Cromatografía en capa fina

Paola Alejandra Barbosa Silva - Maribel Mesa Mejía

Grupo 6
Universidad Nacional de Colombia - Facultad de ingeniería
Laboratorio de principios de química orgánica

Resumen
En la práctica experimental se llevó a cabo una cromatografía en capa delgada, con el fin de caracterizar las sustancias
presentes en la muestra 6. El sistema de muestras en las cromatoplacas fue colocado en tres cápsulas con éter de
petróleo, MEK y metanol, al observar que no ocurrió una separación de sustancias exitosa, se procedió a cambiar el
eluyente por una mezcla 9:1 de tolueno y MEK respectivamente. Se obtuvo como resultado la presencia de rojo de
metilo y Sudan III en la muestra problema

1. Metodología
a. Preparación de la placa y aplicación de la
muestra:
b. Desarrollo de las placas
Limpiar y secar el
portaobjetos de la fase
Hacer marca de Colocar 0,8 cm de altura del
estacionaria
frente del disolvente eluyente, sin tocar la línea de origen
a 1cm
Sumergir por 10 segundos
los portaobjetos en el Introducir los portaobjetos y
Llevar a cabo el
frasco cilíndrico con la fase tapar el frasco
desarrollo de las
estacionaria silicagel
placas

Marcar el frente del solvente, medir las

Secar al ambiente y activar distancias desde la línea de origen
las placas en la estufa

Trazar línea de origen con Calcular la medida de velocidad del

capilar de 1 cm compuesto o Rf

Colocar 3 siembras una de Hacer análisis de los eluyentes

cada sustancia de interés con base a la polaridad

Comparar resultados con otros

Esperar a que se seque el grupos que hayan utilizado los
punto de siembra mismos disolventes
1
2. Resultados  Éter de Petróleo (menor polar)

La muestra problema contiene una mezcla de colorantes

desconocidos, el análisis de cromatografía en capa
delgada permite identificar cualitativamente los
compuestos.

Imagen 1. Montaje TLC

Se escogieron tres solventes teniendo en cuenta las

Imagen 2. TLC utilizando Éter de Petróleo
polaridades, así obtener un espectro amplio y observar
cómo se comporta la muestra con cada solvente. Junto  MEK (medianamente polar)
con la muestra se corrieron cuatro patrones distintos
que podrían estar en la muestra problema:

Patrón Estructura Solubilidad

σ- 2,1 g/L en
1
nitrofenol agua a 20 °C

Rojo de Insoluble en
2
Metilo agua

Insoluble en
3 Sudan III
agua

p- 10 g/L en aua a
4
nitrofenol 20 °C

Tabla 1. Patrones utilizados en el análisis Imagen 2. TLC utilizando Metil Etil Cetona

2
  Metanol (Altamente polar) Cálculos:
𝑅𝑓
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑚𝑎𝑛𝑐ℎ𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑑𝑒 𝑒𝑙 𝑝𝑢𝑛𝑡𝑜
𝑑𝑒 𝑎𝑝𝑙𝑖𝑐𝑎𝑐𝑖ó𝑛
=
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑒𝑙𝑢𝑦𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒𝑠𝑑𝑒 𝑒𝑙
𝑝𝑢𝑛𝑡𝑜 𝑑𝑒 𝑎𝑝𝑙𝑖𝑐𝑎𝑐𝑖ó𝑛

 Rf muestra en placa 1
5,1 𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0,74 = 74%
6,9 𝑐𝑚
 Rf patrón Sudan III
5,0 𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0,72 = 72%
6,9 𝑐𝑚
 Rf muestra en placa 2
1,5 𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0,22 = 22%
6,8 𝑐𝑚
 Rf Rojo de metilo
1,4 𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0,21 = 21%
6,8 𝑐𝑚

