TRABAJO PRÁCTICO N° 2

•MEDIOS DE CULTIVO
• SIEMBRA Y TRANSPLANTE
 MEDIOS DE CULTIVO.

• Definición: es toda preparación artificial, sólida,

semisólida o líquida que suministra al microorganismo
cada una de las sustancias fundamentales, una fuente
de energía y condiciones ambientales adecuadas para
el desarrollo y la supervivencia del microorganismo.
• CULTIVOS: son las poblaciones de microorganismos
que se obtienen en los medios de cultivo.

• Los cultivos pueden ser:

• a) puros o axénicos Un solo tipo de microorganismo

• b) mixtos Varios tipos de microorganismo

Existe gran diversidad de condiciones químicas y

físicas en las cuales puede ocurrir el crecimiento
microbiano, pero siempre se requieren una fuente
de energía y una fuente de carbono
Todos los organismos requieren una fuente de energía
para obtener ATP y generar poder reductor (NADH,
NADPH) por alguno de los siguientes metabolismos:
- Fotosíntesis
- Respiración aerobia: aceptor final de electrones O2
- Respiración anaerobia: aceptores finales de
electrones: NO3, SO4, CO2, fumarato.
- Fermentación: conjunto de reacciones donde
compuestos orgánicos sirven como donadores y
aceptores de electrones. Se produce ATP por
fosforilación a nivel de sustrato.
Clasificación de Microorganismo según su
fuente de energía y fuente de carbono
 Composición de los medios de cultivos

• 1. Elementos energéticos y constitutivos

a) Macro elementos
b) Micro elementos o trazas
c) Factores de crecimiento

• 2. Agua

• 3. Agentes solidificantes:
 1. Elementos energéticos y constitutivos
a) Macro elementos
CO2 para autótrofos,
Fuente de Carbono
azúcares para heterotrofos

“Se necesita el carbono para la construcción de muchas moléculas necesarias para la célula”

NO3-, NH3 ó N2.

(autótrofos)
Fuente de nitrógeno

Aminoácidos y proteínas

“El nitrógeno es metabolizado para proveer proteínas, ácidos nucleicos y polímeros de pared”
1. Elementos energéticos y constitutivos
a) Macro elementos

Fuente de: Se adiciona como: La célula lo utiliza para:

Azufre SO42-, tiosulfato Producir aminoácidos (cisteína y

o sulfuro metionina) y diferentes coenzimas

Fósforo Fosfatos de sódio Funciona como Buffer

o potasio Para producción de ATP,
fosfolipidos y Ac Nucleicos

calcio,
magnesio sales inorgánicas Co factores de enzimas
y potasio

Estabiliza la
sodio Na Cl presión osmótica
1. Elementos energéticos y constitutivos
b) Micro elementos o trazas

Son metales que se requieren en muy pequeñas cantidades. Participan en la estructura de

las enzimas, vitaminas, transportadores de electrones como citocromos. Son
contaminantes de los macroelementos y se incorporan junto a ellos en los medios de
cultivo.

Frecuentemente esenciales:
Cr, Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Se, W, V, Zn

Inhibidores del crecimiento:

Au, Ag, Cd, Cr, Pb, y cualquier microelemento a concentración mayor
que 10-4 M puede resultar tóxico para el desarrollo de los microorganismos.
 1. Elementos energéticos y constitutivos
b) Factores de Crecimiento

Son compuestos orgánicos específicos requeridos en muy bajas

concentraciones y que no pueden ser sintetizados por la célula

Si la secuencia de producción enzimática, de un determinado componente.

(Por ej: Histidina) esta interrumpida por alguna alteración, este componente no
podrá sintetizarse por la célula y se convertirá en un factor de crecimiento.

