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Anticoagulantes y coloración

Coloración

Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el
contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que
usualmente se utilizan en biología y medicina para resaltar estructuras en tejidos biológicos
que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios. Los diferentes
colorantes pueden ser utilizados para aumentar la definición y examinar grandes cortes de
tejido (resaltando por ejemplo fibras musculares o tejido conectivo), poblaciones celulares
(por ejemplo clasificando diferentes células sanguíneas) o incluso para resaltar organelas
dentro de células individuales.

Tinción de Giemsa

Usada en la sección de hematología, la tinción o coloración de Giemsa permite la


diferenciación de las distintas células sanguíneas. La solución de Giemsa colorea y revela
eritrocitos, basófilos, eosinófilos, polimorfonucleares, linfocitos, plaquetas y la cromatina de
los núcleos a través de un frotis sanguíneo.

Material

-Frotis sanguíneo seco y rotulado.

-Cubeta.

-Varillas paralelas.

-Frasco lavador con agua destilada.

-Pipetas Pasteur.

-Cronómetro.

-Metanol como solución fijadora.

-Colorante de Giemsa.

Procedimiento

-Llenar de agua la cubeta para que los colorantes no se peguen al fondo.

-Colocar las varillas paralelas sobre los bordes de la cubeta.

-Colocar las extensiones sanguíneas sobre las varillas paralelas.

-Cubrir las extensiones con metanol y esperar 4-5 minutos.

-Decantar para eliminar el metanol.

-Cubrir las extensiones con solución extemporánea de Giemsa recién diluída (1/10 gotas con
agua destilada) y dejar actuar durante 10 minutos.
-Lavar las extensiones con agua destilada para eliminar los restos de colorante.

-Secar las extensiones al aire, colocas en vertical.

-Observar los frotis sanguíneos teñidos al microscopio óptico (Colocar un gota de aceite de
inmersión).

Tinción de Wright

Este colorante va a permitir suministrar un medio para estudiar la sangre y determinar las
variaciones y anormalidades de su estructura, forma y tamaño de eritrocitos, su contenido de
hemoglobina y sus propiedades de coloración. Esta coloración es conocida como poli
cromática debido a que se produce varios colores. Es una solución de alcohol metílico de un
colorante acido (eosina) y otro básico (azul de metileno).

Materiales

-Frotis sanguíneo seco y rotulado.

-Cubeta.

-Varillas paralelas.

-Frasco lavador con agua destilada.

-Pipetas pasteur.

-Cronómetro.

-Colorante de Wright.

Procedimientos

-Llenar de agua la cubeta para que los colorantes no se peguen al fondo.

-Colocar las varillas paralelas sobre los bordes de la cubeta.

-Colocar las extensiones sanguíneas sobre las varillas paralelas.

-Cubrir las extensiones con un volumen conocido de solución de Wright durante 5-8 minutos.
Se producirá la fijación de la extensión.

-Añadir el mismo volumen de agua destilada, soplando ligeramente con la pipeta para
homogeneizar la mezcla, durante 3-4 minutos. Se producirá la tinción de la extensión.

-Lavar los frotis teñidos con agua destilada hasta eliminar los restos de colorante.

-Secar las extensiones al aire.

-Observar las preparaciones al microscopio óptico para comprobar la calidad de la tinción.


Tinción azul de crecil brillante

Es un líquido acuoso de color azul intenso, utilizado en la laboratorio clínico para reencuentro
de reticulocitos (son eritrocitos no nucleado e inmaduros que contiene R.N.A y que continúan
sintetizando hemoglobina después de la pérdida del núcleo.

Materiales:

-Microscopio de 100X

-Portaobjetos
-Tubo comercial con azul de crecil brillante al 1% o azul de metileno

-Pipeta pasteur

Procedimientos:

-Se mezcla en un tubo 3 gotas de azul de crecil brillante y 3 gotas de sangre

-Se encuba durante 15 min a 37 grados

-Se hacen 2 extendidos en la lámina y se miren con objetivo de 100X

-Se encuentran aproximadamente 1.00 hematíes y se seca el promedio de reticulocitos

-Valor normal neonatos hasta 2,6 % y en adultas hasta 2,0%

Anticoagulantes:

Se denomina anticoagulante a aquellas sustancias, ya sea exógenas o endógenas, que tienen la


capacidad de inhibir la coagulación de la sangre. Esto es posible a partir de la creación de un
estado denominado pro-hemorrágico.

Se debe tener en cuenta que los vasos sanguíneos son conductos que transportan sangre a
través de todo el organismo humano. Si se produce una herida en dichos vasos, la sangre
comenzará a brotar rápidamente, por fuera de su cauce normal. Para evitar el desangramiento
(es decir, que la sangre fluya de forma ininterrumpida por fuera de los vasos sanguíneos), el
organismo reacciona a través de sustancias que coagulan la sangre, es decir, la convierten de
líquida a sólida, para “cerrar” la herida. Entonces, se denomina coagulación, al proceso por el
cual la sangre se solidifica, primero en apariencia de gel, hasta solidificarse completamente. La
sustancia que interviene en el proceso de coagulación es una proteína (fibrinógeno) que se
encuentra en la sangre, que al experimentar un cambio químico (como consecuencia de una
lesión), convierte la sangre en insoluble.

