CARACTERIZACIÓN Y COLORACIÓN DE HONGOS Y BACTERIAS

(LIMPIEZA, DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN)

MARLIN YOHANA GAMBOA CAICEDO

CÓDIGO (1.151.440.226)

DOCENTE:
LUZ DARY CAICEDO

UNIVERSIDAD SANTIAGO DE CALI

SEDE PAMPALINDA
LICENCIATURA EN CIENCIAS NATURALES Y EDUCACIÓN AMBIENTAL
FECHA DE ENTREGA:
12/OCT/2017
 INTRODUCCIÓN

El primer medio de cultivo llega probablemente cuando el microbiólogo

Brefeld, consigue aislar y cultivar espora de hongos en medios solidos
realizados a base de gelatina. Sn embargo este procedimiento no era el más
adecuado para las baterías (por su menor tamaño) pero en el año 1787 Lister
popularizo un método enfocado al cultivo puro basado en diluciones seriadas
en un medio líquido. En 1892 Wurtz impulsó el uso de los medios diferenciales,
incorporando indicadores de pH a la composición de ciertos medios con lo cual
se podía observar la producción de ácidos en la #fermentación en ciertos
microorganismos.
Por ende uno de los objetivos de este laboratorio es aprender y ampliar más
nuestros conocimientos; por eso estas primeras prácticas se encargaron de
expandir nuestros conocimientos acerca de las bacterias y bongos. (Medios de
cultivos, características, coloración, clasificación. Etc.) En este informe se
observan e identifican los diferentes tipos de bacterias y hongos, la siembra y
tinción de los mismos.
A partir de las observaciones de las practicas hechas en el laboratorio, se
observó un estudio detallado de los organismos mencionados anteriormente,
y que características deben cumplir para poderlas clasificar en dicho grupo o
categoría, también se nos permitió hacer la esterilización de cada uno de estos.
 OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL:
 Cuantificar e identificar los principales géneros de hongos ambientales
en ambientes interiores y fosas nasales de estudiantes de laboratorio
de microbiología 2015B y relacionar la presencia de hongos con
síntomas de alergias respiratorias.

OBJETIVOS ESPECIFICOS:
 Cuantificar e identificar los principales hongos ambientales presentes en
ambientes interiores de las casas o lugares de trabajo de los estudiantes
de laboratorio de microbiología.
 Conocer el número y género de hongos aislados en las fases nasales de
los estudiantes de laboratorio de microbiología 2015B.
 Determinar la sensibilización cutánea a los alérgenos fúngicos (Prick
test) de los principales hongos alergénicos presentes en el ambiente y
fosas nasales.
 Establecer si hay asociación entre los síntomas de alergias y el número
y género de hongos aislados en ambientes y fosas nasales de los
estudiantes que manifestaron tener o haber tenido síntomas de alergias
respiratorias.
 RESUMEN

El principal objetivo de esta práctica es aprender a limpiar, a desinfectar y

hacer la respectiva esterilización de los microrganismo a trabajar, también se
requiere hacer una detallada observación los diferentes resultados que se
obtuvieron en la siembra y coloración de bacterias y hongos; saber cuáles son
los tipos de cultivos y cuál es su preparación adecuada. Como es de esperarse
la práctica nos ayuda a comprender fácilmente la información sobre cómo
identificar un hongo a través de las observaciones microscópicas, cuales son
los medios de cultivos y como se hace la respectiva coloración.
En el laboratorio de micro biología, se sigue paso a paso la guía que la docente
envía con su respectivo orden, realizando procesos que más adelante mostrare
en los procedimientos.
Utilizando los diferentes recursos que el laboratorio nos brinda y realizando
cada práctica se nos permite enriquecer nuestros conocimientos. Estas
prácticas fueron de mucha importancia ya que se pudo aprender por medio de
hongos y bacterias, identificar algunas de las diferentes clases de hongos y
bacterias, y hubo hongos que no fueron utilizados por ser dañinos.
 MARCO TEÓRICO

MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite
el desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para
realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las
muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar
colonias.
Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir
en condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno,
colonizando una amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los
requerimientos más importantes para su desarrollo están el carbono, el
oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno. Muchas bacterias sin
embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento específicos en
forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros.

