LIPIDOS- COLESTEROL

I. FUNDAMENTO TEORICO
Los lípidos son un conjunto de moléculas orgánicas (la mayoría biomoléculas), que están
constituidas principalmente por carbono e hidrógeno y en menor medida por oxígeno.
También pueden contener fósforo, azufre y nitrógeno.
Debido a su estructura, son moléculas hidrófobas (insolubles en agua), pero son solubles en
disolventes orgánicos no polares como la bencina, el benceno y el cloroformo lo que permite
su extracción mediante este tipo de disolventes. A los lípidos se les llama incorrectamente
grasas, ya que las grasas son solo un tipo de lípidos procedentes de animales y son los más
ampliamente distribuidos en la naturaleza.
El colesterol es una sustancia cerosa y parecida a la grasa que se encuentra en todas las células
de su cuerpo. Su cuerpo necesita algo de colesterol para producir hormonas, vitamina D y
sustancias que le ayuden a digerir los alimentos. Su cuerpo produce todo el colesterol que
necesita. El colesterol también se encuentra en alimentos de origen animal, como yemas de
huevo, carne y queso. La circulación sistemática del colesterol es posible gracias a la
formación de complejos solubles por su unión a proteínas. El hígado es el órgano principal
donde se produce la incorporación del colesterol y otros lípidos a las lipoproteínas. Así
mismo en el hígado se esterifica, con ácidos grasos, la mayor parte de colesterol (60-75% del
total).
Si tiene demasiado colesterol en la sangre, puede combinarse con otras sustancias en la sangre
para formar placa. La placa se pega a las paredes de sus vasos sanguíneos. Esta acumulación
se llama arterioesclerosis. Puede provocar enfermedad de las arterias coronarias, la que puede
estrecharlas o incluso bloquearlas.
II. OBJETIVOS
 El objetivo de estas prácticas es familiarizar al alumno con las distintas técnicas
experimentales empleadas en el laboratorio, trasladando al mismo los conocimientos
adquiridos durante la docencia teórica
 Determinación del colesterol total presente en una muestra de suero
 Manejar los valores de referencia para el colesterol total en sangre y su utilidad
diagnostica.

III. MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES
 Pipetas de 2ml y de 50 ml
 Espectrofotómetro
 Pipeta automática
 Tubos de ensayo
  Patrón acuoso de colesterol
 Suero o plasma obtenido mediante procedimiento estándar
 Guantes desechables
 Gradilla
 Jeringas
 Centrifuga de tubos
REACTIVOS
Composición del reactivo enzimático:
 Buffer pipes pH 7.3
 Colesterol ester hidrolasa
 Colesterol oxidasa
 Peroxidasa
 4-aminocantipirina
 Acido p-hidroxibenzoico
 Estabilizantes y preservantes no reactivos
Preparación del reactivo del trabajo: el reactivo se provee listo para su uso. El reactivo con
el tiempo tomar un leve color rosado que no afecta los resultados. Descartar el reactivo si
su absorbancia contra blanco de agua es superior a 0.4 D.O. a 505 nm.

IV. PARTE EXPERIMENTAL

MUESTRA
Se sacó una muestra de sangre de un alumno en ayunas. Los tubos y material de vidrio
deben estar limpios y libres de residuos de detergentes. Se utilizó el suero de la muestra
TECNICA
Blanco Standard Muestra
Muestra (ml) -------------------- ------------------- 0.01

Standard (ml) ------------------ 0.01 -----------------------

Reactivo (ml) 1.00 1.00 1.00

PROCEDIMIENTO
1. Una vez obtenido las muestras de sangre, colocamos las muestras de sangre en la
centrifuga, en un tiempo de 10 min y 1500 RPM.
2. Al sacar las muestras de la centrifuga vemos que el suero se separó de la sangre.
Extraemos con la pipeta automática un poco suero
3. Se vierte en un tubo de ensayo 1ml de reactivo blanco
4. Usando la pipeta automática se extrae 0.01 del plasma y se pasa a dos tubos de ensayo

5. Se le agrega 1ml de reactivo de colesterol a cada tubo de ensayo con suero

6. Se encuba las muestras por unos 10 min

7. Se coloca las muestras en el espectrómetro, junto con el estándar y el blanco. Observar
y anotar
 ESPECTÓMETRO
1. El blanco de colesterol se coloca en un tubo 1 y luego se pone en el espectrómetro.
2. Se vierte el estándar de colesterol en el tubo 2
3. Se vierte la muestra del paciente 1 en un tubo 3
4. Se vierte la otra muestra del otro paciente 2 en un tubo 4
5. La longitud de onda que se pone es de 500 nm.

V. RESULTADOS

 El reactivo del colesterol con el suero hizo que la muestra se torne de un color rosado
bajito
 Del espectrómetro se obtuvo:

Absorbancia
Blanco 2.844
Stándard 2.854
Paciente 1 2.854
Paciente 2 2.875

CALCULOS
𝐴𝑏𝑠. 𝑃𝑅
× 200 = 𝑚𝑔 𝑐𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙/𝑑𝐿
𝐴𝑏𝑠. 𝑆𝑇
Abs. PR: Absorción de la muestra
Abs. ST: Absorción del Standard
Unidades SI
(mg /100 ml)x 0.0259= mmol/L

 Paciente 1:
2.854
× 200 = 200 𝑚𝑔 𝑐𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙/𝑑𝐿
2.854

(200/ 100)x 0.0259= 0.0518 mmol/L

 Paciente 2:
2.875
× 200 = 201.47 𝑚𝑔 𝑐𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙/𝑑𝐿
2.854

(201.47/100)x 0.0259= 0.05218 mmol/L

VI. DISCUSION DE ESULTADOS
Según las recomendaciones de valores normales de colesterol:

Podemos notar que el paciente 1 tiene un colesterol de 200 mg/dL y según la tabla podemos
decir que su colesterol total es óptimo, es decir que está dentro de los límites normales. En
cambio, el paciente 2 presenta un colesterol de 201.47 mg/dL, esto nos quiere decir que se
encuentra sobre el limite óptimo. Por lo general, un valor de colesterol total por encima de
200mg/dL puede significar que usted está en mayor riesgo de sufrir una cardiopatía. Sin
embargo, los niveles de LDL son una mejor manera de predecir la cardiopatía y determinan
como se debe tratar el colesterol alto.
Sin embargo, la principal causa de un aumento de colesterol es una dieta demasiada rica en
grasas saturadas y ácidos grasos trans.

VII. CONCLUSION
Poniendo en práctica la aplicación de las normas de bioseguridad dentro del laboratorio para
la extracción de una prueba sanguínea; desarrollamos habilidades para el manejo del
espectrofotómetro y determinamos con los resultados de absorbancia la concentración de
colesterol en la sangre.

VIII. BIBLIOGRAFIA

 https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/000403.htm
 https://medlineplus.gov/spanish/cholesterol.html