USO DE LA SEROLOGÍA

COMO HERRAMIENTA EN
MEDICINA PREVENTIVA AVIAR
Carlos A. Gómez D, DVM, MSc Gerente de aves y cerdos para IDEXX Latino-América
Muestras y muestreo
 Calidad y cantidad de las muestras tiene impacto en la interpretacion de los
resultados

 Evitar

 suero lipemico, hemolisado y contaminado

Número de muestras para detectar infección con 95% de Confianza
Herd Prevalence
Size
50 40 30 25 20 15 10 5 2 1 0.5 0.1
20
4 6 7 9 10 12 16 19 20 20 20 20
30
4 6 8 9 11 14 19 26 30 30 30 30
40
5 6 8 10 12 15 21 31 40 40 40 40
50
5 6 8 10 12 16 22 35 46 50 50 50
60
5 6 8 10 12 16 23 38 55 60 60 60
70
5 6 8 10 13 17 24 40 62 70 70 70
80
5 6 8 10 13 17 24 42 68 79 80 80
90
5 6 8 10 13 17 25 43 73 87 90 90
100
5 6 9 10 13 17 25 45 78 96 100 100
150
5 6 9 11 13 18 27 49 95 130 148 150
200
5 6 9 11 13 18 27 51 105 155 190 200
500
5 6 9 11 14 19 28 56 129 225 349 500
1000
5 6 9 11 14 19 29 57 138 258 450 950
5000
5 6 9 11 14 19 29 59 147 290 564 2253
10000 5 6 9 11 14 19 29 59 148 294 581 2588
5 6 9 11 14 19 29 59 149 299 596 2995
 Guía para poblaciones negativas (95% de nivel de confianza)
Comentarios
• Lechones Presunto-negativos y unidades de
engorde deben utilizar de 30 a 60 muestras
por unidad
• Cerdas Presunto-negativas y las poblaciones
de reproductores deben utilizar 60 a 150
muestras, suponiendo que la prevalencia de
la enfermedad 2-5%

Reference
• Ponedoras y pollos considerados
Martin SW et al Veterinary epidemiology–principles and methods. Ames, Ia: Iowa State University Press negativos debe usar 150 a 300 muestras
• Para detectar 5% de prevalencia de
enfermedad 60 muestras son necesarias
por unidad de población
• Con 30 muestras, asumimos al menos
10% de prevalencia de enfermedad
Guia para poblaciones positivas
(con nivel de confianza del 95% )

Comentarios:
• Para lechones y engorda usar 13, 18 o 27
muestras por unidad de acuerdo a la
prevalencia de la enfermedad (10, 15 o
20%)
• Para cerdas, reproductoras, pollonas,
posturas y pollos, usar 14, 19 o 29 muestras
por unidad de acuerdo a la prevalencia de
la enfermedad (10, 15 o 20%).
• Un mínimo de 95% de confianza puede
ayudar a establecer datos confiables
y/o líneas base para hacer
Reference interpretaciones.
Martin SW et al Veterinary epidemiology–principles and methods. Ames, Ia: Iowa State University Press
• La aplicación de la medicina preventiva en
poblaciones , nos asegura la obtención de
resultados validos y una mejor
interpretación.
Toma de muestras en parvadas positivas, riesgo de
reducir el tamaño de la muestra
Comentarios:
• Note la reducción del nivel de confianza cuando se
cambia desde el número sugerido de muestras a
10 muestras como un tamaño de muestra
• El ejemplo de 3000 animales puede ser aplicable a
una granja de cerdas o reproductoras: si la
de prevalencia de
Asumiendo 5% prevalencia de la enfermedad es igual a o menor
enfermedad que 5%, 10 muestras por unidad tendrá un nivel de
confianza del 40% en los resultados obtenidos a
partir de las 10 muestras, que están distorsionando
la población que estaba bajo vigilancia
• Un complejo de edades múltiples tiene más
prevalencia de la enfermedad y la mala
bioseguridad en comparación con un complejo de
una sola edad, lo que puede justificar un menor
número de muestras (10 a 15) en esas condiciones
x x
 Muestreo al azar y sistemático
x x  Separar el suero de la sangre

antes de 24 horas,
x
x  Refrigerar máximo por 3-5
x x dias, o congelar a -20C
 Evitar congelar y descongelar
(maximo 3-5 veces)
Herramientas de Diagnóstico y Monitoreo (Vigilancia)

 Evaluaciones clínicas de campo

 Evaluación clínica
 Exámenes postmortem
Serología.
Bacteriología y Micología.

