ESCUELA DE CIENCIAS QUIMICAS

CARRERA DE QUIMICA

PRACTICA DE LABORATORIO DE LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA

PRÁCTICA No. 02

1. DATOS GENERALES:

NOMBRES: CÓDIGOS:

Segundo Morales
Erica Sani
Angy Estrada 93

GRUPO No.:3

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

2018/05/08 2018/05/18

Tema: Extracción de ADN vegetal

2. OBJETIVOS:

2.1. GENERAL:
Extraer ADN de bananas licuadas con agua
2.2. ESPECÍFÍCOS:
Demostrar que las células presentes en la banana contienen fragmentos de
ADN.
Identificar sustancias que puede actuar sobre la pared celular como
emulsionantes de lípidos y destruirla.
Observar la estructura de ADN con ayuda del microscopio

3. METODOLOGÍA:

4. MATERIALES, SUSTANCIAS, REACTIVOS Y EQUIPOS:

4.1 MATERIALES:
 Licuadora
 Una cuchara plástica para medir y mezclar
 Papel filtro
 20 ml de agua destilada
 Shampoo de color claro
 1 banana
 1 vaso (por grupo)
 Sal de mesa, con o sin Iodo
 1 pipeta de transferencia plástica o un gotero médico
 1 tubo de ensayo sellado
 1 conservadora con hielo para enfriar los tubos con alcohol
 1 varilla de vidrio o 1 pipeta Pasteur

4.2 SUSTANCIAS:
 Etanol al 95% de o 91% de alcohol isopropílico

4.3 REACTIVOS:
 Azul de metileno

5. MARCO TEÓRICO Y REFERENCIAL:

5.1. MARCO TEÓRICO:

5.2. MARCO REFERENCIAL:

La presente práctica se realizó el día Martes 8 de mayo de 2018 en el laboratorio
de Biotecnología de la Facultad de Ciencias, de la Escuela Superior Politécnica de
Chimborazo, en la ciudad de Riobamba parroquia Lizarzaburu ubicado en la Av.
Panamericana Sur km.
6. PROCEDIMIENTO:

1. Preparar una solución de banana procesada con sal, agua destilada y shampoo
(detergente) mediante los siguientes pasos:
2. En una licuadora, mezclar una banana por taza de agua destilada (250ml).
3. Licuar por 15-20 segundos, hasta que la solución se mezcle.
4. En un vaso, preparar una solución consistente en una cucharadita de té de
shampo y dos pizcas de sal.
5. Agregar 20 ml (4 cucharaditas) de agua destilada.
6. Disolver la sal y el shampoo revolviendo lentamente con la cuchara de plástico
evitando formar espuma.
7. A la solución preparada en el paso 3, agregar tres cucharaditas de té de la mezcla
de banana del paso 1.
8. Mezclar la solución con la cuchara por 5-10 minutos.
9. Mientras uno de los miembros del grupo mezcla la solución de banana, otro
miembro pondrá el papel filtro dentro del otro vaso plástico. Doblar el borde del filtro
alrededor del vaso para que el filtro no toque el fondo de la taza.
10. Filtrar la mezcla vertiéndola dentro del filtro y dejar que la solución drene por
algunos minutos hasta que sean 5 ml aproximadamente de filtrado para testear.
11. Tomar un tubo de ensayo con alcohol frío. Para mejores resultados el alcohol
debe estar tan frío como sea posible, para ello se puede mantener en un baño de
agua con hielo durante el desarrollo de la práctica.
12. Llenar la pipeta plástica con la solución de banana y agregarla al alcohol. El
ADN no es soluble en alcohol. Cuando el alcohol se agrega a la mezcla, los
componentes, excepto el ADN, permanecen en la solución mientras el ADN
precipita en la capa de alcohol.
13. Dejar la solución reposar por 2 a 3 minutos sin mover. Es importante no batir el
tubo de ensayo. Se puede observar el ADN blanco el cual precipita en la capa de
alcohol.
14. Cuando se obtienen buenos resultados, habrá suficiente ADN para levantar con
una varilla de vidrio (el ADN se enrolla a la varilla). O usando una pipeta de Pasteur
que haya sido calentada en la punta para formar un gancho, se puede recuperar
(tomar) algo de ADN.
15. El ADN recuperado es colocado sobre un portaobjetos y se tiñe con azul de
metileno durante 3 minutos. Se limpia el portaobjetos y se lleva al microscopio para
su observación.

