PRESENCIA DE MICROORGANISMOS EN DIFERENTES AMBIENTES.

Ariza Laura Isabel, López Jhennifer , Viafara Yineth Sofia

Escuela de Ingeniería de Alimentos
Universidad del Valle
2018
C= 4,6

RESUMEN
Los microorganismos se encuentran en los más diversos ambientes y materiales cumpliendo
funciones beneficiosas o perjudiciales. Se comprobó dicha ubicuidad de los microorganismos
mediante el cultivo en agar con cajas de petri, donde se sembraron células microscópicas
provenientes de: la superficie de un teléfono celular sin limpieza previa, pomo de polvos cosméticos
,dedo pulgar en contacto con superficies sin higienizar y moneda comercial, las cuales fueron
dispuestas respectivamente en las cajas de petri y llevadas a incubar durante un periodo de 48 horas
a una temperatura oscilante entre 30º-35º C, generando manifestaciones de crecimiento microbiano
perceptibles cómo turbidez, olor desagradable y cambio en coloración, obteniendo que la superficie
con mayor desarrollo de colonias corresponde al pomo cosmético. De igual manera se dispuso de
dos tubos de ensayo, con agar y caldo nutritivo respectivamente , donde se procedió a sembrar un
bacilo patógeno gram negativo , ​Serratia , empleando un asa bacteriológica previamente esterilizada
por flameado hasta la incandescencia. Se someten los tubos a incubación a las mismas condiciones
de tiempo y temperatura qué las cajas de petri ; evidenciando en el medio de cultivo líquido turbidez y
la formación de una capa de cromogénesis bruna y en el medio sólido un área de la misma
coloración que asciende por las paredes del tubo , en adición se aprecia que en el epicentro del
mismo hay concentración de células de color rojo.

Palabras clave :​ Microorganismo, incubación, bacilo, patógeno,gram negativo, esterilización.

INTRODUCCIÓN
Debido a que los microorganismos son difíciles de percibir por el ojo humano y se encuentran en
todas partes resultará inevitable nuestro contacto y por ende el de los alimentos con ellos .
Numerosos estudios han demostrado que aun en los ambientes más difíciles con condiciones
extremas de pH, temperatura,escasez de nutrientes , entre otros se ha logrado identificar la
presencia de algunos de estos, por ello identificarlos será ​un factor importante de estudio debido a
que en cuanto a los alimentos se refiere la presencia de estos va de la mano con la posterior
conservación e inocuidad del alimento. [1]
Para conocer e identificar un determinado microorganismo y sus potenciales riesgos ,beneficios ,
morfología y entre otras características se hace necesario utilizar un medio de cultivo, estos se
realizan a partir de una mezcla de proteínas, hidratos de carbono, oligoelementos,enzimas y
colorantes que proporcionan al microorganismo lo necesario para continuar su fase de reproducción
pero también se deberá conocer cómo será la manifestación microbiana en estos medios , en
nuestro caso utilizaremos los medios de tipo sólido y líquido en los cuales la manifestación de estos
se hará por medio de la aparición de turbidez en el caldo y la aparición de colonias en el medio
sólido. [2]
Se tomarán muestras mediante un raspado de objetos comúnmente utilizados como monedas ,
celular, pomo de maquillaje y la superficie de los dedos . Se realizará la siembra de estos, en medio

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sólido para evidenciar la aparición de colonias en el agar y se sembrara una bacteria previamente
conocida , ​serratia​, en ambos medios para analizar cómo será su evolución de crecimiento.

OBJETIVO
Mediante la práctica, desarrollar y potenciar la capacidad de comprobar la existencia de los
microorganismos en diversos ambientes , superficies corporales , entornos líquidos y objetos
inanimados de uso cotidiano.

