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Dentro de las cavidades estériles, aquellas más importantes de las cuales vamos a hacer el diagnóstico microbiológico
son el LCR, por la importancia que tiene en las meningitis, y el hemocultivo, por lo importante que es desde el punto
de vista cuando llega un paciente con fiebre y no hay un foco de infección aparente, por esto es que es un examen al
cual se le debe dedicar tiempo y recursos.
Cavidades estériles o serosas: normalmente no hay microorganismos.
Líquido cefalorraquídeo.
Ascítico o peritoneal.
Articular.
Pleural.
Pericárdico.
Cuando hay aumento de líquido en estos espacios, se deben obtener estas muestras frente a la sospecha clínica de
infección (meningitis, ascitis, artritis supurada, empiema pleural, pericarditis –inflamación del pericardio, el paciente
generalmente manifiesta fuertes dolores-).
ESTUDIO MICRIOBIOLÓGICO.
Toma de muestras.
Estas muestras se obtienen generalmente por punción percutánea, por lo tanto, se debe realizar un riguroso aseo y
desinfección de la zona que se va a puncionar, para evitar la contaminación con flora de piel (técnica aséptica
correctísima). La muestra debe ser obtenida por un médico experimentado en la técnica.
Transporte.
Deben ser llevadas al laboratorio inmediatamente a temperatura ambiente, porque las bacterias que se van a
estudiar son muy lábiles al ambiente y temperatura, por lo cual se podrían obtener cultivos negativos. Esto es
diferente a otras muestras que necesitan medios de transporte (después de 2-4 horas), como en el caso del
coprocultivo (Stuart, Amies o Cary-Blair).
Interpretación de resultados.
Por tratarse de líquidos normalmente estériles, cualquier desarrollo bacteriano puede tener importancia clínica. Debe
correlacionarse con los antecedentes clínicos del paciente y a las características citoquímicas del líquido por
ejemplo, en un LCR con bacterias: glucosa baja (o no habrá), proteínas altas y recuento de PMN elevado, lo que sí se
Etiología.
Diagnóstico.
Manifestaciones clínicas:
Fiebre.
Compromiso del estado general.
Síntomas locales:
Dolor.
Eritema.
Aumento de volumen.
Impotencia funcional.
Diagnóstico de laboratorio.
Muestra: líquido articular (muy denso).
Exámenes:
Tinción de Gram (sensibilidad 50%) Si no se observa nada no hay que asustarse, porque como se ve la sensibilidad
es baja. Dado que el líquido es muy denso, se sugiere colocar una gota de caldo para ayudar a diseminar en el
portaobjetos, se debe decolorar más de lo habitual, y aun así puede costar observar.
Cultivo (agar sangre, chocolate y caldo).
MENINGITIS BACTERIANA.
El LCR es la muestra clínica que con mayor urgencia debe ser procesada, ya que habitualmente proviene de un
paciente grave en el que se ha sospechado el diagnóstico de meningitis.
Los microorganismos presentes suelen ser escasos y son sensibles a las condiciones ambientales (frío y sequedad),
por lo que se les debe proporcionar rápidamente un medio de cultivo óptimo para que se desarrollen.
Inflamación de leptomeninges (piamadre y aracnoides) con efecto sobre LCR que se encuentra en espacio
subaracnoídeo.
Dado que sus síntomas son inespecíficos muchas veces se puede confundir con otro tipo de infecciones, como por
ejemplo la faringitis, en donde hay fiebre, dolor de cabeza, y en el caso de los niños por la tos también puede haber
vómitos.
*Meningitis meningocócica.
Agente: Neisseria meningitidis.
Es un diplococo gram negativo.
Reservorio humano. Portación asintomática 20% a nivel nasofaríngeo.
Transmisión: por contacto a través de gotitas (secreciones respiratorias).
Afecta principalmente a niños y adolescentes.
Período de incubación: 1 a 3 días.
Patogenia.
Factores de virulencia:
Pili: adherencia en mucosa de nasofaringe y orofaringe.
Cápsula: protege de fagocitosis. Según tipo de polisacárido de la cápsula se diferencian en serogrupos: los más
comunes son A, B y C.
Lipooligosacárido: actúa como endotoxina, es muy potente. Es responsable de las manifestaciones clínicas.
Proteasa IgA: degrada IgA a nivel epitelio.
Proceso:
1) Adherencia: en epitelio nasofaríngeo.
2) Colonización.
Diagnóstico.
Clínico:
Signos y síntomas.
Examen físico.
Laboratorio: Punción lumbar se obtiene LCR para realizar:
Citoquímico: la glucosa es la mitad de lo que hay en sangre.
