SEMINOGRAMA

Q.F.B. FABIOLA MALDONADO

CEJUDO
ANÁLISIS DEL SEMEN ESTANDARIZADO
• ESPERMOGRAMA
• ESPERMIOGRAMA
• ESPERMATOGRAMA
• SEMINOGRAMA (OMS)
• ESPERMOCITOGRAMA
• ESPERMOCINETOGRAMA
• ESPERMATOBIOSCOPIA DIRECTA
 BIBLIOGRAFÍA
• MANUAL PARA EL ANÁLISIS BÁSICO DE SEMEN: UNA
GUÍA PRÁCTICA
– EDITORES
• Biol. Gerardo Cerezo Parra
• Dr. José Antonio Castilla Alcalá
• Biol. Hugo Manuel Rodríguez Hernández

– EDITORIAL PRADO

• MANUAL PARA EL EXAMEN Y PROCESAMIENTO DEL

SEMEN HUMANO
– OMS (5ta EDICIÓN/2010)
UTILIDAD DEL ESTUDIO
 UTILIDAD DEL ESTUDIO
• Para evaluar:

– la fertilidad masculina.
– Análisis del semen postvasectomía
– Análisis forenses

Consiste en :
• una evaluación macroscópica
• y microscópica del semen.
 Evaluación andrológica
✓ Historia clínica • EXPLORACIONES
✓ Exploración física COMPLEMENARIAS:
✓ Seminograma
– Pruebas de función
espermática
– Determinaciones
hormonales
– Ecografía y USG doppler
escrotal
– Ecografía transrectal
– Análisis de orina post
orgasmo.
ESPERMATOGÉNESIS O ESPERMIOHISTOGÉNESIS

❖ Es el aumento o crecimiento, maduración,

transformación y la liberación del empaquetamiento
del ADN en los espermatozoides en la pubertad.
❖ Mecanismo encargado de la producción de
espermatozoides.
❖ Proceso llevado a cabo en las gónadas, activado por la
hormona GnRH sintetizada en el hipotálamo.
Tiene una duración
aproximada de 62 a
75 días en la especie
humana, y consta de
res fases o eapas:

1ª MITOSIS O
ESPERMAOGÉNESIS
2ª MEIOSIS (I y II)
3ª
ESPERMIOGÉNESIS
 FISIOLOGÍA DEL
ESPERMATOZOIDE
HUMANO

CARÁCTERÍSTICAS DEL ESPERMATOZOIDE

Medida: 45 a 50 um
EL ESPERMATOZOIDE TIENE 4 PARTES PRINCIPALES:
CABEZA: 1. Acrosoma o vesícula acrosomal
2. Núcleo que contiene ADN altamente
compactado
CUELLO: 3. La pieza intermedia que contiene una
gran cantidad de mitocondrias.
FLAGELO 4. El flagelo que aporta la energía para la
movilidad. Contiene axonema y
proteínas motoras como la dineína.
FISIOLOGÍA DEL ARM Túbulos seminíferos Espermatogénesis (c.
de los testículos sertoli)
Epidídimo Maduración de
espermatozoides
Conducto deferente Propulsa los
espermatozoides a los
conductos
eyaculadores
Vesículas seminales Proporciona
nutrientes a los
espermatozoides y
líquido
Próstata Proporciona enzimas y
proteínas para la
coagulación y la
licuefacción
Glándulas Agrega moco alcalino
bulbouretrales para neutralizar la
acidez prostática y
vaginal
 SEMEN HUMANO
• Del griego sperma (semilla)
• Es un líquido viscoso y blanquecino que es
expulsado a través del pene durante la
eyaculación. Está compuesto por:
– Espermatozoides
– Plasma seminal
– Otras células presentes

• Durante la eyaculación se distinguen 4 diferentes

fracciones.
 FRACCIONES DEL EYACULADO
• 1ª fracción (Pre-eyaculatoria): es de consistencia
mucosa, transparente y presenta pocos
espermatozoides; procede de la glándula de
Cowper y Litré, su función consiste en limpiar y
hacer más resbaladizo el canal de la uretra.

• 2ª Fracción (Previa): Es fluida y no presenta

espermatozoides ya que tiene un pH ácido, esto
debido a su elevada concentración de fosfatasa
ácida y ácido cítrico; procede de la prósata.
 FRACCIONES DEL EYACULADO
• 3ª Fracción (Principal): presenta elementos
líquidos gelatinosos, procede del epidídimo y
conductos deferentes, es la fracción que
contiene la mayor cantidad de los
espermatozoides.

• 4ª Fracción (Terminal): Es de consistencia

gelatinosa; procede de las vesículas seminales,
tiene un pH alcalino y fructuosa, razón por la
cual todavía tiene espermatozoides presentes.
OBTENCIÓN DE LAS
MUESTRAS DE SEMEN

FASE PREANALÍTICA
 Métodos de obtención
• Por masturbación.

