UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FCCNM – 2019 PRÁCTICA

Reporte N°1 Fecha de Entrega: 29/04/2019

▪ 2014025571, Huamanricra Covarrubias Neyda

▪ 2014021895, Huarcaya Velasquez Josselin Dayana
▪ 2014024752, Nolasco Gutierrez Zenaida

TEMA: Protocolo de fijación y técnicas de disociación de

Células Madre en Mus musculus (BALB/c)

Objetivos
 Conocer cuáles son las técnicas de disociación de células madres en ratones
albinos.
 Realizar la identificación de células cerebrales y del estómago.

MATERIALES
 Tubo falco
 Tubo eppendorf
 Placa petri
 Pipeta
 Bisturi
 HBBS
 Tripsina
 Colagenasa

Muestra biológica:

 Un ratón albino (Mus musculus BALB/c)

 I. PROCEDIMIENTO
A. Disección del Ratón
A continuación, se realiza la disección del ratón para poder extraer tanto el
estómago y realizar un corte en la cabeza para poder extraer toda la masa
encefálica del animal para poder así obtener las células de cada órgano y
posteriormente ser tratadas para ser visualizadas finalmente.

Cabeza

 Delicadamente se extrae la cabeza del ratón sin hacer daño

 Seguido se le extrae la piel, pero no del todo ya que nos permitirá sujetar
para realizar los siguientes procedimientos.
 Como se observa en la figura anterior con una tijera curva cortar hasta la
línea media en forma de T por los extremos iniciando por el foramen y luego
un corte en el centro para levantar las dos parietales y poder retirar el
cerebro.
 Seguido se lava con suero fisiológico para retirar la sangre y evitar algún
daño.
B. Disociación Mecánica
 En la obtención de células del estomago
 Luego de la disección del ratón se extrajo el estómago del ratón poniéndole
en una placa Petri que tenía 1ml de HBBS para así poder evitar la asociación
de las células.
 Seguidamente se empezó a abrir el estómago para así realizarle un raspado
del interior previamente antes limpiar por completo.
 Finalmente, ya limpio el estómago de ningún residuo se empezó a realizar
el raspado del interior del estómago sobre el líquido de HBBS para luego
este será absorbido y expulsado por 10 veces seguida con una pipeta.
 Luego este líquido que contiene HBBS con las células estomago serán
echado en un tubo eppendorf, del cual se extraerá 10 ul de la muestra y 5 ul
de azul de tripán sobre una lámina porta objetos para luego ser observada
al microscopio.

 En la obtención de células del cerebro

 Poner el cerebro en un pequeño placa Petri con HBBS y realizarle cortes
bien pequeños 2mm.
 Luego transvasar la solución a un eppendorf con la ayuda de una pipeta
Pasteur y realizar la disociación mecánica con este mismo absorbiendo diez
veces.
  Seguidamente se realiza la observación de muestra (solución), para ello se
extrae 5um de la solución y se pone en un porta objeto y sobre ella se agrega
10 um de azul de tripan .observar al microscopio.

C. Disociación Enzimática
 En la obtención de células del estomago
 En el tubo eppendorf que contenía la muestra celular del estómago se le
adiciono 50 ul de una enzima llamada colagenasa al 0,1% y se mandó a
incubar por 30 minutos a una temperatura de 37°C, pero nosotros por falta
de tiempo solo se llegó incubar solo 10 minutos.
 En la obtención de células del cerebro
seguido se realiza la disociación enzimática en donde a la muestra se le agrega
100um de colagenasa y se debe de mantener a una temperatura de 37°C por
media hora. Seguido se observa al microscopio.

II. RESULTADOS

Disociación Mecánica
CELULAS DEL CEREBRO A 40X
CELULAS DEL ESTOMAGO

Disociación Enzimática

CELULAS DEL CEREBRO

CELULAS DEL ESTOMAGO

III. DISCUSIONES
IV. CONCLUSIONES

V. REFERENCIA BIBLIOGRAFICAS.