Imagen 4. TLC utilizando Metanol

Después se corrió la muestra problema en una fase
móvil Tolueno – MEK (9:1) y se obtuvo el siguiente
resultado:
3. Análisis de Resultados
Para este análisis las placas utilizadas se hicieron en
sílica gel que puede presentar problemas de
disminución de poder absorbente debido a que los
sitios activos de la superficie se pueden bloquear
debido a moléculas de agua y si hay demasiadas
moléculas de agua implicara fenómenos de partición lo
que separa los componentes basado en la distribución
selectiva de los solutos en las fases, una de estas será el
agua contenida en la sílica, esto sucederá al tiempo con
la cromatografía de adsorción lo que restara eficacia al
proceso cromatográfico. [1] Es por esto que antes de
realizar las siembras las placas estas se sometieron a un
tiempo en la estufa de secado a una temperatura de
96°C.

Se debe tener en cuenta la probabilidad de las

M 3 4 M 1 2 reacciones entre el compuesto y el adsorbente ya que
la sílica puede tener propiedades acidas y si las
muestras sembradas tienen algún componente básico
Imagen 5. TLC utilizando Tolueno – MEK (9:1)

3
este podría quedar demasiado absorbido, se descarta
en este caso ya que todos los patrones utilizados tienen
carácter acido. Lo ideal es que la granulosidad de la
sílica este entre 10 y 40 micras de diámetro para
facilitar el equilibrio adsorción – desorción, también
que la superficie sea homogénea en espesor puesto que
se daría un recorrido más rápido en zonas delgadas y
mas lentos en zonas de mayor espesor. [1]
El proceso de adsorción se debe a interacciones
intermoleculares de tipo dipolo‐dipolo o enlaces de
hidrógeno entre el soluto y el adsorbente es por esto
por lo que la estructura de las muestras analizadas es
importante ya que, dependiendo su polarizabilidad y su
capacidad para formar puentes de hidrogeno serán
adsorbidos por la fase estacionaria. [2]
El patrón 1 o-nitrofenol tiene la capacidad de
formar puentes de hidrogeno intramoleculares y de
esta forma adsorberse menos, en cambio el p-
nitrofenol no forma ese tipo de enlace como se muestra
en la siguiente imagen.[2][1]
Imagen 6. Interacción de nitrofenoles con el adsorbente
Si el compuesto es un soluto aceptor de 𝐻 + o bases
de Lewis se presentará una unión fuerte ya que se
formarán puentes de hidrogeno o interacción entre
dipolos permanentes. [3] Los grupos funcionales
polares o polarizables presentan uniones mas débiles
debido que se forman interacciones entre dipolos
transitorios. Los compuestos encontrados en la
muestra según la cromatografía fueron rojo de metilo y
4
sudan III, ambos pueden formar puentes de hidrogeno,
sin embargo, se puede evidenciar una menor polaridad
en el sudan III esto puede deberse a que la cadena
hidrocarbonada va preponderando y disminuyendo la
influencia del -OH en la molécula. [1]
Para la elección del solvente adecuado primero se
eligieron tres solventes con diferentes polaridades para
evaluar el comportamiento del análisis.
Eter de Metil Etil
Tolueno Metanol
Petroleo Cetona
Polaridad
Imagen 7. Polaridad de los solventes utilizados
El primer disolvente usado fue el éter de petróleo
muy poco polar y se evidencio en la imagen 2 que la
muestra y los patrones no fueron arrastrados por este
lo que significa que no tienen afinidad por el éter de
petróleo por lo que se descarta. Otro de los solventes
utilizados fue el metanol, altamente polar y el resultado
fue que todos los solutos o muestras corrieron al
tiempo con el solvente sin lograr ninguna separación.
[4]
El solvente metil etil cetona evidencio una pobre
separación por lo que se decidió utilizar un solvente
menos polar que el MEK pero más polar que el éter de
petróleo. La decisión fue usar una mezcla de Tolueno-
MEK (9:1) el resultado fue una separación de la muestra
en dos compuestos que al compararse con los patrones
