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Año de 1993
Práctica No. 1
Generalidades: En la membrana del glóbulo rojo existen complejos químicos que representan los
llamados grupos o factores sanguíneos Fué Landsteiner quién realizó en 1900 el importante
descubrimiento de que los eritrocitos del hombre pertenecen a varios sistemas Antigénicos
diferentes, este autor descubrió el sistema A B O.
Se utilizan tres reactivos llamados: suero anti A (de sangre b), de color azul y que
contiene aglutininas alfa, suero anti B (de sangre a), de color amarillo y que contiene aglutininas
beta, existe además otro suero, el anti AB que contiene las dos aglutininas, alfa y beta.
Fundamento: Los antígenos de los hematíes son estructuras químicas que proporcionan
propiedades específicas a su superficie y que solo pueden detectarse con anticuerpos que
corresponden a esos antígenos la mayoría de estas reacciones antígeno-anticuerpo implican la
aglutinación o hemólisis de los hematíes.
Material y equipo:
Ø 1 gradilla
Ø 16 tubos 10 x 75
Ø 4 tubos 13 x 100
Ø Centrifuga clínica
Ø Centrífugas Serofuge
Ø Sangre problema
Tipificación en tubo.
Técnica:
Se prepara una suspensión de glóbulos rojos al 5%, previamente lavado en solución fisiológica.
En una gradilla colocar 4 tubos de ensaye de 10 x 75, marcados con las letras A, B, AB y Control.
En el tubo marcado con A poner una gota de suero anti A, en el tubo marcado con B, poner una
gota de suero anti B, en el tubo AB una gota de suero anti AB
Se debe hacer un control agregando a 1 tubo con una gota de albúmina bovina al 22 %
Se sacan los tubos cuidadosamente de la centrifuga evitando que se mezclen los glóbulos rojos
que quedan depositados en el fondo de los tubos y para efectuar la lectura se sacuden
cuidadosamente el botón del fondo, uno por uno buscando si existe aglutinación macroscópica.
Si la aglutinación tuvo lugar, puede comprobarse en el seno del liquido claro los hematies que
nadan y se flotan formando pequeños agrupamientos, si el resultado es negativo los glóbulos rojos
se distribuyen uniformemente por el líquido.
10. El resultado se reporta de acuerdo a la intensidad del grupo y al color del liquido sobre
nadante, de una o varias cruces, hasta cuatro.
11. Si existe duda en la lectura se podrá observar al microscopio una gota o también se pueden
incubar los tubos a 37° C. durante 30 minutos.
Interpretación de resultados:
Anti A
Anti-B
Anti AB
Grupo A
Positivo
Negativo
Positivo
Grupo B
Negativo
Positivo
Positivo
Grupo AB
Positivo
Positivo
Pos itivo
Grupo O
Negativo
Negativo
Negativo
3 cruces; la aglutinación serán varios grumos grandes con el fondo claro o rosado
Comentarios: Los principales errores que pueden existir en la clasificación sanguínea, son los
siguientes:
Generalidades: Los eritrocitos que poseen antígeno A pueden ser subdivididos en Al y A2, las
células rojas del grupo A que aglutinen con Anti Al lectina, se consideran del subgrupo, aquellas
que no aglutinan con Anti A1 lectina, se clasifican como A2. Aproximadamente el 80 % de las
células, son Al y el restante 20% se consideran A2.
Principio: Los procedimientos usados con este reactivo, están basados en el principio de
aglutinación, las células humanas normales, conteniendo antígenos se aglutinan en presencia del
anticuerpo del antígeno correspondiente algunos extractos de semillas lectina contienen
aglutininas con especificidad de grupos sanguíneos humanos, el extracto de la semilla dolichus
biflorus es virtualmente específica para el antígeno Al en células rojas humanas contiene un fito
hemo aglutinina, la cual como se dijo anteriormente aglutina las células rojas de los subgrupos Al o
A1B.
Material y equipo:
Ø 1 gradilla
Ø 4 tubos ensaye 10 x 75
Con una pipeta Pasteur, agregar una gota de la suspensión de glóbulos rojos.
Interpretación.
Cuando los glóbulos rojos son aglutinados la reacción es positiva e indica la presencia de antígeno
A1 y por lo tanto los glóbulos rojos son A1
Cuando los glóbulos rojos no aglutinan, la reacción es negativa e indica la ausencia de antígeno A1
y los glóbulos rojos son A2
Cuando se investiga en una sangre AB, con Antia Al lectina, si aglutina es AlB, si no aglutina es A2B
Ø Todas las pruebas usando antisuero hemoagrupadores ABO, deben ser llevadas a cabo a
temperatura ambiente y nunca incubarse a temperaturas más elevadas,
Ø Glóbulos rojos de más de 28 días pueden ser probados con este reactivo aún cuando las
reacciones positivas pueden ser más débiles que las obtenidas de glóbulos rojos frescos,
Objetivo: Al término de la práctica el alumno clasificará además del sistema sanguíneo ABO el
factor Rho.
Generalidades: Además de los Antígenos del sistema ABO, existe otro sistema de mayor
importancia que es el factor Rho.
Material y equipo:
Ø 1 gradilla
Ø 4 tubos 10 x 75
Ø 4 tubos 13 x 100
Ø Centrifuga Serofuge
Ø Suero Anti-D
Ø Antiglobulina humana
Método en tubo:
Técnica: Se prepara una suspensión de glóbulos rojos en solución fisiológica al 5%
En un tubo de ensayo 10 x 75, se coloca una gota de suero anti Rho (D) y se le agrega una gota de
suspensión de los eritrocitos problema al 5%
Se realiza la lectura, en busca de aglutinación, en caso de duda se incuba durante 15’ al cabo de
este tiempo se efectua lectura, suspende suavemente el sedimento.
Se observa aglutinación con grumos visibles, si hay duda se confirma la lectura mediante
observación microcópica.
Interpretación de resultados.
Determinación de antígeno Du
Introducción:
El Du, es un alelo de D, muy importante pero irregular. No existe suero anti-Du específico. Algunas
sangres Du deben esta característica al hecho de que el factor D normal heredado, de uno de los
padres, está enmascarado por el factor C de un cromosoma aparejado dCe (r´) heredado de otro
progenitor: este tipo se conoce como “Du por interacción genética”. El otro tipo “Du hereditario”
puede atribuirse a transmisión de un D debilitado.
