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Índice
Clasificación
Dedos de cinc Cis2His2
Dedos de cinc Zn2/Cis6
Química inorgánica de los dedos de cinc
Técnicas de estudio Representación de la proteína Zif268 (azul)
Matrices de dedos de cinc prediseñadas conteniendo tres dedos de cinc en complejo con
ADN (naranja). Los aminoácidos coordinantes y
Ensamblaje modular
los iones de cinc están resaltados (verde).
Métodos de selección
Función biológica
Posible aplicación en terapia molecular
Referencias
Enlaces externos
Clasificación
Grupo de Estructura
Colocación de los ligandos
pliegue representativa
Dos ligandos forman un nudillo y los otros dos forman una hélice
Nudillo
corta.
Listón de cinc Dos ligandos forman un nudillo y los otros dos forman otro nudillo.
Técnicas de estudio
Según los estudios basados en bases de datos cristalográficas para metaloproteínas y un detallado examen de la secuencia
emergente para dedos de zinc, Berg,4 propuso una estructura tridimensional. Estudios de EXAFS también respaldaron el sitio
tetrahédrico del zinc. Asimismo, estudios de RMN coinciden.
El RMN ha sido la técnica más recurrentemente usada para el estudio de los dedos de zinc. La espectroscopía de resonancia
magnética nuclear (RMN) es una técnica de investigación que explota las propiedades magnéticas de ciertos núcleos atómicos.
Este tipo de espectroscopía nos permite determinar las características físicas y químicas de los átomos o de las moléculas que los
contienen. Se apoya en el fenómeno de resonancia magnética nuclear en el que el campo magnético intramolecular alrededor de
un átomo en una molécula cambia la frecuencia de resonancia, dándonos así acceso a detalles de la estructura electrónica de una
molécula y de sus grupos funcionales individuales. Da información acerca de la estructura, la dinámica, estado de reacción y
ambiente químico de las moléculas.
Un reto que presenta el estudio de ciertas proteínas, incluyendo dedos de cinc, es que la formación de cuerpos de exclusión, la
toxicidad de proteínas exógenas, la modificación de cadenas laterales, etcétera, influencian la expresión de la proteína y pueden
complicar la purificación de la misma. Por lo tanto, ha sido difícil expresar suficientes proteínas para estudiarlas in vitro. En los
últimos años se han desarrollado sistemas de expresión fusionados como GST y etiquetamiento con histidina (His-tag por su
abreviación en inglés) para facilitar la expresión de proteínas y simplificar la purificación de proteínas.5
Los sistemas de expresión His-tag son ampliamente usados debido a su bajo peso molecular y que no afectan la estructura de la
proteína ni sus funciones. Esto significa que no es necesario separar el His-tag de la proteína buscada. Por otra parte, las proteínas
fusionadas His-tag pueden ser fácilmente purificadas por una resina de afinidad Ni-NTA. En estudios recientes, los dedos de cinc
han sido expresados, separados y purificados usando un sistema His-tag/Ni-NTA. A partir de los efectos del His-tag en las
proteínas de dedos de cinc, se pueden evaluar sus propiedades y su estructura. Para esto se pueden usar técnicas de espectrometría
como espectroscopía de absorción UV-Vis, espectroscopía de dicroísmo circular (CD), prueba de titulación de ion de Cinc,
prueba de degeneración de urea y prueba de actividad de hidrolasa.
Métodos de selección
Numerosos métodos de selección se han utilizado para generar matrices de dedos de cinc capaces de apuntar a las secuencias
deseadas. Los esfuerzos iniciales de selección se utilizaron para seleccionar proteínas de unión a ADN expresadas en fagos de un
gran conjunto de arreglos de dedos de cinc aleatorios. Los esfuerzos más recientes han utilizado una sistemas de uno y dos
híbridos de levadura, bacterias y células de mamífero. Un método aún más reciente para seleccionar los nuevos arreglos de dedos
de cinc de bacterias utiliza un sistema de dos híbrido y ha sido denominado "OPEN" por sus creadores.9 Este sistema combina
conjuntos preseleccionados de dedos de cinc individuales que fueron seleccionados para unirse a un triplete y, a continuación, se
utiliza una segunda ronda de selección para obtener matrices de 3 dedos capaces de unirse a la secuencia de 9 pares de bases
deseado. Este sistema fue desarrollado por el Zinc Finger Consortium como una alternativa a las fuentes comerciales de matrices
de dedos de cinc prediseñados.
Función biológica
Además de ser útiles en lectura, escritura y transcipción de ADN, existen hormonas que hoy usan dedos de cinc. Son estas las
mismas hormonas que están fuertemente asociadas con la homeostasis de crecimiento de todo el organismo. Se listan en la
siguiente tabla las conexiones de dichas hormonas con la homeostasis de otros elementos (M).4
Referencias
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4. Bertini, I (1994). Bioniorganic Chemistry (en inglés). University Science Books.
5. Zhao, Dongxin; Huang, Zhongxian (20 de julio de 2016). «Effect of His-Tag on Expression, Purification, and
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Bioinorganic Chemistry and Applications (en inglés) 2016: 1-6. ISSN 1565-3633 (https://www.worldcat.org/issn/1565-
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tp://www.nature.com/nrd/journal/v2/n5/abs/nrd1087.html). Nat. Rev. Drug Discov. 2: 361-8.
7. D. Carroll (2008). «Progress and prospects: Zinc-finger nucleases as gene therapy agents» (http://www.nature.co
m/gt/journal/v15/n22/abs/gt2008145a.html). Gene Therapy 15: 1463-1468.
8. S.C. Ekker (2008). «Zinc finger-based knockout punches for zebrafish genes» (http://www.liebertonline.com/doi/a
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9. M.L. Maeder et al. (septiembre de 2008). «Rapid "Open-Source" Engineering of Customized Zinc-Finger
Nucleases for Highly Efficient Gene Modification» (http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?tool=pub
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Enlaces externos
,,.,-.-.--.-.
McDowall J. European Molecular Biology Laboratory - European Bioinformatics Institute (EMBL-EBI), ed.
«Protein of the Month: Zinc Fingers» (http://www.ebi.ac.uk/interpro/potm/2007_3/Page1.htm).
Goodsell DS. Research Collaboratory for Structural Bioinformatics (RCSB) Protein Data Bank (PDB), ed.
«Molecule of the Month: Zinc Fingers» (http://www.rcsb.org/pdb/static.do?p=education_discussion/molecule_of_t
he_month/pdb87_1.html).
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