TECNICAS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS

Maryurli Espinoza Olmos

Facultad de Educación, Programa de Licenciatura en Biología y Química, Laboratorio de
microbiología, Grupo 19, Ciudadela Universitaria, Universidad del Atlántico, km 7 Vía Puerto
Colombia, PBX: 3197010, Barranquilla, Atlántico, Colombia.

Resumen:
las bacterias hacen parte de los diferentes ambientes, al igual que los demás seres vivos.
Los microorganismos para su crecimiento necesitan de muchos factores, siendo uno de los
más importantes, contar con los nutrientes adecuados, y sobre todo tener unas
condiciones ambientales óptimas para que estos microorganismos se puedan desarrollar.
Uno de los métodos más utilizados en el laboratorio para el cultivo y aislamiento de
bacterias, es el de estrías en superficie el cual tiene como objetivo agotar la muestra de la
superficie para obtener colonias separadas y de esta forma poder observar las
características de las colonias.

Palabras claves: Bacterias, técnicas de cultivo, aislamiento.

Abstract: bacteria are part of different environments, like other living beings. The microorganisms
for their growth need many factors, being one of the most important, having the right nutrients,
and above all having optimal environmental conditions for these microorganisms to develop. One
of the methods most used in the laboratory for the cultivation and isolation of bacteria, is that of
striae on the surface which aims to exhaust the sample of the surface to obtain separate colonies
and in this way to be able to observe the characteristics of the colonies.

Keywords: Bacteria, cultivation techniques, isolation.

De manera general los métodos de

Introducción:
En todos los ambientes podemos encontrar
los diferentes tipos de microorganismos,
para hacer el estudio de un
microorganismo en particular es necesario
separarlo dela población mixta en la cual
se encuentra. Para este proceso se emplean
una serie de técnicas de aislamiento las
cuales tendrán como finalidad la obtención
de cultivos puros.
aislamiento incluyen: separación de los
Microorganismos mediante diferentes
tipos de métodos, como lo son la siembra
por agotamiento y mediante diluciones
seriadas y siembra por vertido en placa.
También se puede realizar mediante la
utilización de medios de cultivos
selectivos y diferenciales, son muchos los
métodos utilizados para obtener este tipo
de cultivos puros.
Como ya se mencionó anteriormente, para
la realización del estudio de este tipo de
microorganismos y de todas sus
propiedades, es necesario separar unos de
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otros y trabajar con especies aisladas, Temperado a 45°C

obteniendo cultivos puros.
Un cultivo puro es aquel que contiene un
solo tipo de microorganismos y que
generalmente procede de una sola célula;
en donde el crecimiento de esta origina en
medio sólido, una masa de células recibe
el nombre de colonias.
En donde el aspecto de estas permite
diferenciarlas entre las distintas especies
microbianas
Objetivos:
 Aprender cuales son los medios
más utilizados para el cultivo y
aislamiento de bacterias a través
de diferentes muestras.
 Observar la composición de los
diferentes medios de cultivos
utilizados en el laboratorio.
 Diferenciar las características de
las bacterias, según el tipo de
medio utilizado.
Materiales y reactivos:
 1 caja de Petri con agar nutritivo
(por grupo de trabajo)
 1 caja de Petri estéril vacía
 20 mL de agar nutritivo fundido y
 1 tubo con agua destilada
 1 tubo con caldo nutritivo
 1 tubo con agar nutritivo en plano
inclinado
 1 asa de inoculación
 1 aguja de inoculación
 1 mechero de alcohol
 1 encendedor
 Cinta de rotular
 Marcador (sharpie)
 Cepa Gram positiva
(Staphylococcus aureus)
suministrada por el profesor
 Cepa Gran negativa ( Escherichia
coli) suministrada por el profesor
Procedimiento
En el laboratorio de técnicas de
cultivo y aislamiento de bacterias
se pretende conocer cuáles son los
métodos utilizados para el
aislamiento de bacterias.
Para esto se lleva acabo el
siguiente procedimiento.
Cultivo en cajas de agar:
Muestra de la mesa de trabajo:
 En la parte posterior de la caja de
Petri y con ayuda del marcador se
hizo una división de cuatro
cuadrantes.
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 Se flameo el asa, y se dejó enfriar. Petri, la cual estaba dividida en

 Tomamos la muestra del inoculo cuatro cuadrantes.
 Estriamos el primer cuadrante y  Cada grupo tomo un
cerramos la caja. cuadrante y escogió una
 se flameo el asa nuevamente y se colonia de su respectivo
dejó enfriar. cuadrante:
 Rozamos el asa en la primera  1 grupo tomo el primer
muestra para hacer el segundo cuadrante
grupo de estrías en el segundo  2 grupo tomo el segundo
cuadrante. cuadrante
 Luego se volvió a flamear el asa, se  3 grupo tomo el tercer
destapo la caja y se tomó el cuadrante
inoculo del segundo cuadrante  4 grupo tomo el cuarto
para hacer estrías en el tercer cuadrante
cuadrante.  5 grupos volvió a repetir la
 Luego sin flamear el asa, se muestra del primer cuadrante.
inoculo la muestra y se hicieron  Primero flameamos la aguja de
estrías más abiertas en el último inoculación, la enfriamos a un
cuadrante. extremo de la caja.
 Finalmente se incubo la caja de  Luego destapamos la caja de
Petri a 37° durante 24 a 48 horas, Petri, cada grupo tomo su
para observar el crecimiento muestra respectiva, cerramos
obtenido. la caja.
 Luego los compañeros hacen el  Después con la aguja ya
mismo procedimiento pero con flameada tomamos la muestra
muestras del cuero cabelludo, y y flameamos la boca del tubo.
las muestras de baño.  Todo el procedimiento se
realizó cerca del mechero
Cultivo en tubos
 inoculamos, y flameamos
Muestra de baño nuevamente la boca del tubo,
 Tomamos la muestra de baño lo tapamos.
que teníamos en la caja de
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 Esterilizamos la aguja y diluyendo de tal manera que en las estrías