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Según su origen:
 NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de
origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y
cuya composición química no se conoce exactamente.
 SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química
definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados
reproducibles.
 SEMISINTÉTICOS: son los sintéticos a los que se les añaden factores
de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como
por ejemplo extracto de levadura.

Según su composición:
  MEDIOS DE CULTIVOS SIMPLE: tienen requerimiento de cultivos
simples y son utilizados para bacterias que son poco exigentes.
 MEDIOS DIFERENCIALES: son utilizados cuando se desea poner de
manifiesto una propiedad especial.
 MEDIOS SELECTIVOS: se utiliza cuando se desea suprimir el
crecimiento de unos microorganismos y favorecer el desarrollo de
otros.
La limpieza y la desinfección son procedimientos que nos sirven para mantener
el laboratorio libre de contaminación ambiental y asi mantener un área de
trabajo limpia, saludable y segura. Esto nos ayuda a reducir la contaminación
y una mayor calidad de los resultados esperados. La desinfección es el
conjunto de operaciones que tiene como objetivo la reducción temporal del
número total de microorganismos vivos y la destrucción de los patógenos y
alterantes; sin embargo la esterilización busca la obtención definitiva de un
medio completamente exento de gérmenes. La presencia de microorganismos
en cualquier ambiente es de especial significado para los trabajos realizados
en microbiología. El conocimiento de este hecho debe tenerse en cuenta con
el propósito de mantener libre de microorganismos los materiales hasta su
organización. Los microrganismo presentes en el aire como no alcanzan a
desarrollarse solo se mantiene hay, persisten por lo tanto, las especies más
existentes a la desecación como las conidias y esporas de hongos, cualquier
clase de batería predominando los cocos.

COLORANTE: Los colorantes son sustancias de origen químico o biológico,

generalmente tintes, pigmentos, reactivos u otros compuestos, empleados en
la coloración de tejidos microorganismos para exámenes microscópicos,
debiendo tener al menos, un grupo cromóforo que le proporcione la
propiedad de teñir.

Colorantes según su origen:

 NATURALES: son extraídos de animales y sobre todo de plantas.
_Hemateina
_Azul de índigo
_Carmín
 ARTIFICIALES: son preparados artificiales obtenidos en su mayoría del
Alquitrán de Hulla. Son colorantes de Anilina, pueden ser ácidos, básicos
y formar sales para ser neutros.
_cristal violeta
_violeta de genciana
_fucsina básica
_Ácido pícrico
_Azul de metileno
Colorantes según su comportamiento químico: en general este
tipo de colorantes, dependiendo de su estructura físico-química se
unirán de una forma más estable a la estructura que tiñe.
 COLORANTES ÁCIDOS O ANIÓNICOS: son aquellos donde la carga
radical colorante es negativa, corresponde fundamentalmente a
colorantes citoplasmáticos, ya que los citoplasmas de las células se
consideran básicos, captando muy bien los colores ácidos.
_Eosinas
_Auraminas
 COLORANTES BÁSICOS O CATIÓNICOS: son aquellos donde la
carga del ion cromóforo es positiva. Corresponden a colorantes que
tiñen estructuras de carácter nuclear o similar, que son ácidas o
ligeramente ácidas, es decir cargadas negativamente.
_Fucsina Básica
_Cristal violeta
_Violeta de genciana
_Azul de metileno
_Tioninas
 COLORANTES NEUTROS: son una sal compuesta de un colorante
ácido y un colorante básico.
_El eosinato
_Azul de metileno
 COLORANTES INDIFERENTES: son colorantes insolubles en agua y
solubles en alcohol donde no predomina la carga positiva ni la carga
negativa pero tampoco tiene un carácter neutro; son los colorantes de
los lípidos.
 _Sudan II
_Negro sudan