6.1. DIAGRAMA DE FLUJO DE LA PRÁCTICA:

Preparar una solución de banana procesada con
sal, agua destilada y shampoo (detergente)
mediante los siguientes pasos:

En una licuadora, mezclar una banana por taza de

agua destilada (250ml

Licuar por 15-20 segundos, hasta que la solución

se mezcle

En un vaso, preparar una solución consistente en

una cucharadita de té de shampoo y dos pizcas de
sal

Agregar 20 ml (4 cucharaditas) de agua destilada.

mezclar las dos soluciones durante 5-10 minutos,

Luego filtrar a través de un papel filtro

Al filtrado se le agrega alcohol frío

Se deja reposar de 2 a 3 min

El ADN de la solución de banana se precipita y se

hace visible
6.2. OBSERVACIONES:
 Al colocar el alcohol en la solución de la banana la presencia se verificar
presencia la una corresponde la fase orgánica compuesta de alcohol y la fase
acuosa donde se encuentra todo el ADN.



6.3. DISCUSIÓN:
 Los resultados obtenidos al momento de triturar el banano incrementa el área
superficial de la membrana siendo fácil de disolverla
 El detergente ayuda a romper la bicapa de fosfolípidos de las membranas
plasmáticas haciendo que los lípidos de la membrana se descompongan
 El ADN es una molécula polar, pero al momento de añadir el etanol a baja
temperatura hace que se vuelva apolar e insoluble en el etanol formándose
un precipitado.
 El alcohol es menos denso que el agua del extracto y por eso flota sobre la
capa del extracto.

7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:
7.1. CONCLUSIONES
 El ADN es el único componente de la solución que no es soluble en el etanol,
y se hace visible porque los diferentes hilos o cadenas se van aglutinando
entre sí al precipitar debido a la acción de fuerzas físicas hacia la superficie.
 Todas las materia viva plantas animales y el hombre están formado por
células las cuales en su núcleo están formado por ácidos nucleicos ADN y
ARN en mismo que contiene el código genético
 Dentro de las sustancias que actúan como emulsionantes de lípidos es el
detergente ya que disuelve las moléculas grasas y las proteínas de la
membrana celular, rompiendo las membranas celulares y nucleares y con
ayuda de la sal que precipite la aglutinación de las hilos de ADN
conglomerados.
 Se puede apreciar la vista en el microscopio estructuras que se podrían
suponer que son filamentos de ADN y juntos a ellas otras biomoléculas como
proteínas y lípidos desprendidos durante la extracción.

7.2. RECOMENDACIONES

 Disolver completamente la sal antes de llevar la solución a filtrar.

 Mecer despacio la mezcla (shampoo, sal y solución de banana) evitando la
aparición de espuma.
  Utilizar la cantidad adecuada de shampoo logrando una solución menos
viscosa y que en el menor tiempo se filtre.

7. BIBLIOGRAFÍA:
7.1 BIBLIOGRAFÍA

James Watson (1968). Salvat Editores S.A. Barcelona,la doble hélice. Un

relato autobiográfico sobre el descubrimiento del ADN.
Alberto Díaz, Diego Golombek (comps.). Siglo veintiuno editores Argentina.
2004.
ADN, 50 años no es nada. Alberto Díaz, Diego Golombek (comps.).
Martínez Martín, L. (2015). Extracción De ADN. Retrieved from
http://genetica. uab.cat/base/documents/genetica_gen/Laura Martínez
Martín2015_4_19P21_19.pdf

8. CUESTIONARIO:

Preguntas para el análisis de la experiencia

a. ¿Por qué se puede suponer que la banana contiene ADN? ¿Dónde se

encuentra ese ADN?
Se supone que la banana contiene ADN por que, el ADN se encuentra en el
núcleo de las células mayoritariamente, al saber que el plátano está compuesto
de células, es obvio pensar que el plátano contiene ADN.
Por qué viene de una planta y es un ser vivo y por ende todos los seres vivos
tenemos ADN, y se encuentra en cada una de las células que contiene la
banana (Watson,1968).
b. ¿Qué otro tipo de sustancias es posible encontrar entre los componentes
de la banana?
Se podría encontrar carbohidratos y fibras, y también contiene mucho potasio,
magnesio y ácido fólico (Watson,1968).
c. ¿Cuál es la función del detergente en la experiencia?
La función que cumple el detergente es disolver las moléculas grasas y las
proteínas de la membrana celular, rompiendo las uniones que mantienen la
integridad de la misma. De esta forma se libera el contenido celular. Luego, el
detergente forma complejos con los lípidos y las proteínas, permitiendo que los
mismos sean separados del ADN por filtración (Díaz, Golombek, 2004)
d. ¿Cuál es la función de la sal en la experiencia?
La sal permite que el ADN precipite en una solución fría de alcohol y que las
cadenas de ADN no se corten (Díaz, Golombek, 2004).

e. ¿Cuál es la función del alcohol en la experiencia?

