k k

11 N.◦ de publicación:
ES 2 006 114
19
REGISTRO DE LA
PROPIEDAD INDUSTRIAL kNúmero de solicitud: 8800828
21

ESPAÑA
kInt. Cl. : C12N 1/12
51 4

A01G 33/00

12k PATENTE DE INVENCION A6

k
22 Fecha de presentación: 18.03.88 k
73 Titular/es: Caola Kosmetikai és
Haztartásvegyipari Vállalat
90., Bocskai ut
Budapest, HU
k
30 Prioridad: 09.02.88 HU 5 75/88

k
45 Fecha de anuncio de la concesión: 01.04.89 k
72 Inventor/es: Literáti-Nagy, Péter;
Bozóki, Gábor y
Radvány, Erzsébet

k
45 Fecha de publicación del folleto de patente: k
74 Agente: Gil Vega, Victor
01.04.89

k
54 Tı́tulo: Procedimiento de preparación de algas dotadas de perfeccionados efectos biológicos.

57kResumen:
Bajo condiciones de cultivo estériles, de un modo
fotosintético o con exclusión de aire, se desarrolla
una variedad de algas capaz de incorporar ade-
cuadamente selenio y se cultiva en un medio que
contenga selenio en una concentración compren-
dida entre 10−7 y 2 x 10−3 mol/litro.

Venta de fascı́culos: Registro de la Propiedad Industrial. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid

 1 2 006 114
DESCRIPCION
Esta invención se relaciona con un procedi-
miento de preparación de algas dotadas de per-
feccionados efectos biológicos.
Desde tiempos inmemoriales la humanidad ha
empleado las algas con fines nutritivos y alimen-
ticios. Ası́, las algas son. consumidas principal-
mente por los pueblos del Extremo Oriente; sin
embargo, recientemente también se vienen utili-
zando en forma seca o de tabletas en paı́ses de-
sarrollados. Constituyen unos vehı́culos de mate-
riales nutritivos altamente valiosos, puesto que su
forma seca contiene elevadas concentraciones de
sustancias que son esenciales para una vida sana,
tales como vitaminas, proteı́nas, complejos de mi-
croelementos proteı́nicos, sacáridos, ácidos grasos
poliinsaturados y similares.
En los años recientes, la contaminación am-
biental ha llegado a representar un problema
de alcance mundial. Actualmente, la contami-
nación de los mares y océanos por metales pesa-
dos tóxicos (por ejemplo, plomo, mercurio, cad-
mio, cobre, etc.), ası́ como por agentes inducto-
res de formaciones tumorales (por ejemplo, com-
puestos aromáticos policı́clicos condensados), no
carece de importancia. Representa un difı́cil pro-
blema el hecho de que tales agentes se acumu-
len en el organismo de las algas. Ası́, las “algas
completas” obtenidas del mar o cultivadas bajo
otras condiciones naturales no pueden usarse a
efectos de nutrición humana o animal, alimen-
tación cosmética y terapia; solamente pueden em-
plearse las fracciones de las “algas completas” que
hayan sido previamente purificadas de materia-
les biológicamente nocivos. Carames de Guovéa,
por ejemplo, describe un procedimiento de purifi-
cación de este tipo [Cosmetics and Toiletries 95.
47 (1980)]. Sin embargo, una operación de purifi-
cación supone una intervención que descompone
parte de las sustancias biológicamente activas del
alga, con lo que el valor biológico de la fracción de
alga ası́ obtenida queda notablemente disminuı́do
[Zajic: Properties and Products of Algae: Edición
Planum, Nueva York, (1970)].
Por ello, adquiere una importancia cada vez
mayor la preparación de algas estériles libres de
deterioros ambientales.
Se conoce una serie de procedimientos desti-
nados al cultivo artificial de algas, que pueden lle-
varse a cabo, por ejemplo, en un estanque abierto,
bajo la luz solar, o en un espacio cerrado bajo con-
diciones que aseguren unas propiedades de esteri-
lidad, ya sea con iluminación natural o artificial
o con exclusión de toda luz.
De acuerdo con la publicada solicitud de pa-
tente japonesa núm. 56.96690, se cultivan algas
usando clases de algas marı́timas en agua de mar
esterilizada, en una solución que contiene varias
sales nutritivas, bajo luz artificial.
De acuerdo con la publicada solicitud de pa-
tente japonesa núm. 45.17146, el cultivo indus-
trial de algas Chlorella verdes unicelulares se lleva
a cabo en un medio de cultivo de agua dulce
estéril con exclusión de dióxido de carbono y de
luz.
El cultivo de algas verdes unicelulares de agua
dulce se describe también en la memoria de pa-
2
2
tente francesa núm. 2.103.462, según la cual el
cultivo a escala industrial se realiza fotosintéti-
camente mediante el uso de soluciones nutritivas
que contienen adecuadas sales nutrientes.
5 De acuerdo con las publicadas solicitudes de
patentes húngaras núms. 4613/84 y 4614/84, el
cultivo de algas se efectúa en un agua mineral de
origen natural, en un agua medicinal o termal o
en una mezcla de ellas enriquecida por un com-
10 puesto metálico hasta una concentración de 10−2
mol/litro.
En cualquiera de las soluciones conocidas, las
algas a emplear para la fabricación de alimentos,
forrajes o medicinas son artificialmente produci-
15 das bajo o condiciones estériles. En estos pro-
cedimientos, las algas se cultivan bajo unas con-
diciones que determinan unas propiedades de las
algas ası́ obtenidas similares a las de algas espon-
táneamente desarrolladas en la naturaleza bajo
20 condiciones ambientales inocuas; o bien las pro-
piedades de las algas ası́ obtenidas son diferentes
sólo en medida reducida, dependiendo de la forma
del cultivo artificial.
Las algas artificialmente cultivadas mediante
25 uso de los procedimientos del arte anterior con-
tienen sólo pequeñı́simas proporciones, o ningu-
nas, de varios elementos, tales como selenio, cinc
o plata.
Es sabido además que el selenio tiene una
30 función biológica diversificada, tal como se ex-
pone en una amplia publicación de Thressa y cola-
boradores [Nutrition Review 35. 7 (1977)], sham-
berger [J. of Env. Path. and Tox. 4. 305 (1980)]
o Masukawa y colaboradores Experientia 39, 405
35 (1983)]. Ası́, es sabido que él selenio produce de
por sı́ un efecto hipotensivo, mejora los estados
isquémicos, hipóxicos e infárticos del corazón e
inhibe la lipofuscinosis ceroidal del sistema ner-
vioso central; ejerce también un efecto beneficioso
40 sobre la periodontitis y ha demostrado disminuir
la probabilidad de desarrollo de las enfermeda-
des cancerosas; además, es considerado como un
agente inhibidor de la mutagenesis. Una serie de
