DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO EN UN JUGO

COMERCIAL POR ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA

Bolívar Esteban (1745103 - 3647), Randolsd Reinel (1441842-3647).

juan.esteban.bolívar@correounivalle.edu.co ; randolsd.reinel@correounivalle.edu.co
Universidad del Valle
Facultad de salud
Departamento de Química; Laboratorio de Química Analítica General
Docente: Harold Díaz Segura
Fecha de práctica: 28 de mayo de 2018
Fecha de entrega: 08 de junio de 2018

Resumen

Resumen: Se determinó la concentración de ácido ascórbico de una muestra de jugo de naranja comercial
(Jugo Hit®), por medio de espectroscopia ultravioleta visible a una longitud de onda de 405 nm; para esto
se usaron dos técnicas de calibración: la primera fue una curva de calibración normal y la segunda una
curva de adición estándar, donde se interpoló la absorbancia obtenida en la muestra y se obtuvo las
concentraciones para cada curva de 19,6772 ppm y 0,1035 ppm respectivamente.

Palabras claves: Ácido Ascórbico, espectroscopia ultravioleta, curva de calibración.

DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

Para construcción de curva de calibración.
Preparación de 25 mL de HCl al 10% v/v.
Los cálculos fueron: Preparación de 50 mL de solución (sln) patrón de
1000 ppm.
10 % [𝐻𝐶𝑙] = Los cálculos fueron:
10 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 1.19 𝑔 𝐻𝐶𝑙 100 𝑚𝐿
𝑥 𝑥 𝑥25 𝑚𝐿 𝐻2 𝑂 50 mL sln a 1000 ppm =
100 𝑚𝐿 1 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 37 𝑔 𝐻𝐶𝑙
= 8.04 𝑚𝐿 [𝐻𝐶𝑙] 8 ± 0.03 mL [HCl] 50 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 𝑎 1000 𝑝𝑝𝑚 𝑑𝑒 á. 𝑎𝑠𝑐 =
1000 𝑚𝑔 á. 𝑎𝑠𝑐 100 %
0.05 𝐿 𝑠𝑙𝑛 𝑥 𝑥
Preparación de 25 mL NaOH 1 M. 1𝐿 99 %
Los cálculos fueron:
= 50.5 𝑚𝑔 á. 𝑎𝑠𝑐 50.02 ± 0.01 mg á. asc

0.025 𝐿 𝐻2 𝑂 𝑥 1 𝑀 𝑁𝑎𝑂𝐻 = Preparación de sln de 250 mL a 100 ppm a partir

de la sln patrón.
40 𝑔 𝑁𝑎𝑂𝐻 100 %
0.025 𝑚𝑜𝑙 𝑥 𝑥
1 𝑚𝑜𝑙 𝑁𝑎𝑂𝐻 99 % 250 𝑚𝐿 𝑥 100 𝑝𝑝𝑚
𝑉 𝑑𝑒 𝑠𝑙𝑛 𝑝𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛 =
= 1.01 𝑔 𝑁𝑎𝑂𝐻 1.02 ± 0.01 g NaOH 1000 𝑝𝑝𝑚
= 𝟐𝟓 ± 𝟎. 𝟎𝟒 𝒎𝑳 𝒔𝒍𝒏 𝒑𝒂𝒕𝒓ó𝒏
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Curva de calibración Figura 1: Grafica de curva de calibración.
La sln pasada de 250 mL - 100 ppm se utilizó para
1,2000
hacer las soluciones (slns) de la curva, de ésta se
tomaron alícuotas de 5.00, 10.00, 15.00, 20.00 y y = 0,0460x + (-0,0428)
1,0000
25,00 para preparar slns con concentración de r2 = 0,9960
entre 5.00 – 25.00 ppm respectivamente. Las 0,8000

Absorbancia.
colusiones se prepararon en matraces de 100 mL
que fueron llevados hasta el enrase. 0,6000