CUESTIONARIO #1

1) ¿Qué métodos son utilizados en el momento para la

esterilización de materiales y medios de cultivos del laboratorio
de microbiología?
__ Calor __ Fuego directo __ Calor seco __ Estufas __ Calor húmedo
__ Autoclave.
2) ¿Qué son las membranas millipore? ¿para que se utilizan?
Una membrana millipore es una membrana que tiene agujeros tan pequeños,
que las bacterias no pueden pasar a través de ellos. Se utiliza para la filtración
ultrarrápida de medios de cultivos de tejidos, aditivos, tampones y otras
soluciones acuosas, también se utiliza en muchas de las unidades de filtración
estériles lista para usar.
3) ¿Cuál es el fundamento de la esterilización intermitente?
Su fundamento consiste en someter el producto a calentamiento intermitente
con vapor de agua producida mediante ebullición (100°C) durante 2º minutos
repitiendo el proceso por 3 o 4 ocasiones a intervalos de 24 horas.
4) ¿Cuál es el agente más eficaz como agente de esterilizante, el
calor seco o el calor húmedo? ¿Por qué?
El calor húmedo porque puede penetran más rápidamente que el calor seco
porque las moléculas de agua conducen mejor el calor que las moléculas de
aire.
5) ¿A qué temperatura en grados F equivalen 121 grados
centígrados? 249, 8
 PREPARACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO
(CUESTIONARIO #2)

1) ¿Qué nutrientes requieren los microorganismos para su

crecimiento?
Necesitan nutrientes como:
a) MACRONUTIENTES: carbono, hidrogeno, oxígeno y nitrógeno.
b) MICRONUTRIENTES: fósforos, potasio, azufre, magnesio.
c) Vitaminas y hormonas
d) ELEMENTOS TRAZAS: zinc, cobre, manganeso, molibeleno, cobalto.

2) ¿Qué propiedades deben tener los medios de cultivo?

__ Temperatura __ Grado de humedad __ Presión de oxígeno y también un
correcto grado de acidez o alcalinidad __ Fertilidad __ PH __ Trasferencia.
3) ¿Cómo es la presentación comercial de los medios de cultivos
para microorganismos? ¿Qué ventajas tiene el medio de cultivo
granulado?
El medio de cultivo granulado tiene las ventajas de reducir significativamente
la formación del polvo de trabajo, también limita enormemente la
propagación de los componentes nocivos y otras sustancias de los medios que
no suelen considerarse peligrosas, pero que pueden inducir reacciones
alérgicas, si son inhaladas por el personal.
4) ¿Cómo se clasifican los medios de cultivos según su estado
físico, composición y propósito?
a) ESTADO FÍSICO: líquido, sólido y semisólido.
b) COMPOSICIÓN: definida, complejo y mínima.
c) PROPÓSITO: selectivos, diferenciales y de enriquecimiento.

5) ¿Cómo se deben conservar los medios de cultivos?

