1. Antibiograma difuzimetrica. Principiu, interpretare.

Definitie​: metoda de testare a sensibilitatii/rezistentei la substante

chimioterapice a unei tulpini bacteriene izolate si identificate

● indicatiile antibiogramei​:
○ in infectii cu etiologie bacteriana, determinate de germeni cu
sensibilitate variabila la antibiotice
○ in infectii bacteriene severe, sistemice (septicemii, endocardite,
meningite, peritonite etc.) care necesita spitalizare si tratament de lunga
durata
○ in infectii bacteriene localizate, cu tendinta la cronicizare (infectii urinare,
biliare, otice, osteomielite, escare etc.) in care exista riscul selectarii de
tulpini rezistente la antibiotice, datorita persistentei indelungate in
organism si supuse permanent presiunii selective a diverselor scheme de
administrare a antibioticelor
○ in infectii intraspitalicesti: determinate de tulpini bacteriene
(​Staphylococcus aureus​ meticilino- rezistent/MRSA, ​Enterococcus
faecium​ rezistent la vancomicina/VRE, ​E. coli, Klebsiella pneumoniae
producatoare de betalactamaze cu spectru extins/ESBL, ​Acinetobacter
baumanni, Pseudomonas aeruginosa​ MDR etc.) selectate in sectii de
terapie intensiva sau diverse profile chirurgicale, datorita tratamentelor
cu antibiotice cu spectru larg si de lunga durata
● contraindicatiile antibiogramei​:
○ agentul etiologic microbian are o sensibilitate cunoscuta si constanta -
sensibilitatea la penicilina a tulpinilor de ​Streptococcus pyogenes
○ in infectii cu evolutie clinica usoara, tendinta de vindecare spontana, in
care tratamentul antibiotic este standard, conform ghidurilor de
tratament

● metode​:
1. Metoda standard difuzimetrica (Kirby Bauer)
2. Metode cantitative: tehnica dilutiilor in medii de cultura solide sau
lichide, tehnica E- test, metode cu citire automata

Tehnica difuzimetrica Kirby Bauer

Obs: cu tehnica difuzimetrica nu se pot testa decat germenii cu crestere rapida

si constanta!

Materiale necesare:
 ● inocul din cultura agentului etiologic (izolare, identificare,
insamantare)
● geloza Mueller-Hinton
● substante antimicrobiene: antibiotice si chimioterapice
(microcomprimate de 6 mm, impregnate cu anumite cantitati,
diferite, de substanta antibacteriana activa)

Principiul metodei​: consecutiv depunerii de microcomprimate impregnate cu

antibiotic pe suprafata unui mediu solid insamantat cu cultura bacteriana, au
loc urmatoarele procese fizico – chimice:
● microcomprimatul absoarbe apa din mediu
● substanta antimicrobiana se dizolva in apa
● substantei antimicrobiene va difuza in mediu
● conform legilor fizice ce conditioneaza difuziunea moleculelor in gelul
de agar, se obtine o scadere constanta a gradientului de concentratie
de la marginea discului spre periferie

Sensibilitatea bacteriei la un anumit antibiotic este apreciata dupa marimea

diametrului zonei de inhibitie a cresterii din jurul microcomprimatului.

Standardizarea ​conditiilor tehnice si a reactivilor de lucru: Fiecare din

componentele ce concura la efectuarea antibiogramei pot influenta diametrul
zonei de inhibitie si, deci, criteriile de interpretare. Elementele standardizate in
antibiograma difuzimetrica sunt: inoculul, mediul de cultura si
microcomprimatele.