0,4000
Cálculos para la curva:
0,2000
5,00 𝑥 100 𝑝𝑝𝑚
𝑺𝒍𝒏 𝟏 = = 5 𝑝𝑝𝑚 0,0000
100 𝑚𝑙 5,0 10,0 15,0 20,0 25,0
Concentración (ppm) ácido ascorbico.
10,00 𝑥 100 𝑝𝑝𝑚
𝑺𝒍𝒏 𝟐 = = 10 𝑝𝑝𝑚
100 𝑚𝑙
La ecuación de la curva fue la siguiente (ecuación
15,00 𝑥 100 𝑝𝑝𝑚 de mínimos cuadrados).
𝑺𝒍𝒏 𝟑 = = 15 𝑝𝑝𝑚
100 𝑚𝑙
Ecu 1 y = mx + b
20,00 𝑥 100 𝑝𝑝𝑚
𝑺𝒍𝒏 𝟒 = = 20 𝑝𝑝𝑚 Donde se tiene m = 0,0460 y b = -0.0428
100 𝑚𝑙

25,00 𝑥 100 𝑝𝑝𝑚 Se obtuvo así:

𝑺𝒍𝒏 𝟓 = = 25 𝑝𝑝𝑚
100 𝑚𝑙
Primero se obtuvo los promedios de las
concentraciones y las absorbancias
En la tabla 1 se muestran los datos de la curva de
calibración. Ecu 2
n1+n2+n3+n4+⋯
=
Tabla 1: Datos para Curva. Ndatos totales

Concentración = 15
Absorbancia
(ppm) = 0,6470
5,0 0,1582
10,0 0,4471 x para concentración
y para absorbancia
15,0 0,6592
20,0 0,8783 Se calculan las siguientes cantidades Sxx, Syy y
25,0 1,0922 Sxy para simplificar el cálculo de la pendiente.

Ahora con estos datos se procede a graficar. En la Ecu 3 Sxx = ∑(Xi − x)^2
figura 1 se muestra la gráfica obtenida; se grafica
absorbancia vs concentración. Ecu 3.1 Syy = ∑(yi − y)2

Ecu 3.2 Sxy = ∑(Xi − x)(yi − y)

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Al reemplazar se obtiene Así, se obtiene al reemplazar y operar
Sxx = 250,0000 Sb = 0,0277816
Syy = 0.5307 Intervalo de confianza al 95% con n2 grados de
Sxy = 11,4960 libertad: 3.18
Así, se calcula la pendiente de la línea (m) y la b ± tSb
intercepción en y, b: -0,0428 ± 0,09

Sxy Se halla también la suma de cuadrados de los

Ecu 4 𝑚=
Sxx residuos para simplifica la formula de coeficiente
de correlación lineal así:
Al reemplazar se obtiene
m = 0,0460 2
Ecu 9 𝑆𝑆𝑟𝑒𝑠𝑖𝑑 = ∑𝑁
𝑡=1[𝑦𝑖 − (𝑏 + 𝑚. 𝑥𝑖 )]

Calculo de la desviación estándar de la regresión. Así se obtiene

SSresid = 0,0021
Ecu 5
Se obtiene la correlación lineal mediante los
𝑆𝑦𝑦 − 𝑚2 𝑆𝑥𝑥
𝑆𝑟 = √ siguientes cálculos:
𝑁−2
Al reemplazar y operar se tiene: Ecu 10
Sr = 0.0265 𝑆𝑆𝑟𝑒𝑠𝑖𝑑
𝑟2 = 1 −
𝑆𝑦𝑦
Cálculo de la desviación estándar de la
pendiente, Sm. Se tiene
r = 0,9980
𝑆𝑟 2
Ecu 6 𝑆𝑚 = √ A continuación se calcula el límite de detección y
𝑆𝑥𝑥
cuantificación así:
Sm = 0,001675293
Ecu. 8
Intervalo de confianza al 95% con n2 grados de (𝑏 + 𝑘.𝑆𝑏) + 𝑏
libertad: 3.18 𝐿𝐷 = k=3
𝑚
m ± tSm (𝑏 + 𝑘.𝑆𝑏) + 𝑏
𝐿𝐶 = k=10
𝑚
0,0460 ± 0,005
Así se obtiene:
Ecu 7 𝑏 = 𝑦 − (𝑚 . 𝑥)
LD = 1,8124
Al reemplazar se obtiene LC = 6,0416
b = -0.0428
Preparación de muestra y el blanco
Cálculo de la desviación estándar de la
intersección en y, Sb. La muestra (jugo) fue tratada previamente
mediante centrifugación después se procedió a
prepararla.
∑ 𝑋𝑖 2
Ecu 8 𝑆𝑏 = 𝑆𝑟 √
𝑁 ∑ 𝑋𝑖 2 –(∑ 𝑋𝑖)2
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Muestra: En un matraz de 50 ± 0.05 mL se mezcló
y se preparó la muestra con 1,00 ± 0.006 mL de
jugo centrifugado y 1,00 ± 0.06 mL de HCl al 10
%, y se llevo a enrase con agua destilada.
Blanco: En un matraz de 50 ± 0.05 mL se mezcló
y se preparó el blanco con 3 ± ¿? mL de HCl 10 %
v/v, 3 ± ¿? mL de NaOH 1 M y 1 ± 0.06 mL de
jugo centrifugado, y se llevo al enrase con agua
destilada.
Método de adición estándar
Se prepararon 5 slns en matraces de 50 ± 0.05 mL,
cada sln contenía 1 ± 0.06 mL de HCl al 10 %, y
una cantidad dada de sln patrón que se ve en la
siguiente tabla, luego el matraz se llevo hasta el
enrase.
Tabla 3: Volumen de solución patrón en cada una
de las soluciones para la curva de adición estándar.

