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GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

PERÍODO ACADÉMICO Abril 2019 – Agosto 2019


ASIGNATURA Análisis Clínico Semestre: Sexto Paralelo: A
I
NOMBRE DEL DOCENTE LIC. ELENA BRITO
FECHA 11/04/2019
NÚMERO DE PRÁCTICA 3 HORA:19HOO–22H00 DURACIÓN: 3 H
GRUPO 3
NOMBRE DEl ESTUDIANTE
Fernando Carlos Ramírez Paguay
LUGAR DE LA PRÁCTICA Laboratorio E300 (facultad de ciencias de la salud)
TÍTULO DE LA UNIDAD Unidad I. Tecnicas cuantitativas de análisis
TEMA DE LA PRÁCTICA Turbidimetria
OBJETIVO GENERAL Realizar la lectura de una técnica turbidimetrica

 Conocer el fundamento de turbidimetría y sus aplicaciones


 Determinar la concentración en una muestra biológica de
Objetivos específicos potasio utilizando el método de ión selectivo.
 Destacar la importancia de los iones sodio y potasio en el
metabolismo humano y su relación con diversas patologías.
FUNDAMENTO TEÓRICO:

La turbidimétria

Es el método analítico donde se realiza la medida de la disminución de la potencia de un haz de


radiación transmitida a través de una suspensión de partículas. Es decir, es la medición de la luz
que no se ha dispersado. La turbidimetría mide la reducción de la intensidad de la luz en su paso
a través de una suspensión, a causa de las partículas presentes en ésta, y cuantifica la luz residual
transmitida (1, 2).

Al ser un indicador de apariencia óptica, ocasionado por la dispersión y absorción de la energía


lumínica a través del líquido, la turbidez solo puede ser medida usando técnicas ópticas. Se
fundamenta en la relación de la intensidad de la luz incidente y de la luz dispersada por el medio,
mediante la ley de Lambert-Beer: En la que la turbidez es proporcional a la concentración de
partículas.
Principio de medición de turbidez

Cuando el haz de luz atraviesa el fluido de la muestra , los sólidos suspendidos dispersan la luz
en todas direcciones. La reducción de la intensidad del haz de luz se debe a la difusión del haz
por dichos sólidos suspendidos en el medio. Sin embargo, la absorción de la radiación incidente
por sustancias coloreadas disueltas, también reduce la intensidad de la luz y debe tenerse en
cuenta para contrarrestar este efecto, de forma manual o automática. En el análisis de bajas
cantidades de sólidos suspendidos, se suele usar la medida de la luz dispersa, debido a que los
fotodetectores detectan pequeños cambios de la intensidad de la luz en contraste con un fondo
oscuro. Sin embargo, este método tiene como desventaja que con grandes cantidades de sólidos
disueltos en la muestra, se produce una dispersión múltiple que limita la cantidad de luz que
recibe el detector.13 A elevadas concentraciones de sólidos suspendidos, se deben emplear
métodos de medición alternativos, tales como los de absorción (3).

Aplicaciones clínicas

La técnica turbidimetría permite determinar la concentración de una variedad de iones en


solución (plata, calcio, sodio, cloruro, sulfato, etc.) haciendo uso de sustancias precipitadoras
apropiadas, por otro lado, en el Bioanálisis se utiliza para cuantificar proteínas plasmáticas y el
contaje de colonias bactrianas. Esta técnica de medición posee una gran cantidad de
aplicaciones, entre las que destacan la detección de contaminantes en forma de trazas en una
variedad de muestras y la estimación de las dimensiones de las partículas en diversos fluidos
(1)(2).

DETERMINACIÓN DEL POTASIO

El método presentado para la determinación de potasio se basa en la técnica turbidimétrica


publicada por Hillman y Beyer en 1967, siendo modificada a través del uso de TCA como
reactivo precipitante. Los iones potasio en un medio alcalino libre de proteínas reaccionan con
el tetrafenilborato de sodio para producir una suspensión turbia finamente dispersa de
tetrafenilborato de potasio. La turbidez producida es proporcional a las concentraciones de
potasio (4).

Valores Normales

 Suero: 3.6-5.5 mmol/L


 Plasma: 3.5-4.8 mmol/L
 Orina: 26-123 mmol/24h (varía con la dieta).

MATERIALES Y MÉTODOS

Equipos Materiales Reactivos

 Turbidímetro  Pipetas Kit para determinación


 Puntas azules y amarillas de potasio
 Gradilla
 Papel abosorbente Muestra
 Reloj
Suero y Orina
PROCEDIMIENTO / TÉCNICA:

Preparación del sorbrenadante de libre de proteínas.

