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Profesor
Dr. Leonardo Arias Cárdenas
Autor
Erick Xavier Cordero Puyol
Año
2016
ii
______________________________
Dr. Leonardo Arias Cárdenas
Doctor en Medicina Veterinaria y Zootecnia
C.I. 1706591441
iii
Declaro que este trabajo es original, de mi autoría, que se han citado las
fuentes correspondientes y que en su ejecución se respetaron las disposiciones
legales que protegen los derechos de autor vigentes.
______________________________
Erick Xavier Cordero Puyol
C.I. 0915799217
iv
AGRADECIMIENTOS
Inmensamente agradecido con Dios
por permitirme los medios para conocer
y ser parte de tan noble y hermosa
profesión; y a su vez el mas
gratificante sentimiento de haber
aprendido, a trabajar con el corazón y
la razón, de una excelentísima
profesional apasionada en su trabajo,
Paulina Cabezas Pardo.
v
RESUMEN
ABSTRACT
The experiment took place in 384 domestic canines by automated and manual
leucogram. Both methods where carried through under strict regulations and
protocols based on scientific publication standards. Diverse leucocitary forms
where identified in large quantities and representative percentages in the
leukograms, situation that couldnt have been able to be carried out through
automated leukogram. Nevertheless, automatization of such processes allows
optimization of resources and has certain quantitative advantages.
Interpretation of the results must be managed with great criteria, taking into
account the methodology of the process; at the same time it is important to
have in mind physiopathology, clinical presentation the individual and its
physiology.
ÍNDICE
Introducción …………………………………………………………….……1
1. Capitulo I
1.1.Antecedentes ……………………………………………………………..3
1.2.Alcance …………………………………………………………………..…4
1.3.Justificación ………………………………………………….……………5
1.4.Objetivos ………………………………………………………..………….5
1.4.1.Objetivo general …………………………………………..……………….5
1.4.2.Objetivos específicos …………………………………….……………….5
2. Capítulo II
2.1.Marco Teórico ……………………………………………………………..7
2.1.1.Muestras …………………………………………….………………………8
2.1.1.1.Recolección ………………………………………………………………9
2.1.1.1.1.Materiales para la recolección ……………………………………….9
2.1.1.1.2. Sitios de venopunción ……………………………………………….10
2.1.1.2.Manejo ……………………………………………………………………12
2.1.1.2.1.Contador Hematológico Automatizado ……………………….…….14
2.1.1.2.1.1.Fundamentos y tecnologías …………………………………….…15
2.1.1.2.1.1.1. Impedancia …………………………………………………….…15
2.1.1.2.1.1.2. Análisis cuantitativo de Buffy Coat ………………………….….16
2.1.1.2.1.1.3. Citometría de Flujo ………………………………………………16
2.1.1.2.2.Conteo Manual de Leucocitos ……………………………………….17
2.1.1.2.2.1.Pipeta de Thoma ………………………………………………..…..17
2.1.1.2.2.2.Cámara de Neubauer ……………………………………..………..18
2.1.1.2.2.3.Diferencial de Leucocitos …………………………..………………21
2.1.1.2.2.3.1.Morfología …………………………………………….……………23
2.1.1.2.2.3.2.Inclusiones …………………………………………………….…..30
2.1.1.2.2.3.3.Variaciones y Correcciones …………………………………..33
3. Capítulo III
3.1.Materiales ……………………………………………..….……………..36
3.1.1.Biológicos ……………………………………….….……………………36
3.1.2.No Biológicos ……………………………………..…………………….36
3.2.Métodos …………………………………………………………………37
3.3.Diseño Experimental …………………………………………………38
3.4.Manejo del Experimento ……………………………………………39
4. Capítulo IV
4.1.Resultados y Discusión ……………………………….……………..49
4.1.1.Análisis estadísticos ……………………………………….…………….49
5. Capitulo V
5.1.Conclusiones y Recomendaciones ……………………..………..62
5.1.1.Conclusiones.………………………………………………….………….62
5.1.2.Recomendaciones …………………………………………..……………64
6. Referencias ……………………………………………………………66
7. Anexos …………………………………………………………………..68
ÍNDICE DE TABLAS
INTRODUCCIÓN
CAPITULO I
1.1. Antecedentes
1.2. Alcance
1.3. Justificación
1.4. Objetivos
CAPITULO II
2.1.1. Muestras
Para que una muestra sanguínea tenga un valor diagnóstico debe ser
perfectamente recolectada, almacenada y manejada.
