PRACTICA No.

2 CUENTA EN PLACA Escherichia coli

División de Ingeniería Química y Bioquímica, Tecnológico de Estudios Superiores

de Ecatepec, Av. Tecnológico s/n Esq. Av. Carlos Hank González (Av. Central),
Col. Valle de Anáhuac, C.P 55210, Ecatepec de Morelos, Estado de México,
México. E-mail: lau_irene94@hotmail.com

Palabras Clave: Escherichia coli, crecimiento, colonia, UFC

ÍNDICE GENERAL

1.0 Resumen…………………………………………………………………..…… 2

2.0 Objetivos
2.1 General………………..……………………........................................ 2
2.2 Específicos……………………………………………………………. 2

3.0 Marco Teórico…………………………………………………………….…… 2

4.0 Metodología…………………………………………………………………… 5

5.0 Análisis y discusión de resultados……………………………………….. 6

6.0 Conclusiones……………………………………………………………….....10

7.0 Bibliografía…………………………………………………………………... 10

1.0 RESUMEN

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La práctica se aplicó a la técnica cuenta en placa para evaluar el crecimiento de la
bacteria (Escherichia coli) su presencia se encuentra clasificado dentro de la
familia Enterobacteriaceae (bacterias entéricas). El microorganismo es capaz de
producir dos tipos de toxina, produce dos proteínas: la intimina que es codificada
por el gen eae y un factor de adherencia que es codificado por un plásmido,
ambas proteínas permite su unión a los enterocitos y la destrucción de las
microvellosidades intestinales, es capaz de resistir temperaturas de ebullición
hasta por 30 minutos. La infección puede ser adquirida por el consumo de
alimentos como vegetales frescos y agua contaminada y productos cárnicos. Los
resultados de esta técnica pueden variar debido a la técnica de dilución y
numerosas fuentes de contaminación. Se hizo el estudio de dos bacterias en el
laboratorio Escherichia coli y Pseudomonas fluorescens la cual el equipo 4 solo
trabajó con E.Coli. debido a la técnica se utilizó el caldo nutritivo como agar.

2.0 OBJETIVOS
INDICE
2.1 Objetivo general
 Evaluar la cuantificación de población de una muestra de E. coli
aplicando la técnica de cuenta en placa.

2.2 Objetivos específicos

 Observar y deducir los resultados adquiridos en la técnica de cuenta en
placa.
 Conocer la cuantificación de las UFC/ml de E. coli a partir de una
muestra.

3.0 MARCO TEORICO

Escherichia coli: Es una bacteria habitual en el intestino del ser humano y de

otros animales de sangre caliente. Aunque la mayoría de las cepas son
inofensivas, algunas pueden causar una grave enfermedad de transmisión

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alimentaria. La infección por E. coli se transmite generalmente por consumo de
agua o alimentos contaminados, como productos cárnicos poco cocidos y leche
cruda.

Los síntomas de la enfermedad incluyen cólicos y diarrea, que puede ser

sanguinolenta. También pueden aparecer fiebre y
vómitos. La mayoría de los pacientes se recuperan
en el término de 10 días, aunque en algunos casos
la enfermedad puede causar la muerte. (Escherichia
coli)

Figura 1.

Cultivo de microorganismos: El cultivo de microorganismos consiste en

proporcionarles las condiciones físicas, químicas y nutritivas
adecuadas para que puedan multiplicarse de forma
controlada. En general, podemos distinguir cultivos líquidos y
sólidos en función de las características del medio y cultivos
discontinuos y continuos en función de la disponibilidad de
nutrientes en el medio. (Microbiología General).

Figura 2.

Pseudomonas fluorescens

Orden: Pseudomonadales. Familia: Pseudomonadaceae. Género: Pseudomonas.

Pseudomonas fluorescens son bacterias con forma de bastón, que necesitan
oxígeno para vivir. En uno de sus extremos
tienen varios flagelos, que son como pelos que
les permiten moverse por el suelo. Son conocidas
por su capacidad de estimular el crecimiento de
las plantas que viven en contacto con ellas.

El modo más conocido en que ayudan a estimular el crecimiento de la planta es

Figura 3
produciendo antibióticos. Estos evitan que la planta se enferme por la presencia

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de otras bacterias u hongos patógenos. Cuando están presentes, las bacterias
Pseudomonas fluorescens compiten con estos patógenos e impiden su
crecimiento. También tienen la capacidad de acelerar la germinación y el
crecimiento de las plantas a través de hormonas. Algunas de estas bacterias
pueden eliminar sustancias contaminantes para el suelo y el agua. Cuando en el
suelo hay poco hierro, liberan un compuesto amarillo fluorescente para capturarlo.
(Pseudomonas fluorescens ).

El tamaño de Pseudomonas está entre 0.5 μm y 0.8 μm de espesor por 1.5 μm y

3.8 μm de largo. No forma esporas.

