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Coli CON EL
PLÁSMIDO pGLO
1nellyyazminar@ufps.edu.co; 2daironeliecerap@ufps.edu.co;
3elianasm@ufps.edu.co; 4danielaanadreavo@ufps.edu.co
INTRODUCCIÓN
La transformación es un proceso por el cual las células captan DNA libre presente en el
medio. Es un fenómeno que ocurre de forma natural en muchas bacterias, pero la
eficacia del proceso varía enormemente de unas especies a otras. Para que la
transformación tenga lugar, la bacteria tiene que encontrarse en el llamado estado de
competencia, que ocurre en determinadas condiciones fisiológicas; en este estado, la
bacteria presenta alteraciones en su pared y membrana celulares, que permiten la
entrada de ácidos nucleicos en la célula (Galván, 2014).
A nivel de laboratorio algunas cepas bacterianas de Escherichia coli son las más
utilizadas, gracias al vasto conocimiento que se tiene acerca de su genética, bioquímica
y biología molecular, siendo generalmente el primer sistema que se escoge para la
expresión de proteínas recombinantes en bacterias. También estas son empleadas para
múltiples actividades, que van desde la conservación y propagación del ADN
plasmídico de clones hasta la creación de grandes bibliotecas para la determinación de
la secuencia de un genoma (Gómez et al., 2018).
OBJETIVOS
METODOLOGIA
3.Choque Térmico Se transfirieron los dos tubos a baño maría a 42°C por 50 segundos.
Seguidamente, se colocaron en hielo durante 2 minutos.
4. Se agregó con una micro pipeta esteral 100 µl de caldo LB a los tubos de +pGLO y –
pGlO y se incubo por 10 minutos a temperatura ambiente.
5. Se procedió a agitar los tubos y con una micro pipeta estéril se tomó 50 µl de cada
tubo a alas placas correspondientes y con una asa estéril, se extendió el líquido en forma
de estría por toda la superficie de la placa y por último se llevó a incubar a 37°C en
posición invertida por 24 horas.
RESULTADOS
pGLO (+):
pGLO (+): LB/AMP/ARA
LB/AMP
DISCUSIONES
Las colonias de E.coli como era lo esperado crecieron e los medios de cultivo de pGLO
(-): LB; pGLO (+): LB/AMP y pGLO (+): LB/AMP/ARA; Pero en pGLO (-):
LB/AMP como también era lo esperado no crecieron colonias.
Para poder determinar si la transformación había ocurrido fue necesario observar las
cajas Petri bajo luz ultravioleta, para poder distinguir si había sufrido la transformación,
y de esa misma manera poder percibir si podían sobrevivir bajo los medios con
ampicilina. Como consecuencia de esto para que el gen pueda expresarse es necesario
que existan condiciones adecuadas; como la presencia de arabinosa, para que el gen se
active. La proteína verde fluorescente ha sido utilizada como un indicador de expresión
genética y determinador de proteínas (Barrera & Ovalle, 2009).
BIBLIOGRAFIA
OGM: Maíz dulce, Arroz dorado, Tomate de larga duración, Fresas, piñas,
pimientos y plátanos son otros ejemplos de productos alimenticios modificados
genéticamente por los científicos para que se mantengan frescos durante más
tiempo.
Las especies que se eligen como modelo tienen las siguientes características en
común:
Características
e. Teniendo en cuenta las cuestiones anteriores, ¿cuál será la mejor opción para
realizar la modificación genética: una bacteria, una lombriz, un pez o un ratón?
Razona la respuesta-
Una bacteria por poseer un genoma sencillo, lo hace fácil de manipular y de esta
manera una buena herramienta en ingeniería genética.
El método del fosfato cálcico es un metodo químico en el cual se realiza una mezcla
de DNA con iones calcio, con una subsiguiente adición de fosfato a la mezcla y la
presentación de la solución final a las células en cultivo. En esta situación se
precipitan el DNA y los iones calcio formando unos agregados que son
endocitados/fagocitados por las células. La eficiencia de transfección puede ser
mayor al 50% dependiendo del tipo celular y del tamaño y calidad del precipitado
que se forma. Este método tiene como ventaja, frente a los otros métodos, su
simplicidad, facilidad de producción y su relativa baja toxicidad.
a)https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3173775/
b)
c)
d)
e)
f)https://www.thermofisher.com/co/en/home/life-science/cloning/competent-cells-
for-transformation/electrocompetent-
cells.html?gclid=CjwKCAjw583nBRBwEiwA7MKvoORuFwDOmNZS7p8whSlIIr
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lectrocompetent%20cells
http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lse/literature/4006097ES.pdf
https://es.scribd.com/document/191227259/Lab-Transformacion