MATERIALES Y MÉTODOS
Instrumentos y materiales empleados :
Los materiales empleados para el desarrollo de la práctica se describen a continuaciòn:

Cajas petri con agar nutritivo: Se usa como medio de cultivo general para la mayor parte de los
microorganismos y como base para la preparación de medios selectivos y enriquecidos.Está
compuesto de extracto de carne, peptona, ClNa, agar y agua destilada.[3]
Moneda​: ​Moneda de denominación de 500 pesos colombianos, de la nueva generación,
aparentemente limpia.
Celular:​ ​Huawei, cubierto por un estuche de tela y cartón desgastado.
Pomo de maquillaje: Esponja clásica, empleada para aplicar polvos cosméticos, plana y redonda,
cubierta de maquillaje.
Hisopo estéril:​ ​Instrumento utilizado para recoger muestras, para su posterior estudio.
Pulgar (mano derecha): ​Mano sin lavar que tuvo contacto con el suelo,las barandas del transporte
público y superficies sin limpieza adecuada
Papel film: ​Se utiliza para envolver, asegurar, proteger y preservar los productos de agentes externos
atmosféricos.[4]
Cultivo previo de Serratia: ​Serratia marcescens es un bacilo Gram negativo de la Familia
Enterobacteriaceae que puede encontrarse en la flora intestinal del hombre y animales, en el
ambiente. [5]
Mechero de alcohol de vidrio: ​Instrumento utilizado para calentar o esterilizar los materiales de
laboratorio.
Tubo de ensayo con agar nutritivo inclinado: ​Da a las bacterias una mayor superficie donde pueden
crecer dentro del tubo de ensayo. [6]
Tubo de ensayo con caldo nutritivo: ​Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el
desarrollo de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. contiene extracto de carne,
extracto de levadura, peptona, NaCl y agar [7]
Asa microbiológica: ​Asa en argolla o anillos, no calibrada. Sirve para la siembra por estrías e
inoculaciones en general. [8]

Metodología
La metodología empleada en la práctica se puede describir en dos grandes etapas de ejecución, las
cuales son:

1. Cultivo de microorganismos procedentes de superficies comunes.

Se dispuso de cuatro cajas de petri y se realizó a cada objeto un cultivo microbiológico.
Para realizar el análisis de la moneda, esta se colocó alrededor de dos segundos por cada
lado en el agar nutritivo. Para analizar el celular se pasó un hisopo estéril por la pantalla de
este y se realizó un movimiento en forma de zic zac por el agar. Posteriormente, se analizó el
pomo de maquillaje, este se colocó y se sacudió encima del agar nutritivo. Seguidamente se
analizó el pulgar, este se colocó sobre el agar alrededor de 5 segundos, Finalmente, se tapó
y se selló cada caja petri con papel film. Las cajas se colocaron de forma invertida (el agar en
la parte superior, y la tapa en la parte inferior) y se llevaron a la incubadora a una

2
 temperatura entre de 30º-35° C durante 48 horas.Pasado este tiempo, se retiraron de la
incubadora, se retiró el papel film y se observaron en el microscopio.En la figura 1 a
continuación se ejemplifica la posición invertida de las cajas de petri.

Figura 1. Cultivos en caja de petri con agar, sellados con papel film.

2. Cultivo de Serratia
Mediante ​un mechero encendido se esterilizó el asa llevándolo a la incandescencia , luego
este se opuso sobre la superficie del agar para enfriarlo. Una vez fría el asa, se tomó una
pequeña muestra de la bacteria Serratia que se encontraba en caja petri, se extendió en la
superficie del agar inclinado y se tapó el tubo de ensayo, acto seguido se esterilizó
nuevamente el asa hasta la incandescencia y se procedió a enfriar el en agar,
posteriormente se tomó otra muestra de la bacteria Serratia y se dispuso dentro del caldo
nutritivo, luego se tapó el tubo de ensayo y se esterilizó nuevamente el asa. Los tubos de
ensayo se llevaron a la incubadora durante 2 días a una temperatura entre 30º-35ºC.
Pasado dicho periodo, se retiraron y se observó el crecimiento y la turbidez respectivamente
de los tubos de ensayo.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Caracterización de microorganismo cultivados en cajas de petri:
Al finalizar el periodo de incubación, el primer factor perceptible del crecimiento microbiano ,
corresponde a un olor desagradable,el cual es producido por las bacterias (anaeróbicas/aeróbicas)
al metabolizar las sustancias nutritivas contenidas en el medio de agar, las cuales generan
metabolitos volátiles responsables del olor, que puede variar en función de circunstancias de higiene
de la superficie y la capacidad para albergar bacterias que tienen las fibras de los diferentes tejidos
que componen el material. ​[9]
Al iniciar la siembra de los microorganismos, la superficie de las cajas de petri son iguales a
excepción del cultivo procedente del pomo cosmético ya que contiene producto (polvo). Los cambios
apreciados en la superficie del agar de cada cultivo fueron , principalmente la aparición de colores
en el medio transparente.

