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TECNOLOGIA EN

ANALISIS QUIMICO

“CONTROL DE MICROORGANISMOS POR AGENTES FISICOS”

NOMBRES: Natacha Aguilera


Viviana Clavero
Valeska Pávez
CARRERA: Tecnología en Análisis Químico
ASIGNATURA: Microbiología Aplicada
PROFESOR: Ruth Ortega Rojas
FECHA: 08/11/2018
TECNOLOGIA EN
ANALISIS QUIMICO
Introducción

Los microorganismos presentan un distinto grado de sensibilidad a los medios que se han
establecido para eliminarlos. Hay diferencias de una especie a otra, dependencias del contenido en
agua y del pH del medio, de la edad de las células o de las esporas, etc. Las tasas exponenciales de
muerte y de destrucci6n dependen además de la especie de diversas condiciones ambientales. En
lugar de esas tasas se expresa el éxito obtenido en la destrucci6n de una población determinada en
condiciones determinadas. La muerte y destrucción de microorganismos.
Por muerte celular se entiende entre los microorganismos a la perdida irreversible de la capacidad
de crecer y multiplicarse, o refiriéndonos a la práctica experimental a la perdida de la "capacidad de
formar colonias".
En este laboratorio se usarán dos técnicas para controlar los microorganismos irradiación y
filtración.
Filtración: Las soluciones con sustancias termolábiles (vitaminas, algunos Aminoácidos, azucares,
otros sustratos) se esterilizan por filtraci6n, debido a la comodidad que presenta este mecanismo.
Existen diferentes tipos de filtros en este caso se usará un filtro desechable estos pueden adaptarse
a jeringuillas y se utilizan actualmente de forma rutinaria para la esterilizaci6n de disoluciones que
no soportan la esterilizaci6n por calor. Con ayuda de filtros de membrana pueden incluso separarse
organismos de distinta forma o tamaño.
Irradiación: De las radiaciones utilizadas para efectuar esterilizaciones totales o parciales (radiaci6n
ultravioleta, rayos X, rayos gamma) es la radiaci6n UV la que tiene mayor interés para su uso en el
laboratorio. La radiación de la mayoría de las lámparas UV es rica en radiaciones de longitud de
onda próxima a 260 nm, radiaci6n absorbida preferentemente por los ácidos nucleicos y que si actúa
durante un tiempo prolongado provoca la destrucci6n de todas las bacterias. La radiación UV es
adecuada para esterilizar parcialmente habitaciones ya que destruye con gran rapidez a las bacterias,
aunque con una lentitud muy superior a las esporas de hongos.
Objetivos

Objetivo General
 Establecer el efecto en la aplicación de diferentes agentes físicos en el control de
microorganismos

Objetivos Específicos
 Establecer el efecto de radiaciones en el control de microorganismos
 Establecer el efecto de filtración en el control de microorganismos
Materiales y Metodología
Materiales

o Placa de Petri con agar nutritivo


o Dos tubos con caldo nutritivo
o Dos tubos de ensayo con caldo sacarosa rojo fenol
o Pinza esterilizada
o Papel de aluminio esterilizado
o Asa Drigalsy
o Dos tipos de microorganismos
o Pipeta aforada
o Mechero
o Jeringa
o Filtro

Metodología

 Efecto bacteriano de la luz ultravioleta

-Se marcaron dos placas de Agar Nutritivo en la parte inferior formando 4 triángulos,
enumerándolos del 1 al 4.

-Se sembraron en cada placa una bacteria diferente, para esto se depositaron 4 a 6 gotas de
microorganismos con una pipeta y luego se distribuyo homogéneamente por toda la placa Petri con
un asa Drigalsy.

- Mediante una pinza esterilizada a la llama, se tomó un papel aluminio de forma de triangulo y se
deposito cada uno de ellos sobre las placas sembradas en tres cuadrantes diferentes, dejando el
primer cuadrante sin cubrir.

- Se ubicaron ambas placas en la cámara de luz ultravioleta, sin sacarle la tapa, luego de encender
la luz U.V se destaparon ambas placas.