Tipos de anticoagulante: Un anticoagulante es una sustancia de distinta naturaleza química


que afecta al proceso de coagulación. Poseen un efecto biológico, lo cual permite que se
puedan dividir en dos tipos:

1-Anticoagulantes de acción indirecta: Este tipo de anticoagulantes son aquellos que por
medio de su intervención con otras proteínas alteran el funcionamiento de las cascadas de
coagulación, esta acción también sucede cuando actúan en otras vías metabólicas.
Entre los anticoagulantes de acción indirecta se encuentran: • Inhibidores medianos de
antitrombina III • Inhibidores de síntesis de factores de coagulación • Derivados del dicumarol
• Heparina no fraccionada • Heparina de bajo peso molecular • Danaparoide sódico

2-Anticoagulantes de acción directa: Estos anticoagulantes son aquellos que son capaces de
inhibir la cascada de la coagulación. Entre los anticoagulantes de acción directa, se encuentran:
• Inhibidores directos de trombina • Hirudina • Argatroban

Existen múltiples factores involucrados en el proceso de coagulación de la sangre. Existen


diferentes tipos de ellos en polvo o líquidos. Deben seleccionarse siempre el anticoagulante
apropiado según el estudio que se quiera realizar.

Los anticoagulantes más comunes son: EDTA: (ETILEN-DIAMINO-TETRA-ACETATO) Este tipo de


anticoagulante es utilizado principalmente cuando se realizan estudios en donde se cuentan
células.

CITRATO DE SODIO: Generalmente en concentraciones al 3.8 % y ser utiliza comúnmente en


estudios de coagulación.

HEPARINA: Se utiliza tanto en algunos estudios de rutina como especializados. Su


presentación puede incluir heparina con concentraciones de sodio o litio. En general, la
heparina con tilio es utilizada para estudios de química y la heparina sódica se utiliza para
estudios de linfocitos.

OXALATOS: Son anticoagulantes menos comunes, utilizados ocasionalmente en las


determinaciones de glucosa. Los tubos deben mezclarse inmediatamente, una vez que la
sangre ha entrado en ellos. Invertir suavemente (10 – 15 veces) o colocarlos en rotores
especiales, para así obtener mezclas homogéneas. Existen códigos de colores
internacionalmente conocidos, para las diferentes presentaciones de tubos colectores de
nuestras sanguíneas.

Anticoagulantes, para uso en vitro y en vivo

En vitro: No aplicadas en pacientes, si no para definiciones de laboratorio

-EDTA: Ácido etilendiaminotetraacético. Actúa por efecto quelante sobre el ión calcio, lo que
impide la formación de los complejos procoagulantes. Útil para recuentos celulares, sobre
todo en auto analizador, tiene la ventaja de permitir la realización del hematocrito y de frotis
sanguíneo hasta dos horas después de la extracción de la muestra, también impide la
aglutinación de las plaquetas.

-Heparina Sódica: Evita que la protrombina se transforme en trombina. Estructuralmente es un


mucopolisacárido ácido con grupos sulfato, no adecuada para muestras a ser examinadas al
microscopio luego de tinción, ya que altera notablemente las coloraciónes obtenidas.
-Citrato trisódico: Impide que el calcio se ionice, evitando la coagulación. Se usa para realizar
pruebas de hemostasia y para medir la velocidad de eritrosedimentación.

-ACD: Se usa en bancos de sangre para conservar las unidades de sangre y estudios
metabólicos eritrocitarios.

-Oxalato: Forma de sal sódica, potásica o amónica, actúan precipitando los iones calcio. El
oxalato altera las concentraciones de los componentes del plasma y mientras más concentrado
se utilice, mayor es la alteración, por ello no debe utilizarse por encima de los 3 mg/ml de
sangre.

En Vivo: Utilizado para medicamentos anticoagulantes. Medicamentos que indicamos para


impedir la coagulación o la agregación plaquetaria; son útiles en patologías por trombo
sanguíneo, para su trombolisis o prevenir reincidencias. Entre los que impiden la cascada de
coagulación:

-Heparina: Alarga el tiempo de coagulación, se administra generalmente mediante inyección


subcutánea o endovenosa. Las cálcicas se usan por vía subcutánea, por menos dolorosas, por
vía endovenosa pueden utilizarse ambas, pero nunca por vía intramuscular. Se usa cuando se
precisa de acción anticoagulante rápida y por poco tiempo.

-Tirofiban: Asociado a la heparina es más efectivo que la heparina sola en pacientes con
síndromes coronarios isquémicos y es eficaz reduciendo complicaciones isquémicas asociadas
a angioplastias transluminales percutáneas.

-Warfarina: Estos medicamentos presentan ventaja de poder ser administrados por vía oral y
de poseer un efecto prolongado en el tiempo, con gran variabilidad interindividual, por ello
necesitan controles periódicos para su ajuste terapéutico.

Ventajas Y desventajas de las tinciones

Ventajas: Te facilita la identificación, morfología y funcionamiento de células, bacterias, virus o


en general objetos microscópicos, los colorantes tiñen de forma parcial, total o gradual las
diferentes estructuras que integran los objetos y principalmente los productos que deseas
observar para facilitar el trabajo.

Desventajas: La principal desventaja es que, debido al tratamiento al que debe someterse un


tejido vivo para su tinción, las células acaban muriendo, con lo cual, no es posible observar
esas células activas en su estado natural, sino muertas. Después de su empleo difícilmente
puedes utilizar sobre las preparaciones teñidas otro colorante

Importancia

1. Proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea, permitiendo


diferenciar varios tipos morfológicos.

2. Permite el estudio de las estructuras internas de la célula bacteriana, tales como paredes
celulares, vacuola o cuerpos celulares.
3. permite el empleo de mayores amplificaciones

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