Pomo de polvo cosmético : se pudo observar el cambio de coloración en algunas áreas del medio,
que inicialmente era transparente y que paso a uno de coloración beige con tonalidad opaca, también
se aprecia de un color marrón la presencia de polvo cosmético. Esto se puede observar en la figura 2
a continuación.

Figura 1.Observación de bacterias obtenidas de pomo / Observación a través de microscopio de bacterias obtenidas de pomo.
De acuerdo con la literatura la gran proliferación de microorganismos en las esponjas cosméticas se
debe a que tienen mayor posibilidad de albergar depósitos que provienen del entorno , de la

3
superficie de las manos y la cara debido a su estructura interna.Por otro lado, dado que la esponja
analizada está en contacto con productos líquidos y en polvo ,además del aire , presenta humedad,
la cual facilita el desarrollo de bacterias. Por otro lado, el tipo de piel para el que se emplea la
esponja, corresponde a una piel mixta con tendencia a grasa , por ello dicha esponja se convierte en
un nicho ideal cuya fuente de alimento se debe a la descomposición del manto hidrolipídico de la piel
encontrando allí un excelente medio de cultivo rico en grasas, proteínas y sudor.​[10]
En adición, se ha demostrado que la presencia de bacterias en estos productos es proporcional a la
cantidad de uso, y el tiempo que tengan los mismos, que para el caso particular de la esponja
corresponde a seis meses de uso. [11]

Moneda: Los cambios apreciados corresponden a la aparición de formas grandes de color blanco
opaco y unas áreas circulares de coloración rosa con tonalidad pálido con un centro de color rojo un
poco más intenso, esto se puede apreciar en la siguiente figura 2.

Figura 2.Observación de bacterias obtenidas de moneda / Observación a través de microscopio de bacterias obtenidas de
moneda.
Dado que la moneda hace parte de un conjunto de activos llamado dinero y se encuentra en
continuo contacto y movimiento con agentes económicos , posee una carga microbiana constante
pues no es usual que se realice lavado de dichos activos (moneda , billete , tarjeta ). Podemos
establecer que la moneda y el billete son entes directamente relacionados, por ello compararemos
los resultados arrojados por un estudio de los billetes colombianos , cuyo análisis consistió en el
aislamiento de la microbiota bacteriana en las superficies de los billetes, empleando la siembra en
agar McConkey ​. La materia prima para la elaboración de los billetes es 100% fibra de algodón, lo
que le confiere una estructura porosa que le permite alojar diferentes tipos de detritus y que
posibilitará la colonización microbiana de dicho papel el cual al estar en contacto con las monedas
de forma directa o indirecta,contribuye a la contaminación de estas . Al realizar la comparación de
los resultados obtenidos se encontró que el 91,1% de los billetes evaluados presentaba
contaminación microbiana,donde el género más frecuentemente aislado correspondió a ​Bacillus spp
[12]​. Relacionando las características morfológicas descritas para el bacillus spp , encontramos que
una características común para este género corresponde a la forma irregular y textura cremosa de la
bacteria , lo cual coincide con lo encontrado en nuestro cultivo , que comparte con el bacillus spp
otras características tales como borde ondulado , elevación crateriforme, textura rugosa,
cromogénesis blanca opaca, por ello corroboramos la estrecha relación entre la moneda y el billete.
De lo anterior podemos decir que nuestro cultivo tenía colonias de un bacillo , probablemente
Bacillus​ spp. ​[13]

Dedo pulgar: Observamos la presencia de tres distintas formas con coloración amarillo brillante ,
blanco opaco y unas más pequeñas con un ligera coloración rosa. Se puede observar en la figura 3
a continuación.

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Figura 4.Observación de bacterias obtenidas de dedo de la mano / Observación a través de microscopio de bacterias
obtenidas de dedo de la mano.