finalmente se incubo a 37° iniciales hay un crecimiento progresivo de
durante 24 a 48 horas para colonias y a lo largo de las ultimas estrías
observar el crecimiento se desarrollaron colonias bien aisladas
obtenido. una de la otra, en forma circular y
puntiforme con elevaciones cóncava y
bordes de enteros a ondulados con color
amarillo pardo. Como lo muestra la Figura
DISCUSION Y RESULTADOS
No. 1.
La siembra por estrías es en general es el
En cuanto al crecimiento de
método más usado de siembra en placa.
cultivo de microrganismos en
El asa con cultivo previamente
el tubo de ensayo de agar
esterilizado e introducida en una
inclinado las estrías de cepa
suspensión de microorganismos se utiliza
No.4,se muestran de aspecto
para hacer estrías paralelas en zig-zag
lechoso y forma equinulada y
sobre una placa de
crecimiento abundante, como
agar(Stanier,1992,p18).
se observa en la figura No.2.
Como resultado, se observó en el inoculo
que en cada estría sucesiva se va

Figura No.1. Siembra de cultivo en cajas de agar, se observa un crecimiento positivo de

microrganismo.
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Figura No.2 Crecimiento de cultivos de microorganismos en tubo de ensayo en agar

inclinada (cepa No 4, muestra X)

Conclusión en cajas de agar y cultivo en tubos

Habiendo ya terminado nuestra
experiencia de laboratorio,
podemos decir que, luego de
realizar una flexión pertinente
frente al trabajo realizado, los
objetivos planteados fueron
cumplidos, ya que se llevó a cabo
el método de siembre en cultivos
con agar inclinados.
Gracias a esta experiencia
pudimos aplicar los conocimientos
adquiridos durante la práctica,
profundizar más en los mismos y
aprender que los procesos de
esterilización y desinfección son
importante en la microbiología, ya
que son la puerta para la siembra
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y aislamiento de colonias en más fácil de identificar que en los cultivos

microrganismos, y por ende el
estudio de estos mismos para el
avance de la ciencia. Todo esto nos
llevó a dar respuesta a los
siguientes interrogantes
CONSULTA
1) ¿Qué es el agar y de donde se obtiene?
Es una sustancia gelatinosa formada por
polisacárido procedente de la pared
celular de las algas marinas.
Se obtiene de las algas marinas del genero
Gellidium
2. ¿Por qué el agar nutritivo es un medio
general para el cultivo de bacterias?
Es muy útil porque permanece solido a
altas temperatura y porque se distinguen
mejor las bacterias en la superficie
permite el cultivo, aislamiento y
determinación de las actividades
metabólicas
no puros que contiene varias cellas.
¿Por qué razón no debes compartir el
mechero de Bunsen?
El mechero debe ser asignado uno para
cada grupo de trabajo para evitar
accidentes o quemaduras en el
laboratorio
4. ¿Cuál es la razón para flamear los tubos
antes y después de cada transferencia?
Es necesario flamear los tubos antes y
después de cada transferencia para evitar
la contaminación con otro tipo de
microorganismos diferente al que se
desea inocular crezca en ese medio.
5. ¿Explica porque debes evitar que el asa
llena de inoculo toque la boca del tubo
fuente o del tubo a ser inoculado?

3. ¿Cuáles son las ventajas de un cultivo
puro?
Las ventajas de un cultivo puro es que
proviene de colonias que contienen una
sola célula, en la cual solo hay un tipo de
microorganismo, por lo tanto es mucho
El asa llena de inoculo no debe tocar la
boca del tubo para evitar que las colonias
crezcan en la parte superior, ya que se
debe inocular en el fondo para obtener
buenos resultados.
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6. ¿Cuándo tomas un inoculo de la caja de Las cajas de agar deben mantenerse

Petri? ¿Por qué es necesario tocar una siempre invertidas para evitar que el
parte estéril del agar con el asa antes de agua de condensación caiga sobre el
tocar el crecimiento bacteriano? cultivo.

Es necesario tocar la parte estéril de la

caja antes de tocar el crecimiento, para Bibliografía:
enfriar el asa y evitar romper la muestra.  Estanier Y. Roger, (1992).
Microbiologia (2da ed.)
7. ¿Por qué el asa debe ser flameada
Madrid,Reverté
antes y después de todos los
procedimientos de siembra?
 Microbiología general, Tema 2-
Cultivo de microorganismos.
El asa debe ser flameada antes y después  http://www.unavan.es/genmic/m
para esterilizarla, de esta forma evitar la icrogral/Tema%2002.%20cultivos
presencia de microorganismos no %20de%20.
deseados, y finalmente obtener las  Microorganismos.pdf fecha de
colonias requeridas. consulta: 22-04-2010.
 Vullo, D; M Wachsman, L.
Alche.2000. Microbiología en
8. ¿Por qué las cajas de agar deben práctica. Manual de laboratorio
mantenerse para la enseñanza de la
¿Invertidas durante la incubación? microbiología básica y aplicada 1
edición. Atlante. S .R. Argentina.

Anexo

Evidencias de procedimiento paso a paso

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