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Protocolo para la inclusión de tejidos vegetales en Polietileno glicol (PEG)

El ploietilen glicol (PEG), también conocido como Carbowax, es un polímero de peso


molecular variable. El que utilizamos en microtecnia tiene un peso molecular de 1,500.
Bajo condiciones ambientales, es sólido, de consistencia firme, semejante a la parafina.
A diferencia de ésta, se disuelve fácilmente en agua, por lo que no es necesario
deshidratar los tejidos para incluirlos en este material. Se puede partir de tejidos frescos
o fijados en alcohol etílico, FAA o cualquier otro fijador histológico. Si se han fijado
previamente, los tejidos se deben lavar en agua, hasta que desaparezca el fijador. De
allí, se sigue el siguiente protocolo:

1. Transferir a una solución acuosa de PEG al 10%, cubriendo completamente la


muestra a incluir.
2. Colocar en una estufa a 60 ºC por 24 horas o más, hasta que el agua se haya
evaporado (es preferible utilizar un frasco alto y marcar el nivel correspondiente
al 10%, para saber cuando se haya evaporado el agua).
3. Decantar la solución y sustituir con PEG puro, previamente fundido en la estufa,
a 60 ºC. Dejar en la estufa por 24 horas.
4. Transferir las muestras a charolas de plástico (las que se utilizan para hacer
cubos de hielo). Orientarlas debidamente y cubrirlas completamente con PEG
puro, fundido. Con una aguja de disección caliente, se destruyen las burbujas de
aire que se hayan formado. Dejar enfriar a temperatura ambiente.
5. Extraer las muestras de las charolas. Eliminar el exceso de PEG con una navaja
de seguridad. Se monta cada muestra sobre un bloque de madera de tamaño
conveniente, dependiendo de la mordaza del microtomo, utilizando una espátula
calentada con un mechero de gas.
6. Se deja enfriar a temperatura ambiente y se monta al microtomo. Se pueden
obtener cortes al microtomo inmediatamente, o se guardan envueltas en
servilletas de papel, en un desecador.
7. Los cortes obtenidos se pueden colocar sobre portaobjetos y atarse con hilo de
algodón. Se sumergen las preparaciones en varios cambios de agua, para
eliminar el PEG, o bien, los cortes pueden transferirse a cajas de Petri llenas de
agua, para eliminar el PEG.
8. Teñir y montar, para hacer preparaciones temporales o permanentes.

Bibliografía

Johansen, D.A. 1940. Plant Microtechnique. McGraw-Hill, N.Y.

Sandoval, Z. 2005. Técnicas aplicadas al estudio de la anatomía vegetal. Cuadernos del


Instituto de Biología No. 38. Instituto de Biología, UNAM.

Autor: Guillermo Ángeles.


Laboratorio de Anatomía Vegetal
Instituto de Ecología A.C.

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