usados se determina con certeza la presencia de Rojo
de metilo y Sudan III.
En este análisis se deben ajustar lo mejor posible
todas las variables, una de estas es la temperatura ya
que afecta las volatilidades y solubilidades por lo que es
importante que se mantenga constante durante todo el
análisis, también es importante la saturación de las
cámaras en las que se corrieron las cromatoplacas ya
que si no esta saturada el solvente tendera a
evaporarse en la capa del adsorbente lo que implicara
un ascenso no homogéneo y este problema se agrava si
se usan mezclas de solventes por que debido a que las
presiones de vapor son distintas se puede evaporar el
solvente más volátil . [5]
Lo que da la certeza en la cromatografía es el
resultado del Rf puesto que el de la muestra como el
del rojo de metilo y sudan III son muy cercanos e indican
propiedades similares, sabiendo de antemano que la
muestra es alguna mezcla de los patrones mencionados
en la tabla 1. Sin embargo, el Rf no es un criterio de
identificación 100% confiable en la mayoría de casos
puesto que si la sustancia problema (de la cual no se
tiene ningún conocimiento) y el patrón se comparan en
la misma corrida y dan valores de Rf distintos se puede
asegurar que NO se trata del mismo compuesto, en
cambio si dan el mismo valor de Rf no asegura que sean
sustancias idénticas. [6][1]
4. Cuestionario
 ¿Qué ocurre si al introducir la plancha en la
cámara cromatográfica, el nivel del
eluyente alcanza el sitio de aplicación en la
mancha?
El eluyente disolvería las manchas tanto de la
muestra problema como de los patrones obstruyendo
el proceso de cromatografía y llevando a la obtención
de datos erróneos. [7]
 ¿Cuál es el efecto de la polaridad en la
cromatografía?
La polaridad de los componentes es el factor mas
influyente en la separación, la placa formada
principalmente por silicagel es muy polar y atrae a los
componentes mas polares. Por el contrario, el eluyente
es menos polar y atrae a los compuestos apolares. De
esta manera, los componentes más polares quedarán
más cerca de la línea de origen ya que su velocidad de
5
desplazamiento es menor debido a que interaccionan
con el soporte.
La polaridad del eluyente permite que el
desplazamiento de los componentes sea rápido o lento.
 ¿Cuáles son las consecuencias de una
columna mal empacada?
Una de las cosas mas importantes para el material
de relleno de las columnas, es el tamaño y distribución
de las partículas. Esto depende de la retención y
volumen de elución al que aparecerán los solutos. Si la
columna esta mal empacada los resultados de la
cromatografía serán erróneos.
 ¿Cuáles son las diferencias entre la
cromatografía liquida y de gases?
La cromatografía de gases es una técnica en donde
la muestra que se volatiliza se inyecta en la cabeza de
una columna cromatográfica. La elución se da por un
gas inerte (fase móvil). En este tipo de cromatografía la
fase móvil no interactúa con las moléculas del analito,
su función es transportar el analito por medio de la
columna.
En la cromatografía liquida, la fase móvil es un
líquido que fluye por una columna que contiene a la
fase estacionaria, está cromatografía no está limitada
por la volatilidad o estabilidad térmica de la muestra.
Este procedimiento se puede llevar por columna o
platos.[7]
 Profundización sobre fluorescencia para
sustancias incoloras.
Si las sustancias utilizadas en la cromatografía no son
coloreadas, se utilizan otros métodos para su
localización, normalmente se emplea una lámpara UV
donde sustancias que son incoloras a la luz ordinaria
presentan una fuerte fluorescencia a la luz ultravioleta.
 Parámetros de la cromatografía liquida de
alta eficiencia.
 Dentro de los parámetros para este tipo de
cromatografía están:
Diámetro interno: de esta forma se determina la
cantidad de muestra que se puede cargar a la columna
y su sensibilidad. Los diámetros grandes (>10mm) se