Virología.

Histopatología.

Detección, caracterización y cuantificación molecular.

Serología - Aplicaciones
1. Monitoreo/Vigilancia de enfermedades.
2. Diagnóstico.
3. Epidemiología.
4. Evaluación de vacunas.
5. Evaluación de vacunaciones.
1. Monitoreo/Vigilancia de Enfermedades
 Enfermedades/Patógenos Comunes:
 Newcastle, Bronquitis, Metapneumovirus, Reovirus…
 Enfermedades de alta importancia:
 MG, MS, IA, Newcastle velogénico viscerotrópico…
1. Monitoreo/Vigilancia de Enfermedades
 Productores de huevos SPF
 Todos los patógenos conocidos
 Reproductores primarios
 Múltiples patógenos
 Enfermedades implicados en alimentos
 Patógenos transmisibles verticalmente
 Reproductoras pesadas y ligeras
 Ponedoras de huevo comercial
 Pollos de engorde
 Patógenos respiratorios
1. Monitoreo/Vigilancia de Enfermedades
Ejemplo de MG en un Lote de Abuelas

 Lote adulto de abuelas

 Monitoreado regularmente para MG, MS, AI, Salmonella
 Conjuntivitis ligera
 Signos respiratorios
 Sin mortalidad significativa
 Sin bajas en producción de huevo
 Newcastle, Bronquitis, IA descartados por ELISA
1. Monitoreo de Enfermedades:
MG/MS
ELISA (MG/MS)
Aglutinación Rápida en Placa

Inhibición de la hemoaglutinación (HI)

Cultivo
Hisopos traqueales
PCR
qRT-PCR
Secuenciación de DNA
1. Monitoreo de Enfermedades: MG/MS
 Criterio para interpretación de serología para MG/MS:
 Aglutinación en placa (+, ++, +++, ++++)
 ELISA (POSITIVO, NEGATIVO)
 HI Negativo (1:0-1:20)
 HI Sospechoso (1:40)
 HI Positivo (>1:80)
 Cultivo (Inmunofluorescencia-POS/NEG)
 Detección molecular (POS/NEG)  Secuenciación
 MG ELISA1
BIRD PLATE HI-MG MG/MS ELISA (IDEXX) MG ELISA2
1 POS 40 7,954 4,174 4,769

Serología MG
2 POS 80 14,683 8,593 2,962
3 POS 40 11,107 5,987 2,107
4 POS 20 3,668 2,301 1,123
5 POS 20 3,520 2,018 2,787

Lote de Abuelas
6 POS 80 14,352 7,681 1,068
7 POS 20 1,442 816 610
8 POS 40 7,797 4,464 1,220
9 POS 80 12,313 7,529 1,727
10 POS 40 11,107 8,276 1,025
11 POS 40 8,348 4,654 1,279
12 POS 40 5,585 4,064 959
13 POS 20 6,704 4,253 753
14 POS 40 10,005 5,486 1,693
15 POS 20 5,472 4,109 1,396
16 POS 40 6,225 5,349 2,245
17 POS 20 6,187 4,319 2,099
18 POS 40 5,817 4,696 2,999
19 POS 40 10,048 6,627 1,548
20 POS 20 7,653 4,130 1,895
21 POS 20 2,937 3,800 1,085
22 POS 40 12,951 6,453 1,614
23 POS 80 15,538 7,833 1,626
24 POS 40 11,595 5,803 1,380
25 POS 40 10,769 5,814 1,310
26 POS 20 1,060 962 423
27 POS 20 4,350 3,811 1,161
28 POS 40 2,960 2,281 565
29 POS 40 3,448 3,678 1,478
1. Serología ELISA Para MG/MS
Positivos (%)
100
80
60
40
20
0
PLACA MG HI MG HI MG/MS MG ELISA
POSITIVO SOSPECHOSO POSITIVO ELISA POS POS
Pruebas Complementarias
 Aislamiento e identificación
 Detección molecular/secuenciación