__ Luz ambiental __ PH __ Temperatura __ Esterilidad del medio __ Utilizar
agua destilada __ Utilizar materiales de vidrio bien lavados.
 6) ¿Qué requisitos se debe cumplir para una buena preparación de
un medio de cultivo?
__ Nombre del medio y lista de componentes, incluido cualquier suplemento
__ Fecha de vencimiento del medio __ Condiciones de almacenamiento __
Control de esterilidad __ Control de crecimiento de los microorganismos no
deseados, y criterios de aceptabilidad __ Controles físicos y criterios de
aceptabilidad aplicados __ Fecha
de emisión de las especificaciones.
7) ¿Qué cuidados se deben tener para el vertido del medio y las
cajas de Petri y en los tubos con agar inclinado?
__ Cajas Petri: para evitar la formación de góticas de condensación de agua,
en las tapas de las cajas de Petri deben verterse en ellas 20ml del medio de
cultivo estéril y enfriado a una temperatura de 45°C al resguardarlo del
mechero.
__ Tubos con agar inclinado: los tubos llenos con medios de cultivo
esterilizados todavía líquidos, se colocan con una posición inclinada de tal
forma que forme una capa aproximadamente de 3cm y una superficie
inclinada de iguales dimensiones, el medio de cultivo se deja solidificar.
8) ¿Qué posibles efectos se pueden encontrar en la manipulación
de los medios de cultivos?
__ Los medios de cultivos deshidratados deben almacenarse siempre en
lugares fresco y a temperatura ambiente, protegidos contra humedad y luz. El
material que ha sufrido cambios sustanciales, tales como: hidratación,
endurecimiento y cambios de color deben destacarse.
__ Cuando se va a esterilizar debe asegurarse en seguir las instrucciones de
tiempo presión y temperatura.
__ El medio esterilizado deben ser enfriado a 45 – 60°C en baño María, para
evitar la formación de agua de condensación.
__ Los medios de cultivos deben mantenerse en sitios oscuros, bolsas plásticas
para evitar desecarse.
__ Evite el congelamiento de los medios preparados.
9) ¿Cuántas clases de cultivos podemos encontrar?
__ Medios de cultivos naturales
__ Medios de cultivos sintéticos
__ Medios vivos

CUESTIONARIO #3

1) ¿Por qué se utiliza el plate count?

Es un medio de crecimiento microbiológico comúnmente usado para evaluar
o monitorear el crecimiento bacteriano ¨Total¨ o viable de una muestra. El
conteo estándar de placa (SPC) se utiliza con un indicador del nivel de bacterias
en los productos lácteos; la placa se utiliza para estimular la concentración de
microorganismos en un cultivo o una solución de ese cultivo.
2) ¿Qué clase de microorganismos crece en agar PDA? ¿Por
qué?
El agar de patata y dextrosa es el medio más utilizado para el crecimiento de
hongos y levaduras que atacan a las plantas vivas y materia vegetal muerta en
descomposición.

3) ¿Qué otras técnicas se utilizan para el análisis

microbiológico del aire?
El análisis microbiológico del aire puede consistir en un recuento de placa de
microrganismo aeróbicos nesofilos (número de Usf por metro cúbico del aire)
que puede completarse con una investigación de la presencia de determinadas
microorganismos patógenos. Son dos las peculiaridades destacables del
análisis microbiológico del aire sobre los análisis de otros tipos de muestras.
a) Las bacterias viables presentes en el aire suelen estar lesionadas debido
a una deshidratación. Por lo tanto no es conveniente recoger las
muestras del aire sobre medios selectivos, si no sobre medios que
permitan redificación de esos microorganismos.
b) Las técnicas de tomas de muestras son totalmente distintos de los que
hemos estudiado hasta a hora.
__ Inerciales __ Filtros.

MATERIALES Y PROCEDIMIENTO

En las prácticas realizadas se hizo el uso de materiales como:

 Mecheros de gas
 Mechero bunsen
 Asas bacteriólogas
 Asas micológicas
 Estereoscopios
 Lámpara de mercurio
 Marcador sharpie
 Cinta de en mascarar
 Lápiz
 Cultivos bacterianos del medio ambiente
 Caja de porta objetos
 Caja de cubre objetos
 Encendedor
 Papel periódico
 Cubetas para coloración
 Goteros de solución salina
 Cristal- violeta
 Lugol
 Alcohol acetona
 Palillos estériles
 Aceite de inmersión
 Para la esterilización del material el procedimiento fue el siguiente:

Esterilizar en auto clave a

21°C y 15 psi durante 20
minutos o más tiempo.

Limpiar bien las cajas y

enjugar.

Enjuagar con
agua destilada.

Secar las cajas a

temperatura ambiente
Limpieza de o en un horno

cajas Petri
Envolver las cajas de
Petri con papel kraft

Esterilizar en auto clave

a 121°C y 15 psi
durante 15 minutos.

Si utiliza autoclave
debe secar las cajas en
el horno.

