Enzimas

• Catalizadores de las reacciones en los

sistemas biológicos.
• Tienen un gran poder catalítico.
• Poseen un elevado grado de especificidad
respecto a sus sustratos y al tipo de reacción.
• Funcionan en soluciones acuosas en
condiciones muy suaves de temperatura y pH.
• Pueden convertir sustratos no quirales en
productos quirales.
 La mayoría son proteínas

Su actividad catalítica depende de la integridad

de su conformación proteica nativa.

Si se descompone una enzima en sus

aminoácidos constituyentes, siempre se
destruye su actividad catalítica
 Constituyentes no proteicos
Algunas enzimas requieren para el funcionamiento un
componente químico adicional llamado cofactor.

Cofactores: iones metálicos o coenzimas. Los grupos

prostéticos están unidos covalentemente a la enzima.
Cofactores: iones metalicos
Muchas vitaminas son las precursores de
Coenzimas
Las enzimas se clasifican según la reacción
catalizada:
1. Oxidorreductasas: oxidaciones y reducciones.

2. Transferasas: transferencia de porciones, como grupos

glucosilo, metilo o fosforilo.

3. Hidrolasas: división hidrolítica de C—C, C—O, C—N y otros

enlaces.

4. Liasas: división de C—C, C—O, C—N y otros enlaces mediante

eliminación de átomo, dejando dobles enlaces.

5. Isomerasas: cambios geométricos o estructurales dentro de una

molécula.

6. Ligasas: unión de dos moléculas acopladas a la hidrólisis de ATP.

 Variantes enzimáticas
1. Isoenzimas: Diferente estructura, pero
catalizan la misma reacción.

2. Heteroenzimas: enzimas de función

semejante, específica de las diversas
especies biológicas.

3. Aloenzimas: variante de enzima e isoenzima

condicionadas genéticamente que solo
aparecen en determinados individuos de una
misma especie.
 Funcionamiento de las enzimas
Enzima + Sustrato Ȼ Enzima-Sustrato
(ES)

Sitio Activo
Revestida con residuos
aminoácidos con grupos
sustituyentes que se unen al
sustrato y catalizan su
transformación química
 Reacción enzimática

El factor que diferencia realmente a los enzimas de la

mayoría de catalizadores no enzimáticos es la
formación de un complejo ES específico.
 Las enzimas alteran las velocidades de
reacción
• Los catalizadores son los responsables de
acelerar reacciones químicas.
• Proveen un mecanismo de acción alternativo.
• Llevan a que una reacción extremadamente
lenta pueda volverse rápida en las mismas
condiciones.
• Intermediarios de reacción.
• Permanecen inalterados.
Efecto de catalizador
¿Cómo se pueden explicar estos incrementos
enormes y altamente selectivos en su
velocidad?

1. Reordenamiento de los enlaces covalentes

durante una reacción catalizada por una
enzima.

1. Interacciones no covalentes entre la enzima y

el sustrato.
¿Cómo se pueden explicar estos incrementos enormes y
altamente selectivos en su velocidad?

1. Entre sustratos y grupos funcionales de los enzimas

(cadenas laterales específicas de aminoácidos, iones
metálicos y coenzimas):pueden formar enlaces
covalentes transitorios, activando el S para la
reacción, o puede transferirse transitoriamente un
grupo del sustrato a la enzima.
Las interacciones covalentes entre enzimas y
sustratos hacen disminuir la energía de activación
¿Cómo se pueden explicar estos incrementos enormes y
altamente selectivos en su velocidad?

2. Interacción E-S no covalente

La interacción en la formación del complejo E-S está
mediada por las mismas fuerzas que estabilizan la
estructura proteica. La energía procedente de la
interacción enzima-sustrato se denomina Energía
de fijación, ΔGB.
Es la principal fuente de energía libre utilizada por
los enzimas para disminuir la energía de activación
de las reacciones.
¿Cómo se pueden explicar estos incrementos enormes y
altamente selectivos en su velocidad?

2. Aprovechamiento de la energía libre liberada al

formarse los múltiples enlaces débiles e
interacciones entre un enzima y su sustrato.
Las interacciones débiles están optimizadas en el
estado de transición de la reacción; los sitios
activos de los enzimas son complementarios a los
estados de transición a través de los que pasan los
sustratos al ser convertidos en productos durante
una reacción.
Las interacciones óptimas entre sustrato y enzima
sólo pueden tener lugar en el estado de transición
 La energía de fijación contribuye tanto a la
especificidad como a la catálisis
Interacciones de fijación débiles E-S en estado de
transición:

Catálisis: La energía libre (energía de fijación) liberada

equilibra parcialmente la energía requerida para llegar
a la cima de la colina energética. (Disminuye Ea)

Especificidad: El sitio activo de un enzima tiene grupos

funcionales ordenados de manera óptima para formar
una serie de interacciones débiles con un sustrato
determinado.
 Unión E-S

Restricción en los movimientos relativos de los dos

sustratos o reducción de entropía: Mantiene los
sustratos en la orientación correcta para
reaccionar,(aumento de colisiones productivas).