Mediul de cultura - geloza Mueller - Hinton

○ asigura o dezvoltare buna a majoritatii germenilor patogeni cu crestere
rapida
○ nu exercita antagonism fata de agentii antimicrobieni
○ compozitie definita cu un pH = 7,2-7,4, concentratii adecvate de Ca si Mg
○ este izotonic pentru sangele care trebuie adaugat in anumite situatii
○ pentru testarea sensibilitatii hemofililor, se utilizeaza pentru
antibiograma un mediu special, care contine factori de crestere
○ asigura reproductibilitate de la lot la lot
○ grosimea stratului de geloza : 4 mm (25 ml mediu pentru diametrul placii
de 90 mm)

Germenul de testat - inocul​

○ marimea riguros standardizata (turbiditate standard : 0,5 unitati
MacFarland)
○ reprezentativ, preparat din 4 – 6 colonii identice
 ○ insamantarea pe placi se face la max 15 min de la momentul prepararii
○ cu ajutorul unui tampon steril de vata se inoculeaza placa, prin rotire in 3
directii diferite, pana la acoperirea uniforma a suprafetei mediului
○ placile insamantate se lasa la temperatura camerei pentru uscarea
inoculului inainte de depunerea microcomprimatelor
○ daca inoculul si insamantarea placilor s-a efectuat corect, se obtine o
cultura bacteriana uniform confluenta

Substante antimicrobiene​ - ​microcomprimate

○ diametrul de 6 mm, iar pe fata este imprimat simbolul antibioticului
respectiv ± incarcatura
○ conservarea se face la adapost de lumina, caldura, umiditate
○ inainte de utilizare se mentin la temperatura camerei 30 min pentru
echilibrare termica
○ asezarea spatiala a se face pe grupe de agenti antimicrobieni
○ depunerea se face cu pensa oftalmologica sau cu ajutorul unui dispozitiv
numit “dispencer”
○ se va respecta o distanta de 15 mm de la marginea placii si aprox. 24 mm
intre marginile comprimatelor sau 30 mm distanta intre centrele lor,
○ pe o placa de 90 mm diametru se pot pozitiona 8 comprimate.

Placile de antibiograma se incubeaza la 37ºC, timp de 18-20 ore, in aerobioza,

dupa care se efectueaza citirea.
Placile cu mediu Mueller Hinton cu 5-10% sange de berbec, folosite pentru
testarea sensibilitatii streptococilor, pneumocilor, meningococului, se
incubeaza in atmosfera aeroba, suplimentata cu 5% CO​2

Citirea ​se efectueaza cu ochiul liber, masurand de 2-3 ori diametrul zonei de
inhibitie (in mm). Exprimarea rezultatelor se face in acord cu standardul CLSI,
prin incadrarea marimii diametrului de inhibitie a cresterii culturii in categoriile:
sensibil/S, intermediar/I, rezistent/R. Se foloseste programul WHONET de
interpretare si raportare a rezistentei germenilor la antibiotice, bazat pe
interpretarea conform Standardelor CLSI/EUCAST.

2. Exudatul faringian. Mod de recoltare, insamantare, interpretare.

Reguli de recoltare
● recoltarea dimineata, inainte ca pacientul sa manance, sa se spele pe
dinti sau de a face gargarisme cu substante antiseptice
● se poate recolta exudat faringian si la minim 4 ore de la ultima masa sau
la sfarsitul unui interval dintre doua doze de antibiotice
 ● respectarea conditiilor de asepsie si antisepsie in recoltarea produsului
patologic
● folosirea echipamentului de protectie pentru prevenirea contaminarii
personalului de laborator (manusi, masca)
● utilizarea unui apasator de limba si a unui tampon steril si recoltarea de
pe pilierii amigdalieni anteriori si posteriori, de la nivelul faringelui
posterior, fara a se atinge baza limbii

Transport ​rapid (max 1-2 ore), cu sau fara utilizarea mediilor de conservare si
transport (Stuart, Amies).

Examen macroscopic​ al produsului patologic: aspectul purulent, culoare, miros,

consistenta etc.

Examen microscopic​: pe examinarea unui frotiu colorat Gram din exudat

faringian pune in evidenta prezenta cocilor Gram pozitivi alungiti, in diplo,
lanturi scurte, dar nu ofera nicio relatie despre caracterele de patognitate.

Insamantarea si izolarea bacteriana

Pentru streptococi se folosesc ​medii de cultura​ cu sange (le lipseste catalaza),

imbogatite cu glucoza si cu lichide organice (asigura aportul de aminoacizi si
vitamine): medii solide precum geloza-sange berbec 5-10% si mediul SSP
(mediu selectiv pentru streptococ si pneumococ) sau medii lichide pentru
izolare streptococi ca bulionul glucozat 0,2%, bulionul Todd-Hewitt.