1. Añada 0.05 mL de suero, plasma u orina diluida a tubos previamente etiquetados.


2. Añada 0.5 mL de Reactivo TCA precipitante gota a gota a cada tubo mezclado
vigorosamente (de preferencia utilizar vortex).
3. Déjelo por 5minutos, despúes centrifuge a alta velocidad por 5 – 10 minutos.

Procedimiento de la prueba

1. Añada el estándar o el sobrenadante claro en la mitad de la superficie del reactivo de trabajo,


asegurese que cada celdilla sea mezclada con cuidado.
2. Pipetear en los tubos de blanco, estándar y muestra 1mL de reactivo de trabajo
3. Dispensar 10 ml de agua destilada en el tubo de blanco
4. Dispensar 10 ml de estándar en tubo estándar
5. Dispensar 10ml de muestra en muestra
6. Incube todas las celdillas a temperatura ambiente por 5 minutos.
7. Lea STD y Muestra contra Blanco de reactivo a 580 en un intervalo de 60 minuto

RESULTADO (Gráficos, cálculos, etc.)

Durante la prueba se obtuvo las siguientes absorbancias:


 Abs: blanco:0.020
 Abs estándar: 0.093 – 0.020= 0.073
 Abs muestra:0.110 – 0.020= 0.090
 [] std: 4 mmol/L
Abs M
- ------------------- X 4 mmol/L
Abs STD
0.090
- ---------------- X 4 mmol/L = 4.93 mmol/L (SUERO)
0.073
ORINA
 Abs blanco: 0.020
 Abs estándar: 0.093 – 0.020 = 0.073
 Abs muestra: 0.103 – 0.02 = 0.083
 [] std: 4 mmol/L
 Fd: 10

Abs M
- ------------------- X 4 mmol/L
Abs STD

0.083
- ---------------- X 4 mmol/L = 4.54 mmol/L (ORINA)
0.073

4.54 X 10 = 45.4 mmol/L

Orina Potásica = mmol/L x V (24 hrs) / 1000

= 45.4 x 1900 / 1000 = 86.41 mmol/L

OBSERVACIONES

Como resultado de la lectura de absorbancias tanto para suero y orina las concentraciones se
encuentran dentro de los valores de referencia lo que indica que los niveles de potasio son
normales y no existe ninguna patología.

CONCLUSIONES

 La turbidimetría se fundamenta en la medición de la intensidad de la radiación lumínica que


se transmite a través de un medio constituido por partículas que manifiestan cierta dispersión,
las cuales poseen un índice de refracción distinto al de la suspensión donde se encuentran.
 Esta técnica de medición posee una gran cantidad de aplicaciones, entre las que destacan la
detección de contaminantes en forma de trazas en una variedad de muestras y la estimación
de las dimensiones de las partículas en diversos fluidos. En el área de la química que estudia
el diagnóstico de tipo clínico, se utiliza el método de inmunoturbidimetría en la estimación
de las estructuras proteicas de tipo sérico que no pueden ser detectadas mediante otras
técnicas clínicas.
 El potasio tiene importancia clínica ya que ayuda a equilibrar el pH y los fluidos corporales
de su cuerpo, por lo que es importante para la regulación normal de la presión arterial.
También es necesario para el crecimiento normal de los músculos y para el sistema nervioso
y la función cerebral.

RECOMENDACIONES

 Llevar los reactivos a temperatura ambiente antes de realizar la prueba.


 Si se realiza la prueba en orina no olvidar multiplicar el resultado por 10 que corresponde
al factor de dilución.
 Hacer las pruebas por duplicado.
CUESTIONARIO

1. ¿Que pasa con la densidad óptica en las técnicas de turbidimetria?


La densidad de luz disminuye ya que tambien disminuye la intensidad de luz.
BIBLIOGRAFÍA

1. Skoog D.; Holler F; Nieman A. Principios de análisis instrumental. McGraw-Hill


Interamericana de España,, 2001.
2. Buitriago J. Tecnicas y métodos de laboratorio clínico. Elsevier–Masson. Barcelona, España,
2010.
3. Faraldos, Marisol, and Consuelo Goberna, eds. Técnicas de análisis y caracterización de
materiales. Editorial CSIC Consejo Superior de Investigaciones Científicas, 2011.
MgS. Ximena Robalino Lic. Elena Brito Ing. Eliana De la Torre

DIRECTOR/A DE CARRERA DOCENTE RESPONSABLE DEL LABORATORIO

Bibliografía
1. Los métodos Turbidimétricos y sus aplicaciones en las ciencias de la vida. Dayana Acebo
González, Armando T. Hernández García. 1, 2013, CENIC, Vol. 44.

2.Análisis químico instrumental. 2014. Disponible


en:http://quimicabasica2014.blogspot.com/2014/10/nefelometria-y-turbidimetria.html