FOSFATASA ALCALINA (ALP)

LDL DIRECTA

Números de catálogo: 249-10 Presentación: 1 x 30 mL + 1 x 10 mL

USO
Equipo diagnóstico para la determinación cuantitativa in vitro de fracciones de lipoproteína de baja densidad de
colesterol en suero.

PRECAUCION
Evitar la ingestión y el contacto con la piel y los ojos. Vea la Hoja de Seguridad del Producto.

REACTIVOS
R1 Amortiguador LDL Directo: solución que contiene un amortiguador (pH 6.5), 1.0 g/L de 4-aminoantipirina,
> 3000 U/L de ácido ascórbico oxidase (botánico), > 1250 U/L de peroxidasa (de rábano), > 1200 U/L de
colesterol oxidasa (microbiana), > 1000 U/L de colesterol esterasa (microbiana), un tensoactivo y un
conservador.
R2 Reactivo de Color de LDL Directo: una solución que contiene amortiguador (pH 6.3), y 0.425 g/L de
DSBmT*, un tensoactivo y un conservador.
*DSBmT = N,N-bis (4-sulfobutil)-m-toluidina disódica

ANTECEDENTES
Las determinaciones de lipoproteínas de baja densidad (LDL) se utilizan como herramientas diagnósticas en la
evaluación del riesgo de cardiopatía coronaria.
Anteriormente, la evaluación de la LDL Colesterol se limitó a la ultracentrifugación para obtener una muestra de
LDL antes de poder hacer el análisis (1).
En 1972, se describió una fórmula para el cálculo de la concentración de LDL. Este método, desarrollado por
Friedewald y col., (2) estimó las concentraciones de LDL en pacientes con niveles de triglicéridos por debajo de
400 mg/dL mediante el uso de la siguiente ecuación:
Triglicéridos
LDL Colesterol = Colesterol Total – ( —————— + HDL-Colesterol )
5
Este cálculo requiere determinaciones independientes de colesterol total, HDL Colesterol y triglicéridos. Este
proceso puede consumir mucho tiempo e implica n gran margen de error.
El método actual descrito a continuación es un sistema de acción directa, con líquido estable para el análisis de
LDL Colesterol.
Este sistema usa una combinación de polianiones y detergentes para aislar las fracciones de LDL Colesterol en
la muestra. Los análisis pueden llevarse a cabo sin los retrasos de la preparación de la muestra o la
introducción de errores a través del procedimiento de múltiples pruebas descritas por Friedewald.

PRINCIPIOS
La prueba LDL Directa se compone de un sistema detergente que solo solubiliza las partículas de lipoproteínas
no LDL, lo que permite que la reacción de las partículas restantes con las enzimas del colesterol resute en la
formación de un producto no colorido. Un segundo sistema detergente solubiliza entonces las partículas de LDL
y permite una formación de color como resultado de la reacción con la DSBmT. Esta formación de color a 550
nm es proporcional a la concentración de LDL Colesterol en la muestra.

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PREPARACION DEL REACTIVO
Los reactivos son suministrados listos para su uso.

ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO

Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad especificada en la etiqueta a 2-8°C.
Una vez abiertos, los reactivos R1 y R2 son estables por 4 semanas a 2-8°C.

DETERIORO DEL REACTIVO

La solución del reactivo debe ser clara. Una turbidez indicaría deterioro.

INSTRUMENTOS
Puede usarse cualquier analizador con control de temperatura de ± 0.5°C que sea capaz de leer la absorbancia
con exactitud, con una sensibilidad de 0.001 de absorbancia a 550 nm. El ancho de banda deberá ser de 10 nm
o menos, la desviación de la luz de 0.5% o menos y la exactitud de longitud de onda dentro de 2 nm.

RECOLECCION Y PREPARACION DE LA MUESTRA

Las muestras recomendadas son suero o plasma tratado con EDTA o heparinizado. Las muestras deben ser
tomadas después de 12 horas de ayuno.
Si no se analizan rápido, las muestras deben almacenarse a 2-8°C hasta por 5 días. Si las muestras necesitan
almacenarse por más de 5 días, pueden congelarse a -80°C.

