ACTIVIDAD ENZIMÁTICA (AMILASA SALIVAL)

ENZYMATIC ACTIVITY (SALIVARY AMYLASE)

Flechas Suarez Wilmar Sebastián, López Ruiz Juan David, Tova García Angela
Estefanía.
17 de junio del 2019

Resumen: La actividad enzimática mide la efectividad que tiene la enzima para

actuar como acelerador de las reacciones en un organismo, existen diversos
factores que alteran esta actividad y con ella la efectividad de actuación de las
enzimas. En este laboratorio se puso a prueba la amilasa salival a cinco factores
que son ph, concentración de sustrato, concentración de la enzima, temperatura y
un cofactor. Cada factor se tomó con diferentes rangos para mirar su
comportamiento e identificar como alteran estos en la inhibición de actividad
enzimática.
Palabras Clave: inhibidor, actividad enzimática, catalizador.

Abstract: enzymatic activity measures the effectiveness of the enzyme to act as an

acelerator of reactions in an organism, there are some factors that alter this activity
and the effectiveness of the enzymes. In this laboratory practice, salivary amylase
was tested by five factors: pH, substrate concentration, enzyme concentration,
temperatura and a cofactor. Each factor was taken with different ranges to watch
their behaviour and identify the way they alter these in the inhibitios of enzymatic
activity.

Key Words: inhibitor, enzymatic activity, catalist.

Introducción afectar factores que afectan la

actividad enzimática que son aquellos
La saliva está compuesta en un 98%
agentes o condiciones que pueden
de agua, pero también contienen otras
modificar el funcionamiento de las
sustancias como electrolitos en forma
enzimas. Estos factores pueden ser
de sodio, potasio, calcio, magnesio,
Concentración de enzimas,
etc., moco, células, compuestos
Concentración de sustrato, pH,
antibacterianos y enzimas como la
salinidad, Temperatura, Activadores
amilasa, la lisozima o la lipasa lingual.
enzimáticos, Inhibidores enzimáticos:
Las interacciones que ocurren en la
los inhibidores enzimáticos son
saliva se le denomina actividad
sustancias que afectan negativamente
enzimática y la pueden
la función de las enzimas y, en
Facultad de Ciencias Básicas
Escuela de Biología
Biología
wilmar.flechas@uptc.edu.co; juan.lopez11@uptc.edu.co; angela.tova@uptc.edu.co
consecuencia, ralentizan o en algunos
casos, detienen la catálisis.
Hay tres tipos comunes de inhibición
enzimática: competitiva, no
competitiva e inhibición del sustrato:
inhibidores competitivos: un inhibidor
competitivo es un compuesto químico
similar a un sustrato que puede
reaccionar con el sitio activo de la
enzima. Cuando el sitio activo de una
enzima se ha unido a un inhibidor
competitivo, el sustrato no puede
unirse a la enzima, Inhibidores no
competitivos: un inhibidor no
competitivo también es un compuesto
químico que se une a otro lugar del
sitio activo de una enzima, llamado
sitio alostérico. En consecuencia, la
enzima cambia de forma y ya no
puede unirse fácilmente a su sustrato,
por lo que la enzima no puede
funcionar correctamente.
Durante la prueba de laboratorio se
utilizará el reactivo de lugol que nos
servirá para la identificación de
polisacáridos en los procedimientos
durante la prueba de laboratorio, en la
cual analizaremos los factores que
afectarían los alterarían la actividad
enzimática comparando los resultados
teóricos con los valores prácticos.
Resultados y Discusión
1. Determinación Del pH Optimo de la
Amilasa Salival
Tubo Resultado Observación
Parcialmente Color azul,
1 resultado que la actividad enzimática
positivo ligeramente amarillo
2 Negativo
Color amarillo
completamente
Residuo azul
Parcialmente
3 condensado y el resto
positivo
amarillo
Tabla 1. Resultados experimentales de la
determinación del pH óptimo de la amilasa salival.
A pesar de que las muestras salivales
varían de persona a persona, existe
condiciones que pueden hacer que las
enzimas no cumplan con su papel
favorablemente, entre ellas el ph, el
cual tiene un valor promedio para que
esa función para la amilasa es 6.9,
para la prueba de laboratorio
encontramos que a diferente ph, la
enzima tiene cierta actividad
enzimática.
2. Cinética Enzimática con Respecto a
la Concentración del Sustrato
Tubo Observaciones
1 Parcialmente activa, parcialmente
actúa con lugol
2 muy efectiva, positiva para enzima y
negativo para lugol
3 positiva para la enzima y negativa
para lugol, aumenta coloración por
concentración de sustrato
4 Positiva para la enzima y negativo
para lugol aumenta coloración por
concentración de sustrato
5 Positiva para la enzima y negativo
para lugol aumenta coloración por
concentración de sustrato
Tabla 2. Resultados experimentales de la evaluación de
cinemática enzimática respecto a la concentración del
sustrato.
La concentraci0on de sustrato es un
indicador que causa un gran efecto en
la actividad enzimática, en el caso de
la saliva es muy efectivo dando como
aumenta proporcionalmente al
2
aumentó en la concentración del 2
Lugol negativo, la enzima
sustrato. Por eso en los resultados de descompuso el almidón
Lugol positivo, la enzima se
la prueba de sustrato en positiva para 3
desnaturalizó
la enzima. Tabla 4. Resultados obtenidos experimentalmente
sometiendo la actividad enzimática a condiciones de
temperatura extremas y a temperatura ambiente.

3. Cinética Enzimática con Respecto a Las enzimas son moléculas orgánicas

la Concentración de la Enzima que funcionan a condiciones de
temperatura habituales, por lo cual no
Tubo Observaciones
Catálisis de la enzima positiva, pueden cumplir sus funciones a
1
lugol negativo. temperaturas extremas, dando como
Catálisis de la enzima positiva, resultado la desnaturalización de ellas
2
lugol negativo.
Catálisis de la enzima positiva,
en temperaturas frías (baño de hielo)
3 y a temperaturas muy calientes (baño
lugol negativo.
4
Catálisis de la enzima positiva, en agua en ebullición). La proteína
lugol negativo. tiene una temperatura optima de 37°c,
Tabla 3. Resultados obtenidos experimentalmente para
evaluar la cinética enzimática en función de la por encima de esta temperatura, el
concentración de la enzima. aumento de velocidad de la reacción
es contrarrestado por la pérdida de
Todos los tubos tuvieron soluciones
actividad catalítica debido a la
iguales, con una única variación, la
desnaturalización térmica, haciendo
concentración de enzimas (tubo1 =
que la actividad enzimática decrezca
0,5ml, tubo2 = 1,0ml, tubo3 = 1,5ml,
rápidamente hasta anularse. Debido a
tubo4 = 2,0ml). Al aumentar la
esto, y a la propiedad del Lugol de
cantidad de enzimas en las
teñir el almidón, observamos que a
soluciones, se aumenta
diferencia de los tubos 1 y 3, el Lugol
automáticamente la velocidad de la
en el tubo 2 no pudo teñir el almidón,
reacción de la enzima frente al
debido a que la enzima trabajó de
almidón (catálisis), descomponiéndolo
manera correcta a temperatura
en mayor efectividad en los tubos con
ambiente y esta descompuso el
más concentraciones de enzima.
almidón.
Debido a esto, el Lugol se caracteriza
por presentar coloraciones diferentes 5. Identificación Del Cofactor Y De Un
dependiendo de las ramificaciones Inhibidor De La Enzima Salival
que presenten las moléculas de
Tubo Resultado Observación Concentración
polisacárido. 1 Parcialmente Coloración 0,55ml
positivo azul solución,
4. Efecto de la Temperatura Sobre la 0,1ml enzima
Actividad Enzimática 2 Negativo Coloración 0,2ml
amarilla solución,
Tubo Observaciones 0,5ml enzima
Lugol positivo, la enzima se
1
desnaturalizó

