Las enzimas de restricci�n son endonucleasas provenientes de eubacterias y arqueas

que reconocen secuencias de ADN muy espec�ficas.2? La secuencia de nucle�tidos

reconocida para escisi�n por una enzima de restricci�n se denomina sitio de
restricci�n. T�picamente un sitio de restricci�n es una secuencia palindr�mica de
entre cuatro a seis nucle�tidos de extensi�n. La mayor parte de las endonucleasas
de restricci�n escinden a la mol�cula de ADN bicatenario en forma desigual, dejando
extremos complementarios de cadena simple. Estos extremos pueden luego reconectarse
a trav�s de un proceso de hibridaci�n, por lo que son denominados "extremos
adhesivos". Una vez apareados, los enlaces fosfodi�ster de los fragmentos pueden
ser unidos por medio de una ADN ligasa.

Existen cientos de endonucleasas de restricci�n conocidas, cada una de las cuales

ataca un sitio de restricci�n diferente. Los extremos de ADN escindidos por una
misma endonucleasa de restricci�n pueden ser emparejados juntos sin importar el
origen del ADN. Estas mol�culas de ADN formadas por trozos de or�genes diferentes
se denominan ADN recombinante; es decir ADN formado por la uni�n de diferentes
genes para crear nuevas combinaciones.1? Las endonucleasas de restricci�n (enzimas
de restricci�n) se dividen en tres categor�as, Tipo I, Tipo II, y Tipo III, de
acuerdo a su mecanismo de acci�n.

Estas enzimas son frecuentemente utilizadas en ingenier�a gen�tica para producir

ADN recombinante para su posterior introducci�n en c�lulas bacterianas, vegetales o
animales; como as� tambi�n en biolog�a sint�tica.3?

Categor�as
En �ltima instancia, hay tres categor�as de endonucleasas de restricci�n que
contribuyen relativamente a la escisi�n de secuencias espec�ficas. Los tipos I y
III son complejos multisubunidades de gran tama�o que incluyen tanto la actividad
endonucleasa como la actividad metilasa.

Las endonucleasas de tipo I pueden escindir al ADN en ubicaciones aleatorias, a

1000 o m�s pares de bases de distancia de la secuencia de reconocimiento y
requieren de ATP como fuente de energ�a.

Las endonucleaasas de tipo II se comportan de forma ligeramente diferente, fueron

aisladas por Hamilton Smith en 1970, se trata de las versiones m�s simples de
endonucleasas y no requieren de ATP para su funci�n. Algunos ejemplos de
endonucleasas de tipo II son la BamHI, EcoRI, EcoRV y HaeIII.

Las endonucleasas de tipo III, escinden el ADN a no m�s de 25 pares de bases de

distancia de la secuencia de reconocimiento y tambi�n requieren de ATP en el
proceso.1?

Notaciones
La notaci�n m�s com�nmente utilizada para las endonucleasas de restricci�n es de la
forma "VwxYZ", donde "Vwx" corresponde a las iniciales de la nomenclatura binomial
para la forma de vida de donde proviene (bacteria), "Y" es la denominaci�n de la
cepa (y es opcional); y "Z" (en n�meros romanos) indica diferentes enzimas de
restricci�n pertenecientes a una misma forma de vida. As� por ejemplo, "EcoRI"
significa que la endonucleasa pertenece a Escherichia coli ("Eco"); la cepa es la
RY13 ("R"), y que fue la primera descubierta en esa forma de vida: n�mero "I".

Otro ejemplo: "HaeII" y "HaeIII" se refieren a la bacteria Haemophilus aegyptius,

mientras que las enzimas son la n�mero II y n�mero III, respectivamente.1?:64-64
Las enzimas de restricci�n que se utilizan en biolog�a molecular, por lo general
reconocen una secuencia diana corta, de aproximadamente 4 - 8 pares de bases. Por
ejemplo la EcoRI reconoce y escinde la secuencia 5'� G�AATTC �3'.4?
Enzima de restricci�n EcoRI
Una endonucleasa t�picamente requiere de un sitio de reconocimiento, y una
secuencia de escisi�n (t�picamente de bases nucleot�dicas: A, C, G, T). Si el sitio
de reconocimiento se encuentra fuera de la regi�n de escisi�n, entonces se dice que
la endonucleasa es de tipo I. Si la secuencia de reconocimiento se superpone con la
secuencia de escisi�n, entonces la endonucleasa se considera una enzima de
restricci�n y es de tipo II.

Consideraciones adicionales
Las endonucleasas pueden escindir ADN de cadena doble (ADNcd), o de cadena simple
(ADNcs), o incluso ARN. El presente art�culo se encuentra centrado en las
endonucleasas que act�an sobre ADNcd, sin embargo, lo explicado en este art�culo
puede aplicarse a:

ADNcd est�ndar
ADN no est�ndar
Uniones de Holliday
ADN triple cadena, ADN cu�druple cadena (G-quadruplex)
H�bridos doble cadena de ADN y ARN (una cadena es de ADN, mientras que la otra es
de ARN)1?:72�73
ADN sint�tico o artificial (por ejemplo, ADN que contiene bases diferentes a las
can�nicas, C, G, T).1?:chapter 3
Adicionalmente, las investigaciones actuales est�n orientadas al desarrollo de
endonucleasas de restricci�n sint�ticas o artificiales, espec�ficamente que posean
un sitio de reconocimiento que sea �nico dentro de un genoma.

Las endonucleasas de restricci�n o enzimas de restricci�n, t�picamente escinden las

cadenas de �cidos nucleicos de dos formas diferentes: con extremos romos, o con
extremos adhesivos.1?:64

Reparaci�n del ADN

Las endonucleasas desempe�an un papel importante en la reparaci�n del ADN.
Espec�ficamente las endonucleasas AP, catalizan la ruptura del ADN exclusivamente
en sitios AP (sitios apur�nicos-apirimid�nicos, es decir sitios en los cuales se ha
perdido la base nitrogenada, pero se conserva la columna de az�car-fosfato), y por
lo tanto preparan al ADN para la subsecuente escisi�n, s�ntesis reparadora y
ligado. Por ejemplo, cuando se produce una despurinizaci�n, esta lesi�n deja al
az�car desoxirribosa sin su base nitrogenada.5? La endonucleasa AP reconoce este
az�car y esencialmente corta el ADN en ese sitio, permitiendo que luego contin�e la
reparaci�n del ADN.6? Las c�lulas de E. coli contienen dos endonucleasas AP: la
endonucleasa IV (endoIV) y la exonucleasa III (exoIII). Mientras que en eucariotas,
solo hay un tipo de endonucleasa AP.7?