DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE VITAMINA C EN LA GUAYABA POR

ESPECTROSCOPIA UV-VIS

Yessi Diaz Becerra1
Zayra Bastidas Ortiz1
Gloria Magaly Paladines2
1 Estudiantes de la universidad de
la amazonia, Florencia-Caquetá,
Colombia
2 Docente de Laboratorio de
Resumen
La práctica de laboratorio consistió en emplear un método
espectroscópico para la determinación cuantitativa de ácido
ascórbico presente en la guayaba, para lo cual, se debió realizar un
pretratamiento a la muestra como se indica en la metodología y
preparar la curva de calibración. Finalmente, se procedió a hacer

Química Instrumental, una lectura en el espectrofotómetro Uv vis. Encontrando que, para

Universidad de la Amazonia,
Florencia Caquetá-Colombia.
Realizado el 3 de septiembre de
2018;
Aceptado el 10 de octubre 2018
la primera muestra de guayaba tiene una concentración de
1.055*10-3 mg/mL, con una absorbancia de 0,337; para la segunda
muestra de guayaba se encontró una concentración de 1.27*10-3
mg/mL con una absorbancia de 0,407. En donde, la curva de
calibración absorbancia vs concentración presenta un R2 de 0,9199.

Palabras claves: Espectrofotómetro Uv-vis, ácido ascórbico, guayaba,

concentración y absorbancia.

Abstract

The laboratory practice consisted of using a spectroscopic method

for the quantitative determination of ascorbic acid present in the
guava, for which, it was necessary to perform a pretreatment to
the sample as indicated in the methodology and prepare the
calibration curve. Finally, a reading was made on the Uv vis
spectrophotometer. Finding that, for the first sample of guava has
a concentration of 1055 * 10-3 mg / mL, with an absorbance of
0.337; for the second sample of guava, a concentration of 1.27 * 10-
3 mg / mL with an absorbance of 0.407 was found. Where, the
calibration curve absorbance vs concentration presents an R2 of
0.9199.
Key words: Uv-vis spectrophotometer, ascorbic acid, Guava,
concentration and absorbance.

Introducción

Las vitaminas constituyen un factor vital
para la salud y bienestar de los seres
humanos, debido a que estas tienen
capacidad antioxidante y cumplen una
función específica dentro del organismo, la
vitamina C, o ácido ascórbico, es un
compuesto hidrosoluble de 6 átomos de
carbono relacionado con la glucosa, el cual
tiene un papel biológico que es de actuar
como cofactor en diferentes reacciones
enzimáticas que suceden dentro del
organismo. (DC., 2001). Por lo que, el ácido
ascórbico actúa como coenzima de
1
hidroxilasas de prolina y lisina, estas son
encargadas de hidroxilar la lisina y prolina
en protocolageno para que pueda formar
enlaces cruzados formando fibrillas de
colágeno. Por consiguiente, la vitamina C es
muy importante para conservación del
tejido conjuntivo normal, así mismo para
que se sanen las heridas y se puedan formar
los huesos ya que este posee una matriz
orgánica con colágeno. (David J. Williams D.
E., 2014.).
Laboratorio de Análisis Instrumental (2018)
Agosto-noviembre

Ilustración 1. Estructura del ácido ascórbico
(Vitamina C)
Por lo tanto, el ácido ascórbico al ser un
agente reductor contiene propiedades
vitales que parecen no ser enzimática, a su
vez, la vitamina C es un antioxidante
biológico que protege al organismo del
estrés oxidativo provocado por las especies
oxigeno reactivas. Por otra parte, la cantidad
de ingesta recomendada de vitamina C para
un adulto es de 60 mg diarios, se ha
informado que el acido ascórbico es una
vitamina soluble en agua, y se sabe que
consumir mas de 500 mg pueden provocar
un posible daño renal. (M. Urivetzky, 1992).
dependiendo de la variedad de guayaba en
estudio. En Colombia se cultivan diferentes
variedades de guayaba dentro de las que se
incluyen la "Regional Roja", "Regional
Blanca", "Pera" y "Manzana" como se
muestra en la imagen 2. En su estado
maduro estas frutas tienen corteza amarilla
y pulpa rosada, corteza amarilla y pulpa
amarilla, corteza amarilla y pulpa roja y
corteza verde y pulpa blanca,
respectivamente. Este tipo de fruto se
consume en fresco y en preparaciones como
néctar, jalea, bocadillo, entre otros. La
producción de guayaba se concentra en los
departamentos de Santander y Boyacá (60%
del área del país), Tolima (10%),
Cundinamarca (9%), Huila, Antioquia,
Cauca, Nariño y Atlántico, principalmente.
(Hernández, Lobo, & Chem., 2006).