Los glóbulos de algunos sujetos Du pueden ser aglutinados directamente por casi todos los
sueros anti D, estos casos se denominan”Du” de titulo elevado”. Otras sangres Du son aglutinados
solamente por unos cuantos sueros anti D; son los “Du de título bajo”. Lo importante respecto a
los glóbulos Du, especialmente la variedad “titulo bajo”, es que probablemente parecerán Rho.
Negativos al ser mezclados con anti D. Solamente podrán reconocerse mediante:
1) Modificación enzimática previa, o sea, ficnización
2) Exposición previa al suero anti D incompleto y luego prueba de Coombs. Los glóbulos Du dan
una prueba de Coombs positiva en estas circunstancias. Se recomienda el segundo método.
Otra consideración todavía más importante respecto al Du, es que todos los que poseen el alelo
Du deben considerarse como donadores Rho. Negativos. Esto se debe a que el Du puede producir
anti D en un sujeto Rho. Positivos, pero receptores Rho. Negativos. Esto se debe a que el Du puede
producir anti D en un sujeto Rho. Negativo, y también a que algunos Du producen ellos mismos
anti D. Además los sujetos Du por “acción intergenética” no deben recibir sangre que contenga el
antígeno c, muy potente, en otras palabras, debe recibir sangre del genotipo Dce/dCe o DuCe/dCe
esta última generalmente corresponde a su propio genotipo.
Fundamento:
Ciertos eritrocitos Rho.+, alrededor del 1% con mayor frecuencia en la raza negra que en la
caucásica, no son aglutinados por el suero anti Rho. (anti D) pero después de ser expuesto a los
anticuerpos Rho. (D), darán una reacción positiva si se tata con suero de Coombs.
Generalidades:
Los hematies del grupo D presentan diferencias en cuanto a su reactividad; se acepta que varios
de los factores del sistema Rho. en ocasiones se expresan en forma débil o incompleta los más
importantes son: el Du, el Cw y el Eu en realidad solo el Du tiene importancia en el banco de
sangre debe sospecharse de ser Du, las sangres que son difíciles de clasificar como Rh positivos o
negativos, utilizando solo el suero anti-D
El paciente Du positivo debe recibir sangre Du negativa ya que se han reportado casos
que por recibir sangre Rho. positiva desarrollan anticuerpos Anti Rho. de especificidad Anti-D,
elfactor Du de Stratton, como es débil no es fácil determinarlo, pero conserva su capacidad
antigénica. Para investigar este grupo, la técnica de aglutinación con el suero Anti-D ha dado
resultados débiles, sin embargo ha servido para que los Anticuerpos se fijen y la prueba de
Coombs indirecta nos dará el resultado positivo; observando macroscópicamente el fenómeno de
aglutinación: el Antigeno Du se determina por la aglutinación de los glóbulos rojos en presencia
del suero Anti-D y Antiglobulina Humana
Material y equipo
Ø 1 gradilla
Ø 4 tubos 10 x 75
Ø 1 Centrifuga Sarofuge
Ø Suero Anti-D
Ø Suero de Coombs
Método en tubo:
Marcar dos tubos No 1 problema y No 2 control, agregar en cada tubo dos gotas de la suspensión
de glóbulos rojos.
Al tubo No 1 agregar una gota de suero Anti-D y una gota de Albúmina bovina al 22%, al tubo No 2
dos gotas albúmina bovina al 22%
Despues del último lavado, decantar completamente y agregar dos gotas de Antiglobulina humana
a cada tubo
10.Leer sobrenadante y despegar el boton del fondo del tubo cuidadosamente en busca de
aglutinación
Ø Si el tubo problema se observa con aglutinación se habla de la presencia del factor Du.
Ø Si hubiese aglutinación enlos dos tubos signifia que se trata de glóbulos rojos cubiertos o
bloqueados, por lo tanto si se trata de donador la sangre será desechada
Práctica No. 5
Dosificación de Hemolisinas
El primer paso en la reacción es la unión del anticuerpo con el antìgeno sobre la membrana del
eritrocito, la unión con su anticuerpo homólogo inicia entonces la secuencia del complemento que
produce la lesión litica. La sensibilidad óptima de un glóbulo rojo parece requerir
aproximadamente 1000 molécuas de anticuerpo, pero requerimiento mínimo en una sola
molécula de IgM o dos moleculas de IgG muy próximas, se ha observado que la cantidad del
complemento necesaria para la hemólisis completa de deter minado número de células, está
inversamente relacionada con la càntidad de anticuerpo suministrada.
Las isohemolisinas naturales son muy poco frecuentes, se ha señalado en algunos de los
sitemas de grupos sanguíneos las isohemolisinas inmunes se observan después de inyectar sangre
incompatibl
La presencia de hemolisinas en el suero de un donante del grupo «O» indica que esa
sangre solo puede ser transfundida a otro paciente del mismo grupo.
Fundamento: Se basa en la activación del complemento por la formación del complejo antigeno –
anticuerpo, entre el antígeno de superficie del eritrocito y la hemolisina, poniendo suero problema
ante suspensiones de globulos rojos «A» y «B». Se puede determinar el titulo de hemolisinas
mediante diluciones del suero problema.
Material y equipo
Ø 1 gradilla
Ø 6 tubos10 x 75
Ø 3 pipeta 1/10
Ø 1 centrifuga Serofuge
Tecnica:
Marcar dos tubos con las letras A y B que corresponden al tipo sanguíneo
Observar si existe hemólisis en el sobrenadante de cada tubo, en caso de duda volver a centrifugar
los tubos y reportar por escrito
Interpretacion de resultados:
Si a pesar de la centrifugación los glóbulos rojos no se sedimentan y el liquido del tubo es rojo,
indica que los glóbulos rojos se han hemolisado
El suero de un donador «O» con hemolisinas, solo se aplicará a un receptor del mismo grupo, no
se utilizará conpacientes «A» o «B «
Si el suero de una madre «O» hemolisa los glóbulos rojos de su hijo con eritroblástosis, es el
causante de la isosensibilización de la madre
Observaciones:
Dosificacion Aglutjninas
Objetivo: Al concluir la práctica el alumno identificará las aglutininas salinas de titulo elevado, que
caracterizan la sangre del llamado «donador universal peligroso»
El plasma de la sangre que ha de emplearse no de be contener aglutininas para los hematiés del
futuro receptor
La prueba cruzada menor debe realizarse con el suero neutralizado del donador, solo si
esta prueba no da aglutinación, podrá emplearse la sangre sin riesgo. Sangre completa del
«donador universal», para un receptor de otro grupo sanguíneo, los peligros relacionados con
transfusiones de sangre de donadores universales, pueden reducirse al mínimo por la extracción
parcial o completa del plasma.