Desolvatación del sustrato: Interacciones E-S

reemplazan la mayoría de los enlaces de hidrógeno que
puedan existir en disolución entre el S y el agua.
Compensa termodinámicamente cualquier distorsión:
principalmente en forma de redistribución electrónica,
que debe experimentar el sustrato para reaccionar.
 Encaje Inducido

La propia enzima puede experimentar un cambio en la

conformación cuando se fija el sustrato, también
inducido por múltiples interacciones débiles con el
sustrato.
 Catálisis
Una vez unido el sustrato a la enzima, grupos
funcionales catalíticos situados adecuadamente
colaboran en la rotura o formación de enlaces
mediante diversos mecanismos:

1. Catálisis ácido-base
2. Catálisis covalente
3. Catálisis por iones metálicos
4. Catálisis por proximidad
5. Catálisis por tensión
1. Catálisis Ácido-Base

Los intermedios cargados se pueden estabilizar

a menudo transfiriendo protones a o desde el
sustrato o intermedio para formar una especie
que se descompone más fácilmente en
productos.
• Específica: sólo utiliza H+ u OH- provenientes
del H2O.
• General: transferencias de protones
facilitadas por otras clases de moléculas.
2. Catálisis covalente

Formación de un enlace covalente entre la

enzima y uno o más sustratos. La enzima
modificada después se convierte en un reactivo.
La modificación química de la enzima es
transitoria.
3. Catálisis por iones metálicos

Interacciones iónicas entre un metal fijado a la

enzima y el sustrato pueden ayudar a orientar a
un sustrato para que reaccione o estabilizar
estados de transición de la reacción que estén
cargados. Los metales también pueden facilitar
reacciones de oxidación-reducción mediante
cambios reversibles en el estado de oxidación
del ión metálico.
4. Catálisis por proximidad

Para que las moléculas reaccionen, deben

acercarse y orientarse hasta ubicarse dentro de
la distancia formadora de enlace de otra.
Mientras más alta sea su concentración, con
mayor frecuencia se encontrarán una con otra y
mayor será el índice de su reacción.
5. Catálisis por tensión

Las enzimas que catalizan reacciones -líticas se

unen a sus sustratos en una conformación que
imita la del intermediario de estado de
transición. La tensión resultante estira o
deforma el enlace al cual se dirige, esto lo
debilita y lo hace más vulnerable a división.
 Ejemplos de reacciones
enzimáticas
1. En la hexoquinasa se produce un encaje
inducido durante la unión del sustrato:

La hexoquinasa discrimina entre la glucosa y el agua de

forma favorable a la glucosa, gracias a un cambio de
conformación que se produce en la enzima cuando se
une el sustrato correcto.
Conformación Inactiva Conformación Activa
2. El mecanismo de reacción de la enolasa
requiere la presencia de iones metálicos:

Cataliza la deshidratación reversible del 2-

fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato:

Ilustra un tipo de catálisis por ión metálico y

proporciona un ejemplo adicional de catálisis ácido-
base general y de estabilización del estado de
transición. La reacción tiene lugar en dos etapas.
 Cinética enzimática
La concentración de sustrato [S] afecta a la
velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas.
A [S] relativamente bajas, Vo
aumenta casi linealmente con
el incremento de [S].

A mayores [S], Vo aumenta a

incrementos cada vez
menores en respuesta a
incrementos de [S].

Finalmente, se alcanza un
punto más allá del cual se dan
incrementos muy pequeños de
Vo a medida que aumenta [S]:
esta meseta es la velocidad
máxima, Vmax.
•
Muchas enzimas catalizan reacciones en las que
intervienen dos o más sustratos
Reacciones secuenciales o de desplazamiento
único: En reacciones secuenciales, ambos
sustratos deben combinarse con la enzima para
formar un complejo ternario antes de que
pueda proceder la catálisis.
Para reacciones de orden al azar, el sustrato A o
el B puede combinarse primero con la enzima
para formar un complejo EA o uno EB.

En reacciones de orden forzoso, A debe

combinarse primero con E antes de que B pueda
combinarse con el complejo EA.
Reacciones de ping-pong: aplica a mecanismos en
los cuales uno o más productos son liberados desde
la enzima antes de que se hayan añadido todos los
sustratos.

