UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
PERÍODO ACADÉMICO
ASIGNATURA
NOMBRE DEL DOCENTE
FECHA
NÚMERO DE PRÁCTICA
NOMBRE DE LOS
ESTUDIANTES.
LUGAR DE LA PRÁCTICA E-302
TÍTULO DE LA UNIDAD
TEMA DE LA PRÁCTICA
SUB-TEMA
RESULTADO DE APRENDIZAJE.
.- Reconocimiento e identificación bioquímica y fisiológica de una cepa de Candida albicans
OBJETIVO GENERAL
Objetivo específico
CARRERA DE MEDICINA
GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO
Abril 2019 - Agosto 2019
Microbiología II SEMESTRE: 4to PARALELO: A
Dr. Francisco Javier Ustáriz Fajardo
02/07/2019 (Grupo 1) y 09/07/2019 (Grupo 2)
No 7 HORA: 16:00 - 18:00 DURACIÓN: 2 horas
GRUPO 1 GRUPO 2
AGREDA TORRES HENNDRY ALFREDO OCHOA BARRIGA ALEJANDRA RAQUEL
ARMAS GARCES JANETH ARACELY ORDOÑEZ GALLARDO PAULA NICOLE
ARROBO HERRERA JORELY ESTEFANIA PACHECO FAJARDO GISELLE VANESSA
BARRAGAN SILVA CLAUDIA DAYANA PANCHI ROCHA DAYANA MISHELL
CALLE NOROÑA KARLA CRISTINA PEREZ REYES MICAELA SALOME
CAMBISACA LOPEZ LISBETH DAYANA PINZON ARMIJOS MIREYA ELIZABETH
CAMPOVERDE SEMITERRA DAVID ANTHONY RAMOS VERA SHAYRA BRICETH
CASTILLO VELASCO DELFA ANGELA REYES LEGARDA ANGIE LISSETH
CHAMBA PEREZ ERIKA LISSETTE RIERA SAMPEDRO VALERIA ALEXANDRA
CHOCA HIGUERA LESSLY YESSENYA SAMPEDRO VILLAMAGUA MARIA GABRIELA
ESPINOZA VACA SARA SOFIA SILVA ARROYO JOSELYN ESTEFANIA
HERMOSA MENESES LADY YADIRA SIVISACA BONIFAZ CLARA NOEMI
HIDALGO VELA JOSSELYN NICOLE SULQUI VALLE ADRIANA IVETTE
HUEBLA PACA ALEX MIGUEL TIXI SANCHEZ GRACE PRISCILLA
LEMA YUNGAN YADIRA NATHALY TOALOMBO LLUGSA HELEN PAMELA
LIMA ARIAS DARIO ESTEBAN VASQUEZ PEREZ DIEGO LENIN
LOPEZ FLORES ESTEFANY GABRIELA VELASQUEZ GARCIA GEOVANNA ISABEL
MALES CAIZA CINTHYA JHOANA VELASTEGUI YANEZ ANDREA CAROLINA
NUÑEZ MARIÑO HUGO JONATHAN ZAMBRANO BAQUE WASHINGTON
JORDANO
BACTERIOLOGÍA, OTRAS BACTERIAS DE IMPORTANCIA MÉDICA
Estudio de hongos Levaduriformes
Aislamiento e identificación de Candida albicans
.- Reconocer e identificar una cepa Candida albicans
- Conocer los diferentes medios de cultivos selectivos y
pruebas bioquímicas y fisiológicas utilizadas para el
reconocimiento e identificación de Candida albicans
FUNDAMENTO TEÓRICO:
Los hongos
Son organismos eucarióticos caracterizados por la formación de hifas, que son estructuras
filamentosas constituidas por una sucesión de células intercomunicadas, que en conjunto
constituyen el micelio. Dichas estructuras (micelio) representan la forma invasiva de los
hongos patógenos y son las que se observan en las preparaciones histológicas del tejido
infectado, aunque algunos hongos miceliares pueden esporular también en el tejido invadido
lo que facilita su diseminación. Sin embargo, un grupo importante de hongos patógenos no
producen hifas y se caracterizan por presentar únicamente estructuras unicelulares
(levaduras).

Un número importante de hongos, de producir enfermedades en el hombre y en los animales

que pueden traducirse en alergias o infecciones fúngicas (micosis). Muchos hongos tienen un
ciclo de vida característico con diferentes formas de reproducción que pueden presentarse
como organismos separados con diferente morfología (pleomorfismo).

