orden [261].
La DSC puede trabajar desde la temperatura del nitrógeno líquido hasta unos
600°C [261].
El polietileno presenta precisamente todas sus transiciones térmicas en ese
intervalo. Por esta razón se emplea en la caracterización del LDPE, para
estudiar: la temperatura de transición vítrea Tg, la temperatura de fusión, las
reacciones de polimerización, los procesos de curado, el análisis de
polimorfismos, la cinéticas de reacción, el tiempo e inducción a la oxidación y
descomposición, también se pueden hacer estudios de compatibilidad de
mezclas del LDPE con otros polímeros [261].
5.4.1.4.2 Análisis térmico mecánico y dinámico DMTA
Es una técnica empleada en el estudio de las propiedades viscoelasticas de un
material, basada en la aplicación de energía mecánica mediante perturbaciones
sinusoidales en la zona elástico lineal de los ensayos esfuerzo- deformación
con el fin de determinar sus propiedades dinámicas [262].
El análisis térmico mecánico dinámico DMTA (del inglés Dynamic Mechanical
Analysis), permite estudiar la respuesta del polímero a las solicitaciones
48
exteriores en un amplio intervalo de tiempos y temperaturas, y también permite
observar propiedades como: la transición vítrea, relajaciones secundarias,
copolímeros, compatibilidad de mezclas, orientación, resistencia al impacto,
presencia de agua, polímeros naturales, peso molecular, irradiación, reacciones
de curado, envejecimiento físico, adhesión y fricción, aislamiento acústico,
fluorescencia [262].
5.4.1.4.2.1 Análisis Termo Gravimétrico TGA
El análisis termo gravimétrico TGA (del inglés Thermogravimetric analysis)
provee una información de caracterización complementaria y suplementaria
para la técnica térmica más comúnmente usada, la DSC [263].
La TGA mide la cantidad y tasa (velocidad) de cambio en la masa de una
muestra de polietileno como una función de la temperatura o el tiempo en una
atmosfera controlada [263].
Las medidas son usadas primeramente para determinar las estabilidades
térmicas y/o oxidativas del material (polietileno de baja densidad), también sus
propiedades composicionales. La técnica puede analizar muestras de
polietileno de baja densidad LDPE que exhiban tanto pérdida de masa como
ganancia debido a la descomposición, oxidación o pérdida de compuestos
volátiles (tal como la humedad). La técnica permite distinguir sutiles pero
importantes diferencias entre varias muestras de polietilenos como: la cantidad
de aditivos, grado de cristalinidad, el análisis composicional de mezclas de
polietilenos, cinética de la descomposición, bajos niveles de volatiles etc [263].
5.4.2 Métodos y pruebas utilizados en los estudios de biodegradación del
polietileno de baja densidad LDPE
Existen muchos métodos que permiten estudiar la biodegradación del
polietileno, algunos han sido diseñados y estandarizados por organizaciones
como la: organización internacional de estándares o ISO (del inglés
International Standard Organization) y la sociedad americana de pruebas y
materiales o ASTM (del inglés American Society for Testing and Materials), los
métodos tienen múltiples propósitos, pueden interesarse en las condiciones de
la biodegradación, en los productos, en los microorganismos, etc.
A continuación se presentaran todos los métodos que se encontraron en los
artículos publicados sobre biodegradación de polietileno de baja densidad.
Tabla 12 Test y métodos de cultivo usados para evaluar la biodegradación del LDPE.
Adaptado de [264]
Nombre del Test Características Referencias

Prueba de Stürm test (OCDE 301B, ISO [51, 127, 101, 92, 62, 196, 32, 73, 201, 128]
biodegradación 14852, ASTM D5988–03 KS [40, 81, 209, 197]
49
respirometrica M3100-1:2002;MOD ISO
Stürm (del inglés 14855:1999, prEN
respirometric 14046) o variantes para obtener
biodegradation la evolución de CO2.
tests.)
Prueba de adherencia a Adhesión bacteriana a hidrocarburos, para la [160, 237, 126, 73, 106,
hidrocarburos BATH (por evaluación de la hidrofobicidad de la superficie 127, 129]
sus sigla en inglés celular bacteriana.
bacterial adhesion to
hidrocarbons)
Prueba de salado SAT El Test de agregación de sal para medir la [106]
(por sus siglas en inglés: hidrofobicidad de la superficie celular.
salting out test)
Demanda biológica de Test sobre la demanda de oxígeno en medio [238, 73, 163, 158, 128]
oxigeno BOD (del inglés líquido o
Biological oxigen en medio solido es (ISO 14851) recomendado
demand) por 117 días
Prueba de composta CP Test Compost bajo condiciones de laboratorio [104, 67, 92, 202, 11,
(del inglés Compost (ISO/DIS 20200, EN 261085, ISO 14855 y 239, 194, 133, 197]
test) ASTM D5958, ASTM 5338-98. ) recomendado
por 50 días
Condiciones Anaeróbico (ASTM D5210) por 58 días pruebas [214]
anaeróbicas
Prueba de En un Erlenmeyer cerrado a 25°C [96, 237, 88, 238, 161, 84, 117, 41, 119, 128]
degradación (OCDE 301D, ASTM D5988-96 o [162, 74, 179]
Headsp 25°C modificado 30°C o 37°C )
(Biodegradatio recomendado por 48 días
n Assays).
Prueba de degradación En un Erlenmeyer cerrada a 50°C (OCDE [48, 104, 126, 158]
(Headsp 50°C) 301D, ASTM D5988-96 modificado)
recomendado por 48 días
Compost a escala piloto Test Piloto de compost (EN 14045) o KS [104, 67, 92, 202, 99,
método estandar para determinar 135, 196, 32, 214, 194]
biodegradación aeróbica bajo condiciones [209]
compostaje controladas ASTM D
M3100-1:2002; MOD ISO 14855:1999. por 84
días
Prueba de Test en suelo reconstruido en [15, 190, 92, 62, 202, 265, 201, 113, 9, 196]
enterramiento en el laboratorio (DIN 53739) [164, 78, 72, 194, 133, 209, 115, 179]
suelo SOT (del ISO 846/2000, ASTM D 5988
inglés Soil burial (ASTM D 5988-09) ASTM D
test ) (lab) 5338-98. En un suelo de jardín
ASTM D 5247–92.
Prueba de suelo de Test de muestra enterrada en suelo real [16, 104, 132, 208]
Agricultura (en inglés para agricultura
agriculture soil test)
Prueba de zona de color La eficiencia se determina por el color de la [75, 144]
o clara(en inglés Color zona formada en los platos solidos
zone assay) o clear zone emulsificados con LDPE-. Indicador Purpura
test de Bromocresol para detectar algún cambio en
el pH of el medio.
Pruebas de enzimas (en Test Enzima, lacasa test con laccase [134, 124, 174, 155, 16, 82]
inglés Enzime test) screening médium, LSM.
Estudio de absorción de De acuerdo a las normas ASTM D1037 - [190, 211, 208, 116, 179]
agua (WAS del inglés 99, ASTM D-570.immersion de una
Water Absorption muestra15xl5x3mm en agua destilada a
Study) temperatura ambiente se mide el peso
ganado. Para biopolímeros hidrófilos
como el almidón plastificado.
Valoración cuantitativa De acuerdo a la norma ASTM G21-90 se [198]
50
del crecimiento de cuantifica el crecimiento de biocapas de
hongos( en inglés hongos en cajas petri sobre el polietileno
Quantitative assessment)
Prueba de Número más probable en orden [62, 92, 156, 132, 238, 84, 163, 16, 119, 242]
viabilidad de examinar el cambio de la [209, 77, 116, 127, 157]
metodo de actividad de las bacterias en el
conteo de suelo durante la prueba, conteo
platos microbiano por el estudio de las
(viability tests) UFC, también las Pruebas Redox,
(plate counting CTC- Fluorescente y TTC (2, 3,
method or 5- cloruro trifeniltetrazólio) como
others ) indicadores de viabilidad.
Prueba de cultivo liquido La degradación se cuantifica por la estimación [144]
(Liquid culture test) de carbón orgánico total soluble en agua
(TOC) y pH de los medios de cultivo
Condiciones de Se sumerge a 3 m conectados a un flotador, y [188, 231, 240, 266]
exposición marina se deja desde varios meses a un año, se
(Marine exposure analiza las condiciones del mar, pH, OD,
conditions) salinidad, etc.
Índice de flujo fundido De acuerdo a la norma ASTM D1238, ASTM [208, 221, 198, 179]
MFI (del inglés Melt flow D3418. Con probador MFI para el análisis de
index, la temperatura de fusión del polímero.
Cultivo en cajas Se siembra en medios [32, 161, 80, 16, 119, 123, 69, 91, 128, 114]
Petri con PE (en selectivos con PE como fuente [51, 116, 82, 179, 175, 157, 144]
inglés polymer de carbón Método de conteo
containing agar de plato, método de zona
(MSM) plates) clara, ASTM G21.
Pruebas de tinción Características, [76, 134, 237, 145, 135, 48, 124, 132, 99, 267]
pruebas bioquímicas y Identificación y [73, 16, 11, 123, 241, 91, 128, 75, 175, 157]
microscópicas (en inglés Caracterización de
Gram staining los Microorganismo
Biochemical test
Macroscopic test)
Quimioluminiscencia de La Quimioluminiscencia de ATP permite el [96, 122, 84]
ATP estudio de la Biomasa.(actividad metabólica
de la célula)
Secuenciación Secuenciación del 16s [122, 168, 95, 126, 32, 73, 106, 84, 80, 63]
molecular o en rRNA o 28S rRNA que [41, 119, 242, 158, 123, 128, 81, 127, 129, 130]
inglés (Molecular Permite identificar las [157]
level (16S rRNA, especies de hongos o
or 18S rRNA bacterias que degradan el
gene sequencing) LDPE.
test
Análisis de PCR (en Random Amplified Polymorphic DNA [242]
inglés (RAPD)-PCR para realizar un perfil del DNA
Analysis)
Viscosidad y peso Viscosidad y Peso Molecular promedio es la [126]
molecular V MW (del correlación entre la viscosidad intrínseca del
inglés viscosity polietileno y su peso molecular fue usado para
molecular weight) estimar la reducción en el número promedio
del peso molecular (Mn)
Actividad Análisis de Biomasa. (actividad [96, 106, 160, 126, 170, 123, 241, 127, 129, 82]
metabólica, metabólica de la célula)
cuantificaci Fluoresceína di acetato FDA, TTC
ón de reducción test, ATP test, método
proteína Lowry para cuantificar la proteína
celular total.
Prueba de acidos grasos Análisis de los productos de la degradación e [80]
FAME (del inglés Fatty identificación de los microorganismos
acid methyl ester
51
analysis test
Pérdida de peso WL (del Disminución del peso del LDPE, el cual esta estandarizado de
inglés Weight loss test) acuerdo a la norma ASTMD 5338 en un periodo de 90 días.
[161, 126, 76, 125, 156, 16, 117, 83, 11, 90]
[167, 71, 160, 231, 137, 99, 191, 234, 131]
[207, 153, 106, 168, 16, 178, 172, 107, 94, 104]
[50, 105, 127, 190, 138, 145, 166, 134, 89, 237]
[202, 48, 124, 88, 238, 80, 158, 194, 241, 128] [114, 115, 82, 179]
Prueba Estandarizados por las [117, 119, 123, 197, 116, 115, 208, 198, 57, 74]
mecánicas normas ASTM D882 ASTM
Mechanical tests D638, ASTM D638-99, ASTM
A370. Se mide la resistencia a
la tensión y % de elongación.
Aclimatación natural en De acuerdo a la norma ASTM D 1435-99 [179]
ingles Natural se monta el PE en una plataforma
weathering
Prueba de Angulo de Angulo de Contacto con agua y Energía [120, 71, 266, 231, 119, 123]
contacto del agua WCA superficial, deposición de la gota. Grado
(del inglés water contact de oxidación de la superficie del material
angle test)
Prueba de dureza HT De acuerdo a la norma ASTM D2240 en [116]
(del inglés Hardness modelo Durometer
Test)
Todos los métodos desarrollados y realizados por los autores se enfocan en

