AISLAMIENTO DE BACTERIAS POR EL MÉTODO DE DILUCIÓN EN PLACAS

Edgar M., Jeremy D., Maritza M., Shirley S., Xtopher F.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTIN, FACULTAD DE INGENIERIA DE PROCESOS,

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA QUIMICA

DIRIGIDO A: Mg. Marcia Quequezana Bedregal

RESUMEN

En este trabajo se realizaron dos técnicas de siembra siendo por diseminación es decir a la placa
con el nutriente se le añade microorganismo a una concentración y se le disemina con Digrasky
este procedimiento se repitió cinco veces con cultivos a diferente concentración. La otra técnica
fue sembrado por dilución conde el microorganismo es añadido cuando el nutriente esta a 44°C
para que se mescle con este. Para luego ver en que concentración crecieron mas microorganismos
y realizar el posterior conteo de UFC.

OBJETIVOS

Aprender la técnica de dilución para el MATERIALES

aislamiento y cuenta en placa de diferentes o Tubos de rosca
fuentes de inóculo. o Cloruro de sodio
o Gradilla
o Agar nutritivo
INTRODUCCION o Mechero
o Juegos de tinción de Gram
Cuando se trata de microorganismos para
o Cajas Petri
empezar se requiere saber si lo tenemos o no, o Pipetas de 1 y 10 ml
o 1 probeta de 100 ml
también si prolifera y la cantidad de UFC Material que deben traer los alumnos:
esto para la posterior conteo y cálculo de su masking-tape, algodón, gasa, alcohol.
concentración. En el presente trabajo se
usaran dos técnicas viendo el impacto de METODOLOGIA

ellas en el crecimiento del microorganismo. SIEMBRA POR DILUCION

Preparación de reactivos y medio de cultivo:

Solución isotónica: Pesar 0.09 g de NaCl y
disolviendo en 100 ml de agua destilada
Agar nutritivo: Preparar 200 ml de medio
siguiendo las indicaciones del reactivo.
Envolver cajas de Petri y pipetas..
Bajo condiciones estériles hacer las diluciones
en la solución isotónica estéril, de acuerdo a la
figura 1.
Tomar 0.1 ml de la dilución 10-1, 10-2, 10-3, 10-
4
, 10-5, 10-6, 10-7 y colocar en cajas de petri bajo
condiciones estériles. Inocular de la misma
manera con las diluciones siguientes
Se realizará el conteo en placa por superficie.
Incubar las cajas en forma invertida a 30°C, de
24 a 48 horas.
Considerar las siguientes reglas para la
realización del reporte de la práctica:
Reglas para conteo en placa. Seleccionar
aquellas placas donde aparezcan de 30 a 300
colonias, pues hay menor error en el conteo.
Contar todas las colonias de la placa. Si el
número se estima mayor de 300 y no hay
diluciones subsecuentes: 301-500 colonias se
divide en dos partes y el número de colonias
contadas se multiplica por 2.
501-800 colonias se divide en cuatro partes y
el número de colonias contadas se multiplica
por 4.
>800 colonias se cuentan de 10 a 20 cuadros
se promedia y se multiplica por el número de
cuadros que ocupa la caja.
El número de colonias contadas deberá ser
multiplicado por el inverso de la dilución y
considerar si la técnica fue por vertido o por
superficie (debido al volumen de la muestra).
Redondear la cifra obtenida en el recuento de
tal forma que haya dos dígitos al inicio de la
cifra por ejemplo: 129 se reporta 130, 2,417 se
reporta 2400, 49 se reporta 49
Fig. 1
SIEMBRA EN PROFUNDIDAD
Preparar las muestras según procedimientos
recomendados para la preparación y dilución
de muestras.
Pipetear a placas Petri estériles, alícuotas de 1
ml. A partir de las diluciones, dilución 10-1, 10-
2
, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7.
Agregar inmediatamente a las placas Petri 15
ml de agar nutritivo licuado y temperado a
45°C, mezclar rápidamente con movimientos
vaivén y rotación de la placa; dejar solidificar.
Incubar las placas en posición invertida a 37
°C por 48 horas.
Efectuar el recuento de microorganismos
según:
♠ Seleccionar dos placas
correspondientes a una dilución que
contenga entre 30 y 300 colonias.
♠ Tomar la media aritmética de dos
recuentos y multiplicar por el factor de
dilución utilizada. Reportar el
resultado como numero de m.o.
aerobios mesofilos viables por gramo
o mililitro, según el caso
♠ Si las placas de dos diluciones
consecutivas presentan recuentos
menores que 30 y mayores que 300,
tomar el promedio de los dos
recuentos y computar el recuento para
cada una de las diluciones y establecer
la relación de los dos recuentos
RESULTADOS

Se hicieron siembras de E. coli por ambas

maneras donde se vieron la formación de
colonias pero con una mayor cantidad es las
más concentradas . Se puso mucho cuidado
en trabajar de manera que no se contaminen
las muestras .

E. coli 0.1 y 0.01

 EN LA PROFUNDIDAD
PLACAS CON E COLI
 EN LA SUPERFICIE
o Utilizamos las asas de Digrasky para
extender el inoculo en la placa.
o Al revisar nuestras muestras nos
pudimos dar cuenta que las placas
donde existen mayor concentración
de mo es donde se formaron
colonias con mayor posibilidad de
poder contabilizarlas a través de la
luz.
En este tipo de siembra también se
pudo observar que el mayor
crecimiento de colonias fue en las
que tenía mayor concentración,
donde se movilizaron en el medio .
Las placas fueron lllevadas a la
estufa para que puedan formar las
colonias que ente caso fueron las de
E. coli.

PLACAS EN LA ESTUFA

ESTERILIZACION DE ASAS DE DIGRASKY

OBSERVACIONES

o Al momento de cultivar las muestras

debemos tener mucho en cuenta de
hacerlo con asepsia y estirilizacioon
y evitar la contaminación de los
materiales y equipos.

CONCLUSIONES

 En esta práctica se logró aprender la

técnica de dilución para el
aislamiento y cuenta en placa en
diferentes fuentes de inóculo.
 Se encontró que las unidades
formadoras de colonias en la
superficie y en profundidad fueron
diferentes para cada caso, teniendo
en cuenta que las condiciones
fueron diferentes.

BIBLIOGRAFIA
o Enfermedades infecciosas 6. Ed.
Escrito por Angela Restrepo M., p.
14, en Google Libros
o Maribel Sancho Martínez (27 de abril
de 2016). «Microbiología básica (I):
el mundo invisible».
o Small Things Considered, blog de
curiosidades de la microbiología:
http://schaechter.asmblog.org/