Reactores Bioquimicos B. ATKINSONREACTORES BIOQUIMICOS B. ATKINSON wee Fevers = ie Barcelona- Bogota -Buencs Air -MéxicoTitulo de la obra original: Biochemical Reactors Ediicién original en lengua inglesa publicada por: Pion Limited, 207 Brondesbury Park, London, NW2 SIN Copyright © Pion Limited Versién espaiola por: Dr. Juan Mata Alvarez Profesor del Departamento de Ingenieria Quimica. Facultad de Quimica. Universidad de Barcelona, Dr. José Costa Lépez Profesor del Departamento de Ingenierfa Quimica. Facultad de Quimica, Universidad de Barcelona, Propiedad de: EDITORIAL REVERTE, S. A. Loreto, 13-15, Local B 08029 Barcelona Tel: (34) 93 419 33 36 ¢@reverie.com Internet; hutp:/www.reverte.com Reservados todos los derechos. La reproduceién total o parcial de esta obra, por cualquier medio 0 procedimiento, comprendidos la reprograffa y el tratamiento informadtico, y la distribuciGn de ejemplares de ella mediante alquiler o préstamo ptibli- cos, queda rigurosamente prohibida sin la autorizacién escrita de los titulares del copy- right, bajo las sanciones establecidas por las leyes. Eaicién en espaiiot © EDITORIAL REVERTE, S. A., 1986 2" REIMPRESION: FEBRERO DE 2002 Umpreso en Espaita ~ Printed in Spain ISBN - 84 - 291 - 7009. X Depuhito Legal: SE-667-2002 tmpresién: Publicaciones Digitales, $. A. (Sevilla) www publidisa.com - (434) 95.458.34.25Prologo A menudo durante las discusiones entre bidlogos e ingenieros surge la suposicion optimista de que el desarrollo futuro de las industrias de procesos bioquimicos seguira, en gran medida, al de las industrias de procesos quimicos. En tales afirma- ciones esta implicita la hipotesis de que el ingeniero bioquimico debe jugar en tal desarrollo un papel similar al que ha jugado el ingeniero quimico en las industrias de procesos quimicos. ‘Al ingeniero bioquimico le compete la investigacion, el desarrollo, el diseno, la construccién y el funcionamiento de los procesos que incluyen materiales biologi- cos; la produccion de alimentos y piensos, bebidas, compuestos medicinales y la depuracion de aguas residuales son ejemplos de estas actividades. En estos momentos el mimero y Ia escala de operacion de tales procesos esta aumentando considerablemente. Quizé ia clave del futuro de la ingenieria bioquimica resida enel aumento de la produccién, puesto que, como veremos mas adelante, la consecucion de grandes producciones requiere una filosofia bastante diferente, en lo que se refie- real diseno del proceso, de la que correspondia a las operaciones en pequena escala. El ingeniero bioquimico necesita sélidos conccimientos en ciencias biolégicas (bioquimica y microbiologia), ciencias fisicas (quimica y fisica), matematicas e ingenieria quimica. Tradicionalmente ésto se ha conseguido mediante una primera graduaci6n en una de las materias anteriores, seguida de una especializacion a nivel de postgraduado en ingeniena bioquimica (Wang y Humphrey, 1969). Seré intere- sante ver cémo se desarrolia el tema desde un punto de vista pedagdgico coma respuesta a las necesidades de la industria y de la sociedad en general. En las paginas siguientes, se ha llevado a cabo un intento de profundizar en lo que podria describirse, a falta de una definicién mejor, como la aplicacién a los sistemas biologicos dela «teoria de la ingenieria quimica del diseno de reactores ¥ procesos». El objetivo ha sido exponer los principios de la teoria del reactor bioquimico con vistas a desarrollar los fundamentos de una valoracién sistematica de las principales caracteristicas de operacién de los reactores bioquimicos. Se ka intentado mostrar cémo este método proporciona procedimientos de diseno genera- lizados para las principales configuraciones de reactores y ofrece una base desde la vVI Prélogo cual pueden proyectarse fururos estudios tanto de naturaleza tedrica como experi- mental. ‘Se ha puesto especial énfasis en las caracteristicas de los procesos industriales en gran escala que utilizan microorganismos ¥ enzimas. En este sentido han recibido una consideracion mas detallada los procesos que tienen lugar dentro del fermenta- dor o reactor; las interacciones entre los aspectos