utilizan para la purificación de compuestos y los
diámetros pequeños (4-5mm) se utilizan para la
determinación cuantitativa de muestras.
Medida de las partículas: las más pequeñas
presentes en la fase estacionaria ofrecen mayor
superficie y mejor separación, en otras palabras, mejor
resolución de columna. Pero a su vez se aumenta la
presión requerida para tener una velocidad lineal ideal.
Tamaño de poro: Los pequeños dan mayor
superficie mientras que los de mayor medida
proporcionan mayor energía cinética.
Presión del sistema: La presión de las bombas varía
según el modelo, pero el rendimiento se mide en la
habilidad para producir flujo constante. [7]
 En qué orden (de arriba hacia abajo) se
puede esperar encontrar los siguientes
compuestos: naftaleno, ácido butírico y
acetato de fenilo en un gel de placa TCL de
sílice desarrollada con diclorometano.
Ácido butírico, acetato de fenilo (Ester), naftaleno
(hidrocarburo aromático). Este es el orden según la tabla
presente en los anexos.
 Organice los siguientes compuestos en
orden creciente de Rf empleando silica como
fase estacionaria en cromatografía en capa
delgada: ácido acético, acetaldehído, 2-
octanona, decano y 1-butanol.
La medida de la velocidad (Rf) es la relación de la
distancia recorrida por la mancha desde la línea de
origen dividido en la distancia recorrida por el eluyente
en el punto de aplicación. Teniendo en cuenta la
polaridad el orden es decano, 2- octanona,
acetaldehído, 1- butanol y ácido acético.
6
 Qué efecto se produce si se siembra mucha
muestra en la cromatoplaca.
Si la muestra está demasiado concentrada cuando la
fase móvil comienza a arrastrarse, la muestra forma una
estela que dificulta la lectura de la longitud.
 Se observa una mancha con un Rf de 0,62
después de desarrollar la cromatoplaca para
una mezcla de reacción. ¿prueba esto que
usted tiene solo un producto presente?
Explique.
Para determinar con mayor exactitud se debe
comparar el recorrido de los patrones y de la muestra,
de igual forma se deben realizar ensayos con diferentes
fases móviles para determinar si aparece uno o más
colores. En este caso habría más de una sustancia. No
seria suficiente tener un Rf de 0,62 para determinar que
exista una sola sustancia ya que la fase móvil puede ser
muy fuerte y arrastrar la muestra hasta un punto.
 De qué manera influye la saturación de la
cámara en el proceso de separación.
Garantiza que la fase móvil cuando se mueve por la
cromatoplaca no se seque y se desplace de manera
adecuada.
5. Conclusiones
 La sustancia problema es una mezcla de rojo
de metilo y sudan III en proporciones
desconocidas ya que se trata de un análisis
cualitativo
 La mezcla de Tolueno – MEK (9:1) logro
separar ambos compuestos con una buena
distancia entre las diferentes sustancias
presentes en la muestra
 Las condiciones ambientales como la
temperatura pueden afectar el análisis y
efectuar variaciones en las corridas
6. Bibliografia

1. Lamarque, A. (2008). Fundamentos teorico-

practicos de quimica organica/Theoretical and
practical organic chemistry. Editorial Brujas.

2. Durst, H. D., & Gokel, G. W. (1985). Química

orgánica experimental. Reverté.

3. Mennickent, S., Vega, M., Godoy, C. G., & Yates,

T. (2000). DESARROLLO DE UN METODO POR
CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA
INSTRUMENTAL PARA ANALISIS CUANTITATIVO
DE ACIDO ACETILSALICILICO. Boletín de la
Sociedad Chilena de Química, 45(4), 615-620.

4. Beyer, H., & Walter, W. (1987). Manual de

química orgánica. Reverte.

5. Gattermann, L. (1937). Laboratory methods of

organic chemistry. MacMillan: London.

6. Zubrick, J. W. (2016). The organic chem lab

survival manual: a student's guide to
techniques. John Wiley & Sons.
7. CONCEPTOS FUNDAMENTALES DE
CROMATOGRAFÍA. (n.d.). Retrieved from
https://docplayer.es/2396459-Conceptos-
fundamentales-de-cromatografia.html