El Género Candida comprende más de 150 especies, siendo Candida albicans la más común.
Este microorganismo se aísla como comensal en cavidad bucal con una frecuencia que oscila
entre el 30 al 50% de la población.

Candida albicans es un hongo levaduriforme, sin embargo, en tejidos infectados también se

han identificado formas filamentosas y pseudohifas, que son células alargadas de levadura
que permanecen unidas entre si. Esta especie tiene una marcada tendencia a formar esporas
grandes de pared gruesa, denominadas clamidosporas, sobre todo cuando se cultivan en
medio especial como Agar Harina de Maíz; asimismo, tiene la capacidad para producir tubos
germinales.

Reproducción
Las levaduras o blastosporas se reproducen asexualmente por un proceso específico de
división celular conocido como gemación.Este proceso de división implica la producción de
nuevo material celular proveniente de la superficie de la blastospora. Cuando el brote o yema
ha crecido y se encuentra en su tamaño óptimo, se suscita la división celular y se forma un
tabique o septo entre las dos células

El aislamiento Candida albicans en cultivos es imprescindible para establecer:

.- la identificación de Candida al nivel de género y especie,
.- para efectuar las pruebas de susceptibilidad “in vitro” a los antifúngicos,
.- así como para llevar a cabo estudios moleculares

Especies asociadas a candidosis o candidiasis

Se han reportado más de 17 especies patógenas pero el 90% de las infecciones se atribuyen
a:
C. albicans, C. krusei, C. glabrata, C. parasilopsis, C. tropicalis.
 Antes de realizar la identificación de C. albicans a través de las pruebas rápidas, se debe:

.- sembrarla en medio de cultivo Agar Dextrosa Sabouraud, bajo condiciones de aerobiosis a

37% por 24 a 48 horas,
.- para aislarla de las muestras clínicas que siempre llevan bacterias se agregan
antimicrobianos como el Cloranfenicol al medio.

.- se observará el crecimiento de las colonias levaduriformes

Morfología Colonial

.-En Agar Sabouraud o en otros medios de cultivo similares, las colonias que crecen son
lisas, suaves, húmedas, de color y aspecto cremoso.

.-Estas colonias tienen un tamaño que oscila entre 1,5 y 2 mm de diámetro, con aspecto de
levadura, de consistencia blanda y rápidamente proyectan filamentos hasta la
profundidad del agar.

.- Después de 4-5 días se percibe un olor característico de levadura

Las especies de Candida crecen bien en medios de cultivo con agar, peptona, dextrosa,
maltosa o sacarosa. Las colonias muy pequeñas aparecen en un lapso de 24 a 36 horas
También crecen rápidamente en otros medios enriquecidos comunes como agar sangre y
chocolate dando colonias de aspecto blanquecino y cremoso, y con frecuencia de aspecto
estrellado.

Características microscópicas del hongo

.- C. albicans suele presentarse como una célula oval levaduriforme de 2 a 4 micras,

con paredes finas;

.- sin embargo, en tejidos infectados también se han identificado formas filamentosas

de longitud variable, con extremos redondos de 3 a 5 micras de diámetro y

.- pseudohifas, que son células alargadas de levadura que permanecen unidas entre sí.
La apariencia microscópica de todas las especies de Candida es similar; todas las levaduras
son Gram positivas, pero en algunas ocasiones la forma de las blastosporas puede variar de
ovoide a elongada o esférica. Microscópicamente,C. albicans presenta dimorfismo, el cual es
una transformación de la forma ovoide de las blastosporas (levaduras) gemantes a hifas.

Métodos para la observación microscópica

Hidróxido de potasio (KOH)

Disuelve rápidamente las células permitiendo digerir material proteico, observando con mayor
nitidez los elementos fúngicos, su efecto de clarificar puede incrementarse al calentar a la
llama ligeramente la preparación.
Adicionalmente, se puede emplear colorantes para pigmentar la pared de los hongos y
mejorar la visualización. La observación de hifas, permite sugerir la presencia de invasión
micótica.

Coloración Gram

Es útil para observar blastoconidias y pseudomicelios de las especies del género Candida,
Malassezia y Cryptococcus, las cuales son Gram positivas con variaciones en la intensidad
de la coloración.
Las pruebas fisiológicas para identificación Tubo germinativo permite diferenciar las especies
de Candida albicans de las no albicans.

1) Filamentización en Suero: se toma una pequeña porción de la colonia con un asa de

platino esterilizada y se siembra en 0,5 ml de suero humano, se incuba a 37ºC por 2 horas, al
cabo de las cuales, se observara microscópicamente (con objetivo de 40X) la formación de
un tubo germinal sin constricción en su punto de origen y con forma característica de "espejo
de mano".