Ejemplos de factores de crecimiento : vitaminas, como las del

complejo B algunos aminoácidos ,purinas y pirimidinas
 2. Agua

•El agua representa el 80-90% del peso

total de una célula

•Es fundamental para la realización de

todos los procesos metabólicos

•Funciones enzimáticas, solvatación

de materiales orgánicos e inorgánicos,
y donación de electrones para
organismos fotosintéticos

En los medios de cultivo se usa agua destilada,

libre de iones como Ca2+ y Mg2+
3. Agentes solidificantés
Cuando se agregan a un medio de cultivo permiten aislar
colonias bacterianas. El mas utilizado es el Agar. Su uso es opcional

El agar se enfría
y se solidifica

Permite aislar
Colonias bacterianas

Placa de petri

Se adiciona el
medio de cultivo
con agar fundido
El Agar es un polisacárido ácido derivado de algas marinas, formado
principalmente por galactosa con un grupo sulfato.

Se usa sin problemas en medios de cultivo

porque las bacterias NO lo digieren.

Sus características:

-Funde a 80-100°C y permanece líquido hasta 50-55°C.

- Permanece sólido a 37°C, temperatura de incubación de la mayoría de las

bacterias patógenas del hombre.

-No es tóxico para las bacterias

-Utilizado al 1.5-2%, permite el aislamiento de colonias (poblaciones de

microorganismos derivadas de una única célula), lo que resulta imposible en
medios líquidos!!

-Para medios semisólidos (donde observo movilidad) empleo 0,2-0,3% de agar

- Es transparente, lo que facilita la visualización de las colonias.

 Condiciones Físicas de un medio de cultivo

mesófilos: 35-37°C
Temperatura psicrófilos: 15-20°C
termófilos: 50-60°C

a) aerobios estrictas: requieren oxígeno para crecer.

b) anaerobios obligados: el O2 les resulta tóxico.

c) anaerobios facultativos: pueden crecer tanto en

Presencia condiciones aerobias como en condiciones anaerobias.
de oxígeno d) microaerófilos: necesitan bajas tensiones de O2 y una
atm enriquecida en CO2.
e) anaerobios aerotolerantes: crecen en ausencia de O2
y si son expuestos al O2 no mueren.

presión osmótica la mayoría de las bacterias crece en 0.1 a 1% NaCl

luz: es importante para los microorganismos fotosintéticos

Humedad: Los microorganismos necesitan un ambiente húmedo para su desarrollo

pH: la mayoría de las bacterias crece en medio neutro o levemente alcalino

 CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Por su origen
químicamente definidos
o sintéticos
Su composición química se
conoce con exactitud, cada
componente es de alta pureza
analítica y realiza un aporte
específico ej: medios para
autotrofos
naturales o complejos
Se preparan a partir de sustancias
naturales de origen animal o vegetal
de composición química no
rigurosamente constante: leche,
suero, macerado de maíz,etc
Ej: medios para quimioheterotrofos
 Ej. Medio Definido o sintético; (para
fototrofos):
CO2 ……………………….. (fuente de C)
NaNO3 …………………… (fuente de N)
Na2SO4 ……………………. (fuente de S y Na)
KH2PO4 ……………………. (fuente de P y K)
Trazas ……………………… varias
H2O ………………………… (indispensable para
toda función celular)
Ej- agar nutritivo, medio natural o
complejo; (para bacterias
quimioorganotrofas):
Peptona de carne ………….. 0.5 g
Extracto de carne ………….. 0.3 g
NaCl ………………………… 0.5 g
Agar ……………………… 1.5 – 2 g
Agua destilada ……………. 100 ml
PEPTONAS: son producto de la hidrólisis ácida o
enzimática de proteínas de origen animal o
vegetal (ej. peptona de carne, peptona de soja,
peptona de caseína).
Conjunto de sales,
Especificas Para un
determinado
tipo de
microorganismo
Aditivos que no tienen una
Composición nutritiva definida
EXTRACTO DE CARNE: su función es ser
complemento vitamínico de las peptonas. Pero también
aporta: Sustancias nitrogenadas como: aminoácidos,
bases púricas y pirimídicas, ácidos orgánicos, creatina,
xantina, hipoxantina, ácido úrico, urea. Sustancias no
nitrogenadas como glucógeno, fosfatos de hexosas,
ácido láctico, sales inorgánicas.
 CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Por su Consistencia

Líquidos sólidos semisólidos o blandos

No contienen Incluyen agar en incluye agar

solidificante concentraciones al 0.3%
y no permiten de 1.5 a 2%
el aislamiento
de colonias
 CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Por su Composición

Comunes Enriquecidos

incluyen una fórmula Tienen una alta calidad

nutritiva básica que nutritiva por el agregado
permite el crecimiento de componentes muy
de microorganismos ricos como leche, sangre,
poco exigentes. huevo líquido, etc. Se
utilizan en el cultivo de
bacterias exigentes
Ej.