bioguimicos, microbiologicos y de ingenieria quimica, han sido discutidos y, en lo posible, analizados. De esta forma ‘se han aclarado la extension y el tipo de informacion bioquimica y microbiolégica necesaria tanto para la interpretacion de las caracteristicas de rendimiento como para el diseito con éxito de procesos. Puede adelantarse que el material presentado, y el método de interpretacion, seran tiles para cuantos trabajen en industrias relacionadas tanto directa como indirectamente con la explotacion comercial de la microbiologia y la bioquimica. Esto incluye el tratamiento biologico de aguas residuales. Ademas cabe esperar que fa monografia ayude a la formacion de un puente por el que la experiencia y los conocimientos adquiridos en una area de las industrias de procesos bioquimicos puedan transmitirse a otras. Que estos objetivos son utiles y alcanzables se confirmo ‘ampliamente cuando parte del material de este texto se utiliz6 como base del curso titulado «Reactores Bioquimicos» que tuvo lugar en 1972 en el Departamento de Ingenienia Quimica de Swansea, por invitacion del Instituto de Ingenieros Quimi- cos. La monografia resultara util ademas a ingenieros y cientificos que se encuentren, quiza por primera vez, implicados en proyectos relacionados con la utilizacion industrial de microurganismos ¥ productos bioquimicos. Finalmente, el material presentado es basico para la comprensién de las carac- teristicas de rendimientos de los reactores bioquimicos y, por tanto, basico para la ingenieria bioquimica. Es de interés para los ingenieros quimicos, importante para los ingenieros civiles relacionados con el tratamiento de aguas residuales, y necesario para aquellos microbiologos y bioquimicos ocupados del desarrollo de procesos para una futura explotacion industrial. B. Atkinson Department of Chemical Engineering, University College of SwanseaAgradecimientos Quiero expresar mis mas efusivas gracias al Profesor A. W. Busch, hasta hace poco profesor de ingenieria del medio ambiente en la Rice University, Houston, Texas. USA, por introducirme en el tratamiento biolégico de las aguas residuales, y actual mente en el National Institutes of Health, Bethesda, Maryland,al Dr. Gene Swilley, USA, quien, como un habil y laborioso estudiante de doctorado y posteriormente amigo y colega, dio impetu a esta disciplina recién descubierta. ‘Los aspectos mas amplios de la teoria del reactor bioquimico, en las cuales esta basada esta monografia, se desarrollaron como resultado de los estudios llevados a cabo con colegas’y estudiantes durante varios anos. A este respecto me complace agradecer las contribuciones al Dr. S. Amotz de Nova Industries, Copenhagen; Dr. I. J. Davies actualmente en el University of Birmingham Careers Service; Dr. L S. Daoud de la University of Baghdad; Dr. S. ¥. How de la University of Pinang, Malaysia, y al Dr. D. A. Williams de Unilever, Port Sunlight. ‘A todos aquellos que llevan aiin la carga con entusiasmo y trabajo va mi admira- cién, en particular a los miembros del «equipo», Harold Fowler y Robert Vass; a los estudiantes Mohammed EF-Amin, Vee Chue, Tony Knights, Doug Lester, Malcolm Miller e Isaac Rousseau, y los ayudantes de investigacién Meirion Jones, Jackie Rott y Peter Williams. También reconozco mi deuda con el Profesor J. F. Richardson, jefe del Departa- mento de Ingenieria Quimica, University College de Swansea. E] Profesor Richard- son ha venido prestando en los ultimos 10 aitos, dentro del Departamento de Ingenie- tia Quimica, todo el apoyo para el desarrollo de los programas de investigacion y ensefanza de la ingenieria bioquimica. Como consecuencia se ha desarrollado un programa para la graduacion en ingenieria bioquimica que produjo su primer gradua- do en 1972, y un curso para la obtencién del M. Sc. que comenzé en 1973. También debo agradecer al Profesor E. M. Crook del Departamento de Bioqui- mica del St. Bartholomew’s Hospital Medical School por leer muy cuidadosamente un primer borrador de esta monografia y por hacer varias sugerencias muy utiles. Finalmente, quisiera agradecer a mi esposa su paciencia y ayuda en la correccion de las