INFORME DE UN EXPERIMENTO (EXTRACCIÓN DE ADN)

OBJETIVOS
- Realizar la extracción de ADN de tejidos animales y vegetales y reflexionar sobre la simpleza de su
composición con sencillas técnicas.
- Observar la estructura fibrilar del ADN.
- Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades quίmico-fίsicas del ADN

INTRODUCCIÓN

La práctica la pudimos realizar en una cocina normal, como se puede realizar en un laboratorio de un
centro. La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas. En primer lugar tienen que
romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Después
debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de
enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es
soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el
alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes
celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita la unión de las proteínas al ADN.

MARCO TEORICO

La cebolla es un cultivo que se extiende por todas las regiones templadas del mundo. Los principales países
productores son: China, Estados Unidos, India y Japón.
En España se cultivan unas 35.000 hectáreas, distribuidas por todas las provincias. Esta superficie se
reparte de la siguiente forma: 7.000 hectáreas en secano y 28.000 en regadío.
Las regiones donde más extendido está este cultivo son:Levante, Centro y Andalucía.
La producción total de España se aproxima al millón detoneladas.
España ocupa, en el comercio internacional, el segundolugar como exportador, detrás de Holanda, y viene
seguida dela India y Estados Unidos.
La cebolla es el tercer cultivo de rruestra horticultura, hoy día, por la superficie que ocupa, y el segundo por
su volumende producción.
Es una planta bianual que se aprovecha por el bulbo,formado durante el primer año de cultivo. Este bulbo
está constituido por varias capas carnosas en forma de escamas; las exteriores son más finas y
transparentes, de color variable, del rojo o violeta al blanco, constituyendo lo que se denomina la piel. La
formación de los tallos florales en el primer año de cultivo es un accidente que parece ser debido a un
invierno suave seguido de una primavera fria.
Estos bulbos, que pueden tener diferentes formas (globosa, discoidal, cónica, etc.), desarrollan, en el
segundo año de permanencia en el terreno, un tallo floral hueco y cilíndrico quetermina en una
inflorescencia en umbela, cuyas flores son blanco-violáceas.
El fruto es una cápsula que contiene semillas rugosas de color negro y forma aplanada.
En la parte inferior del bulbo se desarrollan las raíces, en forma de mechón más o menos alargado.
El ciclo productivo que interesa al agricultor, comprende desde la siembra en semillero o en terreno de
asiento, hasta laobtención de los bulbos o cebollas.

MATERIAL NECESARIO

 Muestra vegetal (cebolla.)

 Un cuchillo de cocina.
 Olla para baño maria.
 Papel filtro
 Agua (destilada o mineral)
 Sal de mesa
 Detergente líquido o champú
 Alcohol congelado
 Bagueta
 Vaso de precipitado
PROCEDIMIENTO

1. Trituración de la cebolla: Con la ayuda de un cuchillo cortamos unos 100g de cebolla y lo troceamos
hasta obtener porciones muy pequeñas. Después aplastamos todos los
trozos con un tenedor para formar una pasta más o menos homogénea. Depositamos esta pasta en un vaso
de precipitados.

2. Preparación de la solución de extracción: Primero pesamos con la balanza 3g de sal.Con una probeta
preparamos 100ml de agua destilada y 10ml de Fairy. A continuación lo mezclamos todo en un erlenmeyer
procurando no formar muchas burbujas.
3. Detergente + cebolla: Vertemos el detergente en el vaso de precipitados que contiene la cebolla y lo
mezclamos todo procurando de nuevo no hacer muchas burbujas.

4. Baño caliente: Ponemos agua a calentar y con un termómetro medimos la temperatura

hasta que alcance unos 60ºC aproximadamente. Después introducimos el vaso de
precipitados con la mezcla y vamos removiendo durante unos 15’ con la ayuda de una
barita agitadora. Hay que procurar manetener la temperatura en los 60ºC y no hacer
muchas burbujas.