múltiples aspectos de interés, tales como son: las condiciones, tanto previas y
como durante los experimentos, tiempos, variables a analizar, el tipo de
material, microorganismos utilizados, entre muchas otras.
A continuación se explicaran brevemente algunos métodos de acuerdo a la
variable a estudiar.
5.4.2.1 Métodos principales de cultivo de microorganismos degradadores
de LDPE
En la biodegradación del LDPE, sin importar el tipo de medio de cultivo a

utilizar, se debe tener en cuenta las siguientes variables: el tipo o tipos
microorganismos, la disponibilidad de oxígeno, la cantidad disponible de agua,
la temperatura, el ambiente químico, pH, electrolitos, etc. A continuación se
presentan las aproximaciones generales a los métodos de cultivo utilizados en
los experimentos de biodegradación del LDPE y las demás variantes.
52
5.4.2.2 Medios para la realización de las pruebas
De acuerdo al sitio o lugar que proporciona el tipo de medio de cultivo se puede
dividir en tres modalidades básicas:
5.4.2.2.1 Pruebas de campo (In situ o in vivo) con medios naturales

De ubicación natural, tales como: compost, rellenos, botaderos, etc., son
medios naturales conocidos pero no controlados, lo que implica una
irreproducibilidad en otros sitios y una aleatoriedad de las variables [259].
5.4.2.2.2 Pruebas de simulación con medios seminaturales

Son pruebas de biodegradación que se realizan a escala de laboratorio con
medios seminaturales, con condiciones parcialmente controladas, los medios
son conocidos y se pueden controlar en un nivel medio.
5.4.2.2.3 Pruebas de laboratorio (In vitro)
Son pruebas cuyas variables son casi completamente controladas, y se ubican
en el laboratorio, los medios son conocidos y controlados con gran precisión,
dando la posibilidad de comparar experimentos de diferentes laboratorios.
5.4.2.3 Los inóculos

Los inóculos que presentan los cultivos se pueden clasificar en dos categorías
básicas.
5.4.2.3.1 Cultivos con inóculos amplios o de consorcios
Son comunidades microbianas naturales, que contienen los microorganismos
que actuarían como una comunidad, como realmente lo hacen, sin embargo
hay que tener en cuenta que existe una fracción de microorganismos no
cultivable y que constituye el 90% de la biodiversidad real [268]. Generalmente
es lo primero que se aísla.
5.4.2.3.2 Cultivos microbianos axénicos
Los cultivos axénicos son cultivos con cepas microbianas puras, definidas con
medios simples y permiten deducir información concerniente al efecto
degradador y el mecanismo de biodegradación del LDPE que realizan los
determinados microorganismos [161].
5.4.2.3.3 De acuerdo a la composición de los medios se pueden clasificar
como:
5.4.2.3.4 Medios líquidos
Son medios libres de agar, contienen nutrientes minerales y suelen ser
preparados en Erlenmeyer, son útiles como medios iniciadores o de
enriquecimiento. Tienen la condición de permitir una competencia libre entre
especies por los recursos, lo que genera selectividad.
53
5.4.2.3.5 Medios sólidos
Con una concentración de 1,5 al 2 % de agar, son útiles porque permiten hacer
los análisis preliminares y no generan competencia por los recursos entre los
microorganismos, excepto por la fuente de carbono que es la que genera la
selectividad, por lo que sirven para identificar las colonias una vez estas sean
pre seleccionadas para degradar LDPE.
A continuación se presenta una exposición de las ventajas y desventajas de las

variaciones en los métodos de estudio de la biodegradación del polietileno de
baja densidad y otras variantes.
Tabla 13 Revisión de los métodos para el estudio de la degradación del LDPE,

Adaptado de [42]
Campo Simulación Laboratorio (In vitro)
(In vivo)
Proceso Enterramiento de las Medios inoculados

a. enterramiento de los muestras de plásticos en definidos con
muestras de plásticos en el compost, suelo o agua poblaciones microbianas
suelo. de mar ubicados en definidas (ejemplo:
b. ubicándolos en un lago o condiciones controladas .lixiviados,) o cepas
rio. (temperatura, pH, microbianas individuales
humedad). o enzimas las cuales
podrían haber sido
especialmente
seleccionadas para el PE
ventajas Más fáciles y ampliamente 1. hay una tasa más
usados, son más realistas en Prácticamente es lo más rápida de degradación
simular el proceso de sugerido; que bajo condiciones
biodegradación natural. naturales.
Mejores herramientas 2. Preferido para muchas
analíticas disponibles investigaciones
que serían usadas para sistemáticas.
las pruebas de campo.
Desventajas Carencia de Este método no puede
a. estas condiciones no reproducibilidad debido a ser usado para probar la
pueden ser bien controladas. variada población biodegradación en
b. las oportunidades Analíticas microbiana términos de metabolismo
para monitorear el proceso de por un microorganismo
degradación son limitadas.
Todos los diferentes tipos de métodos de biodegradación son útiles e

importantes, por los datos que aportan, siendo todos complementarios, se
pueden centrar en: el entorno, los pretratamientos, los microorganismos y sus
eficiencias, etc.
5.4.2.4 Pretratamientos del LDPE

Los pretratamientos son opcionales, permiten simular y/o acelerar el proceso de
biodegradación natural, los siguientes fueron tomados de los trabajos de Nowak
[31].
54
5.4.2.4.1 Aclimatación natural
La exposición al aire libre se realiza con muestras montadas en plataformas de
prueba, orientadas bajo condiciones estándar para exponer el material al
espectro completo de radiación junto a la temperatura y humedad de la lugar
[179].
5.4.2.4.2 Aclimatación artificial / pruebas de laboratorio
Las pruebas de laboratorio comprenden el uso de cámaras ambientales y luces
artificiales para aproximadamente replicar las condiciones exteriores pero con
un tiempo reducido y mayores controles en las condiciones [179].
5.4.2.4.2.1 Ruptura por hidrólisis

La hidrólisis de las capas se lleva a cabo con buffer fosfato (pH 7.4) con azida
de sodio para prevenir el crecimiento de microrganismos por 84 días [31].
5.4.2.4.2.2 Oxidación térmica

La foto- y /o termo degradación del LDPE se logra por la ubicación de las
muestras en un horno adaptado para 16 días. Cada 24 horas, se cambia la
locación de las muestras en una dirección en sentido de las manecillas del reloj
[31].
5.4.2.4.2.3 Procedimiento de fotodegradación
Las láminas se ubican a 15 cm de la lámpara, entonces se irradian con UV
usando lámpara de vapor a baja presión que genera energía entre los 280 nm
and 370 nm, en atmosfera aire y a temperatura ambiente [31].
5.4.2.4.2.4 Procedimiento de termodegradación

La muestra se sujeta a calentamiento a 50°C a oscuras, y es expuesta al aire
libre [31].
5.4.2.5 Pruebas de biodegradación

Las pruebas que estudian la biodegradación del LDPE pueden ser directas o
indirectas, lo cual significa que hay pruebas que permiten cuantificar el grado de
mineralización, (efecto final o directo) causado por los agentes abióticos y
bióticos al LDPE expuesto, y también hay pruebas que analizan los efectos
intermedios que ocurren antes del proceso de mineralización, estos podrían ser
por ejemplo: los metabolitos que se producen, la perdida de sus cualidades
fisicoquímicas, la alteración de su morfología, la formación de biocapas, entre
muchos otros cambios .
5.4.2.5.1 Prueba de enterramiento en suelo

El método de enterramiento en Suelo es uno de los métodos frecuentemente
usados para la determinación de la biodegradabilidad del polietileno. En este
método, la prueba de biodegradación se realiza bajo condiciones naturales o de
laboratorio. Las muestras con un peso y dimensiones definidas se entierran a
55
una profundidad específica en el suelo, por diferentes intervalos de tiempo
[269, 179].
5.4.2.5.2 Prueba de compostaje

Las condiciones ambientales de la prueba de compostaje son las siguientes:
altas temperaturas (58 °C); condiciones aeróbicas; propio contenido de agua
(cerca del 50%). compost maduro se usa como matriz sólida, como una fuente
de microrganismos termófilos (inóculo), y como una fuente de nutrientes. El
método se basa en la determinación de la evolución neta de CO2, i.e. el CO2
liberado de la mezcla de polímero en el compost menos el CO2 liberado del
compost sin polietileno (blanco) probado en un reactor diferente [184].
5.4.2.5.3 Prueba de biodegradación en cajas petri

La prueba en cajas petri ha sido inicialmente desarrollada para valorar la
resistencia a la degradación microbiana. Varios métodos han sido
estandarizados por organizaciones de estandarización tales como la ASTM y la
ISO. Estas ahora también se usan para ver si un material polimérico permitirá el
crecimiento de microorganismos. El principio del método requiere ubicar el
LDPE en la superficie de un agar de sales minerales en una caja petri que no
contiene ninguna fuente adicional de carbono. El materia de prueba y la
superficie del agar se esparce con una mezcla estandarizada de inoculo de
las bacterias conocidas y/o hongos. El material de prueba (LDPE) se examina
después de un periodo predeterminado de incubación a temperatura constante
por la cantidad de crecido en su superficie y finalmente se limpia el material y
se vuelve a pesar o examinar y se compara [59].
5.4.2.5.3.1 Formación de zonas claras

Es un método simple y semi-cuantitativo. Es una prueba en platos de agar en
la cual el polímero se dispersa como partículas muy finas dentro del medio de
agar sintético, este resulta en un agar de apariencia opaca, después de ser
inoculado con microrganismos, la formación de un halo claro alrededor de la
colonia indica que los organismos están son al menos capaces de des
polimerizar el polímero, el cual es el primer paso a la biodegradación [269].
5.4.2.5.4 Prueba de platos con hongos

Para probar la habilidad de las cepas de hongos para atacar las capas de
polietileno, las cepas se cultivan en medio agar mineral básico MBA (del inglés
mineral base agar) el cual se describe en la norma ASTM G21-90. El medio
libre de carbono que no sea el LDPE suele ser suplementado con 0.02 % de
extracto de levadura y el pH se ajusta a 6.5 [144].
5.4.2.5.4.1 Método de Inoculación