En la tabla 2 se muestran los datos para la muestra. Volumen de

Solución Absorbancia
Se aclara que la concentración que se observa en la patrón (mL)
tabla es el dato que nos dio el equipo en el que se 1 0 0,8373
realizaron los análisis. 2 2,5 0,9999
3 5,0 1,0659
Tabla 2: Datos de la muestra. 4 7,5 1,1401
5 10,0 1,2887
Muestra
Concentración Absorbancia
19,6772 0,8621 A continuación con estos datos se grafica la curva
de calibración por el método de adición de
estándar y se muestra en la figura 2.
A continuación se calcula la concentración de
ácido ascórbico a partir de la ecuación 1 despejada Figura 2: Curva de calibración.
y reemplazando los datos como se muestra:
1,3000
0.8621 − (−0.0428) y =0,0417x + 0,8578
𝑥=
0,0460 1,2000 r2 = 0,9734
Absobancia

Se obtiene concentración de acido ascórbico 1,1000

x = 19,6777 ppm de á. ascórbico 1,0000

También se calcula desviación estándar para los 0,9000
resultados obtenidos a partir de la curva de
calibración. El cálculo fue así, con la ecuación de 0,8000
desviación estándar respectiva. 0,0 2,5 5,0 7,5 10,0
Concentración (ppm) de ácido ascóbico
𝑆𝑟 1 1 (𝑦𝐶 −𝑦)2
𝑆𝑥 = √ + +
𝑚 𝑀 𝑛 𝑚2 𝑆𝑥𝑥 Se calcula ahora la concentración de acido
ascórbico por medio de el método de adición
Se reemplaza y se tiene que Sx = 0,653629748 estándar.
El cálculo se realizó con la ecuación 1 aplicada a
Intervalo de confianza al 95% con n2 grados de
este método.
libertad: 3.18
y = 0,0417.x + 0,8578
x ± tSm
0.8621−0,8578
19,6777 ± 2,1 Se despeja 𝑥=
0,0417
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Se tiene
x = 0,1035 ppm de ácido ascórbico
Mediante cálculos muy similares a los presentados
en el paso anterior ya que se siguieron los mismos
pasos y se utilizaron las mismas formulas, de hallo
el coeficiente de correlación lineal y la desviación
estándar de la regresión, los resultados fueron.
r = 0.9866
Sx = 0,9496
r: coeficiente de correlación lineal.
Sx = desviación estándar de la regresión.
Intervalo de confianza al 95% con n2 grados de
libertad: 3.18
También se calcula el límite de detección y
cuantificación.
LD = 1,7535
LC = 5,8452
Nota: para realizar los cálculos que se muestran
en el presente informe se utilizó como material de
referencia el libro fundamentos de química
analítica de Skoog, 9ed [1].
ANÁLISIS DE RESULTADOS
La espectroscopia de absorción ultravioleta, al
igual que muchos otros métodos de
espectroscopia, se utiliza en gran parte para el
estudio de las moléculas orgánicas, su estructura,
su análisis cualitativo y cuantitativo.
La región ultravioleta desde 100 hasta 380 nm y se
divide en 2 regiones diferentes, la región lejana
que va desde los 10 hasta 200 nm y la región
cercana que va desde 200 hasta 380 nm.[1]
La técnica se basa en la medición de cuantos
fotones absorbe una muestra por el cambio que
trata desde el estado basal al estado excitado de la
molécula; para esto el aparato utiliza una lámpara
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de descarga de hidrógeno o deuterio como fuente
de luz para la región ultravioleta, el
monocromador aísla las radiaciones de longitud
de onda deseada, y el detector se encarga de captar
la radiación (fotones) y a su vez, dejarla en
evidencia para su estudio posterior.
Los resultados en este tipo de técnicas, la