La mayor parte de los problemas que ocasionan una mala muestra se debe a
los daños físicos sobre los componentes de la sangre durante la recogida. Hay
que considerar la fragilidad de los eritrocitos y la agregabilidad de plaquetas
(Day, M., Mackin A. y Littlewood J., 2012, p.4). Los mismos que son la razón
para la hemólisis y los agregados plaquetarios resultado de un vacío excesivo,
llenado incorrecto del tubo, shock térmico, entre otros.
9
2.1.1.1. Recolección
• Tubos
Los tubos de tapón lila se los encuentra en varios tamaños y cada uno viene ya
con la concentración indicada correspondiente a la capacidad del volumen del
tubo. Es importante respetar la relación sangre-anticoagulante, ya que el
exceso de EDTA puede diluir la muestra, alterando el valor del hematocrito y
causando alteraciones en la morfología celular.
10
• Jeringas y Agujas
Los sitios mas frecuentes de venopunción en perros son vena yugular, vena
cefálica y vena safena, que queda a consideración del médico veterinario cual
utilizar dependiendo de las condiciones del paciente, siendo la vena yugular
siempre la de preferencia para estudios hematológicos.
La vena yugular externa se localiza en ambos lados del cuello, formada por la
unión de las venas maxilar y linguofacial (Miller, M., 1972, p.102).
• Vena Cefálica
• Vena Safena
2.1.1.2. Manejo
Se debe etiquetar todas las muestras obtenidas, para de esta forma evitar
confusiones.
2.1.1.2.1.1.1. Impedancia
5) Se cuentan las célula que estén sobre la línea izquierda y la línea superior,
pero no se cuentan las que se encuentre sobre la línea derecha o la línea
inferior. La diferencia del conteo entre cuadros no debe ser superior a 25%
(Núñez, L. y Bouda, J., 2007, p. 56).
2.1.1.2.2.3.1. Morfología
a. Neutrófilos Tóxicos
b. Neutrófilos en Banda
c. Anomalía de Pelger-Huët
d. Neutrófilos Hipersegmentados
e. Linfocitos Reactivos
f. Linfocitos Atípicos
Tienen un mayor tamaño que los neutrófilos y contienen núcleos con cromatina
punteada inmadura. Cuando se encuentran linfocitos atípicos en gran cantidad
de linfocitos atípicos sugiere leucemia linfocítica aguda o linfoma en estadio V.
Sin embargo, pueden existir en pequeñas cantidades en enfermedades
inflamatorias (Allison, R. y Meinkoth, J., 2007, p.261).
2.1.1.2.2.3.2. Inclusiones
Figura 26.
Mórula de E. ewingii en neutrófilo canino.
Fuente: COWELL, “DIAGNÓSTICO CITOLÓGICO Y HEMATOLÓGICO DEL
PERRO Y GATO”, 2007
- Variaciones:
- Correcciones:
CAPITULO III
3.1. Materiales
3.1.1. Biológicos
a. 384 Caninos
b. Sangre Venosa Periférica
3.1.2. No Biológicos
a. Jeringas 3ml
b. Torundas del algodón
c. Tubo de recolección sanguínea con EDTA de 1ml.
