GUÍA DE PRÁCTICAS

FACULTAD : INGENIERÍA EN ALIMENTOS CARRERA: INGEN IERÍA BIOQUIMICA

NIVEL: SEXTO 1 ASIGNATURA: BIOQUÍMICA 11 TIPO GUIA DE PRÁCTICAS: Laboratorio
DOCENTE: DANAE FERNANDEZ RIVERO CICLO ACADÉMICO: SEPTIEMBRE 2018 - FEBRERO 2019

l . TEMA:

A.islamiento e Identificación de Glucógeno

11. OBJETIVO:

Identificar la presencia de g lucógeno en hígado y músculo procedente de un ave.

Comparar cualitativamente su concentración.

III.INSTRUCCIONES :

A. partir de un ave sacrificada, obtener muestras de hígado y músculo.

Pesar por duplicado de 2 g de hlgado y músculo.

Homogeneizar las muestras de tejidos con 4 mi de KOH al 30%.

Calentar los homogenizados en un baño de agua a ebullición por 15 minutos, agitar ocasionalmente.

Centrifugar los homogenizados a 3000 rpm por 5 minutos. separar la capa de sobrenadante y colocarla en tubo de ensayo. añad1r 6 mi de etanol y agitar.

Reposar los tubos con la mezcla en baf\o de hielo por 5 minutos.

Centrifugar los tubos 5 minutos a 3000 rpm, desechar el sobrenadante y separar el g lucógeno precipitado.

H1drólls1s ác1da del glucógeno: Al precipitado de glucógeno obten1do añad1r 1 mi de H2S04 5N y calentar en baño de agua a 1oo•c por 25 minutos. Usar lentes de
seguridad y proceder con suma precaución en esta etapa para evitar salpicaduras de ácido. (Es conveniente poner en la parte superior del tubo papel de filtro enrollado.
:>ara que absorba el ácido si éste salta y evitar riesgos).

11.1 término de la hidrólisis enfriar los tubos, adicionar 2 mi con agua destilada a cada tubo y 3 gotas de fenolftaleina. añadir gota a gota NaOH SN con agitación hasta el vire
:lel indicador (pH 8 o superior). (Se debe comprobar el pH de la muestra con papel indicador).

Identificación del contenido de glucosa en el hidrolizado de glucógeno: Colocar 0.5 mi del hldrolizado de g lucógeno y añadir 0.5 mi de Cu2 S04 1%. la presencia de g lucosa
se denota por la aparición de turbidez debido a la insolubilidad del Cu 20 fonmado.
IV. LISTADO DE EQUIPOS, MATERIALES Y RECURSOS:

Tubos de ensayo

Pipetas

Espátula

Balones de aforo

Guantes

3radilla

A.gua destilada

Vaso de precipitación

Baño maria

Solución de KOH 30 %

Etanol

Fenolftaleina

Sulfato de cobre CuS04 1 %

 GUÍA DE PRÁCTICAS
Hidróxido de sodio 5 N
V. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

Elabore un diagrama de la glucogenólisis y como se regula esta vla.

¿Cuáles son tas funciones del glucógeno hepátiCO y del glucógeno muscular?

¿Qué cantodad de glucógeno se encuentra en el h ígado y en el músculo en el hombre?

VI. RESULTADOS OBTENIDOS:

Discutir los resu ltados obtenidos.

VIl. CONCLUSIONES :

• Conclwr en base a los objetivos planteados.

VIII.RECOMENDACIONES:

• Leer la hoja guia.

Trae r el equipo de protección personal y el animal de experimentación seleccionado.

fALIDACIÓN DE LAS GUiAS DE PRÁCTICAS

'echa de elaboración Aug 28 2018

DOCENTE P
Lic. Mg.DANAE FERNANDEZ RIVERO

Coordinador Unida de Organización Curricular

Lic. Mg. DANAE FERNANDEZ RIVERO

~ UNIVERSIDAD T~CNICA DE AMBATO l

tW) FACULTAD DE CIENCIAS E INGENIERIA
FC IAL EN AUMENTOS
COORDINADOR CARRERA
INGENIERIA BIOQUIMICA
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FACULTAD : INGENIERÍA EN ALIMENTOS CARRERA: INGENIERÍA BIOQUÍMICA

NIVEL: SEXTO 1 ASIGNATURA: BIOQUÍMICA 11 TIPO GUÍA DE PRÁCTICAS: Laboratorio
DOCENTE :DANAEFERNANDEZRWERO CICLO ACADÉMICO : SEPTIEMBRE 2018 - FEBRERO 2019

l. TEMA:

"VIAS METABÓLICAS"
11. OBJETIVO:

Determinar la presencia de piruvato en la glucólisis.

Comprobar las condiciones d e pH a nivel celular para la producción de piruvato.