 Lote vendido y huevos destruidos

Inventario de Aves en Georgia
TIPO GRANJAS GALPONES CAPACIDAD MAX
Pollos de engorde 2,619 10,606 248,430,000
Ponedoras 47 136 10,480,000
Pollitas comerciales 48 119 2,761,000
Reproductora ligera 13 17 301,000
Pollita reproductora 5 8 132,000
Reproductora pesada 755 1,445 14,351,000
Pollita reproductora 245 787 8,371,000

100% de las enfermedades virales son monitoreadas por ELISA.

2. Serología Diagnóstica
 Evaluaciones en un solo monitoreo
 MG, MS, AI, …

 Evaluaciones en múltiples monitoreos

 Monitoreo contínuo (base de datos/baselines)

 Serología en fases aguda y de
convalescencia (seroconversión)
 Ponedoras – Empresa “A”
C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 C10 C11 C12
AGE (WEEKS) 75 63 54 42 49 27 112 102 95 88 35 20
BREED HYLINE BOVANS BOVANS HYLINE HYLINE HYLINE HYLINE HYLINE HYLINE HYLINE HYLINE HYLINE
MDV VACCINE HVT/RISP HVT/RISP HVT/RISP HVT/RISP HVT/RISP HVT/RISP HVT/RISP HVT/RISP HVT/RISP HVT/RISP HVT/RISP HVT/RISP
MG-VACCINATED NO NO NO TS-11 NO TS-11 NO NO NO NO TS-11 TS-11
NDV HI (n=20) 20083 19517 21276 18658 25624 22208 15448 14643 19867 9459 27691 18358
NDV LO 3092 3450 3193 1084 2092 816 4602 1300 3198 0 3808 3238
NDV

NDV AVG 9584 7797 8361 9583 11210 10563 9166 7156 10899 3721 14159 9727
NDV GMT 8498 7058 4976 7594 8769 8358 8684 5880 10147 1916 12331 8575
NDV GA GMT
NDV CV% 33.5 32.6 42.3 40.8 46.1 41.4 23.1 41.4 25.2 55 35 34.3
IBV HI (n=20) 44419 44093 41573 47678 47242 47242 40903 43525 42940 30069 42682 38907
IBV LO 2639 4328 12224 6341 5087 8177 4741 2896 7382 1862 14220 14220
IBV

IBV AVG 21723 21018 29383 26783 32787 32317 23596 25235 23993 11868 29717 28297
IBV GMT 16707 18680 27746 24300 30219 29867 21280 20420 22110 9711 28686 27365
IBV GA GMT
IBV CV% 42.6 29.4 20.5 26.7 22 23 26.2 36.6 24.4 38.8 16 15.7
AE HI (n=20) 12055 7405 9670 9492 10061 9704 10913 7943 7847 15313 8714 7043
AE LO 0 0 4776 0 0 0 0 0 0 0 0 0
AE AVG 6922 3129 6967 6354 6895 4142 6343 4513 3886 3837 4193 3043
AEV

AE GMT 3075 115 6820 1933 4560 421 4154 670 280 125 916 164
AE GA GMT
AE CV% 45.4 62.1 29.3 46.4 35.8 66.9 44.4 49.9 61.6 99.6 49.9 67.7
MG HI LO (n=30) 40 0 0 0 0 0 0 80 0 0 0 0
MG