Tinción de gram.
Cultivo.
Recolección de la muestra.
Antisepsia de piel.
Tubo estéril con tapa rosca.
Enviar a Microbiología: el más turbio. El LCR se describe como agua de roca (transparente), cuando tiene cierto grado
de opalescencia es porque está infeccioso o porque la punción no fue tan limpia, es decir, al puncionar se puede
pasado a romper algún vaso sanguíneo pequeño y con ello salen glóbulos rojos; por lo tanto, la opalescencia no
siempre va a ser signo de infección, sino que puede estar dada por hematíes. Cuando está turbio (como pisco sour),
generalmente es que hay meningitis.
Idealmente min 2 mL.
Transporte de la muestra.
Lo antes posible, antes 15 minutos.
Temperatura ambiente.
No refrigerar.
Criterios de rechazo.
Relativos. JAMÁS SE PUEDE RECHAZAR, por lo que significa la toma de muestra y el impacto que tiene.
Si el nombre del paciente que está registrado en la orden no coincidiera con el de la muestra, se debe ir a consultar
a sala, llamar por teléfono, etc., pero NO se puede rechazar, sino que como observación en el informe se puede
colocar que la muestra venía rotulada como blablablá, se conversó en sala y blablablá.
Muestra en recipientes rotos, procesar y con alerta a médico tratante de posible contaminación.
Procesamiento de la muestra.
Según cantidad de muestra:
< 0.5 mL Gram y cultivo directo.
> 1 mL Centrifugación convencional Gram y cultivo de sedimento.
Lo anterior indica que en la tinción de gram podrían no observarse bacterias, pero en el cultivo sí se van a encontrar.
Cultivo.
Sensibilidad de hasta 90%.
Medios de cultivo:
Agar sangre cordero al 5%.
Agar chocolate.
Medios líquidos: Cuestionados.
Tioglicolato no recomendado.
Viales de hemocultivo: No existe recomendación.
Incubación: 2-3 días en CO2. Mínimo 48 horas.
PERITONITIS BACTERIANA.
Diagnóstico microbiológico.
Cultivos: 30 - 40% negativos.
Diagnóstico: Recuento de PMN > 250/mm3.
Toma de muestra.
Procesamiento.
Centrifugar la muestra, tinción de gram (directo) del sedimento y cultivo en agar sangre y chocolate.
Además se podría inocular un frasco de hemocultivo (pediátrico, ya que son caros), ya que su rendimiento es mucho
mejor que el de un cultivo corriente, porque la carga bacteriana es tremendamente baja.
Lo ideal es trabajar ambas cosas en paralelo, es decir, por un lado el cultivo y por otro el hemocultivo.
Si el volumen de muestra es bajo:
Sedimento se siembra en medios enriquecidos (agar chocolate y agar sangre), incubación 5% CO2, ideal mínimo 72
horas.
Sedimento: Tinción de Gram.
HEMOCULTIVO.
HEMOCULTIVOS.
Sistemas de hemocultivo.
Manual Prácticamente ya no se usa, porque en este caso ha pasado a ser semi-automatizado.
Toma de muestra: catéter venoso central (el que se pone a los pacientes que se dializan) o de sangre periférica (de
los brazos).
Tiempo de protocolo: 7 días.
Procedimiento.
1) Inoculación en frasco.
2) Incubación en estufa.
3) Observación diaria de los frascos, para ver si existe cualquier indicio de desarrollo bacteriano: turbidez, hemólisis,
coágulo, presencia de gas, etc.
4) A las 24 horas: Primer Repique.
Coloración de Gram.
Agar chocolate.
Agar sangre.
5) Incubación en estufa.
6) A las 48 horas: Segundo Repique.
Coloración de Gram.
Agar chocolate.
Agar sangre.
7) Incubación en estufa.
8) A los 7 días: Repique Final.
Coloración de Gram.
Agar chocolate.
Dato: En el caso de los pacientes que son dializados y que comienzan con fiebre, se les toma una muestra de
hemocultivo del catéter (venoso central) y de sangre periférica. Si en ambas botellas se encuentra el mismo
agente bacteriano (por ejemplo Pseudomonas aeruginosa), el foco de infección es el catéter; pero si en la
muestra del catéter se encuentra, por ejemplo, Staphylococcus coagulasa negativo y la de vía periférica es
negativa, eso no tiene importancia.
Los frascos de hemocultivo vienen con un caldo enriquecido y con anticoagulante incluido; está certificado y viene con la
cantidad necesaria para el volumen de sangre que se tiene que tomar.
Tecnología automatizada.
