I.

INTRODUCCIÓN

La tecnología ha avanzado mucho en los últimos años en distintos

ámbitos, en la mecánica, la medicina, en computadores, y la verdad es que la
biología no es la excepción, actualmente se está experimentando nuevos
procesos y tecnología con el ADN. El llamado ADN Recombínate, ADN
Recombinado o ADN Modificado, es una molécula del ADN que está constituida
de forma artificial y de manera deliberada por la unión de secuencias del ADN
que provienen de dos o más organismos distintos, es decir es una combinación
de dos ADN que no se encuentran juntos.

Al introducir el ADN Recombinate a cierto organismo, se produce algo

que conocemos como una modificación genética, que le permite a la ciencia
adherir una secuencia de ADN totalmente nueva a un organismo, de tal forma
que se puedan controlar los rasgos existentes del organismo. También pueden
incentivar la producción de cierta proteína que el organismo no poseía, a partir
del ADN Recombinate, y a estas proteínas se les denomina proteínas
recombinate.
 II. REVISIÓN DE LITERATURA

II.1. Tecnología del ADN

El ADN recombinate no es más que el resultado de los diversos

estudios e intentos de los biólogos moleculares de manipular las moléculas del
ADN, cabe destacar que esto no es igual a la recombinación genética que ya
se conoce, el proceso consiste en agarrar una molécula del ADN de cierto
organismo, puede ser una planta, una bacteria, también puede ser un virus, y
luego de tener esa pequeña molécula , la manipulan y la insertan dentro de otro
organismo, con el fin de estudiar el desarrollo de un gen, para así poder
producir proteínas para el tratamiento de ciertas enfermedades genéticas,
también pueden generar vacunas con fines económicos y científicos.

Las secuencias que contiene el ADN al ser replicadas confieren una

gran resistencia a antibióticos en específicos. Esta técnica ha sido de gran
utilidad en el campo de la medicina y ha logrado grandes avances terapéuticos
un ejemplo de esto es la insulina recombinate, además esta biotecnología nos
permite modificar ciertas plantas para así poder producir ciertos fármacos de
vital importancia y otros cuantos productos que también son importantes para
la sociedad actual ejemplo de esto pueden ser; la insulina, las vacunas contra
enfermedades, también la hormona del crecimiento. Con el uso de esta
tecnología llamada ADN recombinate se han obtenido plantas resistentes a los
insectos, hongos y bacterias que en ella podían causar un efecto perjudicial, y
además mejorar la calidad de cosecha en las mismas.

II.1.1. Creación de ADN recombinante

La clonación molecular es un proceso de laboratorio usado para crear

ADN recombinante. Es uno de los dos métodos más utilizados, junto con
la Reacción en cadena de la polimerasa (PCR), usada para dirigir la replicación
de cualquier cadena de ADN específica escogida por el experimentador. La
diferencia fundamental entre ambos métodos, es que la clonación molecular
implica la replicación de ADN dentro de una célula viva, mientras que PCR
replica el ADN en el tubo de ensayo, sin células vivas.

La formación de ADN recombinante requiere un vector de clonación,

una molécula de ADN que se replica en una célula viva. Los vectores
generalmente son derivados de plásmidos o virus, y representan segmentos
relativamente pequeños de ADN que contienen señales genéticas necesarias
para la replicación, así como elementos adicionales de conveniencia para
insertar ADN foráneo, identificando células que contienen ADN recombinante y,
cuándo y dónde sea apropiado, siendo capaz de expresar el ADN foráneo. El
tipo de vector que se utilizará para clonación molecular depende en la elección
del organismo huésped, el tamaño de ADN que será clonado y de la manera en
la que el ADN foráneo será expresado.5 Los segmentos de ADN pueden ser
combinados usando una gran variedad de métodos, como la restricción de
clonación de enzima/ligasa o la Asamblea de Gibson.

En protocolos de clonación estándar, la clonación de cualquier

fragmento de ADN implica esencialmente siete pasos: (1) Elección del
organismo huésped y del vector de clonación, (2) Preparación del vector de
ADN, (3) Preparación del ADN para clonación, (4) Creación del ADN
recombinante, (5) Introducción del ADN recombinante en el organismo
huésped, (6) Selección de organismos que contengan ADN recombinante, y (7)
Proyecciones para clones con las inserciones del ADN deseado y con
propiedades biológicas. Los pasos anteriores están descritos con detalle en el
artículo relacionado: (Clonación molecular).

II.1.2. Expresión del ADN recombinante

Después del trasplante en el organismo huésped, el ADN foráneo

contenido en la estructura del ADN recombinante puede o no ser expresado.
Significa que el ADN puede ser simplemente replicado sin expresarse, o puede
ser transcrito y traducido, causando que una proteína recombinante sea
producida. Generalmente, la expresión de un gen foráneo requiere que la
reestructura del gen incluya secuencias necesarias para producir una molécula
de RNA mensajero (ARNm) que pueda ser usada por el aparato de traducción
del huésped (e.g. promotor, señal de iniciación de traducción, y [[Ter]). Cambios
específicos en el organismo huésped pueden ser realizados para mejorar la
expresión del gen ectópico. Además, se pueden requerir cambios también en
las secuencias de codificación, para optimizar la traducción, hacer la proteína
soluble, dirigir la proteína recombinante a su correcta localización celular o
extracelular, y estabilizar la proteína de la degradación.