Fundamento: Las aglutininas forman parte de los donadores universales. Para cuantificar el título
de isoaglutininas, secuantifica cualquier reacción de aglutinación de Anti A y Anti B que persista en
una dilución de 1:80 deberá considerarse de titulo elevado, donador universal peligroso.
Material y equipo:
Ø Gradilla
Ø 24 tubos de 10 x 75
Ø 3 tubos de 13 x 100
Ø 10 pipetas de 0 1
Ø 5 pipetas pasteur
Ø 2 pipeta 1ml
Ø 1 centrifuga Serofuge
Técnica:
En la gradilla colocar 3 hileras de tubos de 10 x 75, de 8 tubos cada una, marcar los tubos de la
primera hilera con: 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1320, 1:640 y 1:1280,
Realizar diluciones del suero o plasma «O», poniendo 5 ml, de solución salina en cada uno de los
tubos marcados, agregando 0 5m1, de suero o plasma del grupo «O» al primer tubo, mezclar y
tomar 0,5 ml de esta suspensión y ponerla enel siguiente tubo y así sucesivamente hasta terminar
desechando 0.5 ml de la suspensión final
Preparar supensión de glóbulos rojos en solución salina al 5% de los grupos «A» y «B», en los
tubos de ensaye 13 x 100
Añadir 0.1 ml de la suspensión preparada anteriormente de glóbulos rojos del grupo «A» a los
tubos de la segunda hilera y 0.1 ml de la suspensión de glóbulos rojos del grupo «B» a los tubos de
la tercera hilera
Depositar 0.1 ml de suero «O» diluido a cada uno de los tubos que contienen los glóbulos rojos
«A» y «B» teniendo cuidado de marcar correctamente los tubos con la dilución que se emplee
Incubar todos los tubos «A» y «B» a 37°C por treinta minutos
Interpretacion de resultados:
Se anotará la dilución a la que se ohservó la aglutinación en las dos hileras de tubos que
contienen la sangre A y B
Aglutinación más de 1:80 se considera de titulo elevado y por lo tanto solo transfundir a
paciente con sangre de su mismo tipo o sangre “O” pero solo concentrado eritrocitario.
Determinacion de Formula Roja
Práctica No. 7
Cuantificacion de Hemoglobina
Objetivo: Determinar los valores de la hemoglobina en la sangre del disponente.
Ø 2 tubos 13 x 100
Ø 1 pipeta volumetrica 5 ml
Ø Fotocolorimetro o espectofotómetro
Tecnica:
Se toman 0.2 ml, de sangre con la pipeta de Sahli y se diluyen en 5 ml de solución de cianometa
Valores de referencia:
Hombres de 15 a 18 grms por 100 ml
Interpretacion de resultados:
Determinacion de Hematocrito
Objetivo: Determinar los valores del hematocrito en la sangre del disponente, por
microhematocrito.
Fundamento: Se basa en la separación de los glóbulos rojos y el plasma mediante una adecuada
duración y velocidad de centrifugación capaz de separar el plasma y sedimentar los hematies el
volumen del plasma que queda entre la masa globular empaquetada.
Ø 1 tubo 13 x 100
Ø 2 capilares con heparina
Ø 1 mechero de alcohol
Ø 1 microcentrifuga
Ø 1 lector de microhematocrito
Tecnica:
El tubo de microhematocrito se llena por capilaridad a partir de una muestra de sangre venosa
bién mezclada, ocupando dos capilares
Los tubos capilares deben llenarse dos terceras partes y sellarse con la llama de un mechero, el
extremo vacio
Se centrifuga con el extremo sellado colocado hacia afuera de la centrífuga, equilibrando los tubos
Valores de referencia:
Hombre de 45 a 50%
Mujeres de 42 a 46%
Interpretacion de resultados:
Los resultados expresados en milimetros por ciento, cantidades menores de los valores de
referencia, no son aceptados como disponentes.
Practica No 9
Investigacion de Serolues
Generalidades: Sífilis es una de las principales enfermedades de transmisión sexual (ETS), puede
transmitirse por la sangre de una transfusión por lo que es indispensable en el estudio del
disponente, en ocasiones el donante niega todo antecedente de esta enfermedad y el exámen
físico no revela datos sospechosos, el estudio serológico de los probables disponentes deben
hacerse de rutina, se ha comprobado que la sangre refrigerada a 4°C por un lapso mayor de 3 días,
mata los treponemas que pudiera contener, no transmite la enfermedad pero sí las reaginas
específicas, por lo que las reacciones serológicas del receptor de sangre, se vuelven positivas en
forma temporal.
Las reaginas es el anticuerpo inmune contra la sífilis, apa recen en la sangre y liquido
cefaloraquideo de personas que padecen la enfermedad: las reaginas también se encuentran en
enfermedades producidas por treponemas, como son la lepra y el mal del pinto.
Material y equipo:
Ø 1 centrifuga clínica
1 agitador de placa
1 Microscopio
Tecnica:
Colocar una gota de suero inactivado en la placa de vidrio escavado y una gota del antígeno
preparado
Interpretacion de resultados:
R. P. R.
El reactivo tiene el VDRL, adicionado de cloruro de colina que sirve para hacer una
descomplementación química y un marca dor de carbón en partículas muy finas que dan color
negro o rojo, a las reacciones de aglutinación, las reacciones negativas tienen aspecto uniforme el
R P R presenta un reactivo esteril y listo para usarse, los equipos contienen además sueros control
de reactividad específica: reactivos, debilmente reactivos y no reac tivos.
Tecnica:
Coloque en una tarjeta del equipo una gota del suero o plasma del paciente con el popote de
plastico.
Extienda la muestra por todo el circulo con la ayuda de la punta del popote, sin permitir que el
suero se salga de la onlla del circulo
Sostenga la suspensión del antígeno, coloque el dispositivo goteador en posición vertical y agrege
exactamente una gotade la suspensión al suero o plasma en el area de la prueba
Coloque la tarjeta en un rotador mecánico durante 8 minutos a velocidad 100 rpm para una
mezcla homogénea
Interpretacion de resultados
Observaciones:
Al finalizar cada determinación, quite la aguja de la suspensión de antígeno, lave con agua
destilada, seque al aire, tape el recipiente y refrigere hasta que de nuevo sea empleado.