La incubación en el medio con hongos en la lámina polímero puede ser
realizado de acuerdo con la método standard BS EN ISO 846:1997, que
56
contiene la fuente de carbono (el LDPE), la cual se requiere para que ocurra el
crecimiento estos [148].
Al polímero se le realiza un análisis por FTIR, se pesa y esteriliza con
radiación UV por 15 minutos, se ubica en la superficie de un medio sólido en
cajas petri, y entonces se esparcen 0.1 ml de las suspensión de esporas.
Después de estos procedimientos, las placas se incuban en una incubadora
bacteriológica (SOLAB) a una temperatura de 28 °C [148].
5.4.2.5.5 Prueba de biodegradación In-vitro
La habilidad de las bacterias aisladas para degradar LDPE se estudia con la
prueba de biodegradabilidad in vitro. Las bacterias aisladas se mantienen en
caldos nutritivos o agar medio nutritivo. Los cultivos líquidos de 50 ml se
incuban en erlenmeyer de (250 ml) con un agitador rotatorio (150 rpm) a 30° C
por 30 días [237].
5.4.2.5.5.1 Prueba de cultivo Líquido

La cuantificación de la degradación se estudia analizando la biocapa o biofilm
desarrollada en la lámina de polietileno, por medio de la estimación del carbón
orgánico total soluble en agua (TOC) y el pH de los medios de cultivo [144].
5.4.2.5.5.2 Prueba de toxicidad

El caldo de cultivo generado durante treinta días, se le adiciona a la planta V.
radiata, en un matero se depositan 10g de suelo de jardín y se siembran las
semillas de V radiata, las cuales se humedecen regularmente con 5 ml del caldo
de cultivo [74].
5.4.2.5.6 Pruebas de hidrofobicidad
Con éste tipo de pruebas se puede estudiar tanto el material, como los
microorganismos que se adhieren al mismo, la hidrofobicidad del polietileno de
baja densidad es propia a su naturaleza, sin embargo, cuando se forman
grupos funcionales por acción biótica o abiótica disminuye un poco esta
propiedad, facilitando la acción de los microorganismos que actúan en su
superficie y probando que esté se está mineralizando, existen múltiples
métodos que permiten determinar la hidrofobicidad del material, por ejemplo: el
ángulo de contacto con el agua, la energía superficial, la deposición o caída de
la gota y el diámetro que genera, ahora, también el grado de hidrofobicidad de
los microorganismos y sus enzimas mejora la adhesión al polietileno de baja
densidad, por lo que se pueden utilizar las pruebas (BATH) y (SOT), debido a
que éste trabajo se enfatiza en los microorganismos, a continuación se
presentaran brevemente estas últimas pruebas mencionadas.
5.4.2.5.6.1 La prueba BATH (Bacterial Adhesion to Hidrocarbons)

Está basada en la afinidad de las bacterias por un hidrocarburo tal como el
hexadecano. A mayor hidrofobicidad de las células bacterianas mayor su
57
afinidad por el hidrocarburo, resultando en la transferencia de las células de la
suspensión acuosa a la fase orgánica y una consecuente reducción de la
turbidez del cultivo [237].
5.4.2.5.6.2 Prueba de salado (SOT) (por sus siglas en inglés: salting out test)
El Test de agregación de sal consiste en que a mayor es la hidrofobicidad
de la superficie celular es más baja la concentración de sal requerida para
inducir agregación celular y precipitación.
5.4.2.5.6.3 Estudios de absorción de agua

Los estudios de absorción de agua se pueden llevar a cabo según la norma
ASTM D 570. Esta prueba cubre la determinación de la tasa relativa de
absorción de agua por el LDPE cuando se sumerge en agua [179].
𝑊1 − 𝑊0
𝑊% = ∗ 100
𝑊𝑜
W0 es peso inicial, antes de sumerjirlo en agua y W 1 es el peso final despues
de sumerjido en agua.
Cuando el LDPE se oxida producto de la biodegradación se incrementa la
presencia de grupos hidroxilos en la superficie del LDPE, lo que aumenta la
afinidad por el agua [179].
5.4.2.5.6.1 Prueba del ángulo de contacto con agua

La hidrofobicidad se determina usualmente por medio del ángulo de contacto de
la superficie con el agua, entre más hidrófila la superficie es más pequeño el
ángulo de contacto [71, 120].
5.4.2.5.7 Pruebas de enzimas
En las pruebas de enzimas al LDPE se le adiciona un sistema buffer, que
contiene una o varios tipos de enzimas purificados. Estos ensayos son muy
útiles en el examen de la cinética de despolimerización. El método es muy
rápido (de minutos a horas) y puede dar información cuantitativa [59].
.
5.4.2.5.8 Pruebas de Evolución de Gas (CO2 or CH4)
La evolución de dióxido de carbono o metano de un substrato representa un
parámetro directo de la mineralización. Por lo tanto, la evolución de pruebas
de gas es una herramienta importante en la determinación de la
biodegradabilidad del LDPE. Un número de métodos bien conocidos se han
estandarizado para la biodegradación aeróbica, tal como la (modificada) prueba
Sturm y la prueba controlada de compostaje en laboratorio [59].
También para biodegradaciones anaeróbicas, tales como la prueba de lodos
anaeróbicos, y la prueba de digestión anaeróbica. Aunque los principios de
estas pruebas son las mismas, estas podrían diferir en la composición de los
58
medios, inoculo, la forma de los sustratos que son introducidos, en la técnica
para medir la evolución de gas [59].
5.4.2.5.8.1 La prueba Sturm
Consiste en la cuantificación de la evolución de dióxido de carbono (CO 2), la
cual es una indicadora de la velocidad de crecimiento celular y el consumo del
material durante la biodegradación, la prueba se basa en la captura del CO2 en
una solución de hidróxido de potasio (KOH) 1M para formar HCO 3⁻
posteriormente titularlo con cloruro de bario (BaCl) [51].
5.4.2.5.8.2 Radiomarcación
En contraste al análisis de residuos, la medida simple de la evolución total de
CO2 y 14CO2, es no destructiva y puede medir la biodegradación final. Si
apropiadamente la prueba de material 14C está disponible, la medida y sus
interpretaciones son relativamente directas. Los materiales que contienen una
distribución aleatoria del marcador 14C el cual se expone a un ambiente
microbiano seleccionado. La cantidad de carbono 14C en el dióxido
evolucionado se estima usando un contador de cintilaciones [184].
5.4.2.5.8.3 Prueba de Respiración
La actividad aeróbica microbiana se caracteriza por utilizar oxígeno, la
biodegradación aeróbica requiere de oxígeno para la oxidación de sus
compuestos a sus minerales constituyentes tales como CO 2, H2O, SO2, P2O5,
etc. El oxígeno utilizado durante la incubación se llama (demanda de oxigeno
bioquímico o biológico) (BOD del ingles biological oxigen demand), es por lo
tanto una medida del grado de la biodegradación. Varios métodos se basan en
la medición del BOD, frecuentemente expresados como un porcentaje de la
demanda teórica de oxígeno (TOD) de los compuestos. El TOD, el cual es la
cantidad teórico de oxigeno necesaria para la oxidación completa del sustrato
en sus constituyentes minerales, puede ser calculada considerando las
composiciones elementales y la estequiometria de la oxidación o basada en
determinaciones experimentales de la demanda química de oxígeno (COD del
ingles chemical oxigen demand) [59].
5.4.2.5.9 Prueba de la Pérdida de masa
Como su nombre lo indica esta prueba determina la variación directa de la
masa del polietileno de baja densidad que ha sido expuesto a las condiciones
de biodegradación. El principio básico de la perdida de la masa es la
adherencia y biodegradación de los microorganismos al LDPE, los cuales se
han preseleccionado por su capacidad de utilizarlo como fuente de carbono. Su
procedimiento consiste en pesar con un micro balanza el material antes y
después de realizar una prueba de cultivo.
59
5.4.2.5.9.1 Porcentajes de degradación del LDPE reportados
Se ha escogido esta prueba por ser fácil de realizar, entender, fácil de replicar y
relativamente confiable, además de ser la prueba más directa indicadora de la
biodegradación, por tanto a continuación se presenta una recopilación de los
resultados reportados por algunos de los trabajos en los que se realizó esta
prueba, considerando las condiciones de su realización y unificando la unidad
de medida temporal a meses con el objetivo de entender a mayor profundidad
tales resultados y hacer más fácil su comparación.
En estos estudios teniendo en cuenta los resultados se puede conocer
quiénes son mejores degradadores de polietileno los hongos o las bacterias, o
específicamente cuales especies son mejores
En el estudio realizado por Nayak Priyanka, Tiwari Archana [76], donde se

incubaron hongos y bacterias durante un mes, en medio agar almidón,
incubados a 35°C y se realizó un subcultivo cada 15 días y se determinó el
peso perdido [76], se encontró que los hongos presentan más eficiencia
degradando, y la diferencia era significativa, sin embargo tanto los hongos
Aspergillium niger como los Proteus vulgaris presentaron el mayor porcentaje
de biodegradación (12,5%), lo que significa que por lo menos durante el primer
mes los hongos suelen degradar más rápido el LDPE que las bacterias.
En un estudio realizado por Chatterjee, Suman Mukherjee y Shamba [135], se
cultivó en un periodo de incubación a 25-30ºC el hongo (aspergillus niger) y las
bacterias Bacillus weihenstephanensis, Bkholderia cepacia, Escherichia coli,
durante 6 meses para probar sus respectivas habilidades para degradar el
LDPE, se usó el análisis de pérdida de masa como prueba directa de la
biodegradación, se encontró que todos lograron degradarlo, incluso las
bacterias Escherichia coli, en los primeros dos y hasta los cuatro meses los
hongos eran más rápidos, pero cuando pasaron los seis meses las bacterias
Bkholderia cepacia eran las más rápidas, aunque no existía gran diferencia
con los Bacillus weihenstephanensis, lo que significaría que las bacterias
pueden ser a corto plazo más lentas degradando LDPE, mientras se adaptan a
las condiciones y al uso del LDPE, pero durante largos periodos de tiempo
pueden llegar a ser mejores o iguales degradando el LDPE como fuente de
carbono.
En un trabajo hecho por Sonil Nanda, y Smiti Snigdha Sahu, titulado
Biodegradabilidad de polietileno por Brevibacillus, Pseudomonas, y
Rhodococcus sp [138], en el cual estos microorganismos fueron Incubados a
dos temperaturas distintas por 21 días (0.75 meses), 50°C para los
Brevibacillus, y 40°C para las Pseudomonas sp y los Rhodococcos sp, como
única fuente de carbono se les proporciono LDPE finamente pulverizado (como
pretratamiento) y con agitación a 150 rpm, los resultados arrojados fueron:
Brevibacilus sp 37.5%, Pseudomonas sp 40.5% y Rhodococcos sp 33.0%, los
tres valores son altos lo cual es obviamente explicado por el estado del LDPE,
pero la temperatura debió influir de manera importante, por la degradación
60
térmica y porque la temperatura era óptima para las tres, como encontró [162]
37°C para las Pseudomonas sp y 55°C para los Brevibacilus borstelensis
[136], por lo tanto estaban a sus temperaturas optimas, lo que podemos concluir
es que la variable decisiva fue la habilidad intrínseca para degradar LDPE de
las Pseudomonas sp.
Las Pseudomonas sp., como degradadoras de LDPE, son reconocidas y muy

estudiadas por sus buenos resultados, siendo entre las bacterias con mayores
reportes obtenidos por su habilidad para degradar el LDPE. Por ejemplo el
trabajo titulado: Biodegradación de polietileno de baja densidad LDPE por
Pseudomonas sp, con un medio simple o basal, sin ningún pretratamiento, en
tubos incubados en un agitador rotatorio (120 rpm) a 37°C, la tapa fue
ligeramente abierta para permitir su aireación, durante un periodo de cuatro
meses las especies de pseudomonas aeruginosa ATCC 1569 lograron degradar
un 20%, habiendo degradado alrededor del primer mes un 18% [156],
Sin embargo no son las mejores en todos los casos, al menos eso es lo que
encontraron Madhuri, Deepika S y Jaya, en un estudio denominado
Biodegradación de polietileno de baja densidad por microrganismos de suelo de
basurero, en este estudio se realizaron pruebas de biodegradación con
Pseudomonas sps, Streptomyces sps A. flavus A. niger con medios de sales
minerales a 30°C con agitación a 120rpm y con LDPE puro [270], durante un
periodo de 6 meses, arrojando como resultados, que los Streptomices sp fueron
los claros vencedores degradando LDPE con porcentajes a un nivel del 46.7%,
degradando cerca del 6% cada mes, mientras que hongos como los aspergillus
Niger lograron 26.17±0.05%, y las bacterias Pseudomonas sp consiguieron
“solamente” degradar un 24.22±0.01% todos en condiciones iguales, sin
tratamientos previos ni condiciones especiales [270].
5.4.2.5.10 Pruebas físicas de la biodegradación