5. Baño frio: Preparamos un recipiente con agua y hielo e introducimos el vaso de

precipitados. Lo dejamos en estas condiciones durante 5’ removiendo constantemente.

6. Filtración de la solución: Preparamos un erlenmeyer con un colador encima y

vertemos el contenido del vaso de precipitados. A continuación preparamos un
embudo con un papel de filtro encima y vertemos la solución obtenida anteriormente
recogiendo el líquido en un tubo de ensayo. Este segundo proceso puede tardar unos
minutos.
7. Solución + alcohol: Sacamos el alcohol del congelador y preparamos en un tubo de ensayo
aproximadamente el mismo volumen de alcohol que de la solución de interés.

10. Observación del DNA: Vertemos muy lentamente el alcohol en el tubo de ensayo con la solución. Al
cabo de pocos segundos seremos capaces de observar tres capas bien diferenciadas. Encima de todo
estará el alcohol, debajo de todo estarán los restos celulares (membranas, orgánulos) del plátano y los otros
componentes de la solución y en la interfase observaremos una especie de hilos blancos rodeados de
burbujas. Esoes el DNA.

Notas:
 Si se quiere realizar una extracción “profesional” puedes agregar enzimas que lo puede hacer
mejor, y el producto que resultaría seria pura.
 Cuando añadas el alcohol frío debes hacerlo de forma que resbale por las paredes del tubo para
que forme una capa sobre el filtrado. Para realizarlo mejor puedes utilizar la varilla de vidrio o una
cucharilla para ayudarte.
 Si se expone por mucho tiempo la muestra vegetal a rayos ultravioletas, esto provoca daños sobre
la estructura del ADN, o aplicar ciertos conservantes que puedan provocar efectos sobre la cadena
del ADN.

EXPLICACIONES CIENTÍFICAS DEL PROCEDIMIENTO:

El DNA se encuentra en el interior del núcleo de las células eucariotas rodeado de proteínas (histonas) que
lo mantienen unido y compactado. Para poder aislarlo y observarlo se deben deshacer la membrana
plasmática y la envoltura nuclear y también se precisa la desnaturalización de las proteínas. A continuación
se explicará qué pasos del procedimiento explicado anteriormente son los encargados de realizar estas
funciones y también se aclarará el por qué de cada paso.
- Trituración del plátano: Incrementar el área superficial del plátano ayuda a hacer la superfície de la
membrana más fácil de disolver y también permite una absorción más efecitva del calor y de las soluciones
que se añadirán.

- Detergente: Las membranas de las células están formadas por dos capas de lípidos con proteínas
transmembrana a través de estas. El detergente ayuda a romper la bicapa de fosfolípidos de las membranas
plasmáticas y la envoltura nuclear . Los lípidos de la membrana se descomponen debido al detergente que
deshace las uniones que mantienen la membrana junta. Cuando el detergente se pone en conacto con los
lípidos éstos se separan de la membrana rompiéndola. La estructura de los lípidos es similar a la del
detergente y eso hace que se combinen, formando una burbuja de detergente y lípidos

- Baño caliente: Este paso se utiliza para liberar el DNA de sus barreras protectoras.La incubación se utiliza
para acelerar el proceso de rotura de las membranas y para ayudar a disolver la bicapa de fosfolípidos
mediante la desnaturalización de las proteínas de membrana y rotura de los enlaces que mantienen los
fosfolípidos unidos El calor “ablanda” la membrana.

- Baño frio: El agua fría ayuda a mantener el DNA intacto durante el proceso de extracción. El enfriamiento
de la solución ayuda a prevenir la desnaturalización que podría destruir el DNA si se expusiera al calor de
manera prolongada (protege el DNA de enzimas que pueden destruirlo como las DNAasas ya que la
refrigeración ralentiza las reacciones enzimáticas).

- Homogeneización continua: Con este procedimiento conseguimos que la temperatura (tanto el calor como
el frío) actúe sobre todo el contenido del extracto, y no sólo sobre las partes en contacto con el vaso de
precipitados. También se consigue que la solución detergente pueda actuar sobre todo el triturado de
plátano.