Practica No. 10
Hepatitis
En el cual se utilizan esferas de plástico cubiertas con Anti HB, cada suero problema se incuba
junto con una de estas esferas durante el tiempo de incubación si hay HB ag en el suero, el suero
problema reacciona con el Anticuerpo y cubre la esfera esta se lava y se añade Anti HB marcado
con, si la prueba es positiva, el anticuerpo radiactivo reacciona con el antígeno previamente ligado
y midiéndose el resultado con un contador de radiaciones gamma, este método es muy sensible y
específico.
Hay que tomar las precauciones adecuadas para la conservación de las soluciones
radiactivas, los materiales sólidos, esferas, placas y tubos contaminados con radiactividad, deben
desecharse siguiendo las normas de la Comisión de Energia Atómica.
Los sueros se absorben con partículas de látex cubiertas con globulina gamma de
cobayo, los sueros absorbidos se incuban con partículas de látex cubiertas con antiHBS mientras se
hacen rotar las muestras, la lectura es igual para la de hemaglutinación pasiva inversa.
El método de ELISA es similar al RIA pero en vez de utilizar antiHBS marcado con 1125,
se emplea un antiHBS marcado con una enzima después de la incubación y el lavado se añade un
sustrato para inducir un cambio de color si se ha ligado el complejo enzima antiHBS los resultados
se leen en un espextrofotómetro para medir la densidad del color. Este método tiene gran
sensibilidad y especificidad, además de que la lectura es objetiva; puede utilizarse un tipo de
lectura automatizada para leer e imprimir los resultadosnaturalmente su precio los hace
prohibitivos, todos los métodos de tercera generación pueden detectar partículas de un ng/ml.
En la utilización de las técnicas anteriores, es preciso los cuidados máximos de limpieza
y condiciones sanitarias, la zona para las pruebas de hapatitis deben estar separada del resto del
banco de sangre y el personal debe utilizar mascarillas, anteojos y guantes desechables, tratar los
materiales como si fueran capaces de transmitir agentes infecciosos.
Practica No. 11
Objetivo: Busqueda de los antígenos virales o anticuerpos producidos como respuesta a los
antígenos, en suero sanguíneo de una per sona infectada por el virus de la inmunodeficiencia
humana (VIH) .
No existen evidencias que apoyen la transmisión por contacto casual entre las personas
en ambientes escolares, sociales o de trabajo; no existe la evidencia de la transmisión por medio
de insectos, ni por tos o estornudos, asi como tampoco a través de agua o alimentos.
Pruebas confirmatorias
Pruehas presuntivas:
Actualmente existen varias pruebas para la detección de aticuerpos contra VIH estas pruebas
difieren en suprincipio funcional, lo cual da lugar a diferencias en tiempo de proceso, necesidad
de instrumentación analítica, necesidad de adies tramiento y experiencias del personal analista,
entre otras, ELISA (Eenzyme Linked Inmuno Sorbent Assay)
Material requerido:
Ø Micropipetas
Ø Tiempo de proceso:
Aglutinación:
Fundamento: Estos métodos hace uso de particulas, ya sea de látex, gelatina o bien hematies,
sensibilizados con antígeno de VIH, el contacto con un suero que contenga anticuerpos contra VIH
produce la aglutinación indirecta de las partículas, observable a simple vista.
Material:
Tiempo de proceso:
Latex 5 minutos
Gelatina 2 horas
Hematíes 2 a 3 horas.
Citoinmunoenzimatica.
Fundamento:
Este método emplea células infectada con VIH, colocadas en un pozo de un porta objetos, al
reaccionar con un suero quecontenga anticuerpos contra VIH estos se uniran a los antgenos de
VIH presentes en las células, dicha unión se pone de manifiesto mediante un conjugado de
proteina «A» estafilococica y el substrato correspondiente, produciendose coloración de la
membrana y citoplasma celular.
Material:
Ø Micropipetas
Ø Microscopio
Membrana sensibiltzada.
Fundamento: Eeste análisis hace uso de una membtana porosa sensibilizada con antígenos de VIH,
al depositar el suero problema sobre la membrana, la reacción ocurre instantaneamente,
drenandose rápidamente el líquido los anticuerpos unidos se ponen de rnanifiesto mediante un
conjugado especial que provoca la aparición de un punto rojo apreciable a simple vista.
Material: ninguno.
En todos los casos de pruebas presuntivas, un primer resulta dopositivo deberá verificarse
repitiendo el analisis con los mismos reactivos o preferentemente con reactivos de otro tipo.
Resultados repetidamente positivos en pruebas de esta calidad, deberán calificarse como
presuntivamente positivos y procederse a su confirmación mediante los metodos
correspondientes.
Existe también un ELISA que permite detectar las proteinas constitutivas del VIH
(antigenemia) esta prueba es útil en la detección muy temprana de la infección (2-4 semanas
después del contagio), cuando aun no es posible detectar anticuerpos circulantes.
Ø Inmunofluorescencia
Ø Radio-inmuno-precipitacion
Método que hace uso de tiras de papel, las cuales han sido impregnadas con las
diferentes proteinas constitutivas del virus, mediante un proceso previo de
inmunoelectrotransferencia. Las proteinas se encuentran distribuidas a lo largo de la tira de papel
en orden decreciente de peso molecular, en espacios discretos y bien definidos.
La tira asi preparada se coloca en un canal de plastico y se sumerge en una dilución del suero
problema; en caso de existir anticuerpos contra VIH, estos se unirán a la tira de papel en el punto
correspondiente a la localización de la proteina para la cual sean especificos. Tal unión se pondrá
de manifiesto mediante un conjugado enzimático Anti-inmunoglobulínico y el substrato
correspondiente, que dará lugar a la aparición de bandas obscuras sobre la tira.
No cumplen con el
criterio de positividad
Atualmente se cuenta con reactivs comercialmente disponibles tanto para VIH 1, como
para VIH 2.
Inmunofluorescencia
Este método consiste en utilizar células infectadas por VIH depositadas en pozos de un
porta objeto, el suero problema se coloca encima de un pozo con células infectadas y de otro con
células no infectadas, en caso de tener anticuerpos específicos contra el VIH, estos se uniran a las
células infectadas, mientras que las no infectadas no presentaran unión alguna, la reacción
antigeno-anticuerpo se pone de manifiesto por medio de un Antisuero Anti inmunoglobulínico
conjugado con fluoresceina, al ser observado en un microscopio de fluorescencia.
el recipiente.