La ausencia del lavado de manos fue un factor clave para el análisis de esta superficie corporal,
dado que la piel contiene bacterias residentes alojadas en las capas más profundas y una flora
transitoria que coloniza la capa superficial, que puede ser fácilmente erradicada por medio del lavado
de manos .​[14]
Comparando las características morfológicas de las bacterias halladas en la superficie del dedo ,con
las de la bacteria ​Staphylococcus aureus encontramos una gran concordancia entre sus
características (colonias lisas,brillantes, convexas con endo pigmento color blanco porcelana o
amarillo ) , por ello se puede establecer que en el cultivo hay presencia de esta bacteria y el dedo se
encontraba contaminado por ella. De ​acuerdo con un estudio que analiza las bacterias en las manos
de los niños, se encontró que ​el microorganismo más frecuente fue S. aureus con 44.0%. Estos
resultados subrayan que las manos sirven como vehículos para transmitir microorganismos,
lo que hace que la técnica de lavado de manos sea fundamental para el control.​[15]

Teléfono celular : Se observó la aglomeración de estructuras irregulares de color blanco intenso con
otras de forma circular u ovalada de color amarillo leve. Esto puede apreciarse en la figura 5.

Figura 5. Observación de bacterias obtenidas de la superficie del teléfono móvil / Observación a través de microscopio de
bacterias obtenidas de la superficie de un teléfono celular de uso diario..

Comparando estos resultados con un estudio microbiano realizado en escuelas odontológicos y de

ingeniería [16] se observó que los celulares estudiados estaban contaminados con Staphylococcus
Aureus. Una bacteria perteneciente a la familia Staphylococcaceae, es Gram positivo, tiene forma de
coco y puede aparecer en parejas, en cadenas o en racimos. Según las características morfológicas
de esta bacteria y las características morfológicas encontradas en el análisis microbiano realizado en
el laboratorio, se dedujo, que el celular estaba contaminado por este microorganismo. Y la bacteria
de coloración cromogénesis amarilla encontrada la identificamos como Pantoea, debido a que esta

5
misma bacteria fue encontrada en un estudio realizado sobre la contaminación bacteriana de
teléfonos celulares de estudiantes de medicina [17]

Con base a la información suministrada por las figuras 2-5 , se realiza una caracterización de los
cambios apreciados en cada cultivo, dichas características se encuentran consignada en la Tabla 1.
Tabla 1. Descripción de estructuras encontradas en los medios de cultivo.

Caracterización de cultivo de ​serratia:

El cultivo del bacilo gram negativo presenta una intensa coloración roja y se evidencia en el medio
de agar un cambio de coloración, esto puede ser constatado en la figura 6.

Figura 6. Cultivo previamente sembrado en caja de petri con agar de serratia (proporcionado por el laboratorio)

Medio sólido : Los medios de agar inclinado nos brindan grandes ventajas a la hora de sembrar una
bacteria ya que estos medios le permiten al microorganismo más superficie dentro del tubo para
desarrollarse y disminuir la pérdida de agua debido a que se sellan de una manera más precisa ; se

6
sembró una cantidad de la bacteria relativamente pequeña en un medio de agar inclinado totalmente
transparente .Al finalizar el periodo de incubación se aprecia el crecimiento exponencial de la bacteria
en el cambio de color del medio , ahora turbio , en cuyo centro hay gran cantidad de colonias de color
rojo y se aprecia también en las paredes del tubo colonias con una coloración beige, ​esto puede
apreciarse en la figura 7​.Es entonces que este tipo de medios de cultivo no solo facilitan el
crecimiento bacteriano sino que también nos puede dar indicios de microorganismos gram negativos
, como es el caso de la serratia con el cual estamos trabajando si este utiliza glucosa y lactosa o
sacarosa de forma fermentativa dependiendo en los cambios en la coloración en el fondo del tubo de
ensayo . [18]

Figura 7. Siembra de serratia en agar inclinado (0 horas de incubación) / Siembra de serratia en agar inclinado (48 horas de
incubación )
Dado que este género de bacteria pertenece a la familia Enterobacteriaceae y tiene una especie. Son
bacilos gram negativos, aerobios, proteolíticos y mesófilos. Puesto que el agar nutritivo es un medio
de cultivo no selectivo en el que la pluripeptona y extracto de carne sustituyen la fuente de carbono y
nitrógeno proporcionan un entorno rico en a​minoácidos libres y cadenas cortas de péptidos ideal para
el crecimiento microbiano de la serratia,cuya temperatura de incubación se desarrolló en el rango
óptimo para microorganismos mesófilos (15º-35º C).[19]

Medio líquido : Al finalizar el periodo de incubación se observó cómo el caldo se torno más turbio,
que nos permitirá decir que el crecimiento de la bacteria a sido significativo y perceptible ; se apreció
también la formación de una capa de una coloración de beige. Apreciable en la figura 8.