- Se dejo expuesto a la luz U.V cada cuadrante sacándole cuidadosamente el papel aluminio con una
pinza, uno a uno, dejando el primer cuadrante siempre expuesto a la luz U.V y los cuadrantes 2 y 3
un tiempo de 30 segundos cada uno, y el ultimo se dejó sin irradiar ya que sirvió como control de
crecimiento microbiano.

- Esto se dejo encubando por 24 horas a 37°C

 Efecto de la filtración sobre los microorganismos

- Se sembró un tubo que contenía caldo sacarosa con un microorganismo a través de un asa loop,
siguiendo todos los protocolos antes aprendidos.

-Luego se tomaron 5 ml aproximadamente del caldo sembrado con una jeringa y se traspasó a un
tubo estéril, a través de un filtro que se ajusto a la parte superior de la jeringa.

-En otro tubo estéril, se depositaron 5 ml de caldo de sacarosa sembrado sin filtrar.

-Se dejo incubar ambos tubos durante 24 hrs a 37°C

-Este mismo procedimiento se realizó con Caldo nutritivo, teniendo un tubo estéril filtrado y uno
sin filtrar.
Resultados

 Radiación UV

Figura n°1: Staphylococcus aureus Figura n°2: E.coli

Observaciones
- En la figura n°1 se puede observar que en el cuadrante que no contiene número es el que
estuvo expuesto los 90 segundos a la radiación y se aprecia pocas cantidades de colonias,
en el cuadrante 2 y 3 se observa una mayor cantidad que el cuadrante ya mencionado y por
último en el cuadrante número 1 que no se expuso la radiación se ve una mancha completa
de colonias .
- En la figura n°2 se observa que en los cuadrantes sin número y 3 hay menos cantidad de
colonias que en la 2 y 1 ya que se ve una mancha blanca.
 Filtración

1. Caldo Sacarosa

Figura n°3: E.Coli Filtrado Figura n°4 : E.Coli Sin filtrar


Observaciones
- En la figura n°3 se puede apreciar que se mantiene de color rojo sin ningún otro cambio
apreciable
- En la figura n°4 se observa que cambio de color de rojo a amarillo, con una leve turbidez
en su interior y con un precipitado blanco.
2. Caldo Nutritivo

Figura n°5: E.Coli en caldo Figura n°6 : E.coli en caldo


nutritivo sin filtrar nutritivo filtrado

Observación
- Figura n°5 no se observa cambio alguno
- Figura n°6 se pudo apreciar turbiedad en el caldo y un precipitado blanco.
Discusión

Efecto de la radiación UV en microorganismos

Tanto en la figura 1 y 2 se puede observar una disminución en el crecimiento de colonias, en las


zonas de la placa que estuvieron expuestas durante más tiempo a la radiación.

Es posible notar que la disminución de colonias en la placa sembrada con Staphylococcus aureus es
mucho mayor que la ocurrida en la placa que contiene a la Escherichia coli.

Cuando se irradia un microorganismo con luz ultravioleta en el rango de 235 a 310 nm se provocan
daños en la estructura del ADN, estos daños podrán variar su intensidad dependiendo de tres
factores: tipo de pared celular, su espesor y su composición.

Debido a que la Escherichia coli es una bacteria Gram negativa presenta una membrana externa,
que dentro de sus funciones está la de otorgar protección frente a agentes antibacterianos.

Los resultados obtenidos sustentan el hecho de que la radiación UV-C presenta carácter bactericida
frente microorganismos como bacterias, virus, protozoos, mohos y levaduras.

Filtración
En el caso del caldo sacarosa la filtración no fue efectiva, en la figura 2 se observa que hay
fermentación del carbohidrato, pues se tornó de color amarillo. Si no hay fermentación el caldo tiene
una coloración naranja-rojiza.

Este fenómeno se basa en que el metabolismo de la fermentación produce ácidos medianamente


fuertes como el ácido acético, acido fórmico, ácido láctico, ácido málico, entre otros, esto depende
del tipo de carbohidrato que se ponga en el caldo. El rango de pH del indicador rojo de fenol es: 6.8
– 8.4, esto nos dice que a pH de 6.8 o menos el medio este ácido y el indicador cambia a color
amarillo y si el pH es de 8.4 o más el medio esta básico y el color se mantiene naranja-rojizo.