III.IN STRUCCIONES:

Formación de piruvato a oartir de glucosa

o Preparar 25 mi de suspensión de levadura al 5% con cada una de las soluciones de fos fato Na2HP04 y KH2P0 4 con 18 h de anticipación.
o En dos tubos de ensayo (A y B) colocar 5 mi de solución de glucosa.
o Agregar al tubo A 5 mi de la suspensión de levadura en solución alcalina de Na2HP04 y al tubo B añadir 5 mi de la suspensión de levadura en solución ácida de
KH2P04.
o Colocar los tubos en un baño de agua a 37 •e durante 60 minutos. luego añadir a cada tubo 2 mi de la solución de ácido tricloroacético (TCA). mezclar
vigorosamente y centrifugar durante 1O minutos a la máxima velocidad generada por la centrifuga

(>2500 g). Separar el sobrenadante y utilizarlo para la determinación de piruvato.

o. Detemninación de oiruvalo

o En un tubo de ensayo colocar O, 170 ?L de solución de 2.4-dinitrofenilhidracina y 0,340 ?L del so brenadante (en fosfalo ácido o alcalino).
o Mezclar fuertemente y añadir poco a poco Na OH al 1O % y 4 mi de agua. La formación de un color rojo oscuro indica la presencia de piruvato.

Comprobar el resultado con una muestra de acetona a la cual se le agregó TCA en la misma relación que en la mezcla de levadura y con una muestra que contiene
solo glucosa.

IV. LISTADO DE EQUIPOS, MATERIA LES Y RECURSOS:

Tubos de ensayo Sol. glucosa al 5% (25ml)

Vasos de precipitación Susp. levadura al 5% en Na2HPO, 0.5 M (25ml)

Pipetas graduadas Susp. levadura al 5% en KH2 P04 0.5 M (25ml)

Probeta Sol. ácido tricloroacético al1 0% (10 mi)

Centrifuga Sol. 2,4-dinitrofeni lhidracina H2S04 y etanol (25ml)

Balones volumétricos Sol. NaOH al 10% (25ml)

Sistema de calentamiento
V. ACTIVIDADES POR DESARRO LLAR:

Elabore una representación de las etapas involucradas en la glucólisis, incluyendo las enzimas regulables .

Realice el balance energético de la glucólisis.

Describa las principales características de la piruva to descarboxilasa y la piruvato carboxilasa.

VI. RESULTADOS OBTENIDOS:

Reporte lo observado gráficamente.

Indique en una tabla la presencia o ausencia de piruvato en cada tratamiento.

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Compare y explique la presencia o ausencia de piruvato en los dos diferentes tratamientos.
VIl. CONCLUSIONES :

• Concluir en base a los objetivos planteados

VIII.RECOMENDACIONES:

• Leer la hoja guia.

Traer el equipo de protección personal

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' echa de elaboraci ón Aug 28 2018

DOCENTE NIFICADOR UTA

Lic. Mg.DANAE FERNANDEZ RIVERO

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~ UN IVERSIDAD T¡;CNICA DE AMBATO

~ FACULTAD DE CIENCIAS E INGENIERIA
FCIAL EN ALIMENTOS
COORDINADOR CARRERA
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FACULTAD: INGENIERIA EN ALIMENTOS CARRERA: INGENIERIA BIOQUIMICA

NIVEL: SEXTO 1 ASIGNATURA: BIOQUIMICA 11 TIPO GUIA DE PRÁCTICAS: Laboratorio
DOCENTE: OANAE FERNANDEZ RIVERO CICLO ACADÉMICO: SEPTIEMBRE 2018 - FEBRE RO 2019

l. TEMA:

TRANSPORTE DE ELECTRONES
11. OBJETIVO:

Examinar experimenfalmente el trasporte de electrones mediante el proceso de óxido reducción en una muestra de extracto de corazón con un compuesto aceptar final de
electrones que es el 2.6 d1clorolenollndolenol.

Evaluar los res uHados a obtener con el reactivo 2.6 diclorofenolindofenol como ind1cador cualitativo del transporte de electrones.

Comparar los resultados de la oxidación y reducción de los sustratos de glucosa y lactato al reaccionar con el extracto de corazón y el aceplor final de electrones.
III. INSTRUCCIONES :

Preparación del Extracto de corazón.

• Cortar en pequeños pedazos 3 g de corazón y colocar en un vaso de precipitación de 25o mi.

• Añadir 200 mi de agua helada . agitar d urante 1 minuto y dejar reposar. Decantar cuidadosamente el agua y repetir el proceso de lavado dos veces más.
• Filtrar el tejido a través de la gasa y exprimir ligeramente para remover el exceso de liquido.
• Trasferir el tejido a un mortero previamente enfriado en un baño de hielo y triturar con un volumen igual de arena y con unos 4 mi de buffer pH 7.4 previamente
enfriado. El proceso de trituración debe realizarlo por 5 minutos.
• Decantar cuidadosamente la suspensión a través de una gasa colocada sobre un embudo de vidno y recoger el extracto sobre un tubo de ensayo colocado dentro
de un baño de hielo .