Tecnología de fluorescencia no invasiva.
Detección de producción de CO2.
Lectura permanente cada 10 minutos, con lo que el equipo va haciendo una curva y cuando se llega a un peak
comienzan las alarmas.
Positividad a partir de las 2 hrs.
Alarmas de positividad, luminosas y sonoras.
Metodología.
El sensor es un compuesto sensible al CO2.
El sensor responde con una señal fluorescente que es detectada por el instrumento.
La fluorescencia en el sensor se modifica con los cambios en CO2.
La fluorescencia se incrementa a medida que se incrementa el CO2.
Lectura cada 10 minutos:
Permite una detección más temprana y rápida.
Viales con resinas para neutralización de antibióticos.
Precocidad en el diagnóstico del paciente.
Aumenta rendimiento.
Resinas.
Los Viales contienen resinas que tienen las siguientes ventajas:
Neutralización de los antibióticos.
Lisis de los Leucocitos por acción mecánica.
Existen 2 tipos de resinas:
Resinas de intercambio catiónico: Se unen iónicamente a los antimicrobianos cargados positivamente como los
aminoglucósidos.
Resinas absorbentes poliméricas (hidrofóbicas): Se unen a las porciones hidrofóbicas de prácticamente cualquier
antimicrobiano.
Existían botellas que antes eran de vidrio, pero hoy en día son
de un material que no quiebra para evitar derrames y accidentes
durante su transporte o en el laboratorio.
Adultos:
Con resinas que neutralizan los antibióticos.
Gran volumen de sangre: 8 - 10 mL máximo (3 - 10 mL rango), para que se representativo.
Mayor volumen de Muestra Mejor recuperación.
Pediátricos:
Medio aeróbico especial.
Con resinas que neutralizan los antibióticos.
Volumen óptimo: 1 – 3 mL (0.5 – 3 mL rango), porque generalmente se toman de recién nacidos.
La formulación del medio y los algoritmos específicos mejoran la detección de los patógenos de los niños
(Haemophilus spp., Neisseria spp.).
Consideraciones generales.
No escribir sobre el código de barras de los viales.
No escribir los datos del paciente con lápiz que se borre.
En cada toma de muestra de hemocultivos se debe elegir un sitio de punción diferente. Se debe tomar en el mismo
minuto, de diferentes sitios y en forma aséptica: por ejemplo, si es sangre periférica, cada muestra debe ser de un
brazo distinto, pero nunca del mismo. ¿En qué ayuda esto?:
En un frasco se puede encontrar Staphylococcus coagulasa negativo y la otra botella (del otro brazo) puede estar
negativa, por lo cual el examen podría estar negativo y lo que se desarrolló fue por contaminación al hacer la
punción.
Si en ambas botellas se encontró Staphylococcus coagulasa negativo, para saber si se debe informar como positivo
o negativo (contaminación) se debe considerar el antibiograma: si se obtienen distintas sensibilidades es
contaminación (ambas se informan como contaminadas), pero si es el mismo para ambas muestras quiere decir
que probablemente este agente está produciendo la infección. Esto quiere decir que el antibiograma permite
asegurar si se trata de una bacteriemia verdadera o no.
No exponer los viales a la luz directa del sol y mantenerlos a temperatura ambiente.
Nunca sobrepasar el volumen máximo de llenado.
Siempre llegar al volumen mínimo.
Lo ideal es completar el volumen óptimo.
Laboratorio.
ENDOCARDITIS BACTERIANA.
El diagnóstico de la endocarditis bacteriana es el hemocultivo. Como se dijo anteriormente, el hemocultivo sirve para
el diagnóstico de varias infecciones: fiebre de origen desconocido; neumonía; pielonefritis, por lo cual el agente se
encontraría en el urocultivo y en el hemocultivo; también en la artritis séptica probablemente el hemocultivo sería
positivo (si es que se utiliza), además de en la muestra de líquido articular; infecciones de prótesis y válvulas cardiacas.
En todas las infecciones de prótesis Staphylococcus coagulasa negativo adquiere importancia. Por lo tanto, si hay o
se sospecha de una infección de válvula protésica y en el hemocultivo se encuentra SCN no se puede mirar en menos,
y si está presente en las 2 o 3 botellas y con la misma sensibilidad a antibióticos, es el agente causante.
En la endocarditis bacteriana o infecciosa, en el ecocardiograma el médico observa una “vegetación”.
Los principales agentes etiológicos de endocarditis son:
Válvula nativa Streptococcus grupo viridans y Enterococcus.
Válvula protésica Staphylococcus coagulasa negativo (epidermidis).