Técnicas de Aislamiento y Recuento

Fundamento

En el manejo de muestras contaminadas o cultivos mixtos en los que se encuentran diversos microorganismos, el prime
para proceder a su estudio es el aislamiento, es decir la separación de cada uno de los posibles integrantes microbiano
muestra.
Existen diversos métodos para conseguir esta separación, la mayoría de ellos basados en la inmovilización de las célul
microbianas en la superficie de los medios de cultivo sólidos. Al depositar una célula bacteriana o una levadura en un p
medio de cultivo, ésta quedará inmovilizada en ese punto y en él se reproducirá por absorción de los nutrientes del med
nuevas células generadas permanecerán igualmente inmóviles y tras sucesivas generaciones conformarán lo que deno
una "colonia" que no es más que un montón de células derivadas de una sola célula madre inicial, es decir, un clon de
bacteria o levadura depositada al sembrar. Esta colonia es visible al ojo humano y presenta diferentes características s
microorganismo que la genera. Esto nos permite distinguir las diferentes poblaciones microbianas que se encuentran e
muestra sembrada y separarlas transfiriendo una colonia de cada tipo a un nuevo medio de cultivo estéril, a estos cultiv
consideraremos "puros" por poseer un sólo tipo de microorganismo. (El fundamento es válido teniendo en cuenta sólo
microorganismos cultivables)

Objetivos

 Distinguir los conceptos de cultivo puro y cultivo mixto.

 Aplicar técnicas de aislamiento para la localización de microorganismos concretos en muestras contaminadas o
mixta.
 Aplicar las técnicas del agotamiento y las estrías escocesas como las más habituales en aislamiento de microor
cultivables.
 Observar la influencia de la temperatura sobre el desarrollo de los microorganismos.

Realización práctica

Técnicas de aislamiento. Se realiza un aislamiento de los microorganismos presentes en un cultivo mixto en caldo ord
sobre agar nutritivo. Se siembran dos placas de agar nutritivo, una mediante la técnica del agotamiento de asa y otra m
la de estrias escocesas.
Estas técnicas pretenden diluir la carga microbiana que se deposita sobre el medio de cultivo de forma que, en los últim
de la siembra, haya tan pocas células que queden suficientemente separadas unas de otras y puedan desarrolla
independientes.

Técnica de aislamiento y recuento: el banco de diluciones. Se realizan una serie de diluciones seriadas a partir
mixto Con esta técnica conseguimos además de aislar colonias, obtener un recuento del número de bacterias que te
el cultivo.
Esquema que representa el aislamiento de un microorganismo cultivable
unicelular (dibujos de José Mª Costa)