Oxidación de Sustratos:

Prepare una mezcla de la reacción de la forma que se indica a cont1nuac1ón para determinar si la glucosa y el lactato son oxidados por el extracto de corazón .

Soluciones para g lucosa como s ustrato ~o l (ml)

2.6-diclorofenolindofenol 0.0015 M en buffer p H 7.4 1
Sol. glucosa 0 .1 M en buffer pH 7.4 H
Sol. buffer de fosfato de potasio pH 7.4 ~

Soluciones para glucosa como sustrato Wol(ml)

2.6-diclorofenolindofenol 0.0015 M en buffer pH 7.4 1
Sol. ácido 13clico 0.1 M en buffer pH 7.4 1
Sol. buffer de fosfato de potasio pH 7.4 1
.. ..
Incubar cada soluc1on a 37?C por 5 mmutos y al comenzar la reacc1on agregar 2ml de extracto de corazcn previamente calentado a 37?C .

l>.note el tiempo q ue se tarda la decoloración del 2,6-diclorofenofindofenol para cada solución.

IV. LISTADO DE EQU IPOS, MATERIALES Y RECURSOS:

Material es

Tubos de ensayo

Vasos de precipitación

Pipetas graduadas

Probeta

Balones volumétricos

Sistema de calentamiento

Mortero y pistilo

t>.rena lavada y seca

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Gasa

Embudo

Embudo

Hielo

Corazón de pollo

Reactivos

Sol. Buffer de fosfato de potasio O.1M, pH 7.4 (50 mi)

2,6-diclorofenolindofenol 0,0015M en buffer pH 7,4 (10ml)

Sol. Glucosa 0.1 M en buffer pH 7,4 (1 Omi)

Sol. ácido láctico 0,1M en buffer pH 7,4 (1Oml)

V, ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

Compare y explique la decoloración de las soluciones en relación con los tiempos empleados en la decoloración.

Desarrollar el siguiente cuestionario:

Represente esquematicamente como ocurre la cadena transportadora de electrones.

¿Cuál es el lugar especifico donde se realiza el proceso de transporte de electrones dentro de la célula?

¿Cuáles son los inhibidores de la cadena respiratoria?

VI. RESULTADOS OBTENIDOS:

• Reporte una tabla donde muestre el tiempo de decoloración de las soluciones (glucosa. lactato).

Muestre las imagenes obtenidas de los cambios de coloración.

VIl. CONCLUSIONES:

Concluya en base a los obj etivos planteados.

VIII.RECOMENDACIONES:

• Leer la hoja guia previamente a la práctica.

• Traer todos los implementos de protección personal.
• Traer los materiales necesarios para la ejecución de la práctica

IALIDACIÓN DE LAS GUIAS DE PRÁCTICAS

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 CAS

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l. TEMA:

1. "DETERMINACIÓN DE CUERPOS CETÓNICOS"

11. OBJETIVO:

Demostrar la presencia de cuerpos cetónicos en diferentes estados fisiológicos.

111. INSTRUCCIONES :

DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ACETOACÉTICO:

En tubos de ensayo colocar 5 mi de orina y adicionar unas gotas de cloruro férrico al10 %.

En presencia de ácido acetoacético se produce una coloración rojo-vinosa.

DETERMINACIÓN DE ACETONA

En tubos de ensayo colocar 5 mi de orina y adictonar 0,5 mL de Nitroprusiato de sodio disuelto al

5% en ácido acético al 50%.

A.dicionar 0,5 mL de amoniaco por las paredes del tubo, en presencia de acetona da lugar a la aparición de un anillo rojo violáceo.
IV. LISTADO DE EQUIPOS, MATERIALES Y RECU RSOS:

. Muestras de orina: personas en estado normal, ayuno prolongado. ejercicio flsico (caminar). embarazada, diabético.

Materiales

r ubos de ensayo

Gradilla

Pipeta graduada

Compuestos y Reactivos

Cloruro Férrico al 10%.

Nitropnusiato de sodio.

Á.cido acético
V. ACTIVIDA DES POR DESARROLLAR:

1. Cuáles son los cuerpos cetónicos? Esquematice la ruta metabólica para obtenerlos.
2. ¿En qué condiciones metabólicas se producen cuerpos cetónicos?
3. ¿A partir de qué macromoléculas es posible sintetizar cuerpos cetónicos?
VI. RESULTADOS OBTENIDOS:

Reporte en una tabla la presencia o ausencia de cuerpos cetónicos.

Presentar las imágenes que respalden la presencia o ausencia de cuerpos cetónicos.

Explique los resultados obtenidos en cada situación metabólica.

VIl. CONCLUSIONES:
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• Concluir en base a los objetivos planteados

VIII.RECOMENDACIONES :

• Leer la hoja guia.

• Traer el equipo de protección personal y las muestras solicitadas

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'echa de elaboración Oct 5 20 18

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