- Filtración: Este paso permite separar los restos de los tejidos del plátano y de las células que hemos roto
en los pasos anteriores. Ese maerial no nos interesa y quedará retenido en el colador (los restos más
grandes) o en el filtro (restos más pequeños). El líquido filtrado que conseguimos es el que contiene el DNA
libre de la membrana nuclear.

- Alcohol congelado: El DNA es una molécula polar, pero la reacción con el etanol a muy baja temperatura
hace que se vuelva apolar e insoluble en el etanol formándose un precipitado justo entre la capa con etanol
líquido y la capa con el extracto. El DNA es el único componente de la solución que no es soluble en el
etanol, y se hace visible porque las diferentes cadenas se van aglutinando entre sí al precipitar debido a la
acción de fuerzas físicas. El alcohol es menos denso que el agua del extracto y por eso flota sobre la capa
del extracto.

- Sal en la solución de extracción: La molécula de DNA es soluble en agua y por tanto invisible, pero si se
pone en contacto DNA que haya estado en un medio salado y alcohol frío el DNA se vuelve insoluble y
precipita. Por lo tanto, el agua salada ayuda a la precipitación en el alcohol. La sal también ayuda a separar
el DNA de las histonas.

RESULTADOS Y EXPLICACIÓN

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay
fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las
moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN.
Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene lauril sulfato de sodio, el cual limpia los
trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la misma manera en el protocolo de extracción de
ADN, separando las grasas (lípidos) y las proteínas que constituyen las membranas que rodean la célula y
el núcleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la célula.
El calor suaviza los fosfolípidos (grasas) en las membranas que rodean la célula y el núcleo. También
desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleicas (ADNasas) las cuales, si están presentes,
pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeños que lo haría imposible de ver. Si las enzimas se
desnaturalizan y el ADN se desenrolla, éste pierde su forma y se vuelve inactivo. Las enzimas se
desnaturalizan a 60° Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80° Celsius.
Los zumos de piña y papaya contienen un enzima, la papaína, la solución ablandadora de carne también
actúa como una enzima, que contribuye a eliminar las proteínas que puedan contaminar el ADN. La solución
ablandadora de carne actúa como una enzima.
El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto. Además de permitirnos ver el
ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución
acuosa.
El proceso de extracción de ADN desde una célula es el primer paso para muchos procedimientos
(protocolos) de los laboratorios de biotecnología.
Los científicos deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que se
encuentran en las células, evitando que el ADN se desnature (que se rompa).
El material que se necesita para ello es fácil de encontrar y el procedimiento es sencillo .Cada uno de los
ingredientes tiene su propia función. La solución de sal y jabón sirve para romper la membrana plasmática y
nuclear e incluso la pared celular. El líquido de lentillas elimina las proteínas que degradan el ADN. El
alcohol etílico sirve para precipitar el ADN
-EL ADN
El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En él están escritas las instrucciones que deben
seguir las células para construir un organismo y mantenerlo vivo. Todas las células que forman un individuo
contienen una copia idéntica de ADN. Cada una de ellas, sin embargo, lee una parte de estas instrucciones
y por eso hay células con diferentes formas y funciones.
Está formado por desoxirribonucleotidos (A, G, C, T). Que a su vez están formados -D desoxirribosa y un
ion fosfato.
La proporción y secuencia de las bases nitrogenadas diferencia a los poli nucleótidos.
El ADN presenta dos niveles de plegamiento que dan lugar a:
 Estructura primaria:
Los polinucleótidos se forman entre las bases nitrogenadas de adenia, guanina, citosina y timina por
enlaces covalentes de tipo fosfodiester. Así se forma un esqueleto de polidesoxiribosa-fosfato, de forma que
queda un extremo con -OH 3´ libre y un extremo 5´ con un grupo fosfato libre.
 Estructura secundaria:
Tiene un empaquetamiento espacial pero no se altera.
Dentro de la estructura secundaria hay 3 modelos:
.El modelo de la estructura secundaria del ADN en forma de doble hélice dextrógira (forma B). Las dos
hebras son anti paralelas es decir si una presenta la dirección 5´->3´, la otra posee la dirección 3´->5´.
El conjunto se pliega sobre sí mismo obligado por los puentes de hidrógeno entre diferentes regiones de la
molécula, hasta adoptar la conformación más estable, que es la de doble hélice. Este enrollamiento entre
las 2 hebras de la doble hélice es dextrógiro es decir gira a derechas y de tipo plectonémico, como si
estuvieran trenzadas.
Las secuencias de bases son complementarias, pues hay una correspondencia entre las bases de ambas
cadenas .La adenina sólo puede estar frente a la timina y la guanina frente a la citosina. Así las bases
púricas están enfrentadas a las bases pirimidínicas y la unión se realiza por puentes de hidrógeno en los
pares A=T y tres en los pares G-C
La correspondencia entre las bases es la causa de que las dos cadenas de la doble hélice de ADN posean
secuencias complementarias.
Además los pares de bases están horizontales y el eje los atraviesa por el centro.
.Modelo hélice A: En este modelo los pares de bases nitrogenadas están inclinados hacia el exterior pero la
hélice al igual que la del ADN B es dextrógiro
. Modelo hélice z: En este modelo las cadenas de ADN no se enrollan en forma de doble hélice sino en
forma de zig-zag.
ADN es la abreviatura del ácido desoxirribonucleico (en inglés, DNA). Constituye el material genético de los
organismos. El ADN es una molécula que se encuentra en todas las células de los seres vivos y se encarga
de codificar todo lo que nosotros formamos o somos, desde nuestro color del pelo hasta las proteínas que
tenemos en nuestra sangre. El ADN es una molécula cargada que está asociada a proteínas y en el caso de
los organismos eucariontes está encerrado dentro de un núcleo.
El ADN está presente en los indicios biológicos como sangre, semen, saliva, hueso, pelo, etc.
Es muy importante conocer las condiciones para remisión adecuada de la muestras.
El Salting- out es uno de los métodos de extracción de ADN mas utilizados por su fácil implementación, baja
toxicidad de los reactivos y permite la visualización del ADN.
-Factores que afectan el rendimiento, calidad y pureza del ADN:
 Cantidad de material de partida
 Número de copias de las moléculas de AN
 Cantidad de tejido.
 Condiciones en las que se encuentra el material de inicio(fresco, congelado, fijado)
 Contaminantes e interferentes en el material biológico

Conclusión
 Al realizar el procedimiento adecuadamente, resulta que las fibrillas de ADN comenzaron a salir, de
un color blanco precipitado por sobre el alcohol (mezcla Heterogénea). Con un alambre doblas y
obtenemos y sacamos del tubo de ensayo el ADN. Si quieres conservar el ADN puede dejarse secar
sobre un papel de filtro.
 En caso de que el ADN de la Muestra Vegetal no se pueda apreciar muy claramente. Tenemos que
agitar el tubo un poco para poderlo apreciarlo mejor.
 Si se tiene problemas con el filtro, que no está bien hecho y que no filtra bien, por lo tanto hay que
hacer otro. También puede haber complicaciones con la forma de poner el alcohol de manera que
cayera por las paredes del tubo de ensayo.
 Con esto podemos saber cómo es el procedimiento del extracto del ADN, así como si estructura de
una forma fácil y sencilla.

BIBLIOGRAFÍA

http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/
http://html.rincondelvago.com/extraccion-del-adn-de-una-cebolla.html
http://centros5.pntic.mec.es/ies.victoria.kent/Rincon-C/Practica/PR-5.htm
http://www.joseacortes.com/practicas/extraccionADN.htm
http://www.jpimentel.com/ciencias_experimentales/pagwebciencias/pagweb/la_ciencia_a_tu_alcance_II/qui
mica/Experiencias_quimica_extraccion_de_adn.htm
http://www.bioapuntes.cl/laboratorio/extrac-adn.htm
http://www.slideshare.net/marcia_karina/extraccion-adn