alteraciones o enfermedades, respectivamente, ta-
45 les como necrosis del hı́gado, mionecrosis, destru-
cción de la membrana de eritrocitos, lesiones in-
tersticiales, elevación del ST en el ECG, sı́ndrome
de Kwashiorcor (malnutrición proteı́nica) y escle-
rosis múltiple, han resultado ser inducidas por
50 una deficiencia de selenio.
La acción beneficiosa del selenio se basa prin-
cipalmente en su efecto activador dirigido a la
enzima glutationperoxidasa, que es el inhibidor
endógeno más importante de los nocivos procesos
55 de peroxidación. Al ser un indispensable cons-
titutivo del grupo prostético de la enzima gluta-
tion-peroxidasa, el selenio es una de las más im-
portantes e indispensables sustancias de la vida
que no se acumula en el organismo y que por con-
60 siguiente ha de ser continuamente suministrada.
Hasta ahora el selenio ha sido exclusivamente in-
troducido en el organismo por compuestos inor-
gánicos (dióxido de selenio, selenito sódico y si-
milares).
65 El objeto de la presente invención es propor-
cionar algas dotadas de particulares propiedades
biológicas y, debido a su incrementado contenido
en selenio, capaces de asegurar el efecto biológico
 3 2 006 114
de este último.
La invención se basa en el reconocimiento de
que, bajo ciertas condiciones, las algas no sólo
pueden mantenerse como vivas en soluciones que
contengan selenio, es decir, que no perecen, sino
que además se desarrollan y por tanto pueden
cultivarse en una solución nutritiva que contenga
selenio en concentración elevada. Este reconoci-
miento es sorprendente puesto que, de acuerdo
con el arte anterior, era de esperar que las algas
fuesen aniquiladas por el tóxico selenio.
Además, la invención se basa en el reconoci-
miento de que el selenio es incorporado en el or-
ganismo de un alga cultivada en un medio que
contenga aquél bajo ciertas condiciones.
Ası́, la invención se relaciona con un procedi-
miento de preparación de algas dotadas de perfec-
cionados efectos biológicos, en el que la variedad
de alga seleccionada se cultiva bajo condiciones
estériles en un medio consistente en agua dulce y
sales nutritivas, en presencia de dióxido de car-
bono y luz, de un modo fotosintético, o con ex-
clusión de luz, en un medio de cultivo que con-
tenga también una fuente de carbono, hidrógeno,
oxı́geno y nitrógeno, tras lo cual se separa el alga
ası́ obtenida. De acuerdo con el procedimiento de
la invención, se añaden al medio de cultivo com-
puestos inorgánicos y/u orgánicos de selenio en
una concentración de 10−7 a 2 x 10−3 mol/litro
y luego se inocula el medio de cultivo con un
cultivo de algas puro capaz de incorporar sele-
nio fácilmente. El cultivo puro se obtiene ino-
culando la variedad de alga seleccionada en un
medio de cultivo lı́quido que contenga materiales
nutritivos inorgánicos y optativamente orgánicos
y tratándolo luego con N-metil-N’nitro-N-nitroso
-guanidina. De los individuos de la variedad ası́
obtenida por mutación, se seleccionan los que son
capaces de incorporar fácilmente selenio cuando
se cultivan después de su mutación en un medio
que contenga este elemento y presentan un ritmo
de desarrollo idéntico por lo menos al de la va-
riedad silvestre. Después de inocular el medio de
cultivo con el cultivo puro ası́ obtenido, y tras
el perı́odo de cultivo, se separa el alga, se seca
hasta un contenido optativo de agua, si se desea,
y se descompone por ultrasonidos o trituración,
de manera ya conocida.
De acuerdo con la invención, el cultivo puro de
algas, capaz de incorporar selenio, es preferible-
mente preparado a partir de algas verdes o azules
unicelulares, tales como la Chlorella sp., scene-
desmus sp. o Spirulina sp., de tal manera que,
después del tratamiento con N-metil-N’-nitro-N-
nitrosoguanidina, las células son cuidadosamente
lavadas y dispersadas en una serie de medios de
cultivo sólidos preparados por semidilución y su-
plementados con un compuesto de selenio a una
concentración de 10−7 a 2 x 10−3 mol/litro. Las
variedades más preferidas de las desarrolladas en
aquéllos, que presentan un rápido crecimiento y
son capaces de incorporar fácilmente selenio, son
seleccionadas y ulteriormente cultivadas en un
medio lı́quido, sometiéndose luego a una produc-
ción industrial el cultivo de algas puro ası́ mante-
nido.
De este modo, se incorpora selenio durante
el desarrollo al organismo del alga tratada como
4
se describe anteriormente, en una concentración
por término medio 104 veces mayor que la de la
variedad de alga original.
Se usa agua destilada como lı́quido en el me-
5 dio de cultivo empleado para el cultivo industrial
de la variedad de alga que sea capaz de incorporar
fácilmente selenio. Además de los materiales nu-
tritivos conocidos comúnmente usados, estos me-
dios de cultivo son suplementados también con
10 compuestos inorgánicos y/u orgánicos de selenio.
El medio de cultivo ası́ preparado y esterilizado se
inocula con la variedad de alga, obtenida como se
describe anteriormente, que sea capaz de incorpo-
rar fácilmente selenio. A lo largo de su desarrollo,