d. Cubreobjetos de cámara
e. Cámara de Neubauer
f. Microscopio
g. Piano Contador Celular
h. Pipeta de Thoma
i. Solución de Turk
j. Manguera
k. Tinción de Wright
l. Homogenizador de sangre
m. Aceite de Inmersión
n. Analizador Hematológico Automático
o. Portaobjetos
p. Agua destilada
q. Cronómetro
37
3.2. Métodos
- ANIMALES MUESTREADOS
- CONTADOR AUTOMATICO
COMO FUNCIONA
TECNOLOGÍA IMPEDANCIA
DETERMINACION DE HEMOGLOBINA
- CONTEO MANUAL
hasta 0.5, luego se limpia la punta y el resto se completa con solución de Turk
hasta la marca del 11.
La regla para contar las célula dice, que se cuentan las que estén sobre la línea
izquierda y la línea superior, pero no se cuentan las que se encuentre sobre la
línea derecha o la línea inferior. También tomando en cuenta que la diferencia
del conteo entre cuadrantes no debe ser superior a 25% (Núñez, L. y Bouda, J.,
2007, p. 56).
A. B.
Figura 40.
A. Plataforma de conteo de cámara de Neubauer (40X) B. Cuadrante para
conteo de leucocitos (100X).
La tinción que se utilizó fue la de Wright, usando como buffer agua destilada.
Se estableció que el tiempo entre tinción y buffer, y entre buffer y lavado con
agua corriente, fuese de tres minutos en ambas.
CAPITULO IV
Según los datos obtenidos en el estudio (Anexo 4), se pudo realizar los
siguientes análisis estadísticos.
Intervalo de confianza:
t = 8.6606
gl = 383
Error standard de la diferencia = 0.030
N 384 384
Intervalo de confianza:
t = 2.8229
gl = 383
Error standard de la diferencia = 0.068
N 384 384
52
Intervalo de confianza:
t = 4.0674
gl = 383
Error standard de la diferencia = 0.034
53
N 384 384
Intervalo de confianza:
t = 4.0581
gl = 383
Error standard de la diferencia = 0.024
N 384 384
Intervalo de confianza:
t = 3.3994
gl = 383
Error standard de la diferencia = 0.024
N 384 384
56
Intervalo de confianza:
t = 14.4383
gl = 383
Error standard de la diferencia = 0.004
57
N 384 384
5%
5%
9%
34%
8%
40%
Automatizado Manual
90
60
30
0
En Rango Fuera de Rango
CAPITULO V
5.1.1 Conclusiones
Al Igual que los neutrófilos, los linfocitos presentan una diferencia significativa
muy amplia entre los métodos de medición descritos. A pesar de ser las
segundas células de mayor presentación en un leucograma normal, existe
63
5.1.2 Recomendaciones
REFERENCIAS
Becker, M., Moritz, A., & Giger, U. (2008). Comparative clinical study of canine
and feline total blood cell count results with seven in-clinic and two
commercial laboratory hematology analyzers. Veterinary Clinical
Pathology / American Society for Veterinary Clinical Pathology, 37(4),
373–84. doi:10.1111/j.1939-165X.2008.00085.x
Brunck, M. E. G., Andersen, S. B., Timmins, N. E., Osborne, G. W., & Nielsen,
L. K. (2014). Absolute counting of neutrophils in whole blood using flow
cytometry. Cytometry. Part A : The Journal of the International Society
for Analytical Cytology. doi:10.1002/cyto.a.22503
Cowell, R., Tyler, R., Meinkoth, J., DeNicola, D., (2007). Diagnostic Cytology
and Hematology of the dog and cat. Canada: Mosby.