MG HI HI 320 320 20 40 80 20 320 320 320 320 80 0

MG HI AVG 195.5 181.3 1.8 30.0 14.4 6.7 205.0 144.0 123.3 108.4 16.8 0.0
 Evaluaciones a Una Sola Edad – Empresa “A”
Complejo en Línea de 1.3 millones de Ponedoras)

C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6 C-7 C-8 C-9 C-10 C-11 C-12 S&G
EDAD 75 63 54 42 49 27 112 102 95 88 35 20 50
NDV GMT 8498 7058 4976 7594 8769 8358 8684 5880 10147 1916 12331 8575 ND
IBV GMT 16707 18680 27746 24300 30219 29867 21280 20420 9711 9711 28686 27365 ND
AE GMT 3075 115 6820 1933 4560 421 4154 670 280 125 916 164 ND
MG HI MAX 320 320 20 40 80 20 320 320 320 320 80 0 320
MG HI AVG 195.5 181.3 1.8 30 14.4 6.7 205 144 123 108.4 16.8 0 197.6
 Bronquitis Infecciosa – Titulos HI Empresa “C” (Abril/22/2008)

18000
Max-Min GMT (IBV ELISA)

16000 MASS
14000

12000

10000

8000

6000

4000

2000

0
ARK

ARK

ARK

ARK

ARK

ARK

ARK

ARK

ARK

ARK

ARK
MASS
CONN

DE072

CONN
ARK
MASS

DE072
MASS
CONN

DE072
MASS
CONN

DE072
MASS
CONN

DE072
MASS
CONN

DE072
MASS
CONN

DE072
MASS
CONN

DE072
MASS
CONN

DE072
MASS
CONN

DE072
MASS
CONN

DE072
MASS
CONN

DE072
C1 C1 C1 C1 C2 C2 C2 C2 C3 C3 C3 C3 C4 C4 C4 C4 C5 C5 C5 C5 C6 C6 C6 C6 C7 C7 C7 C7 C8 C8 C8 C8 C9 C9 C9 C9 C10 C10 C10 C10 C11 C11 C11 C11 C12 C12 C12 C12
84 84 84 84 72 72 72 72 63 63 63 63 51 51 51 51 58 58 58 58 36 36 36 36 20 20 20 20 101 101 101 101 104 104 104 104 96 96 96 96 44 44 44 44 29 29 29 29

Galpón, Edad, Antígeno HI (IBV)

▲ = MASS; ▲ = CONN; ▲ = ARK; ▲ = DE072
Uso Práctico de Bases de Datos – Pollos de Engorde
 Serología a edad de procesamiento
 Bronquitis, Newcastle, Metapneumovirus son de gran
utilidad.
Número pre-determinado por parvadas.

Inclusión de parvadas “problema” para

comparaciones > 23 aves por parvada.

La aplicación es para la identificación de tendencias.
Base de Datos ELISA Para Bronquitis – Empresa “C”
Bronquitis ELISA GMT
J. Smith – Watt IBV Summit, 2002.

GA-98
[DEO72]
Virus aislado

B1B1 B1B1 B1B1 B1B1

Vacunaciones MASS MASS MASS ARK-DPI
ARK-DPI ARK-DPI DE-O72
DE-O72 DE-O72
Línea Base ELISA Para Bronquitis – Empresa “A”

IBV GMT IBV ELISA CV Lotes (n)

Empresa A:
> 2000 NA 75
Con Problema Clínico
Empresa A:
< 2000 NA 200
Sin Problema Clínico

Sept. 2009  Dec 2010.

Base de Datos Serológicos ELISA
Variaciones Por Región (Norte vs. Sur
Antígeno
POLLOS (Títulos ELISA a Edad de Proceso)
Norte de GA GMT (Lotes) Sur de GA GMT
(Lotes)
de Georgia)
NDV
IBV
339 (190)
2158 (191)
427 (87)
903 (87)
IBDV 7668 (120) 5435 (87)
REO 707 (206) 649 (6)
REPRODUCTORAS (20-30 Semanas de Edad)
Norte de GA GMT (Lotes) Sur de GA GMT
Antígeno
(Lotes)
NDV 3467 (177) 1762 (72)
IBV 6058 (176) 4863 (70)
IBDV 11866 (144) 8609 (71)
REO 5509 (206) 5350 (38)
Consideraciones Importantes para la Interpretación
 Título: número calculado del nivel de IgG en un lote.

