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La plupart des aliments sont sujets au brunissement enzymatique. Ces réactions sont d'autant plus
importantes que le matériel est soumis à de multiples manipulations entraînant des blessures du tissu
végétal. Ces réactions entraînent une modification de l'apparence, de la flaveur et de la qualité
nutritionnelle. Toutes ces conséquences sont préjudiciables à la qualité organoleptique de l'aliment.
Le brunissement peut dans certains cas être recherché lorsqu'il permet d'améliorer l'aspect et le
goût des produits alimentaires comme dans le cas du café, de la datte ou du sirop d'érable. Dans le
cas des fruits et légumes réfrigérés ou déshydratés, le brunissement est indésirable puisqu'il en
résulte une dégradation du goût et de l'aspect. Le brunissement des fruits et légumes dû à des
blessures mécaniques au cours de la récolte ou du procès de transformation est une cause
importante de la perte de la qualité .
BUT DE TP
L'objectif principal est d'identifier les paramètres majeurs influant sur le brunissement enzymatique
afin de proposer des voies d'amélioration de la qualité du produit pertinentes. Une approche
expérimentale permettant d'étudier les effets spécifiques de la température et la vitesse de la réaction
indépendamment des autres paramètres nous a permis d'identifier les points critiques du procédé
induisant des altérations de la couleur ; (le cas de brunissement enzymatique du banane).
PARTIE THEORIQUE
1) Définition de brunissement enzymatique
C’est un phénomène observé chez les fruits et légumes blessés ou découpés, correspond à la
conversion des composés phénoliques en polymères colorés, le plus souvent bruns ou moins qui sont
désignés par les mélanines.
Les substrats sont principalement les pigments et substances phénoliques comme les tanins et la
lignine responsable de la structure des fruits et légumes. Ils sont transformés en quinones qui se
polymérisent grâce à l’oxydation. Ils peuvent réagir avec les acides aminés. L’enzyme responsable du
brunissement enzymatique est le polyphénol oxydase.
Le Polyphénol oxydase (PPO)
Les polyphénols oxydases (E.C. 1.14.18.1), appartiennent au groupe des oxydoréductases à deux
atomes de cuivre. Ils interviennent dans les phénomènes respiratoires comme cytochrome oxydase,
c’est un enzyme régulé, sensible et de faible concentration. Elles catalysent l'oxydation des
composés phénoliques en présence d'oxygène moléculaire. Les cellules végétales contiennent de
la PPO et des composés phénoliques (pyrocatéchol, flavonoïdes, tannins…), séparés par une mince
membrane. Les composés phénoliques sont contenus dans un compartiment appelé la vacuole
PARTIE PRATIQUE
1) Extraction de l’enzyme
1) Sans inhibiteur
*Matériels et réactifs
-extrait enzymatique.
S1 S2 S3 S4 S5 S6
S (ml) 30 20 15 10 7.5 5
T (ml) 0 10 15 20 22.5 25
DO 0.714 0.680 0.517 0.433 0.400 0.310
Graphe obtenu :
Les calculs :
1) la vitesse maximale
V max = 0.714
2) le Km
3) Vitesses initiales
[𝑠]
V= Vmax × [𝑠]+𝐾𝑚
[30]
V1= 0.714 × [30]+5.5 = 0.603 mol/l
[20]
V2= 0.714 × [20]+5.5 = 0.551 mol/l
[15]
V3= 0.714 × [15]+5.5 = 0.522 mol/l
[10]
V4= 0.714 × [10]+5.5 = 0.466 mol/l
[7.5]
V5= 0.714 × [7.5]+5.5 = 0.411 mol/l
[5]
V6= 0.714 × [5]+5.5 = 0.34 mol/l
2) Avec inhibiteur :
Réactifs et matériel
-extrait enzymatique
benzoïque0.002 mol/l.
Résultats obtenus
S1 S2 S3 S4 S5 S6
S (ml) 30 20 15 10 7.5 5
T (ml) 0 10 15 20 22.5 25
DO 0.703 0.55 0.462 0.414 0.207 0.204
Le graphe
Les calculs
V max = 0.703 mol/l.
Km = 9.2 mol/l.
>> Interprétation sur les résultats obtenus
>> D’après les résultats et les graphes précédentes en résulte que la diminution de vitesse de la
réaction de Brunissement Enzymatique à cause de l’ajout de l’acide benzoïque comme un inhibiteur
qui est un corps autre que le substrat qui combine avec l’enzyme provoquant ainsi une diminution de
son activité catalique.
CONCLUSION