Stirn, M., Moritz, A., & Bauer, N. (2014). Rate of manual leukocyte differentials
in dog, cat and horse blood samples using ADVIA 120 cytograms. BMC
Veterinary Research, 10, 125. doi:10.1186/1746-6148-10-125
Recuperado en 2015 de http://www.abaxis.com/veterinary/products/
hm5.html
68
ANEXOS
69
2) MÉTODO DE IMPEDANCIA
\
71
4) RESULTADOS CUANTITATIVOS
RESULTADOS CUANTITATIVOS
1 6.9 7.86 6.5 6.34 0.2 0.22 0.2 0.4 0.0 0.9 0.0 0.0
2 7.1 6.96 4.9 4.56 2.1 1.86 0.1 0.21 0.0 0.26 0.0 0.08
3 8.4 8.24 4.9 4.83 2.8 2.47 0.1 0.54 0.6 0.30 0.0 0.1
4 8.3 7.91 6.2 6.46 1.4 1.27 0.0 0.05 0.7 0.12 0.0 0.01
5 70.3 73.21 40.1 59.07 11.2 13.56 2.1 0.32 1.4 0.25 0.0 0.01
6 5.2 5.86 4.4 4.43 0.5 0.87 0.0 0.08 0.3 0.46 0.0 0.02
7 6.2 7.2 3.9 3.56 2.2 2.54 0.0 0.33 0.0 0.65 0.0 0.12
8 16.2 15.92 13.0 13.59 2.1 2.03 1.1 0.27 0.0 0.03 0.0 0.0
9 17.7 17.7 16.1 16.16 1.2 0.98 0.2 0.08 0.0 0.46 0.0 0.02
10 7.9 8.13 3.8 3.98 3.5 3.45 0.4 0.66 0.2 0.03 0.0 0.01
11 15.2 14.88 12.7 12.60 1.8 0.91 0.5 1.3 0.2 0.05 0.0 0.01
12 26.5 27.1 24.4 25.57 0.8 0.76 1.3 0.44 0.0 0.25 0.0 0.08
13 14.9 14.9 11.3 10.01 2.1 3.49 0.9 0.76 0.6 0.54 0.0 0.1
14 7.7 7.39 5.8 5.98 1.7 1.10 0.1 0.23 0.1 0.06 0.0 0.02
15 10.2 9.81 5.3 5.17 3.6 4.02 0.9 0.15 0.4 0.40 0.0 0.07
16 16.7 16.6 13.2 14.12 2.3 2.1 0.5 0.35 0.7 0.02 0.0 0.01
17 16.2 15.74 13.6 13.72 2.3 1.02 0.2 0.6 0.1 0.14 0.0 0.06
18 14.2 13.97 9.5 9.95 3.4 3.37 0.3 0.44 1.0 0.15 0.0 0.05
19 9.6 9.88 7.7 8.12 0.6 0.8 0.3 0.45 0.9 0.41 0.1 0.1
20 14 14.42 11.8 11.54 2.1 2.49 0.1 0.22 0.0 0.12 0.0 0.05
21 11.8 11.87 7.7 8.78 2.8 2.55 0.7 0.29 0.6 0.22 0.0 0.03
22 9.7 9.86 8.2 8.88 0.8 0.63 0.3 0.34 0.4 0.02 0.0 0.01
23 12.9 12.58 7.3 6.75 1.7 1.98 0.5 0.91 3.0 2.8 0.4 0.14
24 36.2 37.25 30.7 30.94 2.2 3.5 1.8 1.55 1.1 0.86 0.0 0.4
25 5.6 6.03 4.3 4.97 0.4 0.56 0.3 0.29 0.3 0.21 0.0 0.0
26 11.6 11.47 7.7 7.37 3.1 2.66 0.2 0.65 0.6 0.62 0.0 0.17
27 11.6 11.34 7.8 7.65 2.6 2.92 0.5 0.65 0.7 0.1 0.0 0.02
28 4.8 5.24 4.4 4.1 0.3 0.56 0.1 0.32 0.0 0.25 0.0 0.01
29 13.7 14.29 5.6 5.92 5.4 6.55 0.7 0.71 1.7 1.09 0.0 0.02
30 19.7 19.74 14.2 15.54 3.5 2.28 1.4 0.14 0.4 1.49 0.0 0.3