 Una medida del nivel de repuesta al desafío de campo y a las vacunas

 No siempre mide la protección de las aves

 Ejemplo: Gumboro (titulo estandar vs desafío var.)

 Ejemplo: LT, cólera (protección es celular también)

 No indica el serotipo responsable de la seroconversión

 Consideraciones Importantes para la
Interpretación(2)
Aves poco desafiadas, no vacunadas

Vacunas vivas
Metodos de administración GMT CV
Antigenos debiles,

Aves desafiadas con organismos

potentes, invasivos, altos números,
adyuvantes
Base de Datos Serológicos ELISA
Variaciones Por Región – Pollos de Engorde
9000
8000
Norte de GA GMT
7000
6000 Sur de GA GMT
5000
4000
3000
2000
1000
0
NDV IBV IBDV REO
Base de Datos Serológicos ELISA
Variaciones Por Región – Reproductoras
14000
12000 Norte de GA GMT
10000 Sur de GA GMT
8000
6000
4000
2000
0
NDV IBV IBDV REO
Serología ELISA vs. Decomisos por Aerosaculitis
Octubre 2013 Diciembre 2013
12000 0.30

Decomisos por Aerosaculitis

IBV GMT
Bronquitis ELISA (GMT)

10000 0.25
AIRSAC CONDEMN (%)

8000 0.20

6000 0.15

4000 0.10

2000 0.05

0 -
F1
F3
F5
F7
F9
F11
F13
F15
F17
F19
F21
F23
F25
F27
F29
F31
F33
F35
F37
F39
F41
F43
F45
F47
F49
F51
Parvadas de Pollos
Base de Datos Serológicos ELISA
Complementación de ELISA con HI (Bronquitis)
700 4500

600 4000

NDV/IBV ELISA GMT Titer

3500
500
3000
IBV HI Titer

MASS HI
400 2500 CONN HI
ARK HI
300 2000 DEO72 HI
NDV ELISA
1500
200 IBV ELISA
1000
100 500
0 0
0 10 20 30 40 50
3. Epidemiología

Tendencias en seroconversión?
Seroconversión contra agentes

exoticos ?
4. Monitoreo de Vacunas y Vacunación
 Evaluación de vacunas
 Evaluación del programa de vacunación
 Base de datos de la propia empresa es esencial
 No deben utilizarse bases de datos genéricas o universales
 Protección

 Interpretación de brotes de enfermedad

 Momento de la vacunación
Titulos de Newcastle en Reproductoras pesadas
Títulos de Bronquitis en Reproductoras Pesadas
Titulos de IBD-XR en Reproductoras Pesadas
Titulos de REO en Reproductoras Pesadas
 Titulos de IBD-XR en Pollos de Engorde
9000 8271
8000
6702
7000
5870
6000 5479
ELISA Titers

5000
4000
(GMT)

3000
2000 1305
1000 159
0

CV 44 76 114 48 38 3
Títulos de IBD-clásico en Pollos de Engorde
5000
4500
4000
3500 3080
2757
ELISA Titers

3000
2500 2175 2121
2000
(GMT)

1500
1000
500 197 No Data
0

CV 46 51 98 49 41
Títulos de NDV en Pollos de Engorde
1200 1077
1000
800
ELISA Titers

600 542
472
(GMT)

400
228
200
39 26
0

CV 81 142 54 131 89 71
Títulos de IBV en Pollos de Engorde
4000
3500 3043
3000 2777
ELISA Titers

2500
1891
2000
(GMT)

1500
1000 768
503
500 51
0

CV 59 104 176 99 68 41
Títulos de REO en Pollos de Engorde
1400 1221
1200
1000
789
800
ELISA Titers