Insamantarea​ se face prin descarcarea pe placa a continutului tamponului si

apoi dispersia in cinci sectoare/cadrane cu ansa bacteriologica de unica
folosinta. Placile se pun la incubat 18-20 de ore la 37ºC.

Identificare bacteriana - pentru Strep β-hemolitic A ​(​Streptococcus pyogenes​)

Caractere culturale (pe geloza-sange)

● hemoliza completa (β) in jur

● colonii mici, punctiforme, rugoase/mucoase
● transparente sau translucide

Caractere biochimice
● C(-), O(-)
 ● testul sensibilitatii la bacitracina (+) - diferentiaza streptococii pyogeni/
grup A (sensibili) de celelalte grupe de streptococi beta hemolitici grup
non-A (rezistenti)

Caractere antigenice

Determinarea grupului serologic (serogrupului) se face prin reactia de

aglutinare pe lama: se folosesc kit-uri cu reactivi ce contin anticorpi cunoscuti
care vor aglutina in contact cu antigenul corespunzator (polizaharidul C)
reactivi anticorpi cunoscuti.

Antibiograma

Streptococii piogeni isi mentin sensibilitatea cunoscuta la penicilina, dar s-au

descris tulpini cu “toleranta” la penicilina G (inhibate dar nu distruse de
penicilina G, necesita doze mai mari de antibiotic). Penicilina sub forma de
suspensie orala se administreaza pe stomacul gol (altfel este neutralizata).
Pentru pacientii cu alergie dovedita la penicilina, se efectueaza antibiograma.
Se recomanda tratamentul cu cefalosporine de generatia a doua (Zinnat,
Cefuroxim) sau macrolide (eritromicina, claritromicina, azitromicina).

3. Urocultura. Mod de lucru, insamantare, interpretare.

Examen macroscopic​: culoare, turbiditatea, miros, prezenta sedimentului la

fundul recoltorului, grade diferite de hematurie macroscopica.

Examen microscopic​ (intre lama si lamela): din sediment (extras prin

centrifugare); examinare pentru leucocite, cristale, cilindrii, hematii, levuri etc.

Examen microscopic​ (frotiu Gram/AM): PMN, neutrofile, bacterii.

Insamantarea urinei - tehnica ansei calibrate

Se foloseste o ansa calibrata, de unica folosinta, cu bucla care incarca la o

imersie un microlitru (10​-6​) de urina.
Se utilizeaza doua medii de cultura:
● geloza – sange pentru coci care cresc pe sange (streptococi de grup B,
enterococi, ​Stafilococcus aureus​ si ​saprophyticus​)
● medii lactozate pentru bacili: AABTL/CLED - strict diferentiale
(lactozopozitivi/lactozonegativi), MacConkey - mediu slab diferential
Insamantarea se face din urina (nu din sediment). Cu ajutorul ansei se fac pe
placa 1 striu diametral si 10 striuri perpendiculare. Se repeta cu o alta ansa pe
cel de al doilea mediu. Placile se pun la termostat 18-20 ore, 37ºC.

Interpretarea

Se numara numarul de unitati formatoare de colonie de pe mediu si se

inmultesc cu 1000 de pe fiecare mediu.
Rezultate:
● > 100.000 UFC/ml: daca are PMN-uri este infectie urinara, daca nu are
PMN-uri este caz de imunosupresie
● 10.000 – 100.000 UFC/ml => bacteriurie cu suspiciune de infectie urinara
● 1.000 – 10.000 UFC/ml => bacteriurie fiziologica, clinic nesemnificativa
● < 1.000 UFC/ml => contaminare

In cazul in care sunt prezente PMN-urile, dar bacteriile nu sunt prezente =>
infectie decapitata de antibiotic.