polaridad y el pH de la solución pueden afectar la
absorción del espectro; por eso en nuestra práctica
le agregamos NaOH al blanco, ya que al ser una
base fuerte, neutralizará el ácido ascórbico y
subirá el pH de manera que la absorbancia
resultante estará fuera del rango que se está
evaluando, lo que permitirá establecer la longitud
de onda con los componentes de la matriz.[2]
Por otro lado, se ve la diferenciación en uso de
técnicas para la curva de calibración, pues los
resultados fueron muy diferentes entre si.
Independientemente de eso la práctica estuvo bien
hecha y los errores que afectaron los resultados no
fueron errores humanos como tal.
CONCLUSIONES
 La espectroscopia de absorción ultravioleta,
resulta ser un método bastante sencillo y
rápido y confiable en lo que se refiere a la
determinación o cuantificación de compuestos.
 Las principales fallas en este tipo de análisis,
se da en el manejo del equipo en la preparación
de las soluciones a estudiar.
 En este tipo de análisis, se debe tener extremo
cuidado en la preparación del blanco, pues con
este es que se contrastará las señales
resultantes del estudio de la muestra, y
permitirá el enfoque en la molécula
seleccionada.
 La espectroscopia en general cobra gran
importancia, por las características del proceso
analítico y por la variedad de moléculas que se
pueden estudiar por medio de este. Se denota
su permeabilidad en los campos de la salud y
5
 la industria alimenticia, por la facilidad para REFERENCIAS
estudiar compuestos orgánicos.
[1] Skoog. Fundamentos de química analítica. -
Novena edición. 9ed. Ma Graw – hill. 2015.
PREGUNTAS
1. Teniendo en cuenta la concentración de ácido [2] Skoog, D. Principios De Análisis Instrumental.
ascórbico determinada experimentalmente, 5ta Edición, McGraw-Hill, interamericana de
cómo es el contenido de esta sustancia en el España, 2001. pp. 765-766.
jugo comercial comparado con el contenido
promedio encontrado en jugo de naranja
natural? [3]https://es.scribd.com/doc/242447242/DETERM
INACION-EXPERIMENTAL-DE-ACIDO-
R// Teniendo en cuenta que la concentración ASCORBICO-EN-EL-ZUMO-DE-NARANJAS-
media del ácido ascórbico en jugos naturales es de 2-pdf
400ppm a 500 ppm, podemos decir que la
concentración encontrada en el jugo de naranja
comercial (19,5 ppm en curva normal y 0,1035 en [4]http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CU
curva con adición estandar) es muy insuficiente, y RVASDECALIBRACION_23498.pdf
que por lo tanto dicho producto no representa una
fuente de vitamina C representativa.[3]
2. Qué ventajas y desventajas presentan cada uno
de los métodos de calibración utilizados?
R// En general lo que difiere como ventajas y
desventajas en estos dos métodos de calibración,
es que en ocasiones la matriz de la muestra es
compleja y/o desconocida. Por ejemplo una
muestra de sangre contiene muchos constituyentes
que no pueden ser incorporados a los estándares en
las disoluciones de los utilizados para la curva de
calibración; en este caso lo que se recomienda es
añadir a la muestra pequeños volúmenes de una
disolución de un estándar concentrado; de esta
manera la matriz que contiene el estándar no
difiere mucho de la propia muestra.[4]

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