31 11.7 12.54 10.1 11.11 0.6 0.8 0.2 0.34 0.8 0.23 0.0 0.06
32 7.8 7.84 6.7 6.66 0.5 0.8 0.1 0.05 0.5 0.21 0.0 0.05
33 8.2 8.29 6.1 7.12 1.6 0.61 0.1 0.5 0.1 0.05 0.0 0.0
34 16.7 16.49 12.2 11.41 1.2 3.38 0.0 1.24 2.8 0.38 0.5 0.08
35 6.4 6.3 3.5 3.01 2.6 2.98 0.1 0.24 0.2 0.05 0.0 0.02
36 12.7 12.97 8.8 9.49 1.7 1.75 0.8 0.91 1.4 0.62 0.0 0.19
37 13.4 13.13 10.7 10.58 2.7 1.97 0.0 0.39 0.0 0.14 0.0 0.05
38 11.4 11.33 9.4 9.51 0.9 0.99 0.9 0.34 0.2 0.36 0.0 0.13
39 9.5 9.1 5.6 6.02 2.7 2.49 0.9 0.47 0.3 0.1 0.0 0.02
40 25.3 26.3 20.0 22.55 3.0 3.45 1.0 0.27 1.3 0.03 0.0 0.0
41 26.9 27.03 20.7 19.14 3.5 5.22 0.8 2.24 1.1 0.31 0.0 0.12
42 14.2 14.48 12.2 11.51 1.1 1.68 0.9 0.97 0.0 0.24 0.0 0.07
43 2.5 2.76 1.8 1.65 0.6 0.55 0.0 0.08 0.1 0.46 0.0 0.02
44 5.5 5.92 4.1 3.97 0.9 1.1 0.2 0.26 0.3 0.48 0.0 0.11
45 9.1 9.13 6.8 6.76 1.8 1.58 0.4 0.51 0.1 0.23 0.0 0.05
1
72
46 8.7 8.11 6.2 6.09 2.0 1.94 0.2 0.04 0.3 0.04 0.0 0.0
47 12.3 13.83 11.2 11.45 0.7 0.98 0.3 0.65 0.0 0.59 0.0 0.16
48 13.1 12.94 6.9 7.34 4.7 4.56 0.7 0.41 0.8 0.47 0.0 0.16
49 8.8 8.88 6.6 6.62 1.0 1.55 0.1 0.45 1.1 0.2 0.0 0.06
50 6.7 6.83 6.1 5.98 0.5 0.78 0.1 0.05 0.0 0.01 0.0 0.01
51 10.3 10.22 6.0 6.65 3.0 2.3 0.8 0.49 0.5 0.66 0.0 0.12
52 11.9 11.89 8.5 8.5 2.6 2.56 0.0 0.43 0.8 0.32 0.0 0.08
53 13.3 13.65 8.2 7.43 4.2 4.54 0.4 0.68 0.4 0.84 0.1 0.16
54 9.9 9.47 4.7 4.34 4.5 5.01 0.1 0.32 0.6 0.15 0.0 0.05
55 9.1 9.24 5.6 5.41 2.5 2.5 0.1 0.5 0.9 0.68 0.0 0.15
56 13.0 13.24 10.0 10.76 0.8 0.76 0.7 0.16 1.5 1.56 0.0 0.0
57 13.4 13.63 10.2 11.25 2.0 1.8 0.5 0.39 0.7 0.14 0.0 0.05
58 13.8 13.85 12.1 12.11 0.9 1.16 0.4 0.32 0.4 0.22 0.0 0.04
59 5.9 6.53 5.4 5.38 0.3 0.51 0.1 0.32 0.0 0.3 0.0 0.02
60 38.3 39.48 33.3 35.78 2.3 2.74 2.3 0.88 0.4 0.06 0.0 0.02
61 9.2 9.11 7.4 7.76 1.0 1.04 0.8 0.23 0.0 0.06 0.0 0.02
62 12.2 12.65 8.0 8.32 3.3 3.58 0.8 0.31 0.1 0.36 0.0 0.08
63 17.5 18.01 15.6 14.27 1.1 2.53 0.5 0.58 0.3 0.46 0.0 0.17
64 8.5 8.54 4.4 5.22 3.1 3.24 0.3 0.05 0.7 0.01 0.0 0.01
65 15.3 15.76 11.9 12.36 1.7 1.27 1.2 1.09 0.5 0.81 0.0 0.24
66 9.4 9.58 7.6 7.28 1.3 1.35 0.3 0.53 0.2 0.34 0.0 0.08