2) Formación de Clamidosporas: se siembra una parte de la colonia en el medio Bilis-Agar o

Agar Harina de Maíz con aguja de inoculación esterilizada, incubando en medio a 28º C por
48 a 72 horas en condiciones de aerobiosis.
Se observara microscópicamente la formación de esporas asexuales, de paredes gruesas y
refringentes, llamadas clamidosporas, que pueden estar intercaladas o en posición terminal
de las hifas tabicadas o septadas.

3) Resistencia a la Cicloheximida: se siembra por estrías en el medio de Mycosel parte de

una colonia de la cepa y se incuba a 28ºC por 3 a 5 días.
Se observará el crecimiento de C. albicans, especie que crece en este medio de cultivo, ya
que contiene cicloheximida en su composición.

4) Aislamiento en medio Chromogenic Candida Agar (CCA) para el aislamiento e

identificación de especies de Candida, en la cual se siembra parte de la cepa en estudio en
CCA, se incuba a 37ºC por 24 a 48 horas, al cabo de las cuales se observara el crecimiento
de las colonias color verde características de C. albicans, que la diferencian de otras especies
de Candida.

5) Desarrollo a 42°C
C. albicans y C. dubliniensis tienen comportamiento fisiológico y morfológico similar y la
prueba que los va a diferenciar en el laboratorio de microbiología es el desarrollo a 42°C en
agar papa dextrosa.
Procedimiento Sembrar la cepa aislada en tubo o placa Petri que contenga agar papa
dextrosa e incubar a 42°C por 48 horas.
Interpretación Positivo: C. albicans con desarrollo óptimo.
Negativo: C. dubliniensis sin desarrollo.

Procedimiento

.- Observación microscópica: Tinción de Gram

KOH + safranina
.-Observación macroscópica
Cultivo en : Agar Sangre
Agar Sabouraud
.- Las pruebas fisiológicas para identificación Tubo germinativo permite diferenciar las
especies de Candida albicans de las no albicans.
. Filamentización en Suero
 Equipos Materiales Reactivos
Infocus, computadora Gorro, mandil, mascarilla, guantes, Reactivos para tinción de
Campana de Flujo Laminar lentes. Gram
Autoclave Placas de Petri Agar Sangre
Mechero de Bunsen Asa de platino Agar Sabouraud
Microscopios Aguja de Platino Solución Salina
Estufa Portaobjetos Agua destilada
cubreobjetos Aceite de inmersión
Palillos de madera Alcohol
Tubo tapa roja
Jeringa
Algodón

Material Biológico:
Cepa de C. albicans
Suero sanguíneo

RESULTADO (Gráficos, cálculos, etc.)

(Se refiere a lo ejecutado en la práctica)
OBSERVACIONES
CONCLUSIONES
DEBERES PARA LOS ESTUDIANTES

1.- Describa los resultados de las técnicas de coloración, cultivos y de prueba fisiológica realizada
para la identificación de Candida albicans.
Exámen microscópico: Se observan células redondas u ovaladas de tres a siete micras de diámetro, que se
reproducen por blastoconidias y forman pseudomicelio en la mayoría de las especies.
Cultivo Sabouraud dextrosa: Se caracterizan por presentar colonias cremosas de color blanco amarillento,
lustrosas, poco elevadas y de bordes bien definidos.
Pruebas fisiológicas:
- Tubo germinativo: Permite diferenciar las especies de Candida albicans de las no albicans.
Procedimiento
Suspender un inóculo de la cepa pura de Candida con 24 horas de desarrollo en 0,5 mL de suero humano o
de conejo. Incubar a 35 – 37 ºC por 2h y 30 min. Colocar 2 ó 3 gotas de la suspensión en una lámina
portaobjeto y cubrir con lámina cubreobjeto y observar al microscopio con objetivo de 40X Interpretación:
La prueba es positiva al visualizar una estructura elongada que se origina apartir de la levadura. Realizar
esta prueba empleando cepas controles en paralelo a la cepa en estudio.
Control positivo: C. albicans.
Control negativo: C. glabrata.
Desarrollo a 42 ºC
C. albicans y C. dubliniensis tienen comportamiento fisiológico y morfológico similar y la prueba que los va a
diferenciar en el laboratorio de microbiología es el desarrollo a 42 ºC en agar papa dextrosa.
Procedimiento
Sembrar la cepa aislada en tubo o placa Petri que contenga agar papa dextrosa e incubar a 42 ºC por 48
horas.
RECOMENDACIONES
BIBLIOGRAFÍA
1.-Picazo, J.; Prieto,J. (2016). Compendio de Microbiología, 2.a edición.
2.-Ordoñez, S. (2014). Guías prácticas para los laboratorios de bacteriología clínica
4.-Bailey/Scott (1992) Diagnóstico Microbiológico, 7ª edición
5.-http://www.ins.gob.pe/insvirtual/images/otrpubs/pdf/Manual%20Hongos.pdf
6.https://www.actaodontologica.com/ediciones/2002/1/algunas_consideraciones_candida_albicans.asp
7.- https://www.actaodontologica.com/ediciones/2006/3/pruebas_rapidas_candida_albicans.asp
8.- http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/micologia/candidosis.html
9.- https://www.fba.org.ar/panel-gestion/InformeResultado/MI/mi32.pdf