Debe usarse bata o uniforme de laboratorio, de manga larga. Se utilizarán guantes para
evitar el contacto de la piel con la sangre, muestras que contienen sangre, articulos contaminados
con sangre, líquidos corporales, excresiones y secresiones, así como superficies, materiales u
objetos expuestos a ellos.
Material y equipo:
Ø 1 gradilla
Ø 4 tubos 10 x 75
Ø 6 Tubos 13 x 100
Ø 1 pipeta graduada 5 ml
Ø 1 mechero Bunsen
Ø 1 tripie
Ø 1 tela de alambre
Ø 2 centrifugas Serofuge
Ø Sueros anti A
Ø Suero anti B
Técnica:
Se obtiene saliva de una persona de tiro A conocidas y otra de tipo B colocando una torunda de
algodón debajo de la lengua, después se exprime en un tubo de ensayo colectar 3 ml
Preparar un testigo positivo, con cuatro gotas de salina y una gota del mismo suero anti-A.
Agregar a cada tubo una gota de glóbulos a conocidos, mezdar bien esperar 3 minutos y
centrifugar 2500 rpm, buscando aglutinación
Interpretación de resultados:
1 El testigo deberá ser aglutinado siempre
Objetivo: El alumno al finalizar la práctica determinará si dos sangres; del donador y del receptor,
son compatibles, para practicar la transfusión sanguínea.
b) Investigar Anticuerpos IgG que por su naturaleza no producen aglutinación y se deben utilizar
distintos «medios« que permitan demostrar su presencia, produciendo aglutinación o hemólisis.
Material y equipo:
Ø 1 gradilla
Ø 12 tubos 10 x 75
Ø 2 centrifugas Serofuge
Técnica:
1 2 3 4 5 6 7
Er Sr Ed Sd FM fm C
A la Fase mayor se le pone una gota de suero del receptor más una gota de globulos rojos al 5%
del disponente
A la fase menor se le pone una gota de suero del disponente más una gota de globulos rojos al 5%
del receptor
Al tubo control se le pone una gota de suero del receptor más una gota de globulos rojos al 5% del
receptor
Se centrifugan a 2500 rpm por 30″ y se lee desprendiendo suavemente el sedimento en busca de
aglutinacion de no existir aglutinación, se continuará
Se agregan dos gotas de Albúmina Bovina al 22% y se centrifuga a 2500 rpm por 30″ y se lee
11.Se llenan con solución salina 3/4 de ambos tubos (fase mayor y menor) se mezclan y se
centrifugan a 2500 rpm por 30″, se sacan de la centrífuga y se decantan y se vuelve a aplicar
solución salina (ésta operación se repite tres veces) en el último lavado, se decantan
completamente el tubo
12.Al sedimento residual se le agregan dos gotas de reactivo de Coombs a ambos tubos y se
centrifugan a 2500 rpm por 30″, se leen cuidadosamente para buscar que no haya hemólisis ni
aglutinación
13.Se le agrega a cada tubo una gota de células control se centrifuga a 2500 rpm por 30″ y se leen
en busca de aglutinación.
Conclusión:
Ø Prueba mayor: suero del receptor con globulos rojos del disponente (2 gotas de suero del
receptor más 1 gota de suspención de eritrocitos del disponente)
Ø Prueba menor: suero del disponente con globulos rojos del receptor (2 gotas de suero del
disponente más 1 gota de suspención de eritrocitos del receptor)
Ø Control: suero del recpetor y globulos rojos del receptor (2 gotas del suero del receptor más 1
gota de suspención de e ritrocitos del receptor )
Ø Si en todos los pasos no existió aglutinación o hemólisis, las pruebas son 100% compatibles y la
sangre puede transfundirse, en caso de existir aglutinación o hemólisis, en cualquiera de los pasos
se considera incompatibilidad, las pruebas se suspenden y se comienza a investigar otra bolsa de
sangre del mismo tipo sanguíneo y factor Rh, siguiendo los mismos pasos.
Ø Si la aglutina ción es en el tubo menor en salina se trata de una IgM del donante y es de
esperarse, en el caso de emplearse sangre «O».
Ø Cuandose efectua el cruce con receptores de tipo sanguneo distinto esta sangre puede
emplearse, de preferencia el paquete globular. Es de hacerse notar que tanto la aglutinación como
la hemólisis son macroscópicas y que en muy pocos casos es necesario utilizar el microscopio.
Este método por los numerosos pasos que hay que efectuar, al parecer es complicado,
pero la práctica continua del mismo se vuelve simple y automatizado y en muchas ocasiones de
acuerdo con la urgencia se puede reducir la incubación, con primera lectura a los 20 minutos, si se
reporta negativo, enviar la sangre a transfundir, continuando con el método hasta cumplir con los
tiempos señalados.
Las investigaciones de métodos más sencillos y gran confiabilidad, han llevado a buscar
que la velocidad de algunas reacciones antígeno anticuerpo de grupos sanguíneos, aumentan
considerablemente si la incubación se lleva a cabo en condiciones de ba ja fuerza iónica entre sus
ventajas, se encuentra el acortamiento de los tiempos de incubación, la posibilidad de detectar
algunos anticuerpos débiles que no pueden detectarse por otros métodos y la formación de
aglutinados más fuertes que los producidos por otras técnicas en la fase de Antiglobulina,
aumentan un tanto las reacciones débiles, probablemente debido a la unión inespecifica de los
componentes del complemento. Los reactivos que han de utilizarse en las técnicas deben
prepararse y controlarse con esmero, y las condiciones de las reacciones deben ser tan precisas
para evitar resultados positivos falsos no cabe duda de que los métodos con LISS, si se efectuan
adecuadamente son excelentes, siempre y cuando lo empleen pesonal debidamente entrenados
este recurso no es de uso común y su uso está restringido a muy pocos centros especializados.
Interpretación de Resultados
Ø Para el corrector manejo de los resultados se deberá anotar después de cada observación
Ø Aglutinación en cualquiera de las pruebas mayores no sera necesario proseguir con los
siguientes pasos, pués demuestra in compatibilidad
Ø Las anotaciones se pueden realizar en tarjetas diseñadas exprofeso y de las cuales cada
laboratorio contará con un modelo, cualquiera que éste sea debe contener los datos generales, de
receptor y donador, cada tarjeta debe ser adherida a la bolsa de sangre correspondiente y al
enviarse a la aplicación del paciente, se guardará en el expediente del mismo.