Existen también las pruebas indirectas de la biodegradación del polietileno, las
cuales pueden ser: el cambio de la distribución del peso molecular, el cambio
de la estructura cristalina y la modificación de sus propiedades mecánicas, la
viabilidad, el crecimiento y la actividad de la biomasa.
5.4.2.5.10.1 Índice de fluidez

El Índice de fluidez MFI determina la temperatura de fusión del polímero,
también indica indirectamente la viscosidad [208]. El índice de fluidez es un
indicador de la longitud de las cadenas poliméricas del LDPE, debido a que
mayor sean las cadenas poliméricas y menos ramificadas, por lo tanto más
cristalizadas presentaran un mayor punto de fusión y una mayor viscosidad.
61
5.4.2.6 Pruebas de identificación microbiana
Las pruebas de dentificación microbiana son el proceso inicial y clave para
conocer cuales microorganismos degradan el LDPE y que potencialidades
presentan para usos biotecnológicos.
5.4.2.6.1 Viabilidad del biofilm microbiano

Se puede medir la actividad metabólica de las células del cultivo, con métodos
como la hidrolisis con acetato fluoresceína FDA usado por [106], el cual es
indirecto y mide la cantidad de proteína, la prueba con naranja de acridina o el
kit de viabilidad bacteriana o BacLight [167], además del ensayo de ATP [96],
también se ha reportado la prueba redox con el uso del cloruro de 2,3,5-
trifeniltetrazolio el directo monitoreo de la respiración directa de los
microorganismos [177].
5.4.2.6.2 Pruebas de caracterización preliminar

Las bacterias aisladas seleccionadas se pueden identificar por una
caracterización bioquímica y morfológica
En una caracterización morfológica, se estudian las características
macroscópicas como forma, tamaño, estructura, textura, apariencia, elevación y
colores. características fenotípicas tales como caracterización microscópica de
la reacción Gram, motilidad y pruebas bioquímicas incluyendo catalasa,
oxidasa, indol, rojo de metilo, Voges-Proskauer, triple azúcar hierro, utilización
de citrato, ureasa, reducción nitrato y la fermentación de carbohidratos y se
realiza con protocolos estandarizados [48].
5.4.2.6.3 Pruebas de identificación especifica

Para identificar los microorganismos biodegradadores de LDPE se pueden
utilizar las herramientas de ingeniería genética, en las que se incluyen:
secuenciación de DNA de los genes ribosomales 16s o 18s, la secuenciación
de proteínas, o la más rápida y avanzada la espectrometría MALDI ToF para
análisis de proteínas [244].
5.4.2.7 Productos de la biodegradación

Algunos estudios demuestran que los microorganismos toman el LDPE y lo
reducen a micro moléculas más fáciles de metabolizar y mineralizar los cuales
se enlistan a continuación.
Tabla 14 Posibles residuos de la biodegradación, tomados de [156, 29, 41, 80, 74]
Compuestos Compuestos
Benceno Ácido undecanóico
Metilo benceno Ácido docosanóico
Docosanoato de metilo propilo 1,3-dimetiloctadecano
Di-tert-butil-1-oxaspiro(4,5)deca-6,9-dieno 2,6,10,16 tetrametil heptadecano
Ácido hexadecanóico 2,3,6 trimetil decano
Hexadecanoáto de etilo 2,6,7 trimetil decano
62
Diisoostilo eicosano 6-etil ,2-metil decano
Ácido octadecanóico Dodecanol
Undecano Dodecanal
Octano Heneicosano
Eicosanol Heptacano
Docosano Heptacosano
Acido 3-cloropropiónico Heptadecano
7,9-Di-tert-butil-1-oxaspiro(4,5) deca-6,9-dieno-2,8-diona 2,6,10,14 tetrametil heptadecano
Octadecanoato de butilo 2,3,5,8 tetrametil decano
1- Nonadeceno 9 Hexil heptadecano
Tetracosano Hexadecano
Pentacosano 5-butil hexadecano
Acido 1,2-Benceno di carboxílico 2-fenil,etil,hexanoato
Ácido Oxano dodecanóico 3-metil,5-(2-teilbutil) octadecano
Hexacosano 3-etil (2-etilbutil) octadecano
Ciclo propano 6-metil octadecano
2-buteno,2-metil- tricloro eteno
Acetona Hexanal
Eteno, 1,2-dicloro-, Eteno 1,1-dicloro
Dicloro Metano Acetato de etilo
Ácido butanóico Ácido oleico
1- Tetradeceno Acido oxálico
Ácido acético Ácido octadecatrienóico
Tricosano Pentadecano
Ácido tetradecanóico Acido ftálico
Ergosta-5,22-dien-3-ol, acetato(3,22E) Acetato de Betametasona
1-Monanalinoeoglicerol trimetil silil éter Azafrin
2,3-bis [(trimetilsilil oxi] propil ester ácido 9,10,15-octadecatrienóico
5.5 METODOLOGÍA PROPUESTA
Se decidió proponer una metodología a partir de una revisión exhaustiva de la

biodegradación del PE por el interés de impulsar a los investigadores
colombianos a estudiar los microorganismos que habitan en las grandes
ciudades del país o regiones naturales apartadas y contaminadas, también por
la posibilidad de su utilización en compost o en lugares especializados en el
tratamiento del material LDPE.
El propósito específico de esta metodología es determinar la identidad y la
eficiencia de los microorganismos que degradan el LDPE, tanto hongos como
bacterias y determinar por métodos estadísticos si hay alguna diferencia
significativa entre ambos.
63
El autor es consiente lo dispendioso y costoso que puede resultar hacer tantas
pruebas, tanto las de identificación preliminar junto a la identificación especifica
podrían durar meses enteros o quizá años.
La estructura metodológica básica será la siguiente:
Figura 11 Esquema metodológico básico propuesto
5.5.1 Test de viabilidad cuenta de microorganismos viables por dilución

en placa
Se propone la prueba de viabilidad o dilución en placa y conteo de unidades
formadoras de colonia por ser fácil y rápida además permite separar e
individualizar las especies de microorganismos hidrocarbonoclastas (al menos
los que pueden sobre vivir in vitro). (Ver ANEXO L2)
Cálculos
1) Contar sólo aquellas cajas (diluciones) que contengan de 30 a 300 colonias.
2) Con la siguiente ecuación calcular las UFC/g s.s.
𝑈𝐹𝐶/𝑔 𝑝𝑒. = (𝑁𝐶 ∗ 1/𝐹𝐷 ∗ 1/ 𝑉) / (𝑃 ∗ 𝐹𝐻).
Donde:
UFC/ g pe. = unidades formadoras de colonias / g de PE.
NC= número de colonias en una caja.
FD = factor de dilución que corresponde a la dilución de donde se tomó la
muestra con la que se inocula la caja (10-2 a 10-10).
V= volumen inoculado en la caja = 0.1 ml.
P = peso de la muestra húmeda = 1 g.
FH = factor de corrección de humedad (1 − (%ℎ𝑢𝑚𝑒𝑑𝑎𝑑/100)).
64
5.5.1.1 Obtención de muestra y selección de los microorganismos
degradadores de LDPE en medio líquido SM
Se propone la realización de un medio líquido SM selectivo por ser ideal para el
desarrollo de los microorganismos biodegradadores de LDPE, además ha sido
probado en múltiples estudios de biodegradación, lo cual genera confiabilidad.
Recolección de la muestra
Pre tratamiento de la muestra
Adición al medio de cultivo líquido
Incubación (ver ANEXO A 2).
5.5.1.2 Identificación preliminar

Para identificar los generos bacterianos se pueden realizar las siguientes
pruebas bioquímicas y microbiologícas tales como catalasa, para bacterias (Ver
ANEXO G1).
a. Caldo de Tioglicolato OF; f. Prueba de hipurato

b. Prueba de la oxidasa g. Prueba de Kligler
c. Prueba de la catalasa h. Tsi hierro tres azucares
d. Prueba de malonato i. Prueba de RM/VP
e. Prueba de citrato
j. Prueba de fermentación, 2,3- k. Agar lisina hierro

butanodiol y acido mixta. l. Fenilalanina desminanasa agar
m. Moeller n. Descarboxilación de
aminoácidos
65
Figura 12 Métodos preliminares de
identificación metabólica
5.5.1.3 Pruebas preliminares de identificación de hongos

Para hongos se realizaran las siguientes pruebas:
Para el aislamiento y cuenta de hongos degradadores de PE se utilizó la misma
técnica y medio que para bacterias, con la diferencia de que al medio se le
adiciona rosa de Bengala y estreptomicina y se ajusta el pH a 4.9 [187]. Para
cultivarlos se puede usar Agar sabouraud, PDA, algodón azul de Lactofenol
(LPCB) y para su identificación se utiliza la observación microscópica y
macroscópica.
66
5.5.1.4 Ensayo de biodegradación in vitro
Se debe cultivar las bacterias y hongos aislados en medio agar nutritivo
5.5.2 Prueba de pérdida de masa

Se propone la prueba de la pérdida de masa en medios de cultivo selectivo en
Erlenmeyer (medio líquido) y en cajas Petri (medio solido) debido a que permiten
unas condiciones controladas de pH y temperatura que aceleran el proceso de
biodegradación y unifica las condiciones de crecimiento de tal manera que se
puedan comparar sus respectivas eficiencias. Para conocer la metodología en
detalle (ver ANEXO C).
El cálculo de la pérdida de masa se puede realizar usando la siguiente ecuación

