UNIVERSIDAD DE TARAPACÁ

FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA

LABORATORIO Nº 8
“Determinación de metales pesados en Aguas Residuales Industriales por
Método Espectrofotométrico UV–Visible”

Objetivos del Práctico

 Analizar la presencia de metales (Pb, As y B) en aguas residuales de origen

industrial mediante espectrofotometría UV–visible.
 Estimar la concentración de metales pesados en la muestra a estudiar mediante la
aplicación de la Ley de Lambert-Beer

Introducción

Las aguas residuales industriales (también llamadas RIL), son aquellos efluentes
resultantes de la actividades productivas, las cuales contienen materia orgánica, inorgánica,
sólidos y elementos tóxicos en variadas concentraciones, dependiendo del sector productivo
que las genere. Por ello, la completa caracterización de los componentes presentes en estas
se hace de vital importancia, especialmente considerando que ciudades como Arica no
cuentan con plantas de tratamiento para estos efluentes y que la mayoría de ellos son
dispuestos directamente al alcantarillado o a cuerpos hídricos superficiales.
La determinación, cualitativa y cuantitativa, de metales pesados en efluentes que son
dispuestos de manera directa e indirecta a aguas superficiales es relevante debido a su
toxicidad y permanencia en el medio ambiente. A diferencia de algunas sales y compuestos
orgánicos, estos no son degradados, sino que se acumulan en sedimentos, vegetales y
algunas especies animales afectando ecosistemas a largo plazo.
La concentración máxima de estos elementos en aguas superficiales está establecida
por el D.S. Nº90/2001 en el Artículo 4, como se señala a continuación:

Tabla 1:
LIMITES MAXIMOS PERMITIDOS PARA DESCARGAS DE RESIDUOS LIQUIDOS A
AGUAS CONTINENTALES SUPERFICIALES Y MARINAS
Contaminante Cuerpo de agua Fluvial Cuerpo de agua Marino
Arsénico 0,5 mg/L 0,2 mg/L
Boro 0,75 mg/L 0,5 mg/L
Plomo 0,05 mg/L 0,2 mg/L

Los métodos oficiales para su cuantificación se encuentran establecidos en el Manual

Operativo de la Norma de Muestreo de Aguas Residuales NCh 411/10 – 2005 establecido
por la Superintendencia de Servicios Sanitarios (SISS), en los siguientes métodos:

Tabla 2:
LIMITES MAXIMOS PERMITIDOS PARA DESCARGAS DE RESIDUOS LIQUIDOS A
AGUAS CONTINENTALES SUPERFICIALES Y MARINAS
Contaminante Método analítico
ME-12-2007: Determinación de Arsénico por Método
Arsénico Espectrofotometría de absorción atómica con generación de
hidruros.
Boro –

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ME-18-2007: Determinación de Plomo por Método

Plomo Espectrofotometría de absorción atómica con aspiración
directa.

Sin embargo, por dificultades técnicas, en el presente laboratorio se realizará la

determinación de arsénico, boro y plomo por medio de técnicas espectrofotométricas
validadas por la EPA en Methods for the Determination of Metals in Environmental Samples,
Supplement 1 (EPA/600/R-94/111). Además utilizadas en países como Argentina, México y
España.

La espectroscopia es un término general aplicado al estudio de las distintas

interacciones de la radiación con la materia. Los métodos espectrométricos incluyen un
amplio grupo de métodos analíticos que se basan en la espectroscopia atómica y molecular,
estos métodos utilizan un detector fotoeléctrico u otro tipo de dispositivo electrónico para
medir la intensidad de la radiación. Las medidas de absorción de la radiación ultravioleta y
visible tienen una gran aplicación en la identificación y determinación de una enorme
cantidad de especies inorgánicas y orgánicas, tiene como principio de medición la
absorción y/o transmisión de la energía radiante emitida por una fuente de luz, que
atraviesa una sustancia. El método es espectroscópico porque se basa en la medida
de la intensidad y de la longitud de onda de la energía radiante.
Para realizar un análisis espectrofotométrico es necesario establecer las
condiciones adecuadas y preparar una curva de calibrado que relaciones la
absorbancia y la concentración. Este proceso se puede realizar tomando en cuenta los
siguientes puntos: selección de la longitud de onda, variables que influyen en la absorbancia,
limpieza del material y determinación de la relación entre absorbancia y concentración.

Dado que la reflexión de la luz es de un interés mínimo en espectrofotometría, se tiene

que lo relevante es la absorbancia y transmitancia de la luz. Transmitancia puede definirse
como la relación de la cantidad de luz transmitida a la cantidad de luz que cayó inicialmente
en la superficie.
𝑃
𝑇=
𝑃𝑂
Donde T es la transmitancia, P la intensidad de la luz transmitida y P O la intensidad de la luz
incidente. Mientras que la absorbancia es el logaritmo negativo de la transmitancia.
𝑃
𝐴 = − log 𝑇 = −𝑙𝑜𝑔
𝑃𝑂
Los conceptos descritos anteriormente constituyen la Ley de Lambert–Beer, que se muestra
a continuación:
𝐴 =𝜀·𝑙·𝑐
Donde A es la absorbancia; ε es el coeficiente de extinción, el cual es constante para una
sustancia dada a temperatura y longitud de onda constante; 𝑙 es la longitud del camino óptico
(ancho de la celda, 1cm como medida estándar) y 𝑐 es la concentración de la sustancia.

Principio del Método

 Arsénico
Para su determinación se utiliza el método espectrofotométrico “Azul de Molibdeno
modificado”, método oficial de la AOAC (Asociación Oficial de Químicos Analistas de
Argentina). Está basado en la formación del complejo arsénico–molíbdico de color azul, entre
el arseniato y el molibdato de amonio en presencia de agente reductor de Johnson (1971).
Materiales y Equipos: El material requerido se limita a material de vidrio de uso
común de laboratorio. Un espectrofotómetro de haz simple UV/Visible con celdas de 1 cm
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de paso óptico. El espectro de absorción del complejo se encuentra situado entre 875 y 880
nm.
Soluciones Patrón: Se necesitan soluciones madres de Arsénico (V) de
1000ppm acidificada al 1% de HCl y Fosfato Monopotásico de 10 mmol/L
 Solución madre As (V) 1000ppm: se disuelven 4,1644 g de
Na2HasO4·7H2O en agua desionizada, agregando HCl al 1% para su
conservación. Aforando la solución a 1L.
 Solución madre KH2PO4 10 mmol/L: se disuelven 0,1361 g de fosfato en
agua desionizada, aforando a 100 mL.
Reactivos: Se debe preparar el reactivo reductor de Johnson, y el reactivo
colorante optimizado de Dhar.
 Reactivo reductor: se genera al mezclar Disulfito de sodio al 14%,
Tiosulfato de Sodio al 1,4% y Ácido Sulfúrico al 10%, en proporciones
2:2:1 respectivamente.
 Reactivo colorante: resulta de la mezcla de Ácido Ascórbico 10,8%,
Molibdato de Amonio 3%, Tartrato de Antimonio y Potasio 0,56% y Ácido
Sulfúrico 2,5M en proporciones 2:2:1:5.

 Boro
Para su determinación se utiliza el método espectrofotométrico con Azometina–H. En
medio acuoso y a un pH óptimo de 5,2, los iones borato y la Azometina–H reaccionan
formando un quelato color amarillo. La principal precaución con esta experiencia es utilizar
material libre de boro, idealmente de polipropileno.
Materiales y Equipos: El material requerido debe ser de polipropileno o vidrio
libre de boro. Un espectrofotómetro de haz simple UV/Visible con celdas de 1 cm de paso
óptico. El espectro de absorción del quelato se encuentra en los 420 nm.
Soluciones Patrón: Se necesita una solución madre de Boro de 1000 ppm,
preparada con 5,7190 g de Ácido Bórico solubilizados en 1 L de agua desionizada. Ésta se
debe guardar en un recipiente de plástico o vidrio libre de Boro.
Reactivos: Se debe preparar el reactivo de Azometina–H en Ácido Ascórbico y
una Solución Tampón de pH 5,9
 Reactivo de Azometina–H: disolver 0,9 g de Azometina–H en 2,0 g de
Ácido Ascórbico en agua desionizada y aforar a un volumen de 100 mL.
 Solución Tampón 5,9: disolver Acetato de Amonio 2 M y 3,8 g de EDTA–
Na2 en 150 mL de agua desionizada. Agregar Ácido Acético 2 M hasta
pH 5,9 y aforar a 250 mL con agua bidestilada.

 Plomo
Para su determinación se utiliza el método espectrofotométrico de transformación de
iones Pb2+ a sulfuro de plomo, mediante la adición de sulfuro de sodio en medio básico, esta
reacción genera un compuesto coloreado parduzco, muy cercano al espectro ultravioleta.
Materiales y Equipos: El material requerido se limita a material de vidrio de uso
común de laboratorio. Un espectrofotómetro de haz simple UV/Visible con celdas de 1 cm
de paso óptico. El espectro de absorción del compuesto se encuentra en los 380 nm.
Soluciones Patrón: Se necesita una solución madre de Plomo (II) de 1000 ppm,
obtenida por la disolución de 1,5980 g de Nitrato de Plomo, acidificado al 1% con Ácido
Nítrico y aforado a 1 L.
Reactivos: Se debe preparar Sal de Seignette, solución de Hidróxido de Sodio,
Cianuro de Potasio y Sulfuro Sódico.
 Sal de Seignette: disolver 50 g de Tartrato de Sodio y Potasio en 100
mL de agua
 Hidróxido de Sodio: solubilizar 27 g de Hidróxido de Sodio y aforar a 100
mL.
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 Cianuro de Potasio: disolver 10 g de Cianuro de Potasio en 100 mL de

agua.
 Sulfuro Sódico: solubilizar 5,0 g de Sulfuro Sódico en una mezcla de 10
mL de agua destilada y 30 mL de Glicerina bidestilada. La solución debe
ser filtrada y almacenada.

PARTE EXPERIMENTAL

1. Construcción de la curva de calibración

 Arsénico
a) A partir de la solución madre de As (V), construir soluciones de 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 y 0,5 ppm
en diferentes tubos de ensayo. Crear un blanco con 0,5 mL de agua destilada.
b) Agregar 0,2 mL de la solución madre de Fosfato a cada uno de los tubos.
c) En un tubo limpio, preparar la solución reductora. Mezclar 2 mL de Disulfito de Sodio, 2
mL de Tiosulfato de Sodio y 1 mL de Ácido Sulfúrico.
d) A los tubos de la curva, agregar 0,5 mL del agente reductor. Dejar actuar por 15 minutos.
e) Agregar 0,1 mL de Ácido Ascórbico a cada tubo.
f) En un tubo limpio, hacer la solución colorante. Agregar 2 mL de Molibdato de Amonio, 1
mL de tartrato de Antimonio y Potasio y 5 mL de Ácido sulfúrico 2,5 M.
g) Incluir 0,4 mL de solución colorante a las soluciones, agitar y dejar reaccionar por 30
minutos.
h) Medir la absorbancia con λ = 880 nm.

 Boro
a) A partir de la solución madre de B (III), preparar una solución estándar de 10 ppm,
diluyendo 1,0 mL en un matraz de aforo plástico de 100 mL.
b) De la solución estándar anterior, transferir 0,5; 1; 2; 3 y 4 mL a tubos de polipropileno de
15 mL. Diluir hasta los 10 mL.
c) Tomar una alícuota de 4,0 mL de cada uno de los estándares de calibración anteriores y
traspasarlos a tubos de polipropileno. Crear un blanco con 4,0 mL de agua destilada.
d) Agregar 4,0 mL de la Solución Tampón y homogenizar.
e) Agregar 2,0 mL de la solución de Azometina–H.
f) Mezclar y dejar reposar por 30 minutos
g) Medir la absorbancia con λ = 420 nm.

 Plomo
a) A partir de la solución madre de Pb (II), construir soluciones de 0,1; 0,2; 0,3 y 0,4 ppm en
diferentes tubos de ensayo. Crear un blanco con 0,5 mL de agua destilada.
b) Añadir 5 mL de la Sal de Seignette para eliminar interferentes de hierro y cobre.
c) Agregar 3 mL de solución de Hidróxido de Sodio.
d) A los tubos de la curva, agregar 0,1 mL de solución de Cianuro de Potasio.
e) Se homogeniza correctamente la solución.
f) Agregar gotas de la solución de Sulfuro de Sodio.
g) Homogenizar y esperar 1–2 minutos para la coloración parduzca.
h) Medir la absorbancia con λ = 380 nm.