II.1.3. Propiedades de organismos que contienen ADN recombinante

En la mayor parte de los casos, los organismos que contienen ADN

recombinante aparentemente tienen un fenotipo normal. Esto significa que su
apariencia, comportamiento y metabolismo son usualmente inalterados, y la
única manera de demostrar la presencia de secuencias recombinantes es el
examen del ADN, que normalmente se hace con el test de la reacción en
cadena de la polimerasa (PCR). Hay excepciones significativas que serán
discutidas abajo.

Si las secuencias de ADNr codifican un gen que está expresado, la

presencia de ARN y/o de los productos de la proteína del gen recombinado
puede ser detectada, normalmente utilizando métodos como PCR o hibridación
Western. Los cambios fenotípicos brutos no son normativos, a menos que el
gen recombinante ha sido escogido y modificado para generar actividad
biológica en el organismo huésped. Fenotipos adicionales que son encontrados
incluyen toxicidad para el organismo huésped inducida por el producto del gen
recombinante, especialmente si es sobre-expresado o expresado en células o
tejidos inapropiados.

En algunos casos, el ADN recombinante puede tener efectos

perjudiciales incluso cuando no está expresado. Un mecanismo por el que lo
anterior sucede es la inactivación insercional, en el que la ADNr se inserta en el
gen de la célula huésped. En ciertas ocasiones, los investigadores utilizan
dicho fenómeno para "bloquear" genes para determinar su función biológica y
su importancia. Otro mecanismo por el que la inserción de ADNr en el ADN
cromosomal puede afectar la expresión del gen es por activación inapropiada
de genes de células huésped que ya habían sido inexpresados. Lo anterior
puede suceder, por ejemplo, cuando un fragmento de ADN recombinante que
contiene un promotor activo llega a localizarse a lado del gen de una célula
huésped previamente silenciado, o cuando una célula huésped que funciona
para restringir la expresión genómica pasa por inactivación insercional por el
ADN recombinante.

II.1.4. Aplicaciones de la tecnología de ADN recombinante

El ADN recombinante es ampliamente utilizado en biotecnología,

medicina y en investigación. Hoy en día, las proteínas recombinantes y otros
productos resultantes de la utilización de la tecnología de ADN recombinante
son encontrados esencialmente en cualquier farmacia occidental, en oficinas
de doctores y veterinarios, laboratorios de pruebas médicas, y en laboratorios
de investigación biológica. Además, los organismos que han sido manipulados
usando tecnología de ADN recombinante, así como productos derivados de
esos organismos, han encontrado su camino a diversas granjas,
supermercados, cabinetes médicos en casa, e incluso a tiendas de mascotas,
como aquellas que venden GloFish y otros animales modificados
genéticamente.

La aplicación más común del ADN recombinante es en la investigación

básica, en la cual la tecnología es de gran relevancia para la mayoría del
trabajo que se está llevando a cabo en las ciencias biológicas y biomédicas.8
El ADN recombinante es utilizado para identificar, mapear y obtener la
secuencia de genes, y determinar su función. La investigación de ADNr es
utilizada para analizar la expresión de genes en las células de los individuos, y
a través de los tejidos de organismos completos. Las proteínas recombinantes
son ampliamente utilizadas como reactivos en experimentos de laboratorio y
para generar investigaciones para examinar la síntesis de proteínas dentro de
las células organismos.
 Muchas aplicaciones adicionales del ADN recombinante son
encontradas en la industria, producción de alimentos, medicina humana y
veterinaria, agricultura, y en bioingeniería.2 Algunos ejemplos específicos son
identificados abajo.

 Quimosina recombinante

Encontrada en el cuajo, la quimosina es una enzima utilizada para la

manufactura del queso. Fue el primer aditivo alimentario diseñado
genéticamente que fue utilizado en el ambiente comercial.
Tradicionalmente, los procesadores obtuvieron la quimosina del cuajo,
una preparación derivada del cuarto estómago de los terneros que se
alimentan de leche. Los científicos diseñaron una cadena (K-12) no
patogénica de la bacteria "E. coli" para la producción a gran escala en el
laboratorio de la enzima. Dicha enzima recombinante
microbiológicamente producida, estructuralmente idéntica a la enzima
derivada del ternero, cuesta menos y es producida en cantidades
abundantes. Hoy en día, cerca del 60% del queso duro de Estados
Unidos está hecho con quimosina diseñada genéticamente. En 1990, la
FDA le concedió a la quimosina el estado de "generalmente reconocida
como segura" (GRAS), basado en información que mostraba que la
enzima era segura.