El tiempo de variación del porcentaje de peso ganado W t puede ser medido
como:
𝑊𝑜 − 𝑊(𝑡) 𝑊𝑡
(𝑊𝑡 = ) ∗ 100; 𝐸𝑓𝑖𝑐𝑖𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 =
𝑊 𝑡(𝑚𝑒𝑠𝑒𝑠)
Donde W t es el peso total después del tiempo t, W 0 es el peso de referencia

seco antes de la prueba.
Para determinar si no hay diferencia significativa en la eficiencia entre
hongos y bacterias Ho se propone usar la prueba de significación t.
Y la prueba ANOVA en dos vías considerando el tipo de medio y de
microorganismo.
5.5.3 Identificación especifica
Se propone la realización de la prueba genética de amplificación y
secuenciación del gen 16S o 5,8S rRNA (para hongos) vía PCR de
diferentes bacterias y hongos el porqué de la selección de ésta técnica es
por ser capaz de detectar bacterias viables pero no cultivables, permite una
identificación especifica del organismo objetivo.
Principio: existen porciones de las secuencias génicas 16S rRNA o 5,8S
rRNA dentro de las bacterias y hongos que son idénticas y entre estas
regiones hay secuencias únicas de DNA asociadas con hongos y bacterias
específicas [271]. Los llamados primers “universales” han sido diseñados
para anillar con las secuencias conservadas de 16S rRNA permitiendo la
amplificación de la secuencia única dentro de la región conservada [271].
Para conocer la metodología en detalle (ver ANEXO F).
67
Las alícuotas del gen amplificado que resultan de la PCR con estos primers
universales pueden ser secuenciadas económicamente en los laboratorios
comerciales o en muchos casos en laboratorios universitarios. Una vez se conoce
la secuencia del gen rRNA, se pueden usar para identificar los microorganismos
originales al nivel de género y especie [271].
Se han computarizado en bases de datos las secuencias de un vasto número de
especies bacterianas [271]. Esto permite la comparación de una secuencia
desconocida de rRNA con una secuencia bacteriana conocida [271].
Muchos programas de análisis de secuencias están disponibles para ayudar a
identificar las secuencias. Uno de tales bases de datos es la BLAST (son las siglas
en ingles de Basic local alignment search tool) que significa herramienta de
búsqueda de alineaciones básicas locales, la cual la provee la (NCBI) National
center for biotechnology information que está disponible en la web [271].
Primers universales 16S rRNA tomados de [271].
8F AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
1492R TACGGY*TACCTTGTTACGACTT
*Y puede ser C o T una posición de base degenerada.
Figura 13 Metodología a realizar para la identificacion específica
68
5.5.3.1 Técnica longitud de polimorfismos de los fragmentos de restricción
(RFLP)
También se propone realizar la prueba de identificación de microorganismos
amplificando regiones que se conservan entre especies (genes), longitud de
polimorfismos de los fragmentos de restricción (RFLP del ingles Restriction
Fragment Lenght Polymorphisms) donde se amplifican regiones específicas y se
cortan con endonucleasas para observar el patrón de bandas en una gel, por lo
que se podría utilizar el gen 16S rRNA o 5,8S rRNA (para hongos) amplificado
para correrlo en una electroforesis. Para conocer la metodología a seguir (ver
ANEXO F).
5.5.4 Pruebas instrumentales

Se proponen solamente dos técnicas FTIR y GCMS por ubiquidad y costo pero
obviamente también es recomendable usar otras técnicas como SEM y TGA, etc.
esa decisión la tomaran los propios investigadores.
5.5.4.1 Aplicación del FTIR al estudio de la biodegradación del LDPE

La exposición prolongada al aire libre de los plásticos afecta la apariencia y las
propiedades físicas de estos materiales, con algunos efectos comunes como
descoloramiento y quebramiento, también los factores biológicos pueden afectar
las características de los plásticos, la espectroscopia infrarroja podría usarse para
elucidar los mecanismos de degradación de polímeros identificando y
cuantificando los productos de degradación [272].
La espectroscopia infrarroja es una técnica sencilla y fiable utilizada ampliamente
en la química orgánica e inorgánica, en la investigación y la industria [272].
Durante el proceso de la oxidación microbiológica del PE, se forma una gran

proporción de compuestos que contienen carbonilo, lo cual es debido a la
oxidación enzimática, (ver mecanismos de despolimerización) tales
mecanismos generan productos carbonilados y carboxilados que se pueden
estudiar mediante la espectroscopia FTIR.
5.5.4.1.1 Variantes de la técnica
5.5.4.1.1.1 La espectroscopia FT-IR (ATR)

Fue validada en los últimos años por brindar un análisis rápido y competitivo, En
la técnica ATR, la muestra se presiona contra un diamante, un cristal de seleniuro
de zinc o un cristal de germanio y se mide la absorción de la onda evanescente
[272].
69
5.5.4.1.1.2 FT-IR Reflectancia Difusa (DRIFT)
Ha sido utilizada ampliamente en el pasado para el estudio de polímeros y
permanece como una técnica muy útil en casos donde la muestra es muy grande
para ser medida con ATR [272].
El Polietileno tiene una estructura molecular simple, semicristalina y alto peso
molecular pero no se degrada por que no absorbe radiación UV [66, 55]; sin
embargo, la presencia de impurezas como catalizadores remanentes,
plastificantes, y antioxidantes induce la absorción radiación UV-B [66].
5.5.4.1.2 Índices de cuantificación de la oxidación
5.5.4.1.2.1 Índice de carbonilo (CI)

El índice de carbonilo es un indicador del grado de oxidación el PE, el cual mide
las bandas de absorción del grupo carbonilo C=O a 1740 cm −1 ((1740)), producto de
su estiramiento.
𝐼𝑐𝑜 = (𝐴1740 − 𝐴1835 )
0,008 ∗ 𝑡
Donde t es igual al grosor de la muestra medido en mm, y la absorción a 1835
cm-1 es el valor de referencia [66]. Aunque también existen algunas otras
variantes
𝐼1715
𝑖𝑛𝑑𝑖𝑐𝑒 𝐶𝑒𝑡𝑜 − 𝑐𝑎𝑟𝑏𝑜𝑛𝑖𝑙 (𝐾𝐶𝐵𝐼) =
𝐼1465
𝐼1740
𝑖𝑛𝑑𝑖𝑐𝑒 𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟 − 𝑐𝑎𝑟𝑏𝑜𝑛𝑖𝑙 (𝐸𝐶𝐵𝐼) =
𝐼1465
5.5.4.1.2.2 Índice vinilo (𝐼V)

Índice vinilo (𝐼V) se calcula usando la razón de la absorbancia de la banda en 909
cm−1 (𝐴 (909)), vibración estiramiento del grupo vinilo (CH2=CH), y la absorbancia a
2020 cm−1 [27]:
𝐼909
𝑖𝑛𝑑𝑖𝑐𝑒 𝑣𝑖𝑛𝑖𝑙𝑜 (𝐼𝑉) =
𝐼2020
𝑖𝑛𝑑𝑖𝑐𝑒 𝑡𝑒𝑟𝑚𝑖𝑛𝑎𝑙 𝑑𝑜𝑏𝑙𝑒 (𝑇𝐷𝐵𝐼)
𝐼1650
=
𝐼1465
𝑖𝑛𝑑𝑖𝑐𝑒 𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑛𝑜 𝑑𝑜𝑏𝑙𝑒 (𝐼𝐷𝐵𝐼)
𝐼908
=
𝐼1465.
5.5.4.1.2.3 Porcentaje (%) de cristalinidad Del PE

% 𝑜𝑓 𝑐𝑟𝑖𝑠𝑡𝑎𝑙𝑖𝑛𝑖𝑑𝑎𝑑 =
70
𝐼𝑎
(1.233𝐼 ) 𝐼𝑎
𝑏
𝑎 100 − [{1 − + ( )} × 100]
1 𝐼𝑏
Donde Ia y Ib son los valores de la absorbancia de las bandas a 1,474 y

1,464 cm−1 o a 730 y 720 cm−1, respectivamente.
5.5.4.2 Cromatografía de gases acoplada con espectroscopia de masas

GCMS
Se propone la utilización de esta técnica por ser muy versátil y rápida
Se puede utilizar para analizar los ácidos grasos (AG) y obtener el perfil de AG
de los microorganismos y así identificarlos.
También para analizar otros metabolitos producidos en la biodegradación.
Para detallar la metodología (ver ANEXO L).
5.5.4.2.1 Para cuantificar la producción de CO2

En esta técnica se podría medir el CO2 producido por los microorganismos
durante la incubación del cultivo degradador del polietileno en un sistema cerrado
y a determinadas condiciones, se cuantifica por cromatografía de gases con head
space y/o con un detector de conductividad térmica. Para detallar la metodología
(ver ANEXO K).
Para calcular la concentración de CO2 se emplea la ecuación de los gases
ideales:
𝑃𝑉 = 𝑛𝑅𝑇.
( 𝑃𝑉 )
Despejando 𝑛 = ( 𝑅𝑇)
El resultado en mol CO2 / g del PE en el sistema, se calcula de la siguiente forma:
𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝐶𝑂2
=
𝑔 𝑝𝑒
%𝐶𝑂2
𝑃𝑉 ∗ ( ))
100
𝑅𝑇 ∗ 𝑔 𝑝𝑒
Dónde:
%CO2 = área del pico de CO2 en porcentaje.
P = presión atmosférica (atm).
V = volumen de la atmósfera de los sistemas a medir (L).
R = constante de los gases (0.082205 L * atm / mol * K).
T = temperatura del sistema (° K).
g pe. = gramos de PE.
La gráfica de CO2 vs el tiempo deberá construirse de forma acumulativa
(Sumando las producciones de CO2). Para conocer la metodología (ver ANEXO
L).
71
Nota: Con este mismo método o cuantificación se puede determinar al mismo
tiempo el O2 y N2 del sistema. Esto permite conocer la cantidad de oxígeno
consumido en los sistemas, dato que se utiliza para calcular su coeficiente
respiratorio (QR). Este parámetro biológico determina la actividad biológica
(estado fisiológico) que ocurre en un sistema y refleja la relación entre el CO2
producido y el O2 consumido [273].
𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐶𝑂2 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑖𝑑𝑜

𝑄𝑅 = 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑂2 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜
6 ANÁLISIS
La biorremediacion ha cambiado su concepción, de ser un simple uso de seres