Dr. Wilson Nina Dr. Francisco J Ustáriz Fajardo Ing. Eliana De la Torre
DIRECTOR DE CARRERA DOCENTE RESPONSABLE DEL LABORATORIO
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE MEDICINA
GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

PERÍODO ACADÉMICO Abril 2019 - Agosto 2019

ASIGNATURA Microbiología II SEMESTRE: 4to PARALELO: B

NOMBRE DEL
Dr. Francisco Javier Ustáriz Fajardo
DOCENTE
FECHA 01/07/2019 (Grupo 1) y 08/07/2019 (Grupo 2)
NÚMERO DE PRÁCTICA No6 HORA: 16:00 - 18:00 DURACIÓN: 2 horas
NOMBRE DE LOS GRUPO 1 GRUPO 2
ESTUDIANTES. ARIAS TOCTAQUIZA WASHINGTON GEOVANNY MINAYA SANTOS ROXANA VANESA
BARRAGAN CAMPOS JESSYCA VIVIANA MOCHA ALAVA ELIANA ESTEFANIA
BASTIDAS PARRA DAYANA STEPHANIE MORA AMOROSO EMILIA GISSELLE

BRAVO GARCIA DAHIRA ABIGAIL OLIVO ACURIO ANGIE JAZMIN

CABRERA VALDIVIEZO ELIZABETH ESTEFANIA PAGUAY GAIBOR CHRISTIAN ALEXANDER

CACUANGO TORRES RUBI MARIBEL PAREDES LEDESMA VALERIA ESTEFANIA

CARDOSO TOTOY DARWIN RODRIGO RAMOS BORJA JHOANNA LISBETH

CHAFLA QUISHPI BYRON ALEXANDER REQUELME VERA MARIA JOSE

CIFUENTES ROSERO ESTHEFANNY MELISSA SALAS OCHOA ERIK SHOEL

ESPAÑA CUASAPAZ KARLA ESTRELLA SANDOVAL VELA ALEXANDER DAVID

ESPINOZA MORANTE ALEXANDER JOSE SUAREZ MUCARSEL MIKAEL SEBASTIAN

GADVAY LEON BRIGGITTE JAMILETH TANICUCHI CANGAS JEFFERSON

ALEXANDER
GUERRERO MOLINA PABLO DAVID TENEMASA TENE DAMARIS ESTEFANIA

JARAMILLO NIEVES ANGGIE AYMETH VALENTE ANILEMA NIDIA PRISCILA

JORDAN FREIRE DAYANNA FERNANDA VELA JIMENEZ NAYDA MISHEL

LEMA LLUAY MARJORIE LISSETH VELOZ JARA VALERIA ESTEFANIA

LEON IZA KAREN LISBETH VINUEZA LOAIZA TALISHEVA MARGARITA

MANTILLA CADENA RICARDO DAVID YACELGA MEJIA ADRIAN OMAR

MATZA ALDAS NOEMI MONSERRATH ZURITA AREVALO WALDO JEANPIERRE
MESA SILVA EMILY SARIA ZURITA PEREZ ALEXA GEOVANNA

LUGAR DE LA PRÁCTICA E-303

TÍTULO DE LA UNIDAD BACTERIOLOGÍA: BACILOS GRAM NEGATIVOS AEROBIOS
TEMA DE LA PRÁCTICA Identificación bacteriana. Género Salmonella

SUB-TEMA
RESULTADO DE APRENDIZAJE.
.- Reconocimiento e identificación bioquímica de una cepa de Salmonella spp

OBJETIVO GENERAL .- Reconocer e identificar una cepa Salmonella spp

Objetivo específico .- Conocer los diferentes medios de cultivos selectivos y pruebas

bioquímicas utilizadas para el reconocimiento e identificación de
Salmonella spp