 La función del alcohol fue cambiar la polaridad de la solución acuosa,
volviéndose insoluble el ADN (Díaz, Golombek, 2004).

f. Al finalizar la experiencia se obtiene un mucus blanco y fibroso que sería

el ADN. ¿Es posible que la molécula de ADN se visualice a simple vista?
¿Por qué?
No se puede visualizar una molécula de ADN, esto debido a su tamaño microscópico, lo que
se aprecia es un cumulo de ADN Watson (1968).

g. A partir de la respuesta anterior, ¿qué creen que contiene “el ADN”

obtenido en la experiencia
Watson (1968)Es un cumulo de muchísimas moléculas de ADN juntas,
posiblemente millones al grado de poderse visualizar dado el tamaño de este.

Preguntas para reflexión

1.- ¿Se podría utilizar otros alimentos para extraer ADN? En tal caso, ¿cuáles
podrían ser esos alimentos?
Se podría emplear cualquier alimento de origen vegetal o animal, también
levaduras.
2.- ¿Se podría decir, entonces, que comemos genes?
Si, comemos los genes de los organismos que forman parte de la alimentación,
Muchas veces no somos conscientes de que cuando nos alimentamos, además de
proteínas, grasas y azúcares, también comemos ácidos nucleicos. El ácido
desoxirribonucleico (ADN) es el portador de la información genética de cada
organismo vivo y está organizado en genes. Mediante una sencilla técnica de
extracción de ADN de plantas se pretende mostrar al público general que estas
moléculas están en las plantas que nos rodean, algunas de las cuales forman parte
de nuestra dieta.
3.- ¿Qué ocurre con el material genético que se consume?
El material genético de lo que comemos es liberado por procesos normales de
digestión que tienen lugar en el tracto gastrointestinal y es destruido por la actividad
de enzimas nucleasas mismas que cortan el ADN.
La degradación de los componentes de los alimentos y el aprovechamiento de las
unidades constitutivas requeridas por el cuerpo mismo que viajan en forma de
nutrientes por el torrente sanguíneo.

10. ANEXOS
RESUMEN
La práctica consistió en extraer el ADN de la banana se forma una vez que el
shampoo actúa disolviendo los lípidos y las proteínas de la membrana celular
liberando el contenido celular para después formar complejos con los lípidos y las
proteínas permitiendo así que estos componentes sean separados del ADN
mediante un método de separación física denominado filtración y se pudo observar
el ADN se deber vertir la solución de banana en una solución fría de alcohol y se
precipita el ADN gracias a la acción que cumple la sal y de acuerdo con la referencia
“Las membranas de las células están formadas por dos capas de lípidos con
proteínas a través de estas. El detergente ayuda a romper la bicapa de fosfolípidos
de las membranas plasmáticas y la envoltura nuclear. Los lípidos de la membrana
se descomponen debido al detergente que deshace las uniones que mantienen la
membrana junta. Cuando el detergente se puso en contacto con los lípidos éstos se
separan de la membrana rompiéndola. La estructura de los lípidos es similar a la
del detergente y eso hace que se combinen, formando una burbuja de detergente y
lípidos. La molécula de DNA es soluble en agua y por tanto invisible, pero si se pone
en contacto DNA que haya estado en un medio salado y alcohol frío el ADN se
vuelve insoluble y precipita. Por lo tanto, el agua salada ayuda a la precipitación en
el alcohol. La sal también ayuda a separar el DNA de las histonas. Al cabo de pocos
segundos seremos capaces de observar tres capas bien diferenciadas. Encima de
todo estará el alcohol, debajo de todo estarán los restos celulares (membranas,
orgánulos) del plátano y los otros componentes de la solución y, en la interface
observaremos una especie de hilos blancos rodeados de burbujas.

DESCRIPTORES

ADN, aglutinamiento, extracción, precipitación, solubilidad

 9. ANEXOS:

(a) (b) (c) (d)

CATEGORÍA DEL TEMA DE LA PRÁCTICA DE
NOTAS
DIAGRAMA ESPOCH LABORATORIO
a) □ APROBADO FACULTAD DE CIENCIAS LÁMINA ESCALA FECHA
□ CERTIFICADO ESCUELA DE …….
b) □ INFORMACIÓN CARRERA DE ……..
LABORATORIO DE……
Aa/mm/dd
c) REALIZADO POR:……… 1:1
□ POR CALIFICAR
d) □ POR APROBAR
□ POR CALIFICAR