vivos como agentes de limpieza, (lo cual no es nada nuevo y en la realidad no es
necesaria la intervención humana para que cumplan estas funciones), a otra en la
que implica la degradación de contaminantes mediante el uso de seres vivos que
están inmersos en un medio físico con determinadas condiciones, y dependiendo
de éstas la biodegradación se relentiza e incluso se detiene o se acelera, tales
como la temperatura, la luz, la humedad, etc,. Por lo tanto la biodegradación
actualmente es vista como una acción conjunta de factores abióticos y bióticos,
en este caso microorganismos, demostrando la amplitud de aspectos que los
investigadores ambientalistas deben tener en cuenta al momento del control de
estos xenobióticos. Tambien nos ayuda a entender como los cambios físicos como
temperatura, pH, luz, etc que ocasionamos al planeta, pueden afectar tanto
negativa como positivamente esta labor, y su control o estudio es de vital
importancia.
Como producto de esta investigación se encontró que el LDPE es degradado por
lo menos por un total 63 géneros de microorganismos entre hongos y bacterias
(ver Tabla 15), de éstos como mínimo existen 148 especies, lo que no es un
numero sorprendente considerando la diversidad de climas, hábitats y organismos
que hay en el planeta, adicionalmente es muy probable que en poco tiempo este
listado quede incompleto o inclusive ya lo esté, cabe mencionar que Amal Hussein
y colaboradores afirman que hay 90 géneros entre hongos y bacterias que
degradan todo tipo de plásticos [274], lo que significaría que por lo menos dos
tercios de todos los géneros de microrganismos degradadores de plásticos,
degradarían el polietileno de baja densidad LDPE, algo entendible considerando
lo simple de la estructura del polímero, de tal forma que solo se requerirían unas
pocas enzimas como: lipasas, lignina peroxidasas, para degradarlo, además es
impulsado por su gran ubicuidad y su gran riqueza energética, que lo hacen muy
valioso como fuente de energía y de carbono, todo esto finalmente conduciría a
una intensa presión evolutiva o selección artificial para degradarlo.
72
En ciertas condiciones extremas y propicias ”óptimas”, un elevado número de
géneros de microrganismos puede lograr degradar el polietileno de baja densidad,
por las características antes mensionadas, sin embargo el interés está en conocer
cuáles de éstas biológicamente han logrado obtener los mejores atributos para
realizar el proceso al máximo ritmo posible, se encontró que las bacterias que
presentan el mayor grado de eficiencia biodegradadora son los Streptomyces sp,
seguidos por las Pseudomonas sp, y entre los hongos están los Aspergillus sp,
especialmente los Aspergillus níger. Estos resultados no pretenden ser definitivos
en lo absoluto, quizá existan mejores o quizá el orden mencionado no sea el
correcto.
¿Cuáles son las condiciones que permiten una mejor biodegradación del LDPE?
Un estudio realizado por Nayak Priyanka y Tiwari Archana comparó [76], la
biodegradación del polietileno por la pérdida de peso considerando el tipo de
disposición del material que fue de tres formas distintas, enterrada, expuesta al
aire libre y en medios de cultivo a condiciones del laboratorio encontrando que las
condiciones de laboratorio fueron las que arrojaron una mayor pérdida de peso.
En cuanto a la cantidad de aditivo pro-degradable Obasi [190], encontró que la
pérdida de peso era mayor cuanto mas biopolímero se le adicione.
Los estudios demuestran que los microorganismos pueden iniciar la degradación
del LDPE, aun cuando no haya sufrido una degradación físico química previa, o
sea de elevado peso molecular, sin embargo cuando sufre una degradación
ambiental que oxida el material y le disminuye su peso molecular la
biodegradación se acelera, también si el LDPE a estudiar posee un bajo peso
molecular como lo demostró Tsuchii [275].
¿Qué microorganismos son mejores degradando polietileno de baja densidad los
hongos o las bacterias?: Los hongos en principio pueden ser mejores degradando
el LDPE, probablemente por su mayor tolerancia a las condiciones extremas de
pH, temperatura y humedad, pero las bacterias pueden llegar a mejorar los
niveles de degradación de LDPE a largo plazo, cuando se adaptan bien a las
condiciones del entorno y llegan a su máximo nivel de crecimiento o son las
bacterias más evolucionadas o adaptadas para degradar este tipo de materiales.
De acuerdo al número de géneros de hongos y bacterias obtenido en este estudio,

lo que se puede concluir es que son numéricamente iguales, (por lo menos con
los trabajos revisados), ¿coincidencia o algo razonable?, podría significar que el
LDPE es un material nutritivo para ambos reinos.
Tabla 15 resultados en cifras de los elementos estudiados

Elementos estudiados N° reportados
Géneros Hongos 32
Bacterias 31
Numero de especies >148 especies
Especies mayormente Aspergillius sp 81
Penicillium
73
encontradas 21
(numero de artículos que los Pseudomonas sp 17
reportaron) Streptomyces 17
Bacillus 13
Rhodococcus sp 11
Los géneros de microorganismos más utilizados o reportados corresponden a las

Pseudomonas sp como degradadoras de LDPE, son las bacterias con mayores
reportes y cantidad de trabajos obtenidos por su habilidad para degradar el LDPE
con 47 trabajos, seguidas por los Bacillus sp con 43 trabajos y streptomices 17.
Puede significar que estos organismos tienen condiciones adecuadas para esta
labor, por lo que un estudio molecular y bioquímico sobre estos microorganismos
podrían arrojar luces sobre estas capacidades especiales, aun poco conocidas y
podrían ser los perfectos candidatos para ser mejorados genéticamente.
Finalmente ya sean bacterias o hongos, la utilización de consorcios microbianos
ofrece considerables ventajas sobre el uso de cultivos puros en la degradación de
LDPE, como ocurre naturalmente, donde todos hacen parte de una cadena en la
cual existen funciones interdependientes y cooperativas, lo cual ofrece una
habilidad multifuncional y su mayor robusteza a las fluctuaciones ambientales.
Las consecuencias de la utilización del material LDPE y todos sus aditivos y
sustitutos: vale mencionar que la inercia del polietileno de baja densidad LDPE
puro es una cualidad que per se que no lo hace axiológicamente malo o peligroso,
de hecho, muchas de sus cualidades son muy utiles, y que han contribuido con el
progreso de la humanidad, por lo que sería un error no darle la importancia y valor
que merece, el verdadero problema es el de abusar de su “servicios”, de forma
desorganizada y descontrolada, y tambien no tener en cuenta su impacto
ambiental, sus efectos a escala local y global, en esencia la solución real es
utilizarlo de forma sabia y responsable, lo cual exige una educación ambiental
masificada, una conciencia colectiva y todos los esfuerzos estatales y
empresariales para su minimización y control hasta que llegue el dia de su
competa sustitución, por otro lado aunque es un material que por sus cualidades
es difícil de igualar, en la actualidad existen cuantiosas opciones de aditivos
comerciales y no comerciales,que permiten acelerar su mineralización, todas
novedosas y que poco alteran sus cualidades originales, acelerando su proceso
de biodegradación, siendo positivo para el ambiente y la economía de las
empresas basadas en estas poli olefinas, además es posible encontrar una gran
cantidad de muy buenos sustitutos altamente biodegradables y biocompatibles,
que son un impulso para el avance de la humanidad sin agredir al planeta, pero
como se ha mencionado antes existen aún inconvenientes por solucionar: Casi
todos los aditivos del polietileno de baja densidad LDPE y los biopolímeros
alternativos en desarrollo son 2.5–10 veces más caros, lo que implica que los
esfuerzos se dirijan a la búsqueda de sustratos de menor costo [6, 67]. Las
propiedades físico químicas de los biopolímeros alternativos frecuentemente
74
restringen su uso [67] siendo necesario una mejora aun en éstos. Cuando se
logren superar todas estas barreras, seguamente pronto, quizá se solucione el
problema definitivamente, o quizá surjan otros problemas nuevos, esto solo el
tiempo lo dirá, pero el abuso la irresponsabilidad y la inconciencia de nuestros
actos como sociedad aún serán y deben ser los problemas a erradicar de las
mentes de la sociedad.
Lo cierto es que a pesar de que sean los más reportados no implica que sean los
mejores realizando esta labor, simplemente que son los más ubicuos hasta la
fecha.
Sin lugar a dudas los
Aspergillus sp. Son los
microrganismos
degradadores de
polietileno más
ubicuos encontrados
hasta la fecha,
estando muy lejos de
los demás géneros
con 81 especies, lo
que demuestra que
los hongos son muy
versátiles y poco
exigentes con el
entorno, los alimentos
y las condiciones,
además de ser muy
populares entre los
investigadores.
Gráfica 2 número de
referencias obtenidas
por genero de hongos y
bacterias que están
vinculadas con la
biodegradación de
(LDPE).
75
En lo que respecta a las técnicas actuales que permiten analizar la biodegradación
del LDPE se encontraron entre 34 técnicas y 28 métodos o pruebas,
desarrolladas y utilizadas, lo que demuestra el ingénio de los investigadores, el
esfuerzo y el interés al respecto, la amplitud de aspectos que abarcan estos
estudios y la gran importancia para la ciencia y para la humanidad, en fin para
toda la vida del planeta, aunque todavía no ha sido ni suficiente ni lo necesario,
porque el problema sigue tan fuerte como antes o incluso mucho más, se requiere
que se continúe investigando y con mas intensidad, desde todas las áreas
(incluyendo las ciencias humanas), este problema requiere el esfuerzo de
múltiples disciplinas científicas, para solucionar la tragedia ambiental que
acontece, todos los investigadores son pertenecientes a las más diversas y
remotas partes del mundo, lo cual no es de extrañar considerando que el
problema de la contaminación con LDPE es igual de global.
Como criterios de selección de las técnicas para el estudio de la biodegradación

del LDPE, se eligieron las siguientes virtudes: tienen que ser razonablemente
económicas, sencillas de utilizar, y de resultados confiables, alta versatilidad y
gran ubicuidad. Todos estos requisitos perfectamente son cumplidos por las
técnicas siguientes: La espectroscopia infrarrojo o FTIR, la cromatografía de
gases GCMS o liquida HPLC, la micro balanza, por lo que su uso es más que
recomendado.
Gráfica 3 tecnicas más

utilizadas para estudiar
la biodegradación de
LDPE.
76
Sin lugar a duda, la técnica más utilizada en el estudio de la degradación del
LDPE es la espectroscopia Infrarroja con transformada de fourier FTIR, la cual ha
sido usada en por lo menos en 70 trabajos, la siguiente técnica de análisis más
utilizada es la microscopia SEM o microscopía electrónica.
Seguramente existen múltiples técnicas que escapan de mención muy
interesantes también, que proporcionan información muy valiosa sobre el material,
y que cumplan algunas o quizá todas las condiciones de selección, sin embargo
solo se proponen por cuestiones de interes las anteriores técnicas, los
investigadores tendrán sus propios intereses que harán otros criterios de selección
y por ende la selección de otras técnicas, también es seguro es que no todas las
técnicas son adsequibles por todas las universidades, por lo tanto estas seran
poco o remotamente utilizadas.
7 CONCLUSIONES
La biorremediacion es una alternativa para el control de la catástrofe ambiental

ocasionada por nuestros actos, no puede verse como una solución integral y
definitiva, cuando la causa es la irresponsabilidad e inconciencia humana.
Debe verse la biorremediacion como una interrelacion entre lo vivo y las
condiciones del entorno o factores abióticos, por lo tanto deben tenerse en cuenta
los efectos o cambios en el entorno causados por la acción humana en todos los
estudios sobre la biodegradación del LDPE y otros tipos de PE.
La investigación sobre la biodegradación del polietileno ha avanzado a pasos
agigantados, lo cual se refleja en la multitud de trabajos publicados, en los cuales
los investigadores han utilizado una gran cantidad de técnicas con sus
respectivos métodos específicos, son (34 técnicas y 28 métodos o pruebas),
seguramente aún hay muchas más desarrolladas y utilizadas que faltaron
mencionar, estos estudios sobre la biodegradación se enfocan en múltiples e
importantes aspectos, lo cual demuestran el ingenio de los investigadores, el
esfuerzo y el interés al respecto, y en la actualidad es un progreso que escapa de
la esfera netamente ambiental, por toda su potencialidad como fuente de
desarrollo industrial y económico. Lo que es natural considerando su gran
importancia para la ciencia y para la humanidad.
Sin embargo deben continuarse las investigaciones sobre la biodegradación del
LDPE por su condición actual de inconcluso, (y aun muy lejos de serlo), además
teniendo encuenta que deben ser aislados e identificados todos los
microorganismos responsables de la degradación del polietileno de baja
densidad o LDPE, incluyendose aquellos que no pueden ser cultivados in vitro, por
lo que todos los microorganismos eficaces deben ser caracterizados a nivel
molecular, y debe determinase su eficiencia degradadora en todos los entornos
aun no estudiados que han sido afectados por estos contaminantes, con todas sus
condiciones, variables o factores ambientales, teniendo encuenta que estas
actitudes tienen que ver con características fenotipicas clave, como su
77
hidofobicidad, capacidad de producion de multiples y especializadas enzimas
capaces de atacar el LDPE, etc.
Los estudios posteriores deben ser sobre las enzimas extracelulares
microbianas que son responsables de la biodegradación del polietileno y la
formación de los ácidos orgánicos presentes. Estas enzimas necesitan ser
caracterizadas y los genes responsables de esas enzimas deberían ser
trabajados. Una vez los genes responsables de la degradación del polietileno se
conozcan, se podrían usar para reforzar la capacidad degradadora de aquellos
microbios que demuestran capacidades excepcionales, en la cual los atributos
naturales se potencien, claro está que también cumplan estrictamente con todos
los criterios bioéticos relacionados con este tipo de organismos, e incluso podría
pensarse en el desarrollo de tratamientos enzimáticos a escala industrial o
comercial para su degradacion, y finalmente se deben esclarecer completamente
los posibles mecanismos de biodegradación, si aún no han sido esclarecidos.
Y no siendo menos importante deben desarrollarse aditivos o sustitutos