El estudio de antioxidantes naturales ha

cobrado un papel importante como
resultado de su relación directa con la
disminución del riesgo a sufrir
enfermedades coronarias y cáncer, entre
Imagen 2. tipos de guayaba colombiana.
otras.1 Compuestos presentes en frutas y
hortalizas como tocoferoles, ácidos
La determinación de ácido ascórbico por el
fenólicos, flavonoides, vitamina C y
método de espectroscopia se basa en la
carotenoides han sido vinculados a efectos
reducción del colorante por el efecto del
positivos en la salud por su acción
ácido ascórbico en solución, en donde, el
antioxidante. (Fernández-Pachón, García-
contenido de ácido ascórbico es
Parrilla, Troncoso, & J., 2008).
directamente proporcional a la capacidad de
un extracto de muestra para reducir una
Diversas investigaciones muestran que los
solución estándar de colorante determinada
frutos de guayaba tienen aportes
por espectrofotometría Uv vis. El objetivo de
importantes en vitamina C, en compuestos
la practica fue cuantificar, determinar la
fenólicos y que su ingesta puede contribuir
concentración de ácido ascórbico (vitamina
a una adecuada actividad antioxidante. De
C) presente en la guayaba empleando la
otro lado, es claro que tanto el contenido de
espectroscopia Uv vis.
este tipo de sustancias, como la actividad
antioxidante pueden ser diferentes

Metodología

Tratamiento de la muestra:

Se escoge la fruta, luego se le quita la cascara, por consiguiente se pica para a macerarla hasta
tener una consistencia un poco líquida para agregarle luego 4.0 ml de ácido oxálico al 0,15% y
mezclar toda la muestra, por último se filtró al vacío para que sólo pasara la solución líquida y
luego proseguir con la metodología.

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Laboratorio de Análisis Instrumental (2018)
Agosto-noviembre
 Ilustración 1, Muestra de guayaba Ilustración 2, Filtrado al vacío para
obtener la muestra
Curva de calibración:

Se realizaron medidas en siete tubos de ensayo con las siguientes cantidades:

Reactivo B 1 2 3 4 5 6 Muestra
2-
nitroanilina 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
(ml)
Nitrito de
0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
sodio (ml)
Etanol (ml) 3,8 3,8 3,8 3,8 3,8 3,8 3,8 3,8
Solución
patrón de
ácido 0,0 0,1 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 0,0
ascórbico
(ml)
Acido
1,0 0,9 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 0,0
oxálico (ml)
Muestra
0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 1,0
(ml)
NaOH al
1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2
10% (ml)
H2O
destilada 3,8 3,8 3,8 3,8 3,8 3,8 3,8 3,8
(ml)
Tabla No 1. Distribución de soluciones en tubos de ensayo para la curva de calibración

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 Ilustración 4, Cubetas para leer en el Uv-Vis
Ilustración 3, Tubos que
contienen la muestra de guayaba
a) Contiene 1ml de guayaba,
b)2ml de guayaba

Ilustración 5, Soluciones pasando de color a translucido.