pruebas, sin lo cual la fecha de publicacion se hubiera retrasado conside- rablemente. B. Atkinson VILNomenclatura El desarrollo de una nomenclatura satisfactoria ha supuesto un problema considera- ble durante la preparacién de esta monografia. A lo largo de los aos las algo ejemplo, el simbolop se ha adoptado para describir el crecimiento en microbiologiay la viscosidad en mecanica de fluidos. En estas circunstancias no es posible un compromiso y una 0 la otra debe descartarse con reservas. La situacion presenta mas complicaciones cuando se llega a la nomenciatura de la ecuacién de Monod para el crecimiento microbiano y a la ecuacion de Michaelis-Menten para cinética de enzimas, en una monografia que pretende extraer las analogias entre el usode enzimas in vivo e in vitro. En este caso ninguna de las nomenclaturas tradicionales puede ser totalmente satisfactoria y debe desarrollarse una nueva. El peligro de tal proce- dimiento es que puede irritar al lector versado en una u otra de las disciplinas de la cual se ha extraido el tema de que se trata. Todo lo que puedo hacer en este momente es pedir un poco de paciencia, sugerir que la nomenclatura actual se creé por necesidad, y que se ha intentado minimizar el numero total de simbolos. Al final de la monografia se da una lista completa con la nomenclatura. Donde quiera que se encuentre un simbolo nuevo en el texto, habra sido definido, y muchas veces cuando un simbolo no se haya utilizado en varias paginas se repetira la defini- nicion.Indice analitico 1 Introduccién a los procesos industriales de fermentacion .. 1 Desarrollo historico .. 1.2 Caracteristicas de los materiales industriales, explotables industrialmente ...... seuss seizes 3 1.4 Procesos de fermentacién actualmente en ctapa de desarrollo 9 1.4.1 Proteinas microbianas . 10 1.4.2 Tejidos de plantas 2 AL 1.4.3 Enzimas ot 2 12 1.4.4 Lixiviacion microbiana AsASheADDacheen ne aes. 13 2 Principales tipos de fermentadores .................... 15 Zi ‘iones de un ferment 32 cVisipi pear: 2.2.1 Tipos de fermentadores discontinuos ..........-00e0eees 21 Transmisién de calor 22 Agitacion ..., Esterilizacion Prevencién de la espuma Elementos mecanicos 2.2.2 Digestion de fangos . . . 2.3 Fermentacion continua en un tanque agitado aannee omens ‘ 26 2.4 Fermentadores tubulares .......1+ : EIR 33 2.4.1 Fléculos microbianos ... ‘ 35 2.4.2 Peliculas mictobianas ......s::crcerrcreisrsnenerenees 36 2.5___Fermentacion en lecho fluidizado .... 0... cscscsssssseseeserees 40 2.6 Principales caracteristicas de operacion de los fermentadores ...... 45xIL 3 a2 Indice analitice Cinética de la ingenieria bloquimica .................. 47 Factores implicados en el disefio de un { 3.2.1 Diferencias entre procesos bioquimicos y quimicos . Sl 3.2.2 _Clasificacion de las reacciones bioquimicas 52 3.2.3 Procesos de transporte ............. 52 3.2.4 Consideraciones acerca del funcionamiento 53 3.2.5 Condiciones locales dentro de un fermentador 53 Distribucion de los tiempos de residencia : Distribucion de las temperaturas 0.2.6... s.+ seer eevee 55 3.4 Velocidad de reaccién 58 3.4.1 Velocidad global de reaccion 58 3.4.2 _Etapa limitante de la velocidad 3.4.3__Cinética de la reaccion....... 4 La ecuaciéna de velocidad bioldgica ( (Biological rate equation: BRE) 69 4.1 Modelo para un microorganismo inico..............02e0se2e0 16 4.1.1 Ecuacion de velocidad para un microorganismo tnico . 719 Modelo en serie .. 19 Modelo en paralelo 82 4.1.2 Estudios experimentales sobre la cinética en micro- organismos individuales ........ 83 4.2 Modelo cinético para la masa microbiana 84 4.3 Ecuaciones de velocidad biolégica (EVB) 88 4.4 Formacién de productos 97 5 Determinacion de los parametros de un sistema NOG ghC0 sisi sc sslisie es ceae veuele snes cinwineview cace oases 101 5.1 Coeficiente de velocidad biologica . 103 5.1.1 Experimentos con fléculos microbianos 103 Experimentos discontinuos 103 (a) Limitaciones de los datos de un fermentador discontinuo 108 (0) Relacion entre el tiempo de duplicacién y los parametros del sistema biolégico .. 