600 544
(GMT)

400
239
200 134
34
0

CV 89 111 114 113 66 63

Títulos ELISA IBD-XR (2009-2011) –
Reproductoras Empresa “A” vs. Georgia
12000

8229
10000

6398
8000

5712

4936
4708

4380
6000
GMT GA
4000
Com A
2000
0
Títulos ELISA IBD-XR (2009-2011) – Reproductoras
Empresa “A” Antes y Después de Correcciones

10187

10055
12000
10000
8000
6000 GMT GA
4000 Com A
2000 Com A NEW
0
Títulos ELISA IBD-XR (2009-2011)
Comparación de Vías de Administración

12000 10649
10000 9493
8836
8000 7360
6000 IM
4000 SQ

2000
a b a b
0
20-29w 30-39w
Títulos ELISA IBD-XR (2009-2011) - Reproductoras
Comparación de Vacunas Comerciales

12702
11792
14000
12000

9627
9141
10000

7193
7119
Vacc A

6929
8000
Vacc B
6000 Vacc C
4000 Vacc D
2000
0 a c d a a b b
20-29w 30-39w
Títulos ELISA Newcastle (2009-2011) – Reproductoras
Comparación de Tipos de Programas

8000 a
7000
6000
a
5000 a a
4000 a K Inactivada
a
3000 b b L Virus vivo en producción
2000 b N Sin vacuna en producción
c c b
1000
0
20-29w 30-39w 40-49w 50-59w
 Títulos de NDV en Pollos de Engorde (GA vs MEX)
16000
14000
14000
12000 10500
ELISA Titers

10000
10000
8000
6000 5000

4000 2600
2000 1350 1000 1200
449 197 253 380 766 747
31 29 21
0
1d (40flks)

14-20d (35 flks)

28-34d (23flks)
7-13d (66 flks)

21-27d (25 flks)

42-48d (143 flks)

35-41d (131 flks)

56+ (74 flks)

49-55d (265 flks)
2-6d (14 flks)

Sep CV 79 103 146 151 16 7 115 131 113 69 70

Los Diez Principios de la Interpretación
Serológica
1. Métodos rápidos, convenientes, sensibles, específicos y económicos.
2. Base de datos interna (propia de cada empresa o unidad de producción).
3. Comparación de base de datos propia con con su propia región.
4. Consideración de cambios estacionales en los datos serológicos.
5. Conocimiento del poder y limitaciones de cada ensayo de laboratorio.
6. Evitar evaluaciones riesgosas de un solo punto.
7. Cumplimiento de las reglas oficiales regionales y federales.
8. Consideración de cepas patógenas, variantes y serotipos locales.
9. Consideración de desafíos de campo y epidemiología en la serología.
10. Cómo y cuándo interpretar serología cualitativa o cuantitativamente.
Resumen
 ELISA es y continuará siendo una herramienta esencial
 Monitoreo/Vigilancia
 Diagnóstico
 Epidemiología
 Evaluación de vacunas y vacunaciones
 Fundamental la creación de una base de datos propia
 No usar una base de datos universal
Georgia

http://www.gapoultrylab.org/
Definición de Baseline
 Datos que representan niveles históricos o niveles iniciales de una cantidad
medible

 Usado como base para comparar con nuevos datos obtenidos

 subsecuamente o
 específicamente de una repuesta a una intervención/programa

 Ejemplos en producción avícola

 Estándar de raza
 Calidad del pollito (GPLN)
 Títulos de ELISA
Usar cual baseline?
 Lo ideal es de usar un baseline de monitoreo continuo
dentro de una compañia
 Tambien se puede usar baseline regionalmente, donde
todos los desafíos son comparables, y los programas de
vacunación similares
 Cuidado en comparar resultados con baselines de otras
regiones del mundo!
 Cuidado con usar baselines hechas con otro kits ELISA
Gracias por su atención

 Carlos-gomez@idexx.com