Figura 8. Caldo nutritivo con siembra de serratia (0 horas de incubación)/Caldo nutritivo con siembra de serratia (48 horas de
incubación)

7
Debido a que el uso de los microorganismos ha facilitado muchos procesos y que se hace necesario
la identificación de los que representan un potencial riesgo para nuestra salud se ha optado por
utilizar métodos para el cultivo y aislamiento de estos , la mayoría de bacterias y hongos de nuestro
interés crecen en rangos de tiempo variables y dependendiendo del medio de cultivo así mismo se
manifiestan, los medios de cultivo generalmente utilizados son en fase líquida(caldo) o sólida (agar).
si el medio es de tipo líquido los nutrientes han sido disueltos en agua y es posible identificar el
desarrollo de colonias al observar turbidez en el caldo, a mayor turbidez mayor será dicho
crecimiento que por lo general necesita de por lo menos 10​6 ​bacterias por mL de caldo para
manifestarse una turbidez perceptible por nuestro ojo humano. [20]

CONCLUSIONES
El análisis microbiológico realizado, nos permitió entender que existe un mundo más pequeño
imperceptible a nuestros ojos . Que puede afectar de manera positiva o negativa todo nuestro
entorno.

Se puede concluir que la preparación de los medios de cultivo y esterilización juegan un papel
importante para la posterior siembra y para un buen crecimiento microbiano.Por otro lado nos
permitió entender que los diferentes medios de cultivo presentan manifestaciones diferentes y
también que las características morfológicas permiten dar una noción de los microorganismo
cultivados.

Los microorganismos son capaces de adaptarse a muchos medios sin importar la hostilidad de estos,
utilizando mecanismos de defensa y supervivencia , generalmente en mayoría los que representan
una potencial amenaza .Un buen trabajo en el laboratorio es determinante para conseguir los
resultados y análisis esperados , es entonces que a través de esta práctica logramos comprender
que los microorganismos son agentes que pueden contaminar nuestras muestras de laboratorio
convirtiéndose en un problema de especial cuidado y obstaculizando nuestro trabajo. Acatar las
normas de seguridad , utilizar ​de manera adecuada los instrumentos del laboratorio y realizar los
procesos preliminares permitirá cumplir lo esperado.

REFERENCIAS
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de alimentos.​ Ciudad Juárez: Universidad Autónoma de Ciudad Juárez.
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FERNÁNDEZ V., A. et al. (2002). Serratia marcescens: Descripción de un brote de infección
intrahospitalaria. ​Revista Chilena De Infectología,​ ​19(​ 4). doi: 10.4067/s0716-10182002000400007
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https://www.geniolandia.com/13065280/que-es-un-agar-inclinado Fecha de consulta
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[8] García Hylary, Q. (2014). Asas microbiológicas y su uso. Retrieved from
http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com/2014/10/asas-microbiologicas-y-su-uso.html Fecha de consulta
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8
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[11]​Jalón Ortiz, F. (2017). Reacciones oculares producidas por cosméticos. Sevilla: Universidad
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[20] ​Shadi Zakai​, ​Abdullah Mashat​, ​Abdulmalik Abumohssin​, ​Ahmad Samarkandi​. ​Basim
Almaghrabi​, ​Hesham Barradah​, ​& ​Asif Jiman-Fatani (2016). Bacterial contamination of cell phones of
medical students at King Abdulaziz University, Jeddah, Saudi Arabia. ​Journal of Microscopy and
Ultrastructure ​ doi: ​10.1016/j.jmau.2015.12.004