 Insulina humana recombinante

Casi completamente reemplaza a la insulina derivada de animales (e.j.

puercos y ganado) para el tratamiento de diabetes (que requiere
insulina). Una variedad de diferentes preparaciones de insulina
recombinada se encuentra en usa extenso. La insulina recombinada es
sintetizada insertando el gen de insulina humana en E. coli, o en
levadura (saccharomyces cerevisiae) que luego produce insulina para
uso humano.
 Hormona del crecimiento humano recombinante (HGH,
somatotropina)

Administrada a pacientes cuya glándula pituitaria genera cantidades

insuficientes para sostener un crecimiento y desarrollo normal. Antes de
que la hormona recombinante estuviera disponible, la hormona para uso
terapéutico era obtenida de las glándulas pituitarias de cadáveres,
práctica insegura que conllevaba a que algunos pacientes desarrollaran
la Enfermedad de Creutzfeldt–Jakob. La hormona recombinante eliminó
dicho problema y ahora es utilizada terapéuticamente. También se ha
hecho un mal uso de ella para mejorar el rendimiento de atletas entre
otros casos. DrugBank entry

 Factor de coagulación VIII recombinante

Proteína de coagulación sanguínea administrada a pacientes con el

desorden de sangrado conocido como hemofilia, quienes son incapaces
de producir el factor de coagulación VIII en cantidades suficientes para
mantener la coagulación sanguínea normal.17 Antes del desarrollo del
factor de coagulación VIII recombinante, la proteína era obtenida
mediante el procesamiento de grandes cantidades de sangre humana de
múltiples donadores, lo cual conllevaba un riesgo muy grande de
transmisión de enfermedades transmitidas por la sangre, como el VIH y
la hepatitis B. DrugBank entry

 Vacuna contra la hepatitis B recombinante

La Hepatitis B es una infección controlada a través del uso de una

vacuna de hepatitis B recombinante, la cual contiene una forma del
antígeno de superficie del virus de la hepatitis B producido en las células
de levadura. El desarrollo de la vacuna recombinante fue importante y
necesario ya que el virus de la hepatitis B, a diferencia de otros virus
como poliovirus, no pueden ser cultivados in vitro. Vaccine information
from Hepatitis B Foundation
 Diagnóstico de infección con VIH

Cada uno de los tres métodos más utilizados para diagnosticar la

infección de VIH ha sido desarrollada utilizando ADN recombinante. El
test de anticuerpos (ELISA o western blot) utiliza una proteína de VIH
recombinante para encontrar la presencia de anticuerpos que el cuerpo
ha producido en respuesta a una infección de VIH. El test de ADN busca
la presencia del material genético del VIH utilizando RT-PCR (Reacción
en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa). El desarrollo de
la prueba RT-PCR fue posible gracias a la clonación molecular y la
secuencia de análisis del genoma del VIH. HIV testing page from US
Centers for Disease Control (CDC)

 Arroz dorado

Una variedad recombinante de arroz que ha sido diseñado para expresar

las enzimas responsables de la biosíntesis de caroteno.9 El arroz
mencionado sostiene una promesa sustancial de reducir la incidencia de
la Deficiencia de vitamina A en la población mundial.18 El arroz dorado
no se encuentra en uso, ya que sigue pendiente la resolución de los
asuntos de regulación y de propiedad intelectual.19

 Cultivo resistente a herbicida

Variedades comerciales de importante cultivo agricultural (incluyendo

soya, maíz, sorgo, canola, alfalfa y algodón) han sido desarrollados
incorporando un gen recombinante que les da la capacidad de resistir el
herbicida glifosato y simplifica el control de la hierba con la aplicación de
glifosato.20 Dichos cultivos se encuentran en uso comercial en varios
países.

 Cultivos resistentes a insectos

Bacillus thuringeiensis es una bacteria que produce naturalmente una

proteína con propiedades de insecticida. La bacteria ha sido aplicada a
 los cultivos como una estrategia para control de insectos por muchos
años, práctica que ha sido extensamente adoptada en agricultura y
jardinería.

III. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

CAMPBELL, NEIL A. & REECE, JANE B. (2002). Biology (6th ed.). San
Francisco: Addison Wesley. pp. 375-401.

BROWN, TERRY (2006). Gene Cloning and DNA Analysis: an Introduction.

Cambridge, MA: Blackwell Pub.

FERNANDEZ, M.; HOSEY, R. (2009). «Performance-enhancing drugs snare

nonathletes, too». The Journal of family practice.

LINCOGRAFÍA

- https://es.wikipedia.org/wiki/Tecnología_de_ADN_recombinante#cite_not
e-pmid|19892171-7

- https://sites.google.com/site/quimicageneralbuapfiq/home/cap4/tecn

- http://modacientifica.over-blog.com/2016/02/tecnologia-del-adn-
recombinante.html
ANEXO