económicamente rentables, que aceleren su proceso de biodegradación y cuyas
propiedades físico químicas sean lo más cercanamente parecidas al LDPE puro,
además que se pueda masificar universalmente y que no demuestren ningún
efecto adverso a el medio ambiente o al ser humano.
Las técnicas que permiten cumplir el objetivo metodológico propuesto son la
espectroscopia infrarrojo o FTIR, la cromatografía de gases GCMS y la balanza
analítica, siendo su uso recomendado.
Por último la metodología prospuesta se puede concluir que es viable,
relativamente fácil y rápida, puede servir como primer un paso a posteriores
estudios más profundos.
8. RECOMENDACIONES
Se recomienda a los investigadores locales o de cualquier parte del mundo que

utilicen esta revisión como una ayuda conceptual o metodológica, que prueben los
métodos propuestos y lo califiquen constructivamente, que tengan en cuenta que
la intencion original era ralizarlo o ponerlo aprueba pero por dificultades no se
logró, y que su objetivo va mas haya de ser un simple estudio de unos meses en
el laboratorio en los que se prueben o no los métodos, lo que busca
principalmente es que aumenten los estudios relacionados o enfocados a este
tema, también que todos los trabajos venideros tengan en cuenta las necesidades
aún faltantes, y que se interesen en el desarrollo de nuevos materiales como
bioplasticos, ya sean Biofragmentables o totalmente bioegradables, o también
nuevas aplicaciones.
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99
ANEXO A1
Aislamiento y cuenta de microorganismos degradadores de LDPE
Figura 14 procedimiento para el aislamiento de los microorganismos

biodegradadores de LDPE adaptados de [187, 94] Para el aislamiento y
cuenta de hongos degradadores de PE se utilizó la misma técnica y
medio que para bacterias, con la diferencia de que al medio se le
adiciona rosa de Bengala y estreptomicina y se ajusta el pH a 4.9.
100
ANEXO A2
Aislamiento e identificación de
Microorganismos degradadores de LDPE
Figura 15 procedimiento para el cultivo, el aislamiento y la identificación de los

microorganismos degradadores de LDPE.
101
ANEXO B
Purificación y aislamiento de microorganismos degradadores LDPE
Figura 16 Procedimiento para aislar los microorganismos degradadores de LDPE y su

posterior propagación para realizar la extracción del DNA. Para extraer el ADN fúngico
no se debe sembrar en agar porque el raspado deja trazas de medio los cuales
interfieren en la extracción de DNA, el método propuesto es el registrado por Rojas
Triviño [276]
102
ANEXO C
Prueba de biodegradación de LDPE
Figura 17 Ensayo de biodegradación in vitro adaptado de [237, 126]
103
ANEXO D
Extracción de DNA de hongos
Figura 18 Método propuesto es el registrado por Mahaku modificado por [203].
104
ANEXO E
Extracción de DNA de bacterias
Figura 19 Método para extraer ADN es la registrada por El centro internacional de

agricultura Tropical-CIAT usando buffer de extracción (CTAB)
Tabla 16 reactivos requeridos con sus respectvas concentraciones, tomadas de [276]
Reactivo Concentración Cantidad

Reactivo Concentración Cantidad
NaCl 5M 14mL
NaCl 1,4M 8,18mL
EDTA pH 8,0 0,5M 2,0 mL
EDTA pH 8,0 20mM 4,0 mL
Tris-HCl pH8,0 1M 5mL
Tris-HCl pH8,0 100mM 10mL
SDS - 0,5g
CTAB 2% 2g
Agua destilada esteril Aforar a 50mL
PVP 40 1% 1g
Figura 20 Cuantificación del DNA microbiano
105
ANEXO F
PCR Discriminación entre grupos microbianos utilizando
Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP)
Figura 21 propuesta metodológica realizar técnica RFLP tomada y adaptada de [277].

106
ANEXO G1
Pruebas de identificación bacteriana
Figura 22 identificacion bacteriana utilizando, prueba de agar LIA, Kligler, tioglicolato y triptófano.
107
ANEXO G2.
Figura 23 pruebas de identificación microbiana, bruebas de almidon, TCI, catalasa oxidasa
108
ANEXO G3
Figura 24 pruebas de descarboxilacion de lisina ornitina, fenilalanina deaminasa
109
ANEXO G4
Figura 25 pruebas RM VP, OF y fermentación de glucosa

110
ANEXO H
Tabla 17 Listado de sustancias para los medios y pruebas
Dilución agua destilada L Cajas de Petri.
MMB Fosfato de potasio monobasico 0,4g Matraces

Fosfato de potasio dibasico 1,6g Espátula.
Cloruro de amonio 1,5g Balanza analítica.
Cloruro de magnesio sexta hidratado 0,17g Agitador magnético.
Sulfato de sodio Hepta hidratado 1,5g Varilla para muestra.
Cloruro de calcio Di hidratado 0,045 Papel filtro estéril.
Agar noble (libre de impurezas). 15g Autoclave.
solución salina 0.85% esteril 99mL Campana de flujo laminar.
etanol tubos de vidrio de 15mL
polietileno esteril vórtex
streptomicina 1ml Varilla de vidrio
SM Cloruro de calcio monohidratado 5,11g papel aluminio esteril
Cloruro de Manganeso monohidratado 0,66g potenciómetro
Cloruro de sodio 1g
Cloruro ferrico sexta hidratado 1g
Cloruro de calcio Di hidratado 0,1g
Cloruro de cobre 0,01g
Cloruro de zinc 0,08g
Cloruro de aluminio 0,05g
Ácido Bórico 0,01g
Molibdato de sodio di hidratado 0,04g
Ácido láctico 10% 10mL
catalasa, Peróxido de hidrogeno 3% 1mL
oxidasa Dimetil-p- Fenilendiamina 1% 1mL Papel filtro estéril.
(OF) peptona 2g
Hugh-leifson Glucosa 10g
NaCL 5g
fosfato ácido de sodio 0.3g
agar-agar 3g
Azul de bromotimol 0,03g

fermentación proteasa de peptona 10g
glucosa Glucosa 10g
caldo glucosa púrpura de bromocresol 0,015
NaCl 5g
agua destilada 1L
agar TSI extracto de carne 3g
111
Extracto de levadura 3g
peptona 10g
sulfato ferroso 0,2g
Tiosulfato de sodio
agar agar
NaCL 5g
Glucosa 1g
proteasa de peptona 5g
rojo fenol 0,024g
agua destilada 1L
lactosa 10g
sacarosa 10g
tioglicolato Tripteína 17g Mechero bunsen
resazurina 0,001g
Peptona de soya 3g Asas de platino
Glucosa 6g Cotonetes
Cloruro de sodio 2,5g tubo eppendorf
Tioglicolato de sodio 0,5g
Agar 0,75g
L-cistina 0,25g
Sulfito de sodio 0,1g
rojo de metilo, Gradilla
RM-VP a-naftol 5% 0.6 ml tubos de cultivo
KOH 40% 0.2 ml
peptona 7g
Glucosa 5g
agua destilada 200mL
etanol 95%
Fosfato dipotásico 5g
UREASA Urea 20
Fosfato monopotásico 9,1
Fosfato disódico 9,5
Extracto de levadura 0,1
p- Dimetilbenzaldehido 0,1mL
agua destiada 1L
agar agar
Rojo fenol 0,01g
l SIM Triptofano 20mg
Peptona 6,1g
Sulfato de hierro y amonio 0,2g
Tiosulfato de sodio 0,2g
Agar 3,5g
112
reactivo de Erlich
Kligler Peptona de carne 13g
Cloruro de sodio 5g
Lactosa 10g
Triptona 10g
Glucosa 1g
Citrato de hierro y amonio 0,5g
Tiosulfato de sodio 0,3g
Rojo de fenol 0,025
Agar 15g
Moeller Peptona de carne 5g
Extracto de carne 5g
Glucosa 0,5g
Piridoxal 0,005g
Rojo de cresol 0,005g
Púrpura de bromocresol 0,01g
simmons Citrato de sodio 2g
Cloruro de sodio 5g
Fosfato dipotásico 1g
Fosfato monoamónico 1g
Sulfato de magnesio 0,2g
Azul de bromotimol 0,08g
Agar 15g
fenilalanina Extracto de levadura 3g
DL-Fenilalanina 2g
Fosfato disódico 1g
Cloruro de sodio 5g
Agar 12g
LIA peptona 5g
Glucosa 1g
L-lisina HCl 10g
citrato ferrico amónico 0,5g
tiosulfato de sodio 0,04g
agar agar 15g
purpura de bromocresol 0,02g
agar almidon extracto de carne 3g
almidón 10g
agar 12g
tinción Cristal violeta. 0,05 Microscopio óptico
Lugol de Gram. 0,005 Portaobjetos
Alcohol-acetona. 0,005 Asa de platino
Safranina. Agar macconkey 0,005 mechero
113
ANEXO I
Tabla 18 Procedimiento sugeridos para la siembra tomada de [276].
Prueba medio /reactivo Procedimiento para la siembra
producción de Agar SIM siembra por punción

sulfúro
producción de Agar SIM siembra por punción

indol
movilidad Agar SIM siembra por punción
(motilidad)
fermentacion de Agar TSI + siembra mixta, inoculación del

carbohidratos caldo rojo de fenol y medio con asa de argolla
carbohidrato
Citrato Agar citrato de siembra mixta