4. Coprocultura. Mod de lucru, insamantare, interpretare.

Examen macroscopic ​al produsului patologic - fiecare aspect patologic este

legat de o anumita etiologie:
● consistenta redusa, sange, puroi - dizenterie
● consistenta redusa, mucus - salmoneloza
● diaree apoasa - holera, ETEC (eliminare de apa si electroliti)

Examen microscopic
● intre lama si lamela pentru specii mobile
● frotiu Gram (bacili Gram(-)), AM

Insamantarea si izolarea bacteriana

Imbogatire​:
● apa peptonata (mediu Rappaport) pentru​ Vibrio cholerae
● selenit acid de sodiu

Medii de cultura​ - pentru Enterobacteriaceae (Salmonella, Shigella, Yersinia

enterocolitica):

Medii diferentiale (lactozate): geloza-lactozata (AABTL), CLED (geloza-lactozata

cu thiosulfat de sodiu).
Medii solide selective:
● slab selective (MacConkey)
● moderat selective (ADCL, Hektoen, SS)
● inalt selective (Wilson Blair - izolare ​Salmonella typhi​)
Obs. a nu se confunda cu Cary Blair (mediu de transport).

Placile se incubeaza la termostat 24-48 de ore, la 37°C.

Identificare

Caractere culturale

● colonii lactozo-negative (verzi in culoarea mediului)

● colonia de ​Salmonella spp​ prezinta centrul negru (produce H​2​S)

Caractere biochimice

Salmonella
Shigella

Yersinia

● TSI:
- glucoza (+) - virare in galben
- zaharoza (+) - virare in galben
- gaz (-)
- H​2​S (-)
● MIU :
- ureaza (+)
- mobilitate (+) la temperatura camerei si (-) la 37ºC
- indol (-)

Caractere antigenice​: reactii de confirmare si determinare a serogrupului ce

utilizeaza seruri de aglutinare.
5. Hemocultura. Mod de lucru, insamantare, interpretare.

Recoltarea sangelui

Se efectueaza hemocultura ori de cate ori este suspicionata o bacteriemie.

Dupa palparea venei alese pentru punctionare (ex. vena plicii cotului), se
realizeaza decontaminarea zonei cu doua solutii antiseptice (alcool si betadina).
Se recomanda prelevarea a 10ml sange pentru inocularea unui flacon, deci
20ml sange pentru o hemocultura (o pereche de flacoane: aerob si anaerob). La
nou nascuti volumul este de 1-2 ml/flacon uz pediatric, iar la copiii mici 5 ml/
flacon uz pediatric. Flacoanele cu mediu lichid pentru hemocultura, inoculate
cu sange la patul bolnavului, in conditii stricte de asepsie, se transporta imediat
la laborator.

Exista set de flacoane cu mediu lichid standard, cu inhibitori de substante

antimicrobiene pentru pacientii care au inceput tratamentul antibiotic, pentru
uz pediatric.

Incubarea:​ se face la 37°C, timp de 7-14 zile, flacoanele fiind agitate in

continuu.

Interpretarea rezultatelor
● rezultatele (pozitive sau negative) trebuie interpretate doar in context
clinic, corelate cu probabilitatea clinica de prezenta a bacteriemiei/
fungemiei
● daca testul este pozitiv (exista crestere bacteriana), metabolismul
agentului patogen produce o acidifiere a mediului, rezultand o
modificare in culoarea acestuia; modificarea este detectata si
semnalizeaza de aparatul in care se afla introduse flacoanele
● timpul de pozitivare a flacoanelor de hemocultura/ momentul detectarii
cresterii bacteriene, este foarte important pentru interpretarea
rezultatului unei hemoculturi pozitive

Flaconul pozitivat este trecut pe un mediu solid pentru crestere bacteriana,

urmand pasii obisnuiti de identificare.