• Con condón especial de goma o poliuretano

sin lubricantes no tóxico (sin espermicidas).

• Nota: el coito interrumpido no es recomendable para

obtener la muestra ya que suele perderse la primera
porción del eyaculado y las secreciones vaginales
pueden contaminar la muestra de semen.
Otros métodos para obtener el semen:
• Electroeyaculación:
– SE UTILIZA EN PACIENTES CON PARAPLEJÍA Y
CON ANESTESIA LOCAL.

• Uso de medicamentos: Sildenafil (problemas

de erección).
 Instrucciones al paciente para obtener la
muestra de semen por masturbación
1. Recolectar la muestra con manos y pene aseados.

2. Tener de 2 a 7 días de abstinencia sexual (no más de 7 y no menos de 48

hrs)

3. Eyacular dentro del recipiente de plástico de boca ancha y tapa

hermética estéril, no tóxico el cual deberá estar entre 20 a 37 °C.

4. La muestra se debe obtener completamente (las 4 fracciones).

5. Entregar la muestra antes de la hora en que se obtuvo.

6. Anotar la hora de recolección y de recepción.

7. Mantener la muestra a 37 °C hasta la realización del análisis.

 Transporte de la muestra
• Debe ser transportada al laboratorio en un
tiempo máximo de una hora conservándola de 20
a 37 °C.
• No exponerla a fluctuaciones de T.
• Transportar el recipiente en posición vertical con
la tapa hacia arriba.
• Es recomendable tratar las muestras como
potencialmente infecciosas y hacer la recepción
con guantes.
Análisis macroscópico
del semen
FASE ANALÍTICA
Pruebas que se determinan en el
análisis macroscópico del semen
1. COÁGULO DEL SEMEN

2. LICUEFACCIÓN

3. VISCOSIDAD

4. APARIENCIA

5. VOLUMEN

ANÁLISIS QUÍMICO MACROSCÓPICO

6. pH
 1. COÁGULO DEL SEMEN
FUNDAMENTO TEÓRICO ANORMALIDAD

Sg I y Sg II Zn(en secreción
(en vesícula seminal) prostática Anormalidades
congénitas de las
vesículas
seminales.

Evaluación del coágulo seminal:

Éste se debe observar minutos después de la obtención
antes de los 15 minutos.
 2. LICUEFACCIÓN DEL SEMEN
• ¿Cómo ocurre la licuefacción?
– Es un proceso de proteólisis catalizado por activador de
plasminógeno, PSA, proteasas, peptidasas y a-amilasas. Éstas se
activan cuando se unen al Ca+ presente en la 1ª porción del
eyaculado y su actividad óptima es a un pH 6.8 – 8.8 y actúan
degradando a las proteínas del coágulo*

• ¿Qué indica una licuefacción aumentada?

– Representa un marcador en procesos patológicos de las
glándulas accesorias sexuales,
– además un semen con licuefacción incompleta inmoviliza
parcialmente al spz.

• ¿En qué tiempo debe licuar una muestra?

– De 15 a 60 min
 Evaluación de la licuefacción
(procedimiento de laboratorio)
 3. VISCOSIDAD

• La viscosidad aumentada refleja función

anormal de las glándulas sexuales accesorias.
• Se clasifica de acuerdo a la longitud del
filamento en:
– Normal
– Disminuida
– Aumentada
 Evaluación de la viscosidad
(procedimiento de laboratorio)
1. Homogenizar la muestra y aspirarla con una
pipeta Pasteur liberando lentamente por las
paredes sin formar burbujas.
2. Dejar caer la muestra y observar la longitud
del filamento.
– Normal: gotas pequeñas bien definidas
– Disminuida: gotea libremente en forma de agua
– Aumentada: no forma gotas, presenta filancia
(filamento > 2 cm se considera anormal)
3. Reportar lo observado
 4. APARIENCIA
• Una muestra licuada normal tiene un color
gris opalescente homogéneo, puede parecer:
– menos opaca si la concentración de spz es muy
baja,
– Roja cuando hay hemospermia
– Amarillo intenso debido a bilirrubina o cuando el
paciente ingiere vitaminas
– Amarillento por ingesta de drogas u orina
– Verde claro debido a un proceso infeccioso
 5. VOLUMEN
• El volumen del eyaculado puede variar desde 0.5
mL hasta 5 mL.
• El manual de la OMS establece que > ó = a 1.5 mL
es una cantidad normal.

• PROCESOS PATOLÓGICOS:
– HIPOSPERMIA: obstrucción causada por una
infección, alteración congénita de los vasos
deferentes, eyaculación retrógada.
– HIPERESPERMIA (>6 mL): procesos inