Irradiación ex vivo de sangre humana para determinar daño genómico utilizando

técnicas moleculares
Los daños causados por la radiación ionizante como las roturas de doble cadena de ADN
activan grandes cantidades de proteínas e inducen genes asociados con el ciclo celular y
control del crecimiento. (Schmidt-Ullrich, Dent, Grant, & Valerie, 2000)
Mantener la estabilidad del genoma es de gran importancia para todos los organismos
porque el daño del ADN puede tener implicaciones biológicas graves, como trastornos
genéticos y cáncer. En los últimos años el uso de las pruebas de imagen para diagnóstico
médico, así como la exposición terapéutica ha aumentado de manera significativa,
convirtiéndose en una preocupación los efectos biológicos de la exposición a la radiación
de dosis bajas en pacientes, médicos y personal técnico. (McKinnon & Caldecott, 2007)
Con la finalidad de determinar el daño en el ADN (roturas de doble cadena), en muestras
de sangre humana irradiada a dosis bajas de radiación ionizante (<100 mGy) se plantea
una metodología de irradiación de sangre, siendo las dosis: 0,12.5,25 y 50 mGy
empleando radiación gamma del Cesio-137 de 662 keV a una tasa de dosis de 38.46
mGy/h y análisis de ADN a diferentes intervalos de tiempo, manteniendo condiciones de
temperatura (37ºC) y volumen de muestra 3mL de sangre, así como la evaluación de la
variación de un biomarcador molecular p53, que es una proteína involucrada en eventos
como la autofagia, reparación del daño del ADN, supervivencia celular y senescencia
celular. (Montes & Agapito, 2016)
Los resultados obtenidos en la evaluación de sangre, cuantificados por
espectrofotometría, mostraron un incremento en la concentración de ADN a las cuatro
horas de incubación. Así mismo, se encontró valores máximos para todas las dosis de
irradiación en ambas muestras analizadas.

Figura 1. Cuantificación del ADN de sangre irradiada, muestra1

 Figura 2. Cuantificación del ADN de sangre irradiada, muestra 2

Tabla 1. Extracción de ADN de sangre irradiada a las 4 horas de incubación .

Concentración de ADN (ng/ul)
Dosis
Muestra 1 Muestra2
0 mGy 33.8 33.6
12.5 mGy 32 29.5
25 mGy 30 35.4
50 mGy 29 33.2

Los resultados obtenidos pueden tener una relación con los procesos de reparación celular
en función del tiempo de incubación a 37ºC, es decir, que la cinética del ciclo celular
incrementó la concentración del ADN ocasionando que la proliferación celular aumente
a las 4 horas de incubación. (Santacruz- Gómez, Manzano, & Meléndez, 2012).
Además, se pudo observar que la calidad del ADN mediante electroforesis en geles de
agarosa mostró un patrón de corrida constante en todas las dosis y tiempos de evaluación.

Figura 3. Electroforesis de ADN en gel de agarosa al 1%, a partir de las

muestras irradiadas
Sin embargo, el daño ocasionado a dosis bajas de irradiación no pudo ser evidenciado de
forma cualitativa mediante electroforesis debido a la generación endógena de Especies
Reactivas de oxígeno que probablemente ocasionen daños pero deforma posterior en
función al tiempo y susceptibilidad genética de cada individuo. (Montes & Agapito, 2016)
Se pudo observar la amplificación por PCR para la secuencia de 133 pb del exón 7 del
gen p53, lo que demuestra que no hubo daño significativo o que no fue evidente debido
a las dosis bajas evaluadas en el estudio.

Figura 4. Electroforesis de ADN en gel de agarosa al 1%. Amplificación de la

secuencia de 133pb del gen p53 a partir de ADN de sangre irradiada.

Frente a estos resultados es importante tener en cuenta que a determinadas dosis de

radiaciones ionizantes es posible que se alteren regiones funcionales importantes en los
procesos de transcripción, las cuales pueden ser regiones promotoras de genes implicados
en procesos de reparación celular dado que cambios en la expresión de estos genes pueden
afectar a la capacidad de las células para reparar el daño del ADN. (Montes & Agapito,
2016)
Conclusiones:
 Mediante técnicas moleculares como la electroforesis de ADN en geles de agarosa
y PCR para la secuencia de 133 pb del exón 7 del gen p5, no se detectó daño
radiológico en las muestras irradiadas.
 La técnica de PCR permitió amplificar la secuencia de 133 pb del gen p53 de
humanos con una elevada sensibilidad y especificidad.
Publicación científica extraído de:
Montes, A., & Agapito, J. (2016). Irradiación ex vivo de sangre humana para determinar daño
genómico utilizando técnicas moleculares. Informe Científico Tecnológico, 14, 7-11.
APLICACIÓN EN LA INDUSTRIA
Las aplicaciones de los radioisótopos son muy variadas, de tal forma que muchas
industrias incorporan métodos de control basados en técnicas nucleares.
Podemos agruparlos en tres grupos:
 Grupo A: Aplicaciones basadas en la interacción de la materia sobre la radiación.
 Grupo B: Aplicaciones basadas en la interacción de las radiaciones sobre la
materia.
 Grupo C: Aplicaciones de radioisótopos como trazadores.
APLICACIONES BASADAS EN LA INTERACCIÓN DE LA MATERIA SOBRE
LA RADIACIÓN
Cuando la radiación penetra en la materia puede sufrir fenómenos de dispersión,
absorción, disminución de energía, etc. Midiendo la radiación transmitida se puede
determinar las características del material con el que las radiaciones han interaccionado.

Gammagrafía
Se utiliza para estudiar la integridad y calidad de soldaduras, y del material de
tuberías, tanques, piezas metálicas, etc. Su uso es intensivo durante la
construcción de grandes piezas metálicas, en el mantenimiento de plantas
industriales, en el tendido de oleoductos, y durante el mantenimiento de estas
instalaciones, ya que pueden detectar los defectos mínimos. La gammagrafía
utiliza una fuente de partículas gamma, que emite ciertos radionúclidos en su
desintegración, las fuentes más usadas son Co-60 y el Ir-192. (Ávila, Calvino, &
López, 2018)
Las ventajas de gammagrafía respecto a los rayos x son: bajos costos de
mantenimiento, permite analizar mayores espesores, portabilidad en lugares
difíciles. Y las desventajas son: mayor riesgo de contaminación, menor calidad de
imagen por contraste, no se puede modificar la energía de los fotones una vez
seleccionada la fuente. (Ávila, Calvino, & López, 2018)
Medidas de espesores

Se suelen utilizar dos métodos, el de transmisión y el de retrodispersión o

reflexión. Los métodos de transmisión se basan en la absorción, por parte del
objeto cuyo espesor se desea medir. Dependiendo de la absorción de la radiación,
al atravesar el objeto pueden determinarse los espesores de estos. Los métodos de
reflexión se utilizan en aquellos casos en los que el objeto no puede situarse entre
la fuente y el detector; las partículas beta reflejadas son función del número
atómico y del espesor de material. (Ávila, Calvino, & López, 2018)

Esta técnica se usa para las medidas de espesores muy pequeños, como papel,
tejidos, emulsiones fotográficas, etc. Los radioisótopos más utilizados son Pm-
147, Tl-204, Sr-90, Ru-106.
Medidas de niveles

En este tipo de aplicaciones se utilizan fundamentalmente emisores gamma, ya

que esta radiación tiene mayor alcance que las otras. Los isótopos más utilizados
son Co-60 y Cs-137. Los procedimientos usados son muy variados y vienen
caracterizados por las posiciones en las que se colocan la fuente radiactiva y el
detector dependiendo de la finalidad buscada. (Ávila, Calvino, & López, 2018)

Las aplicaciones más habituales son:

 Nivel de líquidos en depósitos con diversas geometrías

 Nivel del arrabio fundido en altos hornos
 Niveles en horno de vidrio, de cal, etc.
 Medida de la carga en carretillas, vagones, etc.
 Medida y control del nivel de productos envasados
APLICACIONES BASADAS EN LA INTERACCIÓN DE LAS RADIACIONES
SOBRE LA MATERIA
Las radiaciones al interaccionar con la materia pueden producir sobre esta, fenómenos de
ionización, excitación, etc. Cualquiera de estos fenómenos puede ser de interés y dar lugar
a alguna aplicación.
Eliminación de electricidad estática