6. Diagnosticul de laborator in infectiile produse de Staphylococcus aureus

Nu se face diagnostic de stafilococ auriu din exudat faringian, decat in cazul in

care insoteste streptococul de grup A (staph. produce penicilinaze si
neutralizeaza efectul antibioticului asupra strep.).
Patologie: ​colectii purulente (infectii cutanate) ce pot difuza in sange, rezultand
afectarea SNC, sistem respirator, articulatii

Recoltare:​ Plagile deschise mai intai se spala cu ser fiziologic steril, centrifug,
apoi se dezinfecteaza marginile leziunii, puroiul fiind prelevat cu tampon steril.
Pentru plagile acoperite cu crusta, se ridica usor aceasta si se colecteaza cu o
seringa. Abcesele din profunzime se punctioneaza cu o seringa cu ac gros, dupa
decontaminarea tegumentului.

Examen microscopic - frotiu Gram

● coci Gram pozitivi (violet) sau Gram variabili, izolati, in diplo, tetrade, lanturi
scurte sau in gramezi
● cocii pot fi intra- sau extracitoplasmatici
● PMN-uri

Insamantare si identificare: ​pe geloza-sange (hemoliza completa ß) sau pe

mediu solid hiperclorurat Chapmann cu manita (se modifica pH-ul si culoarea
mediului se schimba in galben = manito-pozitiv)

Caractere biochimice:
● catalaza (+)
● oxidaza (-)
● coagulaza (+)
● manita (+)

Pentru diferentierea stafilococilor coagulazo-pozitivi (stafilococul auriu) de SCN

se utilizeaza: testul coagulazei libere in tub cu plasma de iepure si testul
clumping factor pe lama.

Antibiograma: ​atentie la​ ​MRSA (rezistenta la peniciline, cefalosporine,

carbapeneme)

7. Diagnosticul de laborator in Faringita streptococica​ ​- vezi subiectul 2

8. Diagnostivul de laborator in pneumonia pneumococica

Recoltare: ​sputa in recoltor steril cu gura larga (recoltor de urina), aspirat

bronsic.
Transport:​ se face rapid (max 1-2 ore), nu exista mediu special de conservare si
transport.

Examen macroscopic: ​pentru a intra in diagnosticul bacteriologic, sputa trebuie

sa aiba aspect purulent

Examen microscopic (frotiu Gram)

● celularitate: screening calitativ al sputei - peste 25 PMN/camp pentru
continuarea diagnosticului
● coci Gram (+), alungiti, cu extremitatile ascutite (lanceolati), asezati
caracteristic in diplo sau in lanturi scurte, inconjurati de halou (pentru ca
sunt incapsulati)

Insamantarea si identificare

Se face pe 3 medii:
● geloza-sange
● geloza-chocolat pentru ​Haemophilus influenzae
● geloza lactozata (CLED) pentru ​Klebsiella pneumoniae

Caractere culturale:​ colonii mici, translucide, mucoase (coci capsulati)

inconjurate de hemoliza incompleta α (viridans); dupa un timp incepe autoliza,
colonii capatand aspect de vulcan (excavare centrala)

Caractere biochimice:
● Oxidaza (-)
● Catalaza (-)
● Testul sensibilitatii la optochin - pneumococul este sensibil

Antibiograma

9. Diagnosticul de laborator in meningita bacteriana

Etiologie
● Neisseria meningitidis​ (meningococul) la copii
● pneumococul la adult
● Streptococcus agalactiae​ (streptococ β hemolitic grup B) la nou nascut,
in urma nasterii naturale
● Listeria monocytogenes

​Recoltare
 ● In urgenta, inainte de administrarea tratamentului cu antibiotice
● Respectarea regulilor de asepsie si antisepsie
● Recipiente sterile, de unica folosinta
● Medicul recolteaza LCR prin punctie lombara: 2-5 ml (copii), 5-10 ml
(adulti)

Transport: ​imediat, la temperatura corpului.

Examen macroscopic
● LCR clar: infectii virale, infectii fungice, meningita tuberculoasa
● LCR tulbure: infectii bacteriene - ​Neisseria meningitidis​, ​Streptococcus
pneumoniae​, ​Streptococcus agalactie​ (la nou-nascut), ​Listeria

Examen microscopic

Se face examinare citologica cantitativa: numaratoare de elemente nucleate

(limfocite, leucocite, PMN-uri) pentru clasificarea infectiei (virala, bacteriana
etc.).