ANEXOS
CUESTIONARIO
1. ¿Que es una colonia bacteriana?
.En los medios de cultivo sólidos ,los microorganismos(bacterias u hongos) se manifiestan
macroscópicamente como conglomerados o “colonias” .Es entonces que las colonias son conjuntos
integrados por miles de elementos (microorganismos) procedentes de una sola célula( “una unidad
formadora de colonia”,UFC) que quedó implantada en un punto concreto de la superficie del
medio.Cada especie da lugar a colonias con aspecto morfológico diferente de otras especies lo que
nos ayuda a orientar su identificación.
Cada colonia está constituida por los descendientes de una sola bacteria , que ha surgido por
divisiones consecutivas.Todas las bacterias de una misma colonia son geneticamente identicas .La
colonia bacteriana constituye, al igual que toda población de individuos genéticamente idénticos , un
clon. Mediante el recuento de las colonias es posible determinar el número de bacterias sembradas
inicialmente en el medio.
Tomado de: ​García Rodríguez , J. Á., & Picazo, J. J. (1998). ​MICROBIOLOGÍA MÉDICA. Madrid:
HARCOURT BRACE.
Bachmann, K., (1978). Biología para Médicos . Editorial REVESTÈ S.A.,178.

2. ¿Podría usted observar colonias bacterianas en un medio líquido?

El cultivo se realiza en un medio de cultivo sólido para formar colonias que serán distintas y
características para cada tipo bacteriano; el medio sólido impide el posible movimiento de los
individuos de la colonia y favorece su agrupamiento. Para obtener colonias bacterianas nunca se
emplea directamente un medio de cultivo líquido.
Tomado de: Universidad Nacional del Nordeste Trabajo Práctico Nº 6 FACULTAD DE
AGROINDUSTRIAS Identificación Microbiología General- Carrera Farmacia Año 2006

9
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp6.pdf

3. ¿De qué modo podrían incidir los microorganismos del aire en los trabajos
del laboratorio? Explique.
Se hace importante en el laboratorio proteger el aire de amenazas de bacterias y hongos y demás
microorganismos posibles de encontrar , generalmente se cree difícil que el aire sea un ambiente
adecuado para un microorganismo debido a la hostilidad del medio y a que este no posee
microorganismos propios pero estos han evolucionado y desarrollado estructuras que les permiten
resistir y sobrevivir.
Como hemos dicho anteriormente algunos microorganismos patógenos de muy pequeño tamaño se
pueden encontrar en muchos lugares , es entonces que estos se pueden transportar o dispersar a
través de este medio y contaminar las muestras con las que estemos trabajando y multiplicarse , esta
es una de las grandes preocupaciones de la industria alimentaria debido a que la presencia de estos
microorganismos pueden disminuir la vida útil de los alimentos y afectar la posterior conservación de
estos.
Tomado de: Carlos A. Méndez, Juan G. Camacho & Sonia Echeverry. (2015). Identificación de
bacterias y hongos en el aire de Neiva, Colombia. ​Rev. salud pública.​ doi: 10.15446/rsap.v17n5.3846

4.¿ Cómo evitaría que los trabajos del laboratorio se contaminen?

Algunas medidas de prevención en los trabajos de laboratorio son la esterilización de los utensilios
que se utilizarán , preferiblemente contar con filtros de aire en el laboratorio y, limpiar las superficies
de trabajo ,un correcto lavado de manos , entre otros.
Tomado de: Méndez C. A., Camacho J G. & Echeverry S. (2015). Identificación de bacterias y
hongos en el aire de Neiva, Colombia. ​Rev. salud pública​. doi: 10.15446/rsap.v17n5.3846

5.¿ Al incrementar el tiempo de incubación se presenta un aumento indefinido en el tamaño de

las colonias? ¿Qué factor podría limitar ese crecimiento?
No se presentará un aumento indefinido en el tamaño de las colonias. El crecimiento de las colonias
de microorganismos va estrechamente ligado a la disponibilidad de nutrientes en el medio, es decir,
después de un determinado periodo las bacterias u hongos no tendrán recursos para suplir sus
necesidades alimenticias, por lo que se observará un descenso en el número de células visibles y no
un aumento de las mismas.
Tomado de: ​Ruiz D. , Nicholls I. , & Salinas R. DEMOSTRACIÓN DE LA PRESENCIA DE
MICROORGANISMOS EN DIFERENTES AMBIENTES-MORFOLOGÍA Y TINCIÓN DE LOS
MICROORGANISMOS. scribd.
https://es.scribd.com/document/56994430/Laboratorio-de-microbiologia-1​. 8.

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