Resultados

Tabla 2. Absorbancia obtenida por el espectrofotómetro Uv vis a las respectivas concentraciones

No. de Concentración
tubo de Absorbancia Mg/ml
ensayo
Blanco 0.079 0,000
1 0.145 0.002
2 0.290 0.004
3 0.485 0.008
4 0.647 0.012
4
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 5 0.848 0.016
6 0.752 0.020

Gráfico 1. Curva de calibración absorbancia Vs concentración

1
0.8
ABSORBANCIA

0.8
0.6
ABSORBANCIA

0.6
0.4
y = 38.678x + 0.1211
0.2
0.4 R² = 0.9199
y = 38.678x + 0.1211
0 R² = 0.9199
0.20.000 0.005 0.010 0.015 0.020 0.025
CONCENTRACION
0
0.000 0.005 0.010 0.015 0.020 0.025
CONCENTRACION

Muestra de cálculos

Para calcular la concentración de Ácido ascórbico en la muestra de guayaba:

Blanco
𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2

𝑚𝑔
(0.2 ) ∗ (0 𝑚𝑙)
𝐶2 = 𝑚𝑙 = 0.000 𝑚𝑔/𝑚𝑙
(10 𝑚𝑙)
Tubo 1

𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2

𝑚𝑔
(0.2 ) ∗ (0,1 𝑚𝑙) 𝑚𝑔
𝐶2 = 𝑚𝑙 = 0.002
(10 𝑚𝑙) 𝑚𝑙
Tubo 2
𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2

𝑚𝑔
(0.2 ) ∗ (0,2 𝑚𝑙) 𝑚𝑔
𝐶2 = 𝑚𝑙 = 0.004
(10 𝑚𝑙) 𝑚𝑙
Tubo 3
𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2

𝑚𝑔
(0.2 ) ∗ (0,4 𝑚𝑙) 𝑚𝑔
𝐶2 = 𝑚𝑙 = 0.008
(10 𝑚𝑙) 𝑚𝑙
Tubo 4
𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2

𝑚𝑔
(0.2 ) ∗ (0,6 𝑚𝑙) 𝑚𝑔
𝐶2 = 𝑚𝑙 = 0.012
(10 𝑚𝑙) 𝑚𝑙
Tubo 5

5
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 𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2

𝑚𝑔
(0.2 ) ∗ (0.8 𝑚𝑙) 𝑚𝑔
𝐶2 = 𝑚𝑙 = 0.016
(10 𝑚𝑙) 𝑚𝑙
Tubo 6
𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2

𝑚𝑔
(0.2 ) ∗ (1.0 𝑚𝑙) 𝑚𝑔
𝐶2 = 𝑚𝑙 = 0.020
(10 𝑚𝑙) 𝑚𝑙

Calculo para hallar la concentración de Ácido ascórbico en la muestra problema:

Muestra 1:
𝑌 = 𝑚𝑥 + 𝑏

(0,337) − (0.1211)
𝑥=
38.678

𝑥 = 1.055𝑥10−3 𝑚𝑔/𝑚𝑙

Muestra 2:
𝑌 = 𝑚𝑥 + 𝑏

(0,407) − (0.1211)
𝑥=
38.678

𝑥 = 1.274𝑥10−3 𝑚𝑔/𝑚

Discusión de resultados

Con base a los resultados dados la concentración de la guayaba teóricamente es de 228mg/ml

del ácido ascórbico (NEWS MUNDO, 2015) y experimentalmente obtuvimos una concentración
de

Conclusiones

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Bibliografía

Maugeri , D., & Iribarren , P. (s.f.). DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS. Obtenido de

http://www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia/licenciatura/biotecnologia/2017/Q
uimicaBiol/1489768358.pdf
David J. Williams, D. E. ( 2014.). The importance of form and ascorbic acid levels. Food Research
International, Volumen 66.
DC., H. (2001). Análisis químico cuantitativo. Editorial Reverté.
Esparza, M. L. (2009). IBEROARSEN- Metodos Espectrofotometricos UV-Vis. Printed In Argentina:
CYTED-ISBN 978-84-96023-71-0.
Fernández-Pachón, M. S., García-Parrilla, M. C., Troncoso, A. M., & J. (2008). Food Comp. Anal.
Hernández, Y., Lobo, M. G., & Chem., G. ( 2006). Determination of vitamin C in tropical fruits:
A comparative evaluation of methods.
Sturm, J. C. (2012). Espectrofotometria Uv – Visible: Aplicaciones en el analisis químico. Obtenido de
Obtenido de https://www.u-
cursos.cl/usuario/2775c7595e300ed228a801eb8341e457/mi_blog/r/Espectrofotometria
__Uv___Visible2012.pdf

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