67 15.6 16.18 6.2 8.21 8.1 6.02 0.2 1.55 1.1 0.32 0.0 0.08
68 8.6 8.66 6.2 5.8 1.7 1.47 0.4 0.29 0.3 0.96 0.0 0.14
69 20.5 20.9 16.4 16.95 3.1 2.65 0.4 1.11 0.4 0.13 0.2 0.06
70 15.9 15.88 10.3 11.01 4.8 3.06 0.5 0.72 0.3 0.85 0.0 0.24
71 6.7 7.48 4.4 4.34 2.0 2.84 0.0 0.22 0.3 0.06 0.0 0.02
72 21.7 24.1 17.0 15.32 3.0 5.91 1.3 2.1 0.2 0.63 0.0 0.14
73 9.5 9.64 5.3 5.32 3.5 3.38 0.3 0.16 0.4 0.64 0.0 0.14
74 11.3 11.13 6.8 6.66 3.2 3.81 0.3 0.26 1.0 0.39 0.0 0.01
75 16.5 16.87 11.5 11.03 3.3 3.97 0.7 1.25 1.0 0.42 0.0 0.2
76 10.6 10.61 8.5 8.96 0.9 0.9 1.0 0.56 0.2 0.14 0.0 0.04
77 10.7 10.71 7.5 7.74 1.6 2.39 0.9 0.52 0.6 0.04 0.1 0.01
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2
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352 22.3 22.78 18.9 19.16 2.5 2.12 0.5 0.8 0.4 0.53 0.0 0.18
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8
79
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81
METARRUBRICITOS NEUTROFILOS BANDAS LINFOCITOS NEUTROFILOS ANOMALIA DE LINFOCITOS INCLUCION DE MORULAS GAMONTES DE FIRUGAS MASTOCITOS
N TOXICOS ATIPICOS HIPERSEGMENTADOS PELGER-HUET REACTIVOS DISTEMPER HEMOPARASITOS HEPATOZOON MITOTICAS
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82
METARRUBRICITOS NEUTROFILOS BANDAS LINFOCITOS NEUTROFILOS ANOMALIA DE LINFOCITOS INCLUCION DE MORULAS GAMONTES DE FIRUGAS MASTOCITOS
N TOXICOS ATIPICOS HIPERSEGMENTADOS PELGER-HUET REACTIVOS DISTEMPER HEMOPARASITOS HEPATOZOON MITOTICAS
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METARRUBRICITOS NEUTROFILOS BANDAS LINFOCITOS NEUTROFILOS ANOMALIA DE LINFOCITOS INCLUCION DE MORULAS GAMONTES DE FIRUGAS MASTOCITOS
N TOXICOS ATIPICOS HIPERSEGMENTADOS PELGER-HUET REACTIVOS DISTEMPER HEMOPARASITOS HEPATOZOON MITOTICAS
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METARRUBRICITOS NEUTROFILOS BANDAS LINFOCITOS NEUTROFILOS ANOMALIA DE LINFOCITOS INCLUCION DE MORULAS GAMONTES DE FIRUGAS MASTOCITOS
N TOXICOS ATIPICOS HIPERSEGMENTADOS PELGER-HUET REACTIVOS DISTEMPER HEMOPARASITOS HEPATOZOON MITOTICAS
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