108 Experimentos continuos 109 5.1.2 Experimentos con peliculas microbianas . it Condiciones no asépticas MLIndice analitico 52 5.3 5.4 5.5 a ao RE 63 64 Condiciones asépticas 5.1.3 Resumen de los métodos para la determinacién de los coeficientes de velocidad biologic: Coeficientes de rendimiento ............... 5.2.1 Experimentos con fléculos microbianos Experimentos discontinuos Experimentos continuos ... 5.2.2 Experimentos con peliculas microbianas Densidad microbiana .... 5.3.1 Densidad humeda (p, 5.3.2 Densidad seca (p,) Tamaito del floculo .... 5.4.1 Tamaiio medio de particulas basado en una particula OMGNCE een os wesc ececnennesesnseseseseneesenersseee 5.4.2 Tusiabo medio de particula basado en una particula irregul 5.4.3 Tamaio efectivo de particula basado en la cinética Espesor de la pelicula microbiana Caracteristicas de los procesos con fléculos microblanos 6.2.1 Diseto basado e ipic 6.2.2 Diseno basado en bos principios de «cambio 6.2.3 Desviaciones del comportamiento «ideal» ............+- 6.2.4 Estudio de algunos casos en recipientes de igual volumen . n recipientes de igual volumen ......+.00sc0s0cceceeeee Un recipiente tinico Henado durante el curso de la Sermentacion n recipientes de tamao creciente . 6.3.1 Fermentador continuo tanque agitado (FCTA; abreviatura inglesa: CSTF) .. Desviaciones de la teoria simple del Productividad . Recirculacién de la masa mic! 6.3.2 Fermentador del flujo de piston (FFP; abreviatura inglesa: PFF) .............0000e0005 6.3.3 Fermentador de lecho fluidizado (ELF; abreviatura inglesa: FBF) Combinaciones de los fermentadores de fldculos microbianos 157 1617.3 Pd 8.3 Indice anaiitico 6.4.1 Una serie de FCTA . Productividad Conversion 6.4.2 FCTA seguido por un Comparacién de los rendimientos del F' yel Fermentadores que contienen peliculas microbianas . Introduccion Fermentador de pelicula microbiana completamente mezclada (FPMCM; abreviatura inglesa: C’ F) . 1.2.1 El FCTA unico (A, = A, = 0) Ausencia de pelicula «gruesa» (A, 7.2.3 Inclusion de una etapa de concentracion mi 7.2.4 Caracteristicas de un FCTA a escala de Taboratorio Fermentador de pelicula microbiana . 1.3.1 Espesor controlado de pelicula microbiana Ausencia de limitaciones de la difusion ... Limitacion de la difusién en fase liquida . Linealizacion de la EVB ..... Ausencia de floculos microbianos 7.3.2. Fermentador de pelicula alimentando a un FFP 1.3.3. Espesor «incontrolado» de pelicula microbiana . . . Introduccion 8.2.1 Determinacién de los parimetros 8.2.2 Determinacidn de la concentracion inicial minima necesaria de cnzima para una conversion dada . 3 Sistemas enzimaticos en general 4 Reactores de tanque unico racion continua 8.3.1 Reactor con ultrafiltracion Membrana permeable al sus! Membrana impermeable al sustrato Comparacién entre el rendimiento de un reactor de enzimas discontinuo y continuo 1 El coeficiente de decadencia (K,,) es cero 2 Tiempo de servicio menor que el tiempo 161 161 162 163 165 169 169 174 177 178 181 182 184 184 184 184 187 188 189 191Indice anattico 9 91 9.2 9.3 94 9.5 10.1 10.2 10.3 Reactores que contienen sistemas con enzimas inmovilizados Introduccién . 9.1.1 Ventajas si 9.1.2 Caracteristicas de los inmovilizados .... Cinética de particulas sencillas que contienen enzimas inmovilizados 9.2.1 Enzimas microencapsulados 9.2.2 Enzimas atrapados en gel Cinética ......... Coeficientes cinéticos 9.2.3 Enzimas ligados .. Estabilidad de una partcula sencilla 9.3.1 Condiciones de orden cero . 1 Microcdpsulas . 2. Enzimas inmovilizados en gel. 3 Enzimas ligados ........+.. 9.3.2 Condiciones distintas de orden cero Efecto del pH sobre la velocidad global de reaccion de una particula simple 9.4.1 Cinética de orden cero . 9.4.2 Cinética de orden distinto de cero . Condiciones de amortiguamiento o produccién nula de iones H* por la reaccién Ion H* producido por la reaccion (condi amortiguadas) . Disefto de reactores que cor INMOVIIZASES ..0,0ccererecencrrceersoresesrresreseesreeesees Fermentadores de percolaciéa (un ejercicio de diseito) . Introduccion 10.1.1 10.1.2 Teoria ........ 10.2.1 10.2.2 Modelo matematico 10.2.3 Ecuaciones de disefio . 10.2.4 Evaluacion numérica de las ecuaciones de discho Valoracién de la teoria