Lichidul cefalorahidian se centrifugheaza: sedimentul se etaleaza pe frotiu

Gram si/sau se insamanteaza pe medii de cultura, iar in supernatant se cauta
antigene bacteriene libere prin reactii de aglutinare cu kit-uri speciale ce contin
reactivi cu anticorpi cunoscuti.

Pe frotiul Gram cu meningococ se observa:

● coci Gram (-), rotunzi, cu fete adiacente aplatizate, reniformi (“in boabe
de cafea”), asezati in diplo
● cocii pot fi intra- sau extraleucocitari

Cultivare: ​germeni pretentiosi, se insamanteaza pe medii ca geloza-sange si

geloza-chocolat.

Identificare

Caractere culturale:​ colonii gri, translucide, nehemolitice.

Caractere biochimice:
● catalaza (+)
● oxidaza(+)
● testul celor patru zaharuri: maltoza (+) si glucoza (+)
Antibiograma: ​obligatoriu tratament cu antibiotice in cel mai scurt timp posibil
pentru evitarea sindromului de coagulare intravasculara diseminata (purpura
vasculara).

10. Diagnostic de laborator in tuberculoza pulmonara

Recoltare: ​sputa in recoltor steril cu gura larga (recoltor de urina), aspirat

bronsic.

Transport:​ se face rapid (max 1-2 ore), nu exista mediu special de conservare si
transport.

Decontaminare

Primul pas in realizarea diagnosticului de laborator al sputei tuberculoase este

decontaminarea. Flora bacteriana asociata trebuie omorata, deoarece poate
inhiba cresterea ​Mycobacterium tuberculosis​ in cele 60 de zile de incubare.
Decontaminarea se realizeaza prin adaugarea unei baze puternice (hidroxid de
sodiu), iar apoi neutralizarea acesteia cu cateva picaturi de acid (HCl).

Examinare microscopica si identificare

Produsul patologic decontaminat se centrifugheaza (concentrarea bacililor

pentru vizualizare), iar sedimentul se etaleaza pe frotiu Ziehl-Neelsen si se
insamanteaza pe mediul special Löwenstein-Jensen.

Tuburile insamantate se citesc in prima saptamana zilnic, pentru eliminarea

celor cu crestere bacteriana saprofita nedistruse in timpul decontaminarii, apoi
din saptamana in saptamana, timp de 60 de zile.

Caractere culturale:​ colonii rugoase, alb-crem/galbui, conopidiforme.

Pe frotiu Ziehl-Neelsen examinate la microscopul optic cu imersie se observa

bacili rosii, granulati, izolati sau in gramezi, uniti prin ​cordfactor​.

Caractere biochimice:​ se realizeaza testul niacinei - pozitiv (coloratie ciclam)

pentru ​Mycobacterium tuberculosis

Caractere antigenice:​ testul antigenului MPT - se introduce o banda in lichidul

de la fundul tubului, este pozitiv (banda se coloreaza) pentru ​Mycobacterium
tuberculosis
Antibiograma: ​se realizeaza tot pe mediul special Löwenstein-Jensen in care
sunt introduse din fabricatie cate un antibiotic (ex. tub cu rifampicina, cu
isoniazida etc.). Daca exista crestere bacteriana in tubul respectiv, specia este
rezistenta.

11. Caracterizati comportamentul biochimic al unei enterobacterii

insamantate pe medii diferentiale.

Escherichia coli

TSI​ - galben tot (fermenteaza toate zaharurile, nu produce hidrogen sulfurat)

● glucoza (+)
● lactoza (+)
● zaharoza (+)
● H2S (-)
MIU​ - ramane galben, banda de indol colorata in rosu
● mobilitate (+)
● indol (+)
Citrat ​- negativ (ramane verde)

Klebsiella pneumoniae

TSI​ - galben tot (fermenteaza toate cele zaharurile)

● glucoza (+)
● lactoza (+)
● zaharoza (+)
● H2S(-)
MIU​ - ramane galben
● mobilitate (-) din cauza capsulei
● indol (-)
● ureaza (+), dar nu inroseste mediul!
Citrat​: pozitiv (albastru)

Proteus spp​.