En el caldo nutritivo la filtración sí resultó como se esperaba, se observa turbiedad en el tubo no


filtrado, por el contrario, en el tubo filtrado no existe actividad.

El éxito de esta técnica se basa en el tamaño del microrganismo, la filtración es un procedimiento


físico de esterilización de fluidos en el cual los microorganismos no son destruidos, sino
simplemente retenidos por un material filtrante.

Conclusiones

De la misma manera en que existen técnicas y estudios basados en la forma de lograr el crecimiento
de microorganismos de manera controlada para su posterior estudio y aprendizaje dado el
comportamiento de estos en distintos medios de cultivo, ha aumentado la necesidad de encontrar la
manera de reducir la cantidad de microorganismos ya sea en alimentos, agua, u otros para lograr
disminuir la cantidad de patógenos presentes. Tradicionalmente, para garantizar un mínimo riesgo
por gérmenes patógenos, se han utilizado tratamientos térmicos de diferente intensidad y duración,
algunos ocasionan efectos indeseables sobre los nutrientes y en ocasiones sobre los atributos
organolépticos de los alimentos tratados. Es por tanto un desafío de la industria alimentaria moderna,
la búsqueda de una efectiva reducción de la carga de gérmenes en un alimento, sin modificar
sustancialmente sus características nutricionales y organolépticas. Para resolverlo se han
desarrollado técnicas alternativas como el uso de atmósferas modificadas, altas presiones
hidrostáticas, biocidas naturales, etc. Entre las técnicas alternativas al tratamiento térmico se
encuentra el uso de radiación ultravioleta.
La idea de utilizar radiación ultravioleta se fundamenta por la capacidad de uso de esta tecnología
a bajas temperaturas (método de desinfección no térmico), lo que presenta las siguientes ventajas
frente a los tratamientos térmicos : es una técnica limpia, con ausencia de residuos o subproductos,
no generan olores ni sabores indeseables, no necesita grandes requerimientos energéticos frente a
los tratamientos térmicos convencionales, pasteurización o esterilización, las pérdidas de aromas y
vitaminas durante el tratamiento son muy pequeñas.

En este laboratorio se utilizó la radiación ultravioleta en dos bacterias distintas, Staphylococcus


aureus y Escherichia coli.
El hecho que las colonias de Staphylococcus aureus disminuyeran en mayor cantidad frente a la
exposición a la radiación, presupone que son microorganismos más sensibles a la radiación
ultravioleta. Esta sensibilidad puede deberse a la ausencia de una membrana externa, debido a que
se trata de una bacteria Gram negativa.

De forma general los resultados fueron los esperados, se pudo observar una disminución de colonias
en ambas placas, en los cuadrantes con mayor exposición hubo una disminución significativa
respecto al cuadrante que no tuvo exposición.

La filtración no resultó ser un método muy confiable, si bien en el caso del caldo nutritivo los
resultados fueron positivos, donde no se registró actividad en el tubo filtrado, pero sí en el sin filtrar,
no ocurrió lo mismo en el caldo sacarosa donde dio positivo el tubo que contenía el caldo filtrado.

Sobre la técnica de filtración, esta sólo puede ser utilizada con fluidos, sean líquidos o gaseosos. Se
suele utilizar con soluciones cuyos componentes sean termolábiles y por lo tanto no pueden ser
esterilizadas en el autoclave, por ejemplo, soluciones concentradas de azúcares, de urea, vitaminas,
factores de crecimiento, etc.

La filtración tiene la desventaja de que es ineficaz con determinados microorganismos, como los
virus o los micoplasmas. Los primeros son mucho más pequeños que el tamaño del poro, por lo que
no son retenidos. Los segundos son pleomórficos ya que carecen de una pared de peptidoglicano y
pueden adaptarse al tamaño de poro, por lo que tampoco son retenidos.

El material filtrante debe de ser inerte para no reaccionar con los componentes de la solución,
presentar resistencia mecánica y tener un tamaño de poro menor que los microorganismos que deben
ser retenidos.

Conclusión

Bibliografía