Metabolismo bacteriano.

Tiene un metabolismo aerobio estricto-oxidativo, no fermenta carbohidratos, sus

requerimientos nutricionales son sencillos prácticamente crece en agua.
Secreta sustancias coloridas hidrosolubles:

*Piocianina; Pigmento azulado.

*Pioverdina (Fluoresceína); tiene un color amarillo-verdoso ante luz UV es
fluorescente.
*Piorrubina; Tiene una coloración roja y se favorece su producción a
temperaturas menores a 37 °C y en un medio de cultivo con compuestos de hierro
*Piomelanina; Su color es marrón, aumenta su síntesis con temperatura menor a
37 grados Celsius y en ambiente con fuentes de Fe.

Produce la enzima catalasa, oxidasa, utiliza diversas fuentes de carbono entre

ellas el citrato, es capaz de reproducirse a temperaturas de 42°C (este fenómeno
puede ayudar a la identificación del género), Es capaz de secretar toxinas
extracelulares como exotoxina A y entero toxinas.

Hábitat en humanos y modo de transmisión.

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Hábitat: El género Pseudomonas prácticamente se encuentra distribuido en todas
partes, por ejemplo en agua, suelos, vegetación, gasolina, objetos inanimados, en
humanos, animales, etc.

Trasmisión: Por aire, el agua contaminada es buena fuente, es posible transmitir

la bacteria, por medio de gotitas de saliva, en hospitales (nosocomios) en especial
en aquellos que no cuenten con proceso de sanitización adecuado de áreas,
equipos, médicos, enfermeras y/o personal que este en contacto con el paciente
enfermo. El periodo de incubación oscila entre las 24h y 72h.

Medios de cultivo donde crece Pseudomonas spp.

Sus requerimientos nutricionales no son exigentes, por lo que crece en casi todos
los medios de cultivos, exceptuando aquellos que sean selectivos para alguna
especie en particular o que contengan antibióticos o sustancias que inhiban el
crecimiento. (Gil, 2015).

Su cultivo bacteriano se da en caldos o agares:

 Medio de cultivo base agar con Soya-Tripcaseína

 Caldo Nutritivo.
 Agar Cetrimida.
 Agar Mueller Hinton.
 Caldo Casoy.

Caldo nutritivo: Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el

desarrollo de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Esta
descrito en muchos procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros
materiales de importancia sanitaria.

Fundamento: Medio no selectivo, contiene pluripeptona (una mezcla de partes

iguales de peptona de carne y de caseína) y extracto de carne que
constituyen la fuente de carbono y nitrógeno necesarias para el
adecuado desarrollo bacteriano. Puede ser utilizada además, como pre INDICE

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enriquecimiento en la búsqueda de varias bacterias como la Salmonella ssp. A
partir de alimentos, ya que permite recuperar células dañadas, diluir metabolitos
toxico y sustancias inhibitorias. (Laboratorios Britania, 2001).

4.0 Metodología
La bacteria de estudio fue Escherichia coli. La mayoría de las E. coli son
organismos comensales inofensivos cuando se encuentran en su hábitat intestinal
natural. Diferentes cepas de E. coli son patógenos gastrointestinales graves para
los seres humanos, y algunas también son patógenos para animales jóvenes
destinados a la producción de alimentos. La E. coli tiene la capacidad de
intercambiar material genético por medio de elementos genéticos móviles, tales
como plásmidos y bacteriófagos, como respuesta de adaptación a entornos
nuevos y adversos. La cepa creció por estría cruzada en medio TSB (Tryptic Soy
Broth) es un medio nutritivo que favorece el crecimiento de una amplia variedad de
microorganismos, en especial las bacterias anaerobias facultativas y aerobias
comunes.
El agar se preparó con tres compuestos diferentes en un matraz de 250 ml, se
esterilizaron 20 tubos para cada equipo, los cuales se utilizarían para las
diluciones con agua destilada aproximadamente 400ml, todo el material previo a la
práctica se esterilizo en una autoclave a una temperatura de 120 °C durante 15
min. Después de enfriar la autoclave, se agregaron aproximadamente 5 ml de agar
por caja Petri (40 cajas) y se dejó solidificar aproximadamente 15 min. Finalmente
en cada serie de 20 tubos se agregaron 0.9 ml de agua estéril.

Se agregó un volumen de 100 µL de bacteria control en 900 µL de muestra de

medio contenida en tubos Eppendorf. Dicha muestra se agito en el vortex durante
10 s, para que esta se homogenizara y se pudiera tomar una alícuota de 0.1ml y
esta se traspasara a otro tubo Eppendorf para iniciar con diferentes diluciones
hasta completar 4 de ellas (1/5, ¼, 1/3, ½). Las cuales se cultivaron en cajas Petri
previamente rotuladas. Las muestras se almacenaron a 37°C.