15 el alga incorpora selenio en su organismo sin las
indeseadas contaminaciones tóxicas antes expues-
tas. El alga ası́ preparada se separa del medio
de cultivo y se seca cuidadosamente de manera
conocida bajo suaves condiciones, a una tempe-
20 ratura óptima de 65◦C y no superior a 80◦C. El
alga secada es adecuadamente descompuesta me-
diante trituración a un tamaño de partı́cula de 1
µm aproximadamente. Como variante, el concen-
trado de algas húmedo es descompuesto mediante
25 ultrasonidos y luego secado bajo las condiciones
antes definidas.
El alga ası́ obtenida es un polvo que contiene
de 250 a 4000 µg/g de selenio, que puede ser
directamente consumido o usado como tal o en
30 alimentos, forrajes, cosméticos o junto con sus-
tancias terapéuticamente útiles y biológicamente
activas y/o como aditivo de ellos, en forma de
cualquier formulación comercialmente obtenible
de estos productos, preferiblemente en forma de
35 tabletas y cápsulas o en otras formas.
Las principales ventajas del procedimiento
según la invención pueden resumiese como sigue:
a) El alga puede cultivarse en un equipo sen-
40 cillo, usando un procedimiento económico y
fácilmente practicable.
b) Después del cultivo, no se precisa ninguna
purificación ni elaboración en múltiples ope-
45
raciones.
c) El alga se cultiva bajo condiciones estériles,
con exclusión de contaminaciones ambien-
tales, de manera que el alga obtenida es
inambiguamente utilizable para consumo
50
humano.
d) Hace posible la preparación de algas de
un elevado contenido de selenio y dotadas
de perfeccionados efectos biológicos y fi-
55 siológicos en comparación con los de las al-
gas conocidas.
e) Las algas obtenidas por el procedimiento de
la invención pueden usarse preferiblemente.
60 y ampliamente, por ejemplo, para alimen-
tación, en la industria cosmética, para fines
terapéuticos y en otros terrenos.
El uso de las algas cultivadas por el proce-
65 dimiento de la invención es muy preferido en te-
rapéutica, ya que el selenio es un agente activador
del grupo prostético de la enzima glutationapero-
xidasa. El selenio no se acumula en el organismo,
3
 5 2 006 114
por lo que su suplementación resulta posible con
las algas obtenidas por el procedimiento de la in-
vención, gracias a lo cual pueden medicinarse to-
dos los daños a la salud derivados de una deficien-
cia en selenio.
El procedimiento de la invención se ilustra con
detalle en los siguientes ejemplos no limitativos.
Ejemplo 1
Se mantiene un cultivo de Scenedesmus obti-
siusculus en un matraz de 250 ml, con agitación,
en un medio de cultivo lı́quido de Bold que con-
tiene de 100 a 500 µg/ml de N-metil-N’-nitro-N-
nitrosoguanidina a una temperatura de 25 a 27◦ C,
durante 30 minutos. Después de este tratamiento,
las células son cuidadosamente lavadas con agua
y dispersadas en una serie de medios de cultivo
de Bold solidificados mediante agar. Esta serie
de medios de cultivo contiene selenio en una con-
centración regularmente incrementada a un va-
lor doble cada vez desde 3,125 µg/ml hasta 400
µg/m. Se aı́slan las colonias formadas a partir
de las células que se desarrollan y sobreviven en
esta serie de medios de cultivo y las lı́neas celu-
lares seleccionadas son multiplicadas a escala de
laboratorio en una solución nutritiva de Bold que
contiene por lo menos 20 µg/ml de selenio. Se
multiplican las colonias que incorporan más pre-
feriblemente selenio y presentan un ritmo de cre-
cimiento casi idéntico al de la variedad silvestre
(control) en un medio de cultivo que contiene por
lo menos 20 µg/ml de selenio.
El contenido en selenio del alga se determina
secando a 65◦ C las células previamente aisla-
das y cuidadosamente lavadas con agua, descom-
poniéndolas mediante ultrasonidos y midiendo
luego el contenido en selenio por el método de
absorción atómica.
El contenido en selenio del polvo de alga ası́
obtenido es el siguiente:
Variedad Contenido en selenio
(µg/g de polvo de algas)
Variedad silvestre I
sin tratar 50
Variedad silvestre II
sin tratar 30
Variedad clave n◦
FM-I-120 1300
Variedad clave n◦
FM-1-1871 2400
Variedad clave n◦
FM-M-441/87 1600
Variedad clave n◦
FM-449/87 1800
Ejemplo 2
Se añaden 40 mg de selenita sódica a 8 litros
de medio de cultivo de Knop-Pringsheim introdu-
cido en una botella de vidrio de cultivo de algas,
de 10 litros de volumen. La solución nutritiva
ası́ obtenida se esteriliza a 121◦ C bajo una sobre-
presión de 1 bar durante 30 minutos. Se enfrı́a
luego la solución estéril y se inocula con un cul-
tivo puro de scenedesmus obtisiusculus capaz de
incorporar fácilmente selenio. Se pasan burbujas
de aire estéril que contiene un 5% en volumen de
4
6
dióxido de carbono a través del medio de cultivo,
a 25◦C, mientras se ilumina el sistema mediante
un tubo de descargas eléctricas que funciona a
4000 lux a una longitud de onda que 400 a 520 y
5 640 a 700 µm.
Después de un perı́odo de cultivo de 14 dı́as,
se separan las algas del medio de cultivo y se la-
van con agua. La masa de algas ası́ obtenida se
descompone mediante ultrasonidos y se seca cui-
10 dadosamente a una temperatura inferior a 65◦ C.
El contenido en selenio del polvo de alga ası́ ob-
tenido es de 1200 µg/g.
Ejemplo 3
Se disuelven 8,0 g de nitrito sódico, 0,8 g de
15 sulfato magnésico heptahidrato, 0,8 g de fosfato
dipotásico hidrogenado, 2,5 ml de solución de oli-
goelementos de Arnon y 5 g de glucosa, 0,1 g
de cisteı́na y 0,1 g de metionina en 8 litros de
agua destilada introducida en un fermentador de
20 cultivo de algas de 10 litros de capacidad. La
solución nutritiva ası́ obtenida se completa con
50 mg de selenita sódica y luego se hace pasar
la solución a través de un filtro esterilizante y
se inocula bajo condiciones estériles cuidadosa-
25 mente mantenidas con un cultivo puro de algas
Scenedesmus obtisiusculus capaz de incorporar
fácilmente selenio. Después de un perı́odo de cul-
tivo de 4 dı́as a una temperatura de 25 a 28◦C
en la oscuridad, se separan las algas del medio de
30 cultivo y se lavan con agua. Se descompone me-
diante ultra-sonidos la masa de algas ası́ obtenida
y finalmente se seca a una temperatura inferior a
65◦C. El contenido en selenio del polvo de algas
ası́ obtenido asciende a 1380 µg/g.
35 Ejemplo 4
Se sigue el procedimiento descrito en el Ejem-
plo 2, salvo que, en lugar del tratamiento por ca-
lor, el medio de cultivo es esterilizado mediante
flujo a través de un filtro de bacterias esterilizan-
40 tes del tipo G-5. El contenido en selenio del polvo
de algas ası́ obtenido es de 1300 µg/g.
Ejemplo 5
Se sigue el procedimiento descrito en los Ejem-
plos 2 ó 3, salvo que, en lugar de la variedad
45 Scenedesmus obtisiusculus, se usa una variedad
de algas Chlorella vulgaris, capaz de incorporar
fácilmente selenio y que ha sido sometida al tra-
tamiento de mutación descrito en el Ejemplo 1.
El contenido en selenio del polvo de algas ası́
50 obtenido es el siguiente:
Variedad Contenido en selenio
(µg/g de polvo de algas)
Variedad
55 “silvestre” I 140
Variedad
“silvestre” II 140
Variedad DV-35-42 3200
60 Variedad DV-78-20 2300
Variedad DV-104-21 1500
Ejemplo 6
Se sigue el procedimiento descrito en los ejem-
65 plos 2 ó 3, salvo que, en lugar de la variedad Sce-
nedesmus obtisiusculus, se usa una variedad de
algas Chlorella minitissima, capaz de incorporar
fácilmente selenio. El contenido en selenio del
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polvo de algas ası́ obtenido es de 1400 µg/g. tritiva se disminuye a 8◦C y se usa una variedad
Ejemplo 7 de algas Nostoc commune azules y filiformes, que
Se sigue el procedimiento descrito en los ejem- es resistente al frı́o y capaz de incorporar sele-
plos 2 ó 3, salvo que la solución nutritiva se deja nio fácilmente. El contenido en este elemento del
calentar a una temperatura de, a lo sumo, 50◦ C y 5 polvo de algas ası́ obtenido es el siguiente:
se usa una variedad de algas Aphanocapsa ther-
malis, que es termodúrica y capaz de incorporar Variedad Contenido en selenio
fácilmente selenio. El contenido en este elemento (µg/g de polvo de algas)
del polvo de algas ası́ obtenido es el siguiente: Variedad “silvestre” 140
10
Variedad Contenido en selenio Variedad BK-1218-2 1140
(µg/g de polvo de algas) Ejemplo 10
Variedad “silvestre” 130 Se añaden 5 x 10−3 M de selenita sódica a 8 li-
Variedad DV-12-220 1100 tros de medio de cultivo de Bold esterilizado por
15 filtración e introducido en una botella de cultivo
Variedad DV-12-340 1550
de algas de 10 litros de capacidad. Se inocula el
Ejemplo 8 medio de cultivo ası́ obtenido con un cultivo puro
Se sigue el procedimiento descrito en el Ejem- de Chlorella fusca preparado como se describe en
plo 2, salvo que, en lugar de la variedad Scene- el Ejemplo 1 y capaz de incorporar fácilmente se-
20
desmus obtisiusculus, se usa una variedad de al- lenio. El alga se cultiva durante 14 dı́as como se
gas Spirulina sp. perteneciente a las algas azules, describe en el Ejemplo 2. Luego se filtra la masa
que es capaz de incorporar selenio fácilmente. El de algas, se lava cuidadosamente con agua y se
contenido en este elemento del polvo de algas ası́ seca por debajo de 80◦ C. El contenido en selenio
obtenido es el siguiente: del polvo de algas ası́ obtenido es de 2700 µg/g.
25
Ejemplo 11
Variedad Contenido en selenio En una botella de cultivo que contiene 8 li-
(µg/g de polvo de algas) tros de solución nutritiva de Bold y 10−7 M de
selenita sódica, se inocula una variedad de Scene-
Variedad desmus obliquus cultivada del modo descrito en el
“silvestre” I 50 30 Ejemplo 1 y capaz de incorporar fácilmente sele-
Variedad nio. Seguidamente se aplica el procedimiento del
“silvestre” II 50 Ejemplo 10 para obtener un polvo de algas de un
Variedad HE-87-104 1100 contenido en selenio de 300 µg/g.
Ejemplo 12
Variedad HE-89-241 1200 35
Se sigue el procedimiento del ejemplo 2, salvo
Variedad HE-89-302 1500 que el alga separada es secada a 65◦ C y luego
descompuesta por trituración a un tamaño de
Ejemplo 9 partı́cula de 1 µm. El contenido en selenio del
Se sigue el procedimiento descrito en el ejem- polvo de algas ası́ obtenido es de 1200 µg/g.
plo 2, salvo que la temperatura de la solución nu- 40

45

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60

65

5
 9 2 006 114
REIVINDICACIONES
1. Procedimiento de preparación de algas do-
tadas de un perfeccionado efecto biológico, ca-
racterizado en que la variedad de alga seleccio-
nada es cultivada bajo condiciones estériles en un
medio de cultivo consistente en agua dulce y sales
nutritivas, en presencia de dióxido de carbono y
luz, en forma fotosintética, o con exclusión de luz,
en un medio de cultivo que contenga también una
fuente de carbono, hidrógeno, oxı́geno y nitróge-
no, tras lo cual se separa el alga ası́ obtenida cuyo
procedimiento comprende la adición de compues-
tos inorgánicos y/u orgánicos de selenio al medio
de cultivo en una concentración comprendida en-
tre 10−7 y 2 x 10−3 mol/litro, la inoculación del
medio de cultivo con un cultivo de algas puro ca-
paz de incorporar fácilmente selenio; si se desea,
el secado del alga obtenida después del cultivo y
su descomposición por ultrasonidos o trituración,
en cuyo procedimiento el cultivo puro de algas se
obtiene inoculando la variedad de algas seleccio-
nada en un medio de cultivo lı́quido que contenga
materiales nutritivos inorgánicos y optativamente
orgánicos; su tratamiento con N-metil-N’-nitro-
N-nitrosoguanidina y el ulterior cultivo de la va-
riedad de alga en un medio que contenga también
selenio, seleccionándose finalmente los individuos
que incorporen fácilmente selenio y que presenten
un ritmo de desarrollo por lo menos idéntico al de
la variedad original.
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado en que comprende el uso de sele-
10
nito sódico y/o dióxido de selenio como compues-
tos inorgánicos de selenio en el medio de cultivo.
3. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado en que comprende el uso de sele-
5 nocisteı́na y/o selenometionina como compuestos
orgánicos de selenio en el medio de cultivo.
4. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado en que comprende el uso de una
variedad de algas Chlorella o Scenedesmus como
10 variedad seleccionada de algas.
5. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado en que comprende el uso de Apha-
nocapsa thermalis como variedad seleccionada de
algas.
15 6. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizada en que comprende el uso de Nos-
toc commune como variedad seleccionada de al-
gas.
7. Procedimiento según la reivindicación 1,
20 caracterizado en que comprende el uso de Chlo-
rella minitissima o Chlorella fusca como variedad
seleccionada de algas.
8. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado en que comprende el uso de una
25 variedad de algas azules de agua dulce como va-
riedad seleccionada.
9. Procedimiento según la reivindicación 8,
caracterizado en que comprende el uso de Spi-
rulina sp. como variedad de algas azules.
30 10. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado en que comprende el uso de Sce-
nedesmus obtisiusculus o scenedesmus obliquus
como variedad seleccionada de algas.
35
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