METODOS DE INMUNODIAGNOSTICO

integrantes:

Yoselyn Cruz Mercado

Ana Lorena Vaca

Ana Maria Vique Acsama

Bonny Cruz Mercado

Harlen Mendoza Huanca

Docente: Omar Rocabado Calizaya

Fecha: 06/07/2019
 METODOS DE INMUNODIAGNOSTICO
1.- OBJETIVOS

 Describir las técnicas de inmunodiagnòstico más utilizados.

 Hacer un análisis comparativo entre las técnicas de interacción no visualizables (Ag-Ac)
y de precipitación.
 Encontrar las principales interferencias que afectan las técnicas de inmunodiagnostico.

2.- TECNICAS DE INMUNODIAGNOSTICOS

Se dividen en:

Técnicas Directas o primarias. -

Miden de forma directa la presencia de uniones Ag-Ac utilizando elementos marcadores. La

combinación de Ag o del Ac con el indicador, se denomina conjugado. Son las reacciones mas
sensibles y las más modernas. Entre ellas tenemos:

 Microscopia electrónica.
 Cultivos celulares
 PCR
 Inmunofluorescencia directa
 Electroforesis
 Otras técnicas (Test de aglutinación, sondas de ácidos nucleicos, sondas sintéticas,
Radioinmunoanálisis)
 Enzimoinmunoanalisis (Elisa, Western Blot, inmunohistoquimica)

Técnicas Indirectas o secundarias.-

Son pruebas de unión Ag-Ac clásicas, más fáciles y simples de realizar, pero son menos
sensibles. Además requieren un efecto secundario que es el que permite visualizar los
complejos Ag-Ac formado.

 Inmunofluorescencia indirecta
 Precipitación
 Inhibición de la hemoaglutinación

3.- FUNDAMENTOS DE LAS TECNICAS

 MICROSCOPIA ELECTRÓNICA.

Mediante el microscopio electrónico se puede observar la morfología. Ejemplo; hepatitis B,

HIV, Herpes.

 CULTIVOS CELULARES.-

Detecta el virus como agente infeccioso. Ejemplo; Pseudomonas, E. coli. Salmonella Sp.

 PCR

Utilizada para amplificar y cuantificar de forma absoluta el producto de la amplificación de

ácido desoxirribonucleico. Ejemplo; HIV, Hepatitis B, Virus del Èbola.
  INMUNOFLUORESCENCIA

INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA.- para detección de antígeno en una muestra

clínica.

Permite la detección de antígeno en un paso. La lectura se realiza en un microscopio de

fluorescencia, que emite luz ultravioleta de una determinada longitud de onda.

Ejemplo; Chagas

 ELECTROFORESIS.-

Se utiliza para la separación de moléculas al ser estas sometidas a una corriente eléctrica. Ej.
HIV

 OTRAS TÉCNICAS

PRUEBAS DE AGLUTINACIÓN.-

En las pruebas de aglutinación una partícula se acopla con un reactivo antigénico o un

anticuerpo. Si el anticuerpo o antígeno buscado están presentes en la muestra, producirán el
entrecruzamiento de las partículas, lo que se observa como aglutinación. Ej. ASTO, PCR. FR

RADIOINMUNOANALISIS.-

 Se mezcla una cantidad constante de antígeno marcado radioactivamente y una

cantidad constante de un anticuerpo para ese antígeno
 Se produce la reacción entre antígeno (Ag) y anticuerpo (Ac)
 se separa la fracción de antígeno que se ha unido de la que permanece libre (hay
varias formas de hacerlo. En la figura inferior se utiliza un 2º anticuerpo dirigido contra
el primero)
 se determina la radioactividad
 Si la muestra contiene además antígeno frío (no marcado), éste competirá con el
marcado para unirse al anticuerpo, y se observará un descenso en la medida de la
radioactividad
 Este descenso es proporcional a la concentración de antígeno frío en la muestra
 En ausencia de antígeno frío (no radioactivo),
todos los complejos Ag-Ac serán radioactivos.
La radioactividad medida es máxima

En presencia de antígeno frío (no radioactivo),

éste compite con el antígeno radioactivo para
unirse al anticuerpo. Por tanto la
radioactividad medida es menor. El descenso
es proporcional a la concentración de Ag frío
presente en la muestra

 Se construye una curva de calibrado (color rojo) que relacione

la medida de radioactividad (cpm) con la concentración de antígeno
frío en la muestra
 Si se realiza el ensayo con una muestra que contiene una
cantidad desconocida del antígeno no marcado y se mide la
radioactividad asociada a los anticuerpos, por interpolación sobre la
curva de calibrado se puede estimar la concentración del antígeno
frío en la muestra.

 ENZIMOINMUNOANALISIS (ELISA, WESTERN BLOT).-

Estas pruebas utilizan anticuerpos unidos a enzimas para detectar antígenos, y para detectar y
cuantificar anticuerpos. Ej. HIV. Chagas, Cisticercosis.

FUNDAMENTOS DE TÉCNICAS INDIRECTAS O SECUNDARIAS.-

 INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA.- para detección de anticuerpos específicos en

el suero del paciente.

 PRECIPITACIÓN.- miden la cantidad de antígenos o de anticuerpos en los líquidos

corporales a partir del grado de precipitaciones visibles de complejos de antígeno
anticuerpo dentro de un gel de agarosa o en solución.

 INHIBICIÓN DE LA HEMOAGLUTINACIÓN.-

La hemaglutinación indirecta se basa en la propiedad que tienen los anticuerpos de producir

aglutinación específica en presencia de glóbulos rojos sensibilizados con los correspondientes
antígenos. Ej. HAI Chagas.