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En todos los tratamientos se realizaron cuentas microbianas con la técnica cuenta
en placa. Las muestras se incubaron a 37°C por 24h.

Los resultados se sometieron a unas pruebas estadísticas, utilizando el paquete

estadístico GraphPad, Prism, Versión 5.0.

5.0 Análisis y discusión de resultados

Tabla 1. Resultados de la cuenta en placa de Escherichia coli. (Equipo 4)

Elaboración propia, 2016

INDICE

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Tabla 2.- Promedio y desviación estándar por equipo de Pseudomonas
fluorescens y Escherichia coli.

Equipo Promedio Desviación estándar

1 7.8156 1.0339

2 4.4668 0.4617

3 4.3512 0.9000

4 5.7653 0.8679

Elaboración propia , 2016

Figura 4. Grafica de las UFC/ml encontradas en cada dilución para

Escherichia coli.

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Figura 5.Grafica de grupo de desviacion estándar y promedio para
Pseudomona Fluorescens y Escherichia coli.

DISCUSIÓN

En la tabla 1. Se puede observar los resultados obtenidos de la cuenta en placa

para Escherichia coli en donde muestra las colonias que se obtuvieron y las UFC
para cada dilución utilizada, de hecho se realizo una sin dilución en donde no se
pudieron contar colonias, y estos resultados se obtuvieron ya que las cajas
tuvieron ciertas diferencias debido a que se contaminaron por la técnica utilizada y
por qué se sembró en el medio la bacteria directa pero con dilución, ya que la
preparación que se llevo a cabo para dichas cajas, murió debido a que no se
mantuvo en la temperatura adecuada. Por lo que solo en tres cajas se obtuvieron
algunas colonias, se observo que la muestra sin dilución como ya se había
mencionado fue directa de manera que esta se encuentra incontable debido al
volumen utilizado por que había poca cantidad de Escherichia coli.
INDICE

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En la tabla 2.se observan los resultados obtenidos de cada equipo para
Pseudomonas fluorescens y Escherichia coli, mostrando el promedio y desviación
estándar obtenido.

En la figura 4 se muestra la Grafica de las UFC/ml encontradas en cada dilución

para Escherichia coli para el equipo 4 , en donde muestra cada dilución y como va
aumentando el grado de UFC para las diluciones observando que en la dilución
1/105 tiene la mayor cantidad de UFC.

Figura 5 se muestra la Grafica de grupo de desviación estándar y promedio para

Pseudomona Fluorescens y Escherichia coli para equipo en donde la desviación
estándar es una promedio de las desviaciones individuales de cada observación
con respecto a la media de una distribución, en este caso para uno de los equipos,
cada equipo muestra su grado de dispersión y variabilidad obtenida en su
experimentación.

Cuando se obtiene un promedio alto, se puede obtener también una desviación

estándar alta como le sucedió al equipo 1 es lo que nos muestra la grafica, pero
no siempre sucede así como en los demás equipos, y como se puede observar el
equipo1 de Pseudomona Fluorescens obtuvo los mayores datos ósea un sesgo, y
más contaminación, para el equipo 4 muestra que esta alto también a diferencia
del equipo 2 y 3 que dan resultados menores y menos contaminación en las cajas
petri.

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6.0 Conclusión
Las cajas tuvieron ciertas diferencias debido a que una de las cajas se contamino,
por la técnica que se utilizó en ella, por lo que solo en tres de las muestras se
pudieron apreciar de manera adecuada dichas colonias de Escherichia coli, así
también se observó que la muestra a la que no se le realizo dilución, no se pudo
hacer el conteo de colonias ya que debido al volumen cultivado esta se encontró
de modo incontable para nuestro análisis.

4.0 BIBLIOGRAFÍA

Escherichia coli. (s.f.). Recuperado el 17 de Septiembre de 2016, de

http://www.who.int/topics/escherichia_coli_infections/es/

Microbiología General. (s.f.). Recuperado el 17 de Septiembre de 2016, de

http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.-
%20Cultivo%20de%20microorganismos.pdf

Pseudomonas fluorescens . (s.f.). Recuperado el 17 de Septiembre de 2016, de

http://contenidos.ceibal.edu.uy/fichas_educativas/_pdf/ciencias-
naturales/reino-monera/003-pseudomonas-fluorescens.pdf

Gil. (28 de 04 de 2015). MicrobitosBlog. Obtenido de MicrobitosBlog:

http://microbitosblog.com/2015/04/28/pseudomonas-aeruginosa-p-putida-p-
fluorescens-morfologia-medios-de-cultivo-enfermedades-y-mas/

Laboratorios Britania (2011) Caldo nutritivo britanialab. Obtenido de:

http://www.britanialab.com/productos/B02123%20REV%2001-
NUTRITIVO%20CALDO.pdf

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