Simmons
Rojo de metilo- Caldo RM-VP inoculación del

Voges medio con asa de argolla
Proskauer
Ureasa Caldo urea inoculación del medio con asa de argolla
Descarboxilació Agar LIA Siembra Mixta

n de lisina
Reducción de Caldo Nitrato inoculación del medio con asa de argolla

Nitratos
Catalasa Peróxido de Hidrogeno, Sobre un portaobjetos limpio realice el frotis de una colónia del
3% microorganismo adicione 2 gotas del reactivo
Oxidasa tiras prueba de oxidasa Frote una colonia del microorganismo sobre el reactivo y realice
las observaciones
Hidrólisis de Gelatina siembra por punción
Gelatina
Coagulasa Caldo BHI plasma de inocule el microorganismo en 0,5mL de caldo BHI e inocule a
conejo 37°C/24h concluída la incubación, adicione 0,5mL de plasma e
incube a 37°C /4h (observe hasta las 1824h)
Hidrólisis del Agar almidón o lugol de Realice una siembra por agotamiento e incube a 37° C /2h,
Almidón Gram Concluida la incubación, inunde las cajas con lugol de gram
Hemólisis Agar sangre Siembre el microorganismo por Agotamiento e incube a 37°C/24h
Caseína Agar nutritivo Realice una siembra por agotamiento e incube a 37° C /2h,
adicionado con skin
milk
Desóxiribonucle Agar DNAsa Realice una siembra por agotamiento e incube a 37° C /2h,
asa Concluida la incubación, inunde las cajas con HCl 1M
Antibiograma Agar Moeller Hinton Siembre masivamente con hisopo estéril el microorganismo.
sensidiscos antibiótico Impregne cada sensidisco con un antibiotico diferente y
repartalos equitativamente en la superficie de la caja, señalando
en la parte posterior el antibiótico utilizado incube a 37°C /24h
114
ANEXO J1
Características preliminares bacterianas
Tabla 19 relación entre género y resultados obtenidos en las pruebas bioquímicas tomada de [276].
reacción de Gram ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₋ ₋ ₋ ₋ ₋
(cultivo fresco)
Forma Coco Coco Coco Coco Bac Bac Bac Bac Bac Bac Bac Bac coc
ilo ilo ilo ilo ilo ilo ilo ilo o
Agrupación Raci Raci Cade Tetra par
mos mos nas das es
Crecimiento aerobio ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₋ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊
Crecimiento ₋ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₋ ₋ ₋ ₊ ₊ ₋
anaerobio
Esporas ₋ ₋ ₋ ₋ ₋ ₊ ₊ ₊ ₋ ₋ ₋ ₋ ₋
Movilidad ₋ ₋ ₋ ₋ ₋ ± ± ± ± ± ± ₊ ₋
Catalasa ₊ ₊ ₋ ₋ ₋ ₋ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊
Oxidasa ₊ ₊ ₋ ₊ ₊
fermentar glucosa a ₋ ₊ ₊ ₊ ₊ ± ₊ ₋ ₋ ₋ ₊ ₊ ₋
ácido y gas
O/F ₋ O F F O
Micrococcus X
Staphylococcus X
Streptococcus X
Lactococcus X
Enterococcus X
Leuconostoc X
Pediococcus X X
Aerococcus X
Lactobacillus X
Clostridium X
Bacillum X X
Alcaligenes X
Pseudomonas X
Enterobacterias X
Aeromonas X
Chromobacterium X
Neisseria X
115
ANEXO J2
Tabla 20 algunas características preliminares bacterianas, +positivo, -negativo.
Genero Especie forma Gram Catalas Oxidas Movi aerobi Estrict/Facul espor
Achromobacte denitrificans Bacilo - + + Si Si F no
Acinetobacter baumannii Bacilo - + - No Si E No
Actinomicetes spp Bacilo + - - Si/no si F Si
Arthrobacter paraffineus Bacilo + + - Si/no Si E Si
Arthrobacter viscosus Bacilo + + - Si/no Si E No
Bacillus amyloliquefa Bacilo + + - Si Si F Si
Bacillus subtilis Bacilo + + - Si Si F Si
Bacillus megaterium Bacilo + + - Si Si F Si
Bacillus sphericus Bacilo + + - Si Si F Si
Bacillus pumilus Bacilo + + - Si Si F Si
Bacillus mycoides Bacilo + + - Si Si F Si
Bacillus thuringiensis Bacilo + + - Si Si F Si
Bacillus Circulans Bacilo + + - Si Si F Si
Bacillus brevies Bacilo + + - Si Si F Si
Bacillus cereus Bacilo + + - Si Si F Si
Bacillus halodenitrific Bacilo + + - Si Si F Si
Brevibacillus borstelensis Bacilo + + - Si Si F Si
Delftia acidovorans Bacilo - + + Si Si F No
Microbacteriu paraoxydans Bacilo + + - No Si F No
Micrococcus lylae Cocos + + - No Si F No
Micrococcus luteu Cocos + + - No Si F No
Moraxella rouxii Cocos - + + No Si F No
Nocardia steroids Bacilo + + + Si Si E No
Paenibacillus macerans Bacilo -/+ + - Si No F Si
Proteus vulgaris Bacilo - + - Si No F No

116
ANEXO J3
Tabla 21 algunas características preliminares bacterianas
Genero Especie form Gram Catalas Oxidas Mó Aerobi Estri/Fac espor
Pseudomonas aeruginosa Bacilo - + + Si Si E No
Pseudomonas putida Bacilo - + + Si Si E No
Pseudomonas syringae Bacilo - + + Si Si E No
Pseudomonas stutzeri Bacilo - + + Si Si E No
Pseudomonas mycoides Bacilo - + + Si Si E No
Pseudomonas fluorescens Bacilo - + + Si Si E No
Rahnella aquatilis Bacilo - + - Si No F No
Ralstonia eutropha Bacilo - + + Si Si F No
Rhodococcus ruber C208 Coco + + - Si Si E No
Rhodococcus erythropolis Coco + + - Si Si E No
Rhodococcus rhodochrous Coco + + - Si Si E No
Serratia marcescen Bacilo - + - Si No F No
Staphylococcu epidermidis Coco + + - No No F No
Staphylococcu aureus Coco + + - No No F No
Staphylococcu epidermidis Coco + + - No No F No
Stenotrophom spp Bacilo + - - Si Si F No

onas
Streptococcus lactis Coco + - - No No F No
Streptococcus aureus Coco + - - No No F No
Streptomyces setonii Bacilo + - - No No F No
Streptomyces viridosporus Bacilo + - - No No F No
117
ANEXO K1
Procedimiento para el análisis del polietileno usando FTIR
Preparación de las muestras

Para obtener una alta calidad en los espectros infrarrojos, el método apropiado para la
preparación de la prueba debería ser seleccionado según las características de la
muestra.Las siguientes observaciones deberían ser tenidas en cuenta a la hora de la
preparación de la muestra:
Figura 26 medidas a tener en cuenta para la preparación de la muestra

cuenta una muestra blanco, de PE no tratado en las pruebas, y un control
negativo adaptado de [287].
118
ANEXO K2
Procedimiento para el análisis del polietileno usando FTIR
Tabla 22 Técnicas de muestreo de FT-IR para el análisis del LDPE tomada de [272]
Forma de la muestra técnicas sugeridas
polvo fino (< 2 μm) ATR; DRIFT; Transmission (KBr)

Forma Irregular, ATR, DRIFT (abrasive sampling)
pelets
Flat, reflective ATR, DRIFT (abrasive sampling); Specular reflectance
surfaces
Single fibers ATR (diamond); FT-IR microscope
Polymer soluble in Transmission (cast film)
volatile solvents
Capas finas (< 25 μm) Transmission Large items DRIFT (abrasive sampling)
Figura 27 Método propuesto para analizar el PE degradado
119
ANEXO L Cuantificación de la producción de CO2 y metabolitos
Figura 28 metodología para el análisis dde la evolución de CO2 usando GCMS

Tabla 23 condiciones óptimas de corrida cromatográfica
Condición
Columna Temperatura ambiente
control 1 25°C
Inyector 40°C
Detector 100°C
Figura 29 Cromatograma donde se muestran
Gas acarreador Helio Flujo 55ml/min los gases cuantificados por CG-DCT.
Corriente 125mAmp
Tiempo de 5 min
corrida
120
ANEXO L2
Cuantificación de la producción de co2
E Identificación de metabolitos
El primer pico que sale es de inyección, el segundo corresponde a CO2, el tercero a O2,
el cuarto a N2 y el quinto a CH4 (Fig. 4.3). Cuando se hace la integración de los datos,
eliminar el primer pico de dicha integración, porque el resultado del área de cada pico se
toma en porcentaje. Tomar la lectura del área del pico de CO2 en porcentaje.
Figura 30 metodología Adaptada de Bhone Myint kyaw [156].

Para ver los metabolitos reportados en la literatura (Ver la tabla 11)
121

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REVISIÓN BIBLIOGRAFICA SOBRE LOS MICROORGANISMOS

BIODEGRADADORES DE POLIETILENO DE BAJA DENSIDAD Y SUS

Nelson Ricardo Acuña Molina

UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSE DE CALDAS

Nelson Ricardo Acuña Molina

TRABAJO DE GRADO PARA OPTAR POR

UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSE DE CALDAS

Presidente del Jurado

Bogotá D.C. (01, marzo, 2017)

A mi madre y a todos los

Le agradezco a mi madre por su apoyo constante, a mis profesores por todas

5.3.4.5.1 Los polihidroxi alcanoatos PHA 34

5.4.1.1.4 Espectroscopia infrarroja con transformada de 42

5.4.1.1.9 Espectrometría fluorescencia de rayos x (XRF) 44

5.5.1.2 Identificación preliminar 65

5.5.4.1.2.1 Índice de carbonilo (CI) 70

Tabla 21 Algunas características preliminares bacterianas 117

Figura 1 a Polietileno lineal de baja densidad (LLDPE) 9

Figura 1 b Polietileno de baja densidad (LDPE) 9

Figura 1 c Polietileno de alta densidad HDPE 9

Figura 2 Factores que afectan la biodegradación del LDPE 13

Figura 3 Rutas hipotéticas de transformación del polietileno 14

Figura 4. Biodegradación del PE por β -oxidación 14

Figura 5 Iniciadores de la oxidación del PE 15

Figura 6 Mecanismo de ruptura hemolítica o fotólisis 16

Figura 7 Iniciación a partir de un agente metálico 16

Figura 8 Propagación de la foto oxidación 17

Figura 9 a Mecanismos de oxidación siguiendo las reacciones 17

Figura 9 b Oxidación para la formación de ácidos grasos o 17

Figura 12 Métodos preliminares de identificación metabólica 66

Figura 13 Metodología a realizar para la identificacion específica 68

Figura 14 Procedimiento para el aislamiento de los 100

Figura 18 Método propuesto es el registrado por Mahaku 104

Figura 19 Método tomado para extraer ADN es la registrada por 105

Figura 21 Propuesta metodológica para realizar la técnica RFLP 106

Figura 22 Identificación bacteriana utilizando, prueba de agar 107

Figura 26 Medidas a tener en cuenta para la preparación de la 118

Gráfica 1. A Variación de la producción de mundial de 4

Gráfica 3. Técnicas más utilizadas para estudiar la 76

ANEXO A1. Aislamiento y cuenta de los microorganismos 100

AFM: Microscopio de fuerza atómica. (del inglés Atomic Force

BIODEGRADACIÓN: es un proceso gradual de descomposición o

El uso irracional y la resistencia a la degradación ambiental son las causas de

Polietileno de baja densidad, biodegradación, microorganismos, pruebas

Globalmente se desechan 57 millones de toneladas anuales de polietileno de

3.1 OBJETIVO GENERAL

 Realizar una revisión bibliográfica sobre la biodegradación del polietileno,

 Realizar una revisión bibliográfica sobre los estudios de la

4.1 DEFINICIÓN DEL PROBLEMA

4.2 Reseña histórica

Los primeros estudios sobre la biodegradación del polietileno se remontan al

4.3 Alternativas para el control del LDPE

4.3.3 La pirólisis del LDPE

4.3.4 Políticas de reciclaje

Debido a la polución “blanca” en el medio ambiente marino, mínimo 267

Quizá como material no sea químicamente tóxico, pero en los productos

El enterramiento de las bolsas y láminas de polietileno en el suelo provoca

A continuación se presentarán brevemente los conceptos más importantes en

5.1.2 Poli olefinas

5.1.2.1.1 El polietileno (PE)

5.1.2.1.2 Clasificación del PE

5.1.2.1.2.2 Polietileno lineal de baja densidad o (LLDPE)

5.1.2.1.2.3 Polietileno de alta densidad (HDPE)

 Por los esqueletos hidrofóbos, que consisten en largas cadenas de