La eliminación de la electricidad estática mediante el uso de radioisótopos se basa

en la ionización que producen las radiaciones y que da lugar a la neutralización
de las cargas eléctricas. Inicialmente los más usados fueron los emisores alfa, pero
posteriormente se ha extendido el uso de los emisores beta porque consiguen un
mayor volumen de aire ionizado por la creación de pares iónicos de una forma
más homogénea y extendida. Los más usados son Hidrógeno-3(tritio), kripton-
85, talio-204. (Ávila, Calvino, & López, 2018)

Ionización en tubos electrónicos

Cuando se desea producir una descarga en un tubo de gas, como pueden ser los
tubos de iluminación o las válvulas electrónicas, se emplean radionúclidos, con
bajas actividades, para ionizar de forma parcial o permanente el gas de llenado,
con el fin de disminuir la inercia del cebador. De esta forma se disminuye la
energía necesaria para el encendido y la respuesta es más rápida. Los isótopos más
usados son Hidrógeno-3(tritio), kripton-85 (Ávila, Calvino, & López, 2018)
APLICACIONES DE RADIOISÓTOPOS COMO TRAZADORES.
La utilización de los isótopos radiactivos se basa en mezclarlos con una determinada
sustancia y estudiar su comportamiento, detectando las radiaciones que emiten.
TRAZADORES ESTABLES
Son trazadores conocidos como isotópicos, constituidos por isotópos estables de
elementos, como 16O/18O y 1H/2H. Estos trazadores son muy utilizados en estudios de
ciencia de la tierra, hidrología, en el estudio de mecanismos de reacción. Sin embargo,
la dificultad radica en su detección y medida. (Ávila, Calvino, & López, 2018)
TRAZADOR RADIACTIVO
Son sustancias radiactivas que se utilizan en formato no encapsulado y que en forma de
disolución se introducen en el medio a estudiar. Estos trazadores se caracterizan porque
son muy fácilmente detectables y con una elevada sensibilidad y precisión. Esto permite
medirlos muy fácilmente aun utilizando pequeñas cantidades. (Ávila, Calvino, & López,
2018)
Ventajas de trazadores radiactivos:
 Su elevada sensibilidad de detección.
 Se pueden realizar medidas in situ, de forma sencilla y fácil.
 Desaparecen del medio transcurridos varios periodos de desintegración.
Principales inconvenientes:
 El método de detección es caro y complejo, comparado con el uso de los
trazadores convencionales.
 Deben ser manipulados por personal especializado y autorizado.
PRINCIPALES APLICACIONES
Transporte de fluidos
Tiene gran utilidad en la separación de productos tales como: petróleo, gasolina,
aceites y otros, que pasan sucesivamente por oleoductos. El procedimiento se basa
en inyectar entre los dos fluidos un trazador radiactivo, el paso del mismo indica
claramente el punto de transición entre uno y otro producto. Este procedimiento
facilita y agiliza la programación de uso del oleoducto. Los isótopos más usados
son: Br-82, Ba-140 y Sb-125. (Ávila, Calvino, & López, 2018)
Medidas de caudales
Para medir la velocidad de arrastre de sustancias sólidas por los ríos u otros
sistemas en fase líquida, se usa trazadores. El estudio de las actividades en otro
punto, río abajo, permite establecer la velocidad de los materiales arrastrados,
técnica que es de gran ayuda en sedimentología y conocer el tiempo que
transcurrirá hasta su colmatación de los embalses por sedimentos. Los trazadores
más usados son Sc-46, ag-110, Cr-51, Au-198 (Ávila, Calvino, & López, 2018).

También se utiliza está técnica para la medida de la velocidad y caudal de la pasta

fundida en los hornos de fabricación de cemento, vidrio o coque. En estos casos
los isótopos más usados son: K-42, ce-141 y P-32. (Ávila, Calvino, & López,
2018)
Medidas de desgaste

Permite medir el desgaste de materiales sujetos a rozamientos de forma rápida y

muy precisa. Para ello se incorpora pequeñas fuentes radiactivas en piezas en
cuestión, luego se procede a hacer trabajar la pieza en sus condiciones habituales.
El análisis de la actividad incorporada y las calibraciones adecuadas permite
conocer cuantitativamente el nivel de desgaste de la pieza. Es de interés para
piezas con desgaste crítico, tales como: álabes de turbina, herramientas de corte,
pistones de los motores, los palieres de turbogeneradores, paredes de hornos, etc.
(Ávila, Calvino, & López, 2018)