Centrifugación

La centrifugación es una técnica de sedimentación, acelerada gracias al uso de

fuerza centrífuga. Se aplica al análisis o a la separación de mezclas de partículas,
células, orgánulos o moléculas.
Partes de la Centrifuga
1. Tubos
De vidrio o plástico. Resistentes químicamente (disolventes, reactivos) y
físicamente (tensión a las velocidades elevadas que se emplean). Diversos tamaños
y formas. Plásticos especiales para altas velocidades.
2. Centrífugas
Se puede regular velocidad, tiempo, temperatura. Elevadas velocidades (102-
105 rpm).

3. Rotores
Dos tipos: rotor angular o de ángulo fijo rotor basculante

Modalidades
Según la velocidad:

Criterio aproximado:

Centrifugación a baja velocidad menos de 10.000 rpm

Centrifugación a alta velocidad entre 10.000 y 20.000 rpm

Ultracentrifugación más de 20.000 rpm

Según el propósito:
1. Centrifugación analítica
Objetivo: medir las propiedades físicas de las partículas que sedimentan, tales
como su coeficiente de sedimentación o su masa molecular. Especialmente en la
variante ultracentrifugación analítica.
Las moléculas se observan mediante un sistema óptico durante la centrifugación.
Los tubos de centrífuga deben ser de cuarzo para dejar pasar la luz visible y
ultravioleta. Rotor basculante, observación en vertical.
2. Centrifugación preparativa
De uso más común. Objetivo: aislar partículas, células o moléculas para su análisis
o utilización posterior. En general, se emplea mayor cantidad de muestra que en la
analítica.
Métodos de Centrifugación
Existen varios métodos de centrifugación y una extensa variedad de técnicas
derivadas de esta.
Centrifugación Diferencial
Se basa en una diferencia en la densidad de las moléculas. Esta diferencia debe
ser grande para poder ser observada al centrifugar; Las partículas que posean
densidades similares sedimentan juntas. Este método no es especifico, por lo que
se utiliza como centrifugación preparativa para separar partículas de otros
componentes en la mezcla (por ejemplo, para separar mitocondrias de núcleos y
membrana) pero no es útil para separar moléculas.
Centrifugación Zonal
Las partículas se separan al usar medios de diferente densidad. Las partículas con
mayor densidad se sedimentarán al fondo (precipitado). Aquellos componentes de
la mezcla con menor densidad al medio quedarán en el sobrenadante mientras que
las partículas con densidad similar a la del medio de centrifugación, quedarán en
una zona intermedia entre el precipitado y el sobrenadante. El medio puede no
presentar gradientes de concentración (centrifugación zonal sin gradiente) o tener
diferencias de concentración (centrifugación zonal con gradiente).
Ultracentrifugación
Permite estudiar las características de sedimentación de estructuras subcelulares
(lisosomas, ribosomas y microsomas) y biomoléculas. Usar rotores especiales (fijos
o de columpio) y sistemas de monitoreo.
Conclusion
La Centrifugación es un método que permite separar sólidos de líquidos, o líquidos
de líquidos de diferentes densidades mediante la utilizacion de una centrifuga de
laboratorio. La centrifuga obliga a una mezcla a experimentar un movimiento
rotatorio con una fuerza de mayor intensidad que la fuerza gravitacional, provocando
la sedimentación del sólido o de las partículas de mayor densidad. Este es uno de
los principios en los que se basa la densidad: todas las partículas, por poseer masa,
se ven afectadas por cualquier fuerza. La centrifugación impone, gracias a la
aceleración centrífuga, un efecto parecido al gravitacional: Las partículas
experimentan una aceleración que las obliga a sedimentar.
Bibliografia

 Harrison, Roger G., Todd, Paul, Rudge, Scott R., Petrides D.P. Bioseparations Science
and Engineering. Oxford University Press, 2003.
 Dishon, M., Weiss, G.H., Yphantis, D.A. Numerical Solutions of the Lamm Equation. I.
Numerical Procedure. Biopolymers, Vol. 4, 1966. pp. 449–455.
 Cao, W., Demeler B. Modeling Analytical Ultracentrifugation Experiments with an Adaptive
Space-Time Finite Element Solution for Multicomponent Reacting Systems. Biophysical
Journal, Vol. 95, 2008. pp. 54–65.
 Cole, J.L., Hansen, J.C. Analytical Ultracentrifugation as a Contemporary Biomolecular
Research Tool. Methods and Reviews, 1999/2000.
 Howlett, G.J., Minton, A.P., Rivas, G. Analytical Ultracentrifugation for the Study of Protein
Association and Assembly. Current Opinion in Chemical Biology, Vol. 10, 2006. pp. 430–
436.
 Dam, J., Velikovsky, C.A., Mariuzza R.A., et al. Sedimentation Velocity Analysis of
Heterogeneous Protein-Protein Interactions: Lamm Equation Modeling and Sedimentation
Coefficient Distributions c(s). Biophysical Journal, Vol. 89, 2005. pp. 619–634.