MÉTODOS PARA DETERMINAR PROTEÍNAS TOTALES FRACCIONADAS EN SANGRE

1. Método colorimétrico para la determinación de Proteínas Totales en suero

1.1. Fundamento: Determinación de Proteínas Totales: Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el
ión cúprico, en medio alcalino, para dar un complejo color violeta con máximo de absorción a 540 nm, cuya
intensidad es proporcional a la concentración de proteínas totales en la muestra.
1.2. REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en hidróxido de sodio 875 mmol/l y alquil aril poliéter (AAP).
B. Reactivo B: solución de 3,3',5,5'-tetrabromo cresolsulfon ftaleína (en polioxietilén lauril éter).
S. Standard (Suero Patrón): solución de albúmina y globulinas de origen bovino, con título conocido de
1.3. PROCEDIMIENTO
MUESTRA: Suero
a) Recolección: debe obtenerse suero libre de hemólisis.
b) Aditivos: no se requieren.
c) Sustancias interferentes conocidas:
- En la determinación de Proteínas Totales no se observa interferencia por bilirrubina hasta 100 mg/l, ni
hemólisis ligera y en ningún caso se presenta turbiedad por quilomicrones.
- En la determinación de Albúmina, no se observan interferencias por hemólisis moderada, bilirrubina hasta
200 mg/l ni lipemia hasta 20 g/l. Debido a que no interfieren las globulinas, en esta determinación no se
requiere desproteinización previa.
DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES CONDICIONES DE REACCION
- Longitud de onda: 540 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro con filtro verde (520-560 nm).
- Temperatura de reacción: 37° C
- Tiempo de reacción: 15 minutos - Volumen de muestra: 50 ul
- Volumen de Reactivo A: 3,5 ml - Volumen final de reacción: 3,55 ml

VALORES DE REFERENCIA

Se determinó el contenido de proteínas totales y albúmina en suero de personas sanas, de ambos sexos, con
alimentación mixta normal y edades entre 17 y 40 años; obteniéndose los siguientes rangos: Proteínas totales: 6,1 a
7,9 g/dl
2. DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES: REACCIÓN DEL BIURET.
2.1. FUNDAMENTO: En medio alcalino regulado, los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con los iones
cúpricos del reactivo, dando un complejo de color azul- violáceo cuya intensidad medida fotométricamente
a 540 nm, es proporcional a la concentración de proteínas totales de la muestra.
2.2. REACTIVOS (Listos para Usar)

Reactivo cuproalcallno: Proteinas Totales.

La concentración de los componentes en solución es: S04Cu 12 mmol/l; tartrato Na-K 32 mmol/I; IK 6 mmol/I;
NaOH 250 mmol/I.

2.3. PROCEDIMIENTO
MUESTRAS: Para la determinación de Proteínas Totales en Suero Método Biuret
Condiciones de conservación Los sueros son estables 48 hs. en refrigerador, o 1 mes en congelador.
Sustancias interferentes
Para la valoración de P.T. no interfiere la hemólisis ligera. Valores de bilirrubina hasta 200 mg/I no alteran los
resultados. Sueros lipémicos con valores de triglicéridos hasta 6 g/l, no modifican significativamente los
resultados.
Manipulación y descarte Las muestras de pacientes deben manipularse considerandolas potencialmente
infecciosas, al igual que el material descartable y los utilizados en el ensayo, que hayan estado en contacto
con las mismas. Un procedimiento aconsejado para descartartos es el siguiente: autoclavado a 121 ºC durante
una hora y el tratamiento de los líquidos residuales con hipoclorito de sodiodurante una hora a una
concentración final del 5%.
ENSAYO 1: Determinación de Proteínas Totales.

VALORES DE REFERENCIA Proteínas Totales: 6,5-8,0 g/dl