TSI​ - galben tot (fermenteaza toate cele zaharurile, produce hidrogen sulfurat)
● glucoza (+)
● lactoza (+)
● zaharoza (+)
● H2S(+)
MIU​ - culoare virata in rosu
 ● mobilitate (-)
● indol (-)
● ureaza (+)
Citrat​: pozitiv (albastru)

12. Diagnosticul de laborator in sifilis

Sifilisul este o boala cu transmitere sexuala, avand ca agent etiologic

Treponema pallidum​. Bacteria are crestere obligatoriu intracelulara si nu poate
fi insamantata pe medii de cultura. Pentru mentinerea viabilitatii trebuie sa fie
injectata in testicule de iepure.

Recoltare si examen microscopic

Din leziuni genitale in forma (sub)acuta, se poate preleva serozitatea prin

capilaritatea pipetei Pasteur, iar apoi utilizata pentru diagnostic microbiologic
direct - coloratie speciala (la microscop), tehnici de imunoflorescenta.

Din ser se realizeaza examen microbiologic indirect (serologic) prin utilizarea

mai multor truse speciale:
● test de screening: kit cu antigene netreponemice (pe baza de cardiolipina
extrasa din cordul de bou) - VDLR, RPR carbon
● test de confirmare: kit cu antigene treponemice - TPHA
● alte teste de confirmare: RFC, PCR

Obs. rezultat (fals)pozitiv al testului de screening trebuie confirmat cu testul de

confirmare!

Reactia de fixare a complementului (Bordet-Wasermann) - principiu,

interpretare

Principiu​: RFC este un test de diagnostic serologic care permite evidentierea

“in vitro” a reactiei antigen - anticorp si are la baza proprietatea
complementului (C’ = alexina) de a se fixa numai pe anticorpul sensibilizat din
complexele Ag/Ac. Reactia se bazeaza pe proprietatea complexelor imune de a
fixa ireversibil C’: odata fixat pe complexul imun, C’ nu se mai poate combina cu
alte complexe. In cazul in care fixarea C’ pe primul complex Ag/Ac nu se
manifesta printr-un fenomen direct observabil, autorii au evidentiat reactia
indirect, prin adaugarea unui al doilea sistem-indicator format din:
● Ag: globule rosii (hematii de berbec)
● Ac: ser antihematii corespunzator, obtinut prin inocularea hematiilor
de berbec la iepure. Fixarea C’ pe cel de- al doilea sistem antreneaza
liza hematiilor, vizibila cu ochiul liber

Complementul este o componenta normala a serului, care nu variaza in

procesul de imunizare, al carui titru nu este influentat de prezenta anticorpilor.
Prin incalzirea serului de testat la 56°C, timp de 30 min, actiunea
complementului este inhibata, insa eventualii Ac prezenti in ser nu sunt
distrusi.

RFC propriu-zisa:
● ser de bolnav (suspect) se trateaza termic, 30 min la 56°C, pentru
inactivarea complementului propriu
● serul inactivat se pune in contact cu o suspensie de Ag corespunzator Ac
banuiti
● daca serul de bolnav contine anticorpii cautati (serul provine deci de la
un bolnav real), se formeaza complexe imune
● se adauga o anumita cantitate de Complement (ser de cobai) care se
fixeaza pe complexele imune (daca exista) sau raman liber (daca
complexele nu exista)
● se adauga sistemul indicator al reactiei Ag/Ac (sistem hemolitic)
● daca exista complement liber, acesta se va lega de cel de al doilea
complex imun, rezultand hemoliza (reactie negativa); daca nu exista
complement liber, cel de al doilea complex imun nu se mai formeaza, iar
hematiile cad in buton (reactie pozitiva)

Citirea reactiei:
● Reactie negativa: serul provine de la pacient sanatos, se produce
hemoliza
● Reactie pozitiva: serul provine de la pacient bolnav, nu se produce
hemoliza, hematiile cad in buton

Avantajele reactiei:​ sensibilitate, specificitate inalte, grad inalt de

reproductibilitate.