INTERFERENCIAS
Se evaluó la interferencia por hemólisis, lipemia e ictericia para este método de LDL colesterol en un analizador
Hitachi 911 utilizando un criterio de significancia de variancia >10% a partir del control.
No se encontró interferencia importante por bilirrubina a concentraciones de hasta 342 µmol/L (20 mg/dL) en
una muestra de LDL de 2.32 mmol/L (90 mg/dL).
No se encontró interferencia importante por lipemia a concentraciones de triglicéridos de hasta 14.6 mmol/L
(1293 mg/dL) en una muestra de LDL de 2.43 mmol/L (94 mg/dL).
No se encontró interferencia importante por hemoglobina a concentraciones de hasta 77.5 µmol/L (500 mg/dL)
en una muestra de LDL de 3.18 mmol/L (123 mg/dL).
Puede encontrar un resumen de la influencia de drogas en las pruebas de laboratorio clínico consultando a
Young, D.S. (3).

PROCEDIMIENTO

Materiales Proporcionados
Se incluyen los reactivos necesarios para la determinación de LDL colesterol. Siga los siguientes lineamientos
para la adaptación a analizadores automatizados específicos.
Condiciones
Analizadores automatizados
Longitud de onda ...................................... 546 (660) nm
Temperatura .............................................. 37°C
Tipo de reacción ........................................ Punto final
Tiempo de reacción ................................... 10 minutos
Volumen de la muestra ............................. 3 µL
Volumen de reactivo ................................. 300 µL R1; 100 µL R2
Volumen total ............................................ 403 µL
Relación muestra/reactivo ......................... 1:100:33

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CALIBRACION
El equipo no incluye un estándar de LDL colesterol; sin embargo, debe usarse uno de acuerdo con las
instrucciones para calibrar el procedimiento.
DCL recomienda su calibrador Cat. No. SE-249 Direct LDL Calibrator. La frecuencia de calibración en sistemas
automatizados depende del sistema en sí y de los parámetros usados.

CONTROL DE CALIDAD
Se debe analizar un suero control con nivel normal y anormal en cada serie de muestras, y los resultados
deberán caer dentro de ± 2 desviaciones estándar del valor establecido.

CALCULO Y RESULTADOS

Resultados
La concentración de LDL colesterol se expresa en mmol/L (mg/dL).

Limitaciones
Una muestra con una concentración de LDL Colesterol que exceda el límite de linealidad, debe diluirse con
solución salina a 0.9% y volver a analizarse incorporando el factor de dilución en el cálculo del resultado.

VALORES ESPERADOS (4)

Deseable: < 2.58 mmol/L (100 mg/dL)
Línea base: 3.36-4.11 mM (130-159 mg/dL)
Alto: 4.13-4.88 mM (160-180 mg/dL)
Muy alto: ≥ 4.91 mM (190 mg/dL)
Se sugieren estos valores como referencia. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
normal para el área donde está localizado.

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO

Rango Lineal (NCCLS EP6-P)

La linealidad del procedimiento descrito es de 10.34 mmol/L (400 mg/dL). El límite inferior de detección del
procedimiento descrito es 0.17 mmol/L (6.6 mg/dL). Estos datos resultan en un rango reportable de 0.17-10.34
mmol/L (6.6-400 mg/dL).

Estudios de Precisión
Se recopilaron los datos de dos sueros control en 40 corridas durante 20 días.

Nivel DE Total DE dentro de la corrida CV dentro de

CV Total
la corrida
mmol/L mg/dL mmol/L mg/dL % mmol/L mg/dL %
2.54 98.1 0.06 2.2 2.27 0.02 0.72 0.73
3.69 142.7 0.07 2.8 1.95 0.02 0.96 0.66
5.36 207.3 0.09 3.6 1.73 0.03 1.31 0.62

Exactitud
Se comparó el rendimiento de este método (y) con el de un método de referencia (Ultracentrifugación y análisis
de colesterol) (x) en un Hitachi 911. Las muestras de suero de 54 pacientes que oscilaron de 1.76-5.55 mmol/L
(68.1-214.5 mg/dL) dieron un coeficiente de correlación de 0.96. El análisis de regresión lineal dio la siguiente
ecuación:
Este método = 0.95 (método de referencia) + 0.08 mmol/L (3.02 mg/dL)

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REFERENCIAS
1. Burtis, C.A., Ashwood, E.R. (Eds.), Tietz Textbook of Clin. Chem., Second Edition, W.B. Saunders Co.
p. 1056 (1994).
2. Friedewald, W.T., Levy, R.I., Fredrickson, D.S., Clinical Chemistry 18:499 (1972).
3. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, AACC Press, Third Edition, Washington,
(1990).
4. Warnick, G.R., Myers, G.L., Cooper, G.R., Rifai, N. Clin. Chem. 48:1, 11-17 (2002).

IN24910-5
Mayo 8, 2002

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