Almacenar las cajas en un

lugar limpio, hasta el
momento de su uso.
 Para la preparación de los medios de cultivos se hizo el respectivo
procedimiento:
 Preparar 500ml de agar nutritivo o plate count
 Preparar 500ml de agar de nutritivo o plate count más 5% de cloruro
de sodio.
 Preparar 500ml de agar PDA + 5% de cloruro de sodio.
 Preparar 500ml de DRBC

1) pesar el erlenmeyer o
pesasales la cantidad de
medio que va a necesitar.

6) Una vez esterilizados los medios

se envasan las cajas de Petri,
siguiendo las indicaciones del 2) Agregar el agua destilada y
instructor. Estos procedimientos se dejar en reposo 5 minutos.
trabajan en ambientes estériles.

5) Colocar el erlenmeyer 3) Al cabo de este tiempo se

dentro del autoclave y hierve esta solución teniendo
esterilizar 121 grados cuidado que no se vaya a
centigrados y 15 psi. derramar.

4) Dejar reposar un poco,

taponar con algodón y sellar
con papel aluminio o papel
Kraft.
 Para la práctica de microorganismos en el ambiente, el procedimiento
llevado a cabo fue el siguiente:

Destape 1 caja con agar PDA

Diríjase al sitio que le +5% de sal, 1 caja con DBRC, 1
corresponde analizar. caja con agar plate count y una
caja con plate count agar +5%

Tape la caja y séllela con cinta

Déjela expuesta durante de enmascarar o
20 minutos. preferiblemente con
espadrapo.

Déjela incubando a temperatura

ambiente. Observe diariamente Guárdelos en la nevera,
el crecimiento de bacterias, sí PROCEDIMIENTO cuando ya observe
tiene agar plate count o de crecimiento en los medios de
hongos, si tiene agar PDA o DRBC cultivos para bacterias

Se harán observaciones Se dejará una caja de cada miedo sin

macro y microscópicas de abrir. (Como testigos de esterilidad)
estos hongos y bacterias.
 Procedimiento para la preparación y fijación de las bacterias para la tinción.
Con un asa de siembra coloque una gota pequeña de agua o solución salina
estéril y mezcle bien con un poco del crecimiento bacteriano del cultivo.

Un calor excesivo estropearía

la forma normal y la estructura
de los microorganismos que se
3) Cuando se halla se
cado el frotis, pase el van a teñir.
porta objetos tres
2) Seque los porta
veces por la llama
objetos al aire.
del bunsen con la
1) Extiéndala la gota capa hacia arriba.
sobre el porta
objetos formando
una capa fina.
 RESULTADOS

CARCAT. CARACT.
ANÁLISIS MICROORGANISMOS MÉTODO MICROSCOPICAS MICROSCOPICAS.

Superficie: Lisa
Color: Blanca
Forma: Circular
Borde: Entero o
SIEMBRA continuo
HONGOS Y BACTERIAS Elevación: Plana

Superficie: Rugosa
Color: Blanca
Forma: Filamentosa
Borde: Ondulado
Elevación: Elevada

Superficie: Rugosa
Color: Amarilla
Forma: Filamentosa
Borde: Ondulado
Placas de Elevación: Plana
HONGOS Y BACTERIAS SIEMBRA
hongos y
Superficie: Lisa
bacterias
Color: Amarilla
Forma: Puntiforme
Borde: Entero
Elevación: Plana

HONGOS Y BACTERIAS
Superficie: Lisa
Color: Amarilla
Forma: Puntiforme
Borde: Entero
Elevación: Plana

SIEMBRA Superficie: Lisa

Color: Rosado
Forma: Circular
Borde: Entero o continuo
Elevación: Plana
Textura:
Algodonosa
Color: Blanco
HONGOS Y BACTERIAS SIEMBRA Topografía: Radiada
Textura: Polvosa
Color: Blanco
Topografía: Liso
SIEMBRAjhsdjshkofksjlfhiudsuFKLMHSUdfyioskldnfhahsyofkjSDKGHYdfshhidskfhjsDHFH
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