3
3 Parcialmente Coloración 0,5ml
positivo azul solución,
0,1ml enzima
Tabla 5. Resultados obtenidos experimentalmente para
la identificación de cofactor e inhibidor de la enzima
salival.
Ilustración 1. Imagen correspondiente a tabla 5.
Según los resultados obtenidos
teóricamente, podemos asegurar que
debido al lugol contenido en cada tubo
de ensayo (con soluciones diferentes)
dispuestos y preparados en el
laboratorio durante la práctica,
reaccionaron los tubos 1 y 3 porque
tomaron una coloración parcialmente
azul (lo que significa que el Lugol tiñó
el almidón presente en la saliva), y el
tubo dos no reacciono quedando la
solución de color amarillo por
completo. Analizando los tubos 1 y 3
podemos inferir que no pudieron
reaccionar completamente, ya que,
comparado con datos consultados, la
coloración debía ser totalmente azul
(img2). Este resultado se dió por la alta
concentración de enzimas.
Ilustración 2. Imágen de reacción de lugol (positivo)
para identificación de cofactor e inhibidor de enzima
salival. Imágen de referencia.
Su función es para identificar
polisacáridos en soluciones, el
almidón en contacto con el lugol toma
un azul violeta característico, esa
coloración producida por el Lugol se
debe a que el yodo se introduce entre
las partes de las moléculas de
almidón, por lo tanto, no es una
verdadera reacción química, sino que
se forma un compuesto de inclusión
que modifica las propiedades físicas
de esta molécula, apareciendo la
coloración azul violeta.
Debido a que este complejo es
sensible a la temperatura se puede
alterar fácilmente mediante factores
como la temperatura, ya que, si se
calienta el tubo, el color se desvanece,
debido a que el almidón se desarma y
el lugol ya no puede hacer efecto, pero
una vez en temperatura ambiente o
menores el lugol toma de nuevo la
coloración morada.
La sustancia que contiene la solución
inhibidora es el tubo numero dos (la
cual contenía 0,2 ml de solución y 0,5
ml de enzima) porque esta no
reaccionó como se demuestra en la
4
figura 1 a comparación de los tubos 1
y 3.
Cuestionario
1. ¿Por qué se utiliza saliva?
Porque la saliva contiene una enzima
proteica y cataliza la degradación de
almidón.
2. ¿Qué factores estudiados afectan la
actividad enzimática, por qué?
Concentración de enzimas: A medida
que aumenta la concentración de
enzimas, la velocidad de la reacción
aumenta de manera proporcional. Sin
embargo, esto es así solo hasta cierta
concentración, pues en un momento
determinado la velocidad se hace
constante.
Concentración de sustrato: Al
aumentar la concentración de sustrato
se incrementa la velocidad de la
reacción. Esto se debe a que más
moléculas de sustrato colisionarán
con las moléculas de enzima, por lo
que se formará el producto más
rápidamente.
pH: Los cambios en la concentración
de iones hidrógeno (pH) influyen
considerablemente en la actividad de
las enzimas. Debido a que estos iones
poseen carga, generan fuerzas de
atracción y repulsión entre los enlaces
de hidrógeno e iónicos de las enzimas.
Esta interferencia produce cambios en
la forma de las enzimas, afectando así
su actividad.
Temperatura: A medida que aumenta
la temperatura aumenta la actividad
enzimática y, en consecuencia, la
velocidad de la reacción. Sin embargo,
las temperaturas muy altas
desnaturalizan las enzimas, esto
significa que el exceso de energía
rompe los enlaces que mantienen su
estructura haciendo que no funcionen
de manera óptima.
Activadores enzimáticos: Algunas de
las enzimas requieren la presencia de
otros elementos para funcionar mejor,
estos pueden ser cationes metálicos
inorgánicos como Mg2+, Mn2+, Zn2+,
Ca2+, Co2+, Cu2+, Na+, K+, etc
3. ¿cuál es el pH óptimo de la enzima
estudiada?
6.9
4. ¿Cuál fue la sustancia activadora e
inhibidora de la amilasa salival, por
qué?
Los activadores se ven asociados a
iones de metales y algunos aniones,
mientras que los inhibidores pueden
ser sales inorgánicas, metabolitos y
hormonas.
Conclusiones
 El Lugol es un reactivo que gracias a
su composición (a base de yodo),
nos permite identificar de manera
acertada el funcionamiento, o no, de
las enzimas en diferentes
condiciones.
 No todos los organismos poseen
concentraciones iguales, o incluso
parecidas de enzimas, lo cual se ve
5
 afectado por los hábitos de cada
quien, dando resultados diferentes
en los diferentes experimentos, por lo
cual, se debió repetir algunos
procedimientos, variando las
cantidades requeridas de cada
solución.
 Las enzimas también pueden variar
su funcionalidad respecto a las
condiciones a las que son sometidas,
tales como temperatura, pues
pueden desnaturalizarse y dejar de
funcionar.

Bibliografía
[1] Báez. J.F. 2017. Cinética
Química.
[2] Muñoz, G., Zamarripa, M. 2007.
Manual de Prácticas de Laboratorio
de Bioquímica
[3] Rivera, E. Cinética Enzimática.
[4] Kaur, S., Ramsay, I.D. 1988.
Effect of preoparative iodine.