El grupo que se transfiere primero es desplazado

del sustrato A por la enzima para formar productos
P y una forma modificada de la enzima (F). La
transferencia de grupo subsiguiente desde F hacia
el segundo sustrato B, que forma el producto Q y
regenera E, constituye el segundo desplazamiento.
Casi todas las reacciones Bi-Bi se conforman a
la cinética de Michaelis-Menten: Vmáx se
refiere al índice de reacción que se alcanza
cuando ambos sustratos están presentes a
concentraciones que producen saturación. Cada
sustrato tiene su propio valor Km característico,
que corresponde a la concentración que da la
mitad de la velocidad máxima cuando el
segundo sustrato está presente a
concentraciones que producen saturación.
(a) Si las líneas se cortan
se ha formado un
complejo ternario en la
reacción.

(b) si son paralelas, la

reacción transcurre a
través de una ruta ping-
pong o de doble
desplazamiento.
 Inhibición enzimática

Interfieren en la catálisis enlenteciéndola o

deteniendo las reacciones enzimáticas.

Hay dos amplias clases de inhibidores

enzimáticos:

1. Inhibición reversible.
2. Inhibición irreversible.
1. Inhibición reversible
– Inhibición competitiva: compite con el sustrato
por el sitio activo del enzima. Debido a que el
inhibidor se une de manera reversible al enzima,
se puede cambiar el sentido de la competición en
favor del sustrato simplemente añadiendo más
sustrato.
– Inhibidor acompetitivo: es el que se une a un sitio
distinto del que se fija el sustrato en el sitio activo
y que, a diferencia del inhibidor competitivo, sólo
se une al complejo ES.
– Inhibidor mixto: también se fija a un sitio distinto
al sustrato, pero se fija tanto a E como a ES.
Las inhibiciones mixta y acompetitiva sólo se
observan en enzimas con dos o más sustratos
2. Inhibición irreversible

– se unen de manera covalente,

– destruyen un grupo funcional de la enzima
que es esencial para su actividad o
– forman una asociación no covalente muy
estable.

Es frecuente la formación de un enlace

covalente entre un inhibidor irreversible y un
enzima.
Caso especial: Inactivadores suicidas

Pasa a través de los primeros pasos de la

reacción enzimática normal, pero a
continuación se convierte en un compuesto muy
reactivo que se combina irreversiblemente con
la enzima en lugar de ser transformado en el
producto normal.
Un inactivador suicida bien diseñado es
específico para una única enzima y no reacciona
hasta que se halla en el sitio activo del mismo.
 La actividad enzimática depende del pH

A valores superiores
o inferiores de pH la
actividad disminuye.

Las cadenas laterales

de aminoácidos
pueden actuar como
ácidos o bases
débiles.
 Enzimas Reguladoras
En cada ruta metabólica hay uno o más enzimas que
tienen un mayor efecto sobre la velocidad global de la
secuencia de reacciones.
Las enzimas reguladoras muestran una actividad
catalítica mayor o menor en respuesta a ciertas
señales.
Estos ajustes en la velocidad permiten que la célula se
adapte a las necesidades cambiantes de energía y
biomoléculas requeridas para su crecimiento y la
reparación de sus componentes.
 Actividad de enzimas regulatorias

Unión de compuestos reguladores a enzimas a través

de:
. unión reversible, no covalente- denominados
moduladores alostéricos
. por modificación covalente reversible.
Ambas clases de enzimas reguladoras tienden a tener
varias subunidades y, en algunos casos, el sitio o sitios
reguladores y el sitio activo se encuentran en
subunidades separadas.
 Las enzimas alostéricas experimentan
cambios de conformación en respuesta a la
unión de moduladores
Además de sitios activos, las enzimas alostéricas tienen
generalmente uno o más sitios reguladores o
alostéricos para la unión del modulador.

Pueden ser inhibidores o estimuladores.

Sustrato = modulador enzima=homotrópica

Sustrato ≠ modulador enzima=heterotrópica
Del mismo modo que el sitio activo de un enzima es
específico para su sustrato, cada sitio regulador es
específico para su modulador.
 Inhibición de enzimas reguladoras

Inhibición por retroalimentación o

retroinhibición: son inhibidos de forma
específica por el producto final de la ruta
siempre que el producto final se acumule en
exceso a las necesidades de la célula.
 LAS PROPIEDADES CINÉTICAS DE LAS ENZIMAS
ALOSTÉRICAS DIVERGEN DEL COMPORTAMIENTO DE
MICHAELIS-MENTEN

Presentan una curva de saturación sigmoidea

cuando se representa Vo frente a [S], reflejo de
interacciones cooperativas entre subunidades
proteicas.
 CURVAS CINÉTICAS SIGMOIDEAS
Enzimas alostéricas homotrópicas: proteínas con
múltiples subunidades y, el mismo sitio de fijación de
cada subunidad funciona a la vez como sitio activo y
como sitio regulador. El sustrato funciona como
modulador positivo (activador) porque las subunidades
actúan en forma cooperativa.