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2. Determinación en Muestra Problema

 Arsénico
a) La solución debe encontrarse pre–tratada con HCl al 1% para evitar errores en la
medición.
b) Tomar una alícuota de 5 mL de la muestra a analizar.
c) Agregar 0,2 mL de la solución madre de Fosfato.
d) En un tubo limpio, preparar la solución reductora. Mezclar 2 mL de Disulfito de Sodio, 2
mL de Tiosulfato de Sodio y 1 mL de Ácido Sulfúrico.
e) Agregar a la muestra 0,5 mL del agente reductor. Dejar actuar por 15 minutos.
f) Agregar 0,1 mL de Ácido Ascórbico al tubo.
g) En un tubo limpio, hacer la solución colorante. Agregar 2 mL de Molibdato de Amonio, 1
mL de tartrato de Antimonio y Potasio y 5 mL de Ácido sulfúrico 2,5 M.
h) Incluir 0,4 mL de solución colorante a las soluciones, agitar y dejar reaccionar por 30
minutos.
i) Medir la absorbancia con λ = 880 nm.
j) Realizar la experiencia por triplicado

 Boro
a) La muestra se encuentra pre–tratada con Ácido Nítrico a pH 2,0.
b) Tomar 4 mL de la muestra problema en un tubo de polipropileno.
c) Agregar 4,0 mL de la Solución Tampón y homogenizar.
d) Agregar 2,0 mL de la solución de Azometina–H.
e) Mezclar y dejar reposar por 30 minutos
f) Medir la absorbancia con λ = 420 nm.
g) Realizar la experiencia por triplicado

 Plomo
a) La muestra se encuentra pre–tratada con Ácido Nítrico a pH 2,0.
b) Tomar una alícuota de 0,5 mL de la muestra.
c) Añadir 5 mL de la Sal de Seignette para eliminar interferentes de hierro y cobre.
d) Agregar 3 mL de solución de Hidróxido de Sodio.
e) A los tubos de la curva, agregar 0,1 mL de solución de Cianuro de Potasio.
f) Se homogeniza correctamente la solución.
g) Agregar gotas de la solución de Sulfuro de Sodio.
h) Homogenizar y esperar 1–2 minutos para la coloración parduzca.
i) Medir la absorbancia con λ = 380 nm.
j) Realizar la experiencia por triplicado

3. Cálculo de la concentración

a) Con la información obtenida a partir de la curva de calibración, utilizando la Ley de

Lambert–Beer, calcule el coeficiente de extinción de cada compuesto.
𝐴 =𝜀·𝑙·𝑐
b) Una vez obtenido ε, y utilizando nuevamente la expresión de la Ley de Lambert–Beer,
obtenga la concentración de la muestra problema.

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Bibliografía

 Decreto Supremo DS N°90 – Norma de emisión para la regulación de contaminantes

asociados a las descargas de residuos líquidos a aguas marinas y continentales
superficiales.
 Manual Operativo de la Norma de Muestreo de Aguas Residuales NCh 411/10
– 2005. Superintendencia de Servicios Sanitarios (SISS).
 Sarmiento, P., Peralta, J., Rosa, M. (2015). Evaluación del método del Azul de
Molibdeno. Análisis en campo de Arsénico en aguas. Unidad Tecnológica Nacional.
Argentina.
 Portocarrero, C. (2018). Validación de tres métodos analíticos para la determinación
de Boro por espectrofotometría UV/Visible. Universidad Nacional de San Agustín de
Arequipa. Perú.
 Simal–Lozano, J., Creus, J. (1975) Determinación espectrofotométrica de plomo.
Universidad de Santiago de Compostela. España.
 Harris, D. (2007). Análisis Químico Cuantitativo. 3ª Edición. Ed. Reverté. España
 Madrigal, A., Vásquez, G., Velasco, V., Rodríguez, P. (2008) Determinación de
Metales Pesados (Pb, Hg, Cd y As ) en Agua de Mar. Universidad de Colima. México.

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