- comunes: AGAR NUTRITIVO

-peptona de carne
-extracto de carne
-NaCl
-agar 2%
-agua destilada

- enriquecidos: AGAR SANGRE

 CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Por su función:
Medios de Medios selectivos
enriquecimiento:
Medios Líqudos sembrados son medios sólidos
con poblaciones mixtas de que favorecen
microorganismos, favorecen la multiplicación
la multiplicación de ciertos de un determinado
grupos e inhiben el microorganismo e inhibe el
desarrollo de las especies desarrollo de otros
Se logran agregando comp qcos
restantes.
(Ab) o alterando las condiciones
fcas (pH).
Medios diferenciales
permiten discriminar entre
diferentes tipos de bacterias
basándose en características
metabólicas particulares
de cada uno.
Se logran agregando determinados
sustratos (Ej glucosa) y un sistema
indicador (Ej Rojo fenol)
 Ej.

- de enriquecimiento (líq.) - selectivos (sólidos)

Caldo Mac Conkey

(inhibidor + lactosa +
púrpura de bromocresol Agar Mac Conkey
(inhibidor + lactosa + rojo
neutro)
Ej.
Fermentación de: -glucosa ?; -sacarosa ?; -lactosa ?
-diferencial Producción de H2S ?
El medio incluye los 3 azúcares, sal de Fe 2+ y un indicador
de pH (rojo neutro)

Shigella Pseudomonas
Enterobacter Proteus

Agar triple azúcar hierro (TSI)

Ej.

De transporte: medio de Stuart

medio de Cary Blair

Contiene buffer + sustancias criopresevantes (glicerol)

Control pH. Ajuste con NaOH o HCL
-Cintas de pH
-Azul de bromotimol
-pHmetro
Esterilización de los medios de cultivo
-Autoclave
Control de Esterilidad
-Se toma una parte representativa de los medios y se incuban en estufa de
cultivo a 37ºC
Medios de Transporte
-Ej Medio de Stuart
Conservación de los medios de cultivo
-4-10º C en refrigerador
 PARTE B: SIEMBRAS Y REPIQUES

Siembra: se entiende por siembra al acto de transferir o colocar un

microorganismo en un medio de cultivo adecuado. La transferencia se
efectúa desde el hábitat natural (nicho ecológico) al medio de cultivo.

Muestras
Medio de cultivo
 Trasplante o repique: es la transferencia de microorganismos
desde un medio de cultivo a otro.

¿Con qué se siembra?

Ansas en anillo
y un ansa recta

Crecimiento de
Colonias bacterianas

Siembra en placa
con medio solido
 ¿Con qué se siembra?

Micropipeta o
Pipeta pasteur
Espátula de
Drigalski
Siembra

Crecimiento de
Colonias bacterianas

Micropipeta Pipeta pasteur

 Técnica aséptica para siembras y repiques
La "Técnica aséptica" tiene un doble objetivo:

a) evitar que el operador se contamine con microorganismos procedentes

de las muestras o cultivos y

b) evitar la contaminación de las muestras y cultivos con microorganismos

procedentes del ambiente o del propio operador

A- se esteriliza el ansa a la llama

B- se sostiene el ansa con el índice

. Luego con el meñique .
se destapa el tubo de muestra .
C. Se flamea la boca para evitar
Contaminación

D- se sumerge el ansa para tomar

Un inoculo del tubo

E- se flamea el tubo, para

Evitar su contaminación

F- se tapa con el dedo meñique