Practica No. 14
Prueba de Coombs
Objetivo: El alumno conocerá los eritrocitos sensibilizados por anticuerpos incompletos, que son
capaces de ser aglutinados por la Antiglobulina Humana.
Es util reconocer estos globu1os sensibilizados al combinarse con los anticuerpos globulínicos que
ya cubren su superficie el suero de coombs es ideal pués tiene anticuerpos contra las globulinas
séricas humanas que abarcan cuatro grandes alfa1, alfa2, beta y gamma, y dentro de estos grupos
se en cuentran anticuerpos Anti Rh incompletos, Anti-Duffi, Anti Kell el suero de Coombs se
obtiene por inyecciones repetidas de sueros humanos del grupo «O» a conejos el animal
sensibilizado de esta manera produce anticuerpos contra la fracción globulinica de las proteinas
séricas y contra anticuerpos incompletos que pueden encontrarse revistiendo a los hematíes o
bien es suspensión en el plasma, por lo que se llama Antiglobulina Humana, se preparan reactivos
de amplio espectro mediante la mezcla de sueros obtenidos de distintos animales.
La IgG no produce aglutinación de los eritrocitos, pero se fijan sobre ellos y permanecen
sin soltarse, al agregar el suero de Coombs se forman puentes entre los fragmentos cercanos y es
posible ver la aglutinación, revelando que esos eritrocitos estaban en realidad cubiertos de
anticuerpos.
Fundamento: La prueba directa se realiza cuando el Antiuerpo se ha fijado sobre el eritrocito «in
vivo”, permite establecer la sensibilizaci6n de los glóbulos rojos que tuvo lugar en el organismo. Se
usa para el diagnóstico de eritroblastosis fetal, anemia hemolítica y reacciones hemolíticas
postrasfusionales por sangre incompatible
Material y equipo
Ø 1 gradilla
Ø 4 tubos de 13 x 100
Ø 2 tubos de 10 x 75
Ø 1 centrifuga Serofuge
Ø Suero de coombs
Tecnica
Para identificar los glóbulos rojos sensibilizados es necesario remover la totalidad del suero de los
eritrocitos, mediante lavadas repetidas con suero salino. Este proceso es importante, pués si se
dejan residuos proteicos se neutraliza el suero de Coombs y se obtendrán falsos negativos
Se prepara una suspensión de glóbulos rojos al 5% de lacuál se colocan dos gotas en un tubo de
ensaye y se procede al lavado por tres ocasiones
Después del último lavado se resuspenden los glóbulos rojos nuevamente con una gota de
solución salina, agregar dos gotasde suero de coombs y mezclar
Incubar por 30 minutos a 37°C, extraer el tubo cuidadosamente y observar si existe aglutinación
en el fondo del tubo con leves movimientos de inclinación,
Se aconseja como testigo utilizar hematíes de adulto no sensibilizados del mismo grupo del
paciente. El testigo se prepara en un tubo poniendo una gota de sangre “O” Rh negativa y cuatro
gotas de solución salina más una gota de suero anti Rh, incubar media hora, lavar por tres veces
estos glóbulos y después se adiciona una gota de suero de Coombs
Interpretacion de resultados:
Si el tubo problema presenta aglutinación, los glóbulosrojos están sensibilizados por algún
anticuerpo incompleto
Técnica
En tubo poner cuatro gotas del suero promema y una gotade glóbulos rojos sensibilizados,
suspendidos en solución salina al 5%, si se investigan anticuerpos Rh se usan glóbulos rojos
tipo”O” Rh positivos
Se incuba a 37°C por una hora, se centrifuga el tubo a baja velocidad 2500 rpm x 1 minuto
Se lavan los glóbulos rojos sensibilizados tres veces con solución salina, desechando el
sobrenadante completamente en el último lavado, dejando solo el boton de eritrocitos en el fondo
Agregar dos gotas de suero de Coombs, mezclar perfectamente y poner en baño María a 37°C,
durante cinco minutos,
Centrifugar a baja velocidad 2500 rpm y buscar aglutinación en el fondo del tubo
Interpretacion de resultados.
Si se encontró aglutinación después del paso número 2, indica la presencia de aglutininas anti Rh
en el suero problema
Se puede realizar diluciones del suero problema para conocer el titulo del aglutininas anti-Rh que
existen en el paciente
Practica No. 15
Generalidades. Esta prueba fué descrita por primera vez en 1908 por Mc. Reschi y años más tarde
en 1945 por Coombs, Mourat y Race, aplicándola en la identificación de aglutininas Rh debiles e
incompletas. El suero de coombs es una Antiglobulina Humana, preparada por inmunización de
animales (conejos o cabras a los que se les inyecta suero humano o las fracciones de éste, los
anticuerpos incompletos, entre ellos los que explican la eritroblastosis fetal y la anemia hemolítica
adquirida, se adsorbe o se une al antígeno Rh fijos en la membrana del eritrocito, pero no los
aglutina, el suero Antiglobulina Humana, permite reconocer estos glóbulos sensibilizados, al
combinarse con los anticuerpos incompletos que ya cubren en superficie con lo cual se produce la
aglutinación.
Puesto que el suero humano contiene anticuerpos que pueden interferir en la prueba y
puede neutralizar el suero de Coombs, es necesario eliminar totalmente el suero de la muestra
sanguínea, mediante lavados repetidos con solución salina.
No se utilizan los sueros de sujetos “A” o “B” porque las substancias especficas de
estos, tendrían suero de Coombs con anticuerpos contra las aglutininas a y b, los anticuerpos
recubren con frecuencia los eritrocitos, pero no forman la malla necesaria que produce la
aglutinación; como es el caso de anticuerpos dirigidos a los determinantes Rh sobre los eritrocitos
humanos sin embargo la adicición de un antisuero Antiglobulina producido por una especi
heteróloga, produce marcada aglutinación.
Material y equipo
1 gradilla
4 tubos 10 x 75
1 centrifuga Serofuge
Suero de Coombs
Suero anti-D
Solución salina en pizetas
Tecnica
En un tubo de ensaye, se pqnen dos gotas de globulos rojos «O», cuatro gotas de solución salina y
dos gotas de suero anti-D
Lavar en tres ocasiones con solución salina a 3, 400 r p m, durante 15 segundos en cada ocasión
Para probar que los eritrocitos se encuentran sensibilizados, se toma una gota de la mezcla en otro
tubo y se le agrega una gota del reactivo de Coombs, se centrífuga a 3400 y si se aglutinan, estan
listos para usarse
Se agrega una gota de los globulos rojos Oo» sensilizados a cada uno de los tubos en que se realizó
el CCoombs en las pruebascruzadas
En caso de no encontrar aglutinación, se procederá a repetir todas las pruebas cruzadas, pues
existió un error en la manipulación o en la agrupación sanguínea.