Enzimas alostéricas heterotrópicas: es difícil generalizar

acerca de la forma de la curva de saturación con el
sustrato
ENZIMAS REGULADAS POR MODIFICACIÓN COVALENTE
REVERSIBLE

La actividad se modula por modificación covalente de

uno o más de los residuos aminoácidos de la molécula
de enzima.
Los grupos fosforilo, acetilo, adenililo, uridililo, metilo,
amida, carboxilo, miristilo, palmitilo, prenilo, hidroxilo,
sulfato y adenosina difosfato ribosilo se cuentan entre
los grupos modificadores más comunes.
La fosforilación es probablemente la modificación
reguladora más importante. La mayoría de los
procesos reguladores involucran al menos una.
ENZIMAS REGULADAS POR MODIFICACIÓN COVALENTE
IRREVERSIBLE

En algunas enzimas, la escision de un precursor

inactivo denominado zimógeno es necesaria
para formar la enzima activa. Muchas enzimas
proteolíticas del estomago y del pancreas se
regulan de esta manera.

Ej: Tripsina, Quimiotripsina.

 Enzimas Plasmáticas
Las enzimas séricas se encuentran en el plasma y
pueden tener o no una función definida en ese
medio. Se las puede clasificar luego como

• Funcionales: Enzimas Plasmoespecíficas

• No funcionales:
– Enzimas secretadas o exocitoenzimas
– Enzimas celulares o endocitoenzimas

El análisis cuantitativo de la actividad de las enzimas o

de otras proteínas liberadas proporciona información
respecto del diagnóstico, el pronóstico y la respuesta al
tratamiento.
Enzimas Plasmoespecíficas:

Estas enzimas son sintetizadas en determinados

tejidos y vertidas a la sangre activamente, que es su
lugar de acción, donde se encuentran su sustrato y
su coenzima.
Una disminución de su actividad (normalmente alta
en suero) indica una alteración en la síntesis, y
como la mayoría son producidas en el hígado esto
nos estaría indicando una alteración de la
funcionalidad hepática.
Enzimas secretadas o exocitoenzimas:

Son enzimas secretadas por glándulas o tejidos muy

especializados, su lugar de acción está alejado, es el
caso de las enzimas digestivas segregadas por el
páncreas y que van al duodeno a ejercer su acción.
En sangre están en baja actividad.
Aumentarían sus niveles en la patología aguda como
la pancreatitis y en casos de patología crónica,
donde la glándula está hipofuncionante, su actividad
estaría disminuida en su lugar de acción; en este
caso en duodeno.
Enzimas celulares o endocitoenzimas:

Son todas las enzimas que tienen su lugar de

acción dentro de la misma célula que las
sintetiza, no tienen acción en plasma por falta
de sustrato y de coenzima.
Principales enzimas séricas usadas en el valor
diagnóstico clínico
Factores a considerar en la interpretación de
datos sobre enzimas:

• Edad del paciente.

• El sexo.
• Antecedentes personales no patológicos y
patológicos.
• Posible consumo de fármacos o drogas.
• La sensibilidad y la especificidad diagnóstica
de la prueba enzimática.
 Importancia de CPK en el músculo

Enzima citoplasmática (CPK =

creatininfosfoquinasa) que cataliza la
transferencia de un fosfato de alta energía
desde el fosfato de creatinina, principal
depósito de almacenamiento energético en el
músculo en reposo, a la adenosina difosfato.
Se halla en altas concentraciones en el tejido
muscular esquelético y cardíaco.
Se utiliza en el diagnóstico de
• Infarto agudo de miocardio.
• Enfermedades esqueléticas e inflamatorias del
músculo.
• Reconocimiento de distrofia muscular incluso
antes de que aparezcan síntomas clínicos.

Incremento transitorio del nivel es común en

• Injurias musculares reversibles como traumas
• Realización de ejercicios vigorosos
• Calambres musculares
 Importancia de Aldolasa en el músculo
El organismo transforma una forma de azúcar llamada
glucosa en energía mediante un proceso conformado
por varios pasos diferentes. Un componente
importante de ese proceso es una enzima conocida
como aldolasa. Si bien esta enzima se encuentra en
todo el organismo, las concentraciones son mayores en
los músculos y el hígado.
Los niveles de aldolasa en la sangre pueden aumentar
cuando se producen daños en el hígado o en los
músculos por lo cual indica daño muscular o hepático.