Control de Calidad en el Banco de Sangre.
En forma periodica,
En forma sistemática
Libre de prejuicio
Ø Prevenir, ya que al llevar un control estricto podemos detectar los posibles errores aún antes de
que se presenten
Ø Corregir, cuando el error se presenta, mediante un análisis podemos ver la naturaleza humana,
de instrumentos o de la práctica de un método que nos lleve a ese error y corregirlo
Ø Modiflcar si ese error se convierte en sistemático, se podrá modificar parte o todo un proceso
que nos conduce a ese error, aún si esto implica cambiar un método
Un buen control de calidad nos debe reflejar todos los aspectos que intervienen en la buena
realización de nuestro trahajo, estos aspectos son:
Ø Instalaciones
Ø Equipo
Ø Procedimientos
Ø Personal
En suma el control de calidad, de esta área debe su vital importancia al echo de ser la suma de
cada uno de los procesos a que la sangre se ve sujeta antes de ser enviada para ser trans£undida.
Libreta de registro la base de esto es la libreta de registro, la cual, debe contener los
siguientes datos:
Ø Fecha de entrada
Ø No de registro
Ø Resultados de laboratorio
Ø Fecha de sangrado
Ø Fecha de caducidad
Ø Procedencia
Ø Fracciones obtenidas
Ø Institución o servicio a quién se entrega el producto
Ø Fecha de entrega
Ø No de registro
Ø Grupo sanguíneo y Rh
Ø Fecha de caducidad
Ø Resultados de laboratorio
Ø Verificar diariamente los datos y anotar los resultados en la hoja de registro correspondiente
Ø Grupo sanguíneo y Rh
Ø Producto
Ø Fecha de preparación
Colocacion de los productos verifigar diariamente, que los pro ductos estén en sus
respectivos sitios, deben estar agrupados por:
Ø Grupo sanguíneo y Rh
Ø Fecha de caducidad
El manejo depende del estudio cuidadoso del manual operativo propio de cada aparato, de la
correcta información del personal que lo utilize y del cuidado que se ponga al llevar a la práctica
esta información
El mantenimiento se entiende en ocasiones como reparación, sin embargo podemos distinguir dos
tipos de mantenimiento:
Ø Correctivo aquí entra la reparación, es el último recurso a considerar y será llevado a cabo por el
fabricante; al recíbir mantenimiento por parte del fabricante, este no debe ser aceptado sin antes
verificar que el equipo cumple con el funcionamiento que de él se espera y solo entonces aceptar
que el ser vicio recibido es satisfactorio
Control de calidad de refrigeradores.
Esto es muy útil en los casos en que no se cuenta con refrigerador dotado de graficador,
pues al tener el termómetro constantemente dentro del refrigerador y si es posible en cada
espacio, nos permite a través de la puerta si es de cristal, lo que marca el termómetro y registrarlo
en la hoja respectiva, in cluso con periodicidad más frecuente, la temperatura no debe diferir de
valor mas menso de 1°C, variación es el seguimiento detallado del cambio de temperatura que
sufren nuestros productos en un lapso de tiempo, para su medición se utiliza un graficador
adecuado, de acuerdoa las instrucciones del fabricante y diariamente se observa la gráfica, viendo
en ella en primer lugar si los productos han estado expuestos a temperaturas que salgan del rango
establecido instrumental debe renovarse todos los días.
Control de Calidad de Congeladores
Colocar un tubo (de preferencia en cada charola en posición invertida (de cabeza)
Observarlos diariamente.
Si los productos almacenados han sufrido variación (es) de temperatura que ocasionó
su descongelación (aún cuando los encontremos congelados), se verá en los tubos, los cuales
presentaran un escurrimiento o descenso del plasma contenido.
Material:
Ø Termometros
Técnica:
Interpretación de resultados:
Material:
Técnica:
Material:
Ø Isopos
Ø Agua destilada
Ø Microscopio
Técnica:
Objetivo: obtener el tiempo óptimo de centrifugación para cada aparato que se mida.
Material:
Ø Microcentrifuga
Ø Capilates
Ø Mechero
Ø Registrar los hematocritos obtenidos, record de calibración, fecba, tiempo óptimo y persona que
realizó el control
1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 5’
44 43 42 40 40 39
Control de Calidad de Centrifuga
Objetivo: verificar que las revoluciones por minuto que medimos en el aparato sean
reales:
Material:
Ø Centrifuga,
Ø Tacómetro
Ø 6 tubos de 10 x 75
Ø Albúmina
Ø Antiglobulina humana
Ø Antisueros A, B, AB y Rh
Tecnica:
Medios:
Interpretación de resultados:
Numerar las centrifugas (con código de inventario) anotando el tiempo y r.p.m. óptimos
de centrifugación para cada aparato.
Lo primero que debe garantizarnos, es que el aire que crcula dentro, esté esteril y no
contamine los productos preparados en su interior, aunque ya se mencionó, la limpieza es
fundamental, debe de hacerse la asepsia antes y después de utilizarla.
2 Introducir dos cajas de Petri, una conteniendo un medio enriquecido para bacterias, gelosa
sangre o BHT La otra un medio para desarrollar hongos como Sabburaud, abrir las cajas y esperar
10 minutos antes de cerrarlas, enviarlas a bacteriologia
3 Si existe crecimiento en cualquier de los medios es idice de que la campana no debe ser
utilizada en fracionamiento por sistemas semicerrados
4 La frecuencia para este estudio debe ser mensual como mínimo
Tecnica:
4) Observar la fotocelda
Interpretación de resultados:
Ø El resultado confible es más o menos de cinco unídades
Ø 1 gradilla
Ø 1 cronómetro
Ø 1 placa de vidrio
Ø 10 tubos 10 x 75
3 tubos 13 x 100
Ø Antisueros: A. B. AB y D
Ø Sangre: A, B, AB y D
2 Colocar una gota de solución de glóbulos rojos al 5% de cada grupo donde le corresponda
3 Colocar una gota de antisuero con su propio grupo, al mismo tiempo se acciona el
cronómetro, éste se detendrá cuando se forme la aglutinación
La especificidad se realiza con la técnica de avidez, pero con el grupo contrario, cuya
aglutinación será negativa ejemplo: Un antisuero A con células B, pero al poner un antisuero A
concélula A, aglutina.
3 Pasar dos gotas al siguiente tubo, mezclar y volver a pasar dos gotas al siguiente y
asisucesivamente, teniendo los tubos las diluciones: 2, 4, 8, 16, 32, 6 4, 128, 256, etc.
4 Agregar dos gotas de la solución al 5% de glóbulos rojo a a cada tubo, mezclar y observar
aglutinación
Interpretación de resultados:
anti-Al
avidez 15″
aglutinación 3+
Título 256
Anti-A2
avidez 30″
aglutinación 3+
título 128
anti-A1B
avidez 30″
aglutinación 3+
título 128
anti-A2B
avidez 30″
aglutinación 3+
título 128
Anti-B
avidez 15″
aglutinación 3+
título 256
anti-D Rh1
avidez 60″
aglutinación 2+
título 32
Coombs:
Material:
Ø 1 pipeta de 5 ml
Ø 3 pipetas Pasteur c/bulbo
Ø 1 placa de vidrio
Ø Fenoftaleina al 1%
Tecnica:
3 Realizar la misma maniobra en los tubos del segundo enjuage y en los tubos secos.
Interpretación de resultados:
Por lo tando la limpieza del material, no es el adecuado y se intesificará, del tal manera que todos
los tubos no haya vire de color, pues los restos de detergente, puede dar resultados falsamente
positivos de cualquier reacción que se busque en elmaterial.
Control de Calidad de Hemoderivados
Todos los procesos del control de calidad, van encaminados a obtener productos de
buena calidad, esto es que satisfagan las necesidades de las Instituciones que los utilizan y no
provoquen riesgos extra a los que cada transfusión por si misma esta sujeta.
Nos referimos a este como volumen neto; esto es la cantidad de sangre extraída a un
disponente. Independientemente del problema que podemos ocasionar al disponente, el volúmen
es irnportante ya que el bajo o nulo, rendiminto de nuestros productos pueden ser ocasionados
por un volúmen inadecuado.
1 Pesar 10 bolsas con anticoagulante de cada uno de los tipos utilizados en la captación y
obtener el promedio de esos pesos, a esto llamamos: Peso de la bolsa.
2 Al recibir una unidad pesarla y anotar el resultado, a esto lo llamamos Peso bruto
Calcular el volumen:
1 Para bolsas que contienen 75 ml de anticoagulante ACD el volúmen neto adecuado es de 500
mas menos 10% (450)
2 La frecuencia recomendada es del 1% del total y todas aquellas unidades suceptibles de estar
fuera del rango, tendrán que darle destino final.
Esterilidad.
2 Aire: Considerese que las bolsas de sangrado como producto de su fabricación, contienen
aire dentro de ellas y que está estéril, en algunas marcas la cántidad es excesiva por lo que su sola
presencia en la sangre no es indice de contaminación.
Ø Tubo colector, este puede observarse totalmente vacío con un llenado intermitente.
Ø En cualquier caso, apartarla, mantenerla entre 4 y 6°C, por tres días, para dar tiempo al
crecimiento bacteriano y enviarlas a control bacteriológico
Ø Defectos de la bolsa.-Los defectos tales como bolsas mal selladas, con picaduras, etc. se deben a
defectos en la fabricación o al mal manejo a que se ven sujetas, comprobar que el defecto
ocasiona la salida de sangre y en caso positivo desecharla.
Coagulos
Ø Revisar las esquinas y las uniones del tubo colector y conector en ocasiones se acumula sangre
en estos lugares dando falsa impresión de contener coágulos
Ø Toda sangre que contenga un volúmen demasiado alto tiene la probabilidad de contener
coágulos o microcoágulos y será manejada como sangre coagulada.
Hemólisis
Los cambios de temperatura que puede llegar a tener un refrigerador, sobre todo
cuando no contamos con registro gráfico y alarma, puede provocar destrucción de los globulos
rojos.
1 Peso neto. Los mismos cálculos que para sangre total, debe estar entre 206 y 350 grm
2 Hematocrito entre 70 y 80%, estos valores garantizan una fluides adecuada durante la
transfusión
3 Esterilidad, coágulos y hemólisis, las mismas medidas que para sangre total
Si el volúmen en ambos casos es menor, este plasm,.puede ser utilizado, pero puede ser indicacion
deuna mala técnica de fraccionamiento
2 Hemólisis, debe estar libre de hemólisis, la presencia de esta se puede observar por el color
rojizo del píasma, no confundirla con la contaminación de eritrocitos, en la hemólisis el color rojo
es siempre uniforme, aún después de centrifugar o dejar desedimentar, en la conta minación
conforme se sedimente se observan dos capas, una de color amarillo característico del plasma y la
otra de color rojo, en caso de haber bemólisis no debe utilizarse ni el plasma ni el paquete
globular.
3 Contaminación con eritrocitos, no debe haber contaminación con eritrocitos, por el peligro
de provocar una sen sibilización en el receptor un plasma contaminado indica una mala técnica de
fraccionamiento
4 Aspecto el color del plasma debe ser amarillo y translúcido, el plasma lipémico no debe ser
utilizado como fresco. Un plasma ictérico debe ser separado de los productos hasta no tener
resultados de laboratorio de bilirrubinas, trasaminasas, AgSHb, etc. Cualquier otro aspecto no
habitual imposibilita su utilización junto con sus productos, hasta conocer la causa que lo oiirigine.
6 Frecuencia míima, 1% del total o cuatro por mes, de cada uno de los productos.
Material:
Ø Jeringa de 10 ml,
Ø Unidad sanguínea
Ø Estufa a 55°C
Ø Microscopio
Ø Tubos de ensaye
Tecnica:
1 Verificar el peso neto de las bolsas, coágulos, de coloración, picaduras, burbujas y hemólisis
2 Se toman 6 ml, de sangre de la bolsa muestra, inoculando cada tubo con 2 o 3 cms e incubar
a 35°C.
4 Si se considera necesario también se sembrará en otros medios de cultivo como EMB para
enterobeacterias (gram neg), 110 para estafilococo (gram positivos)
5 Se deberá efectuar en estos casos, frotis de la sangre del paciente y de la bolsa, teñiendo con
gram ó azul de metileno para ver morfologia también se puede utilizar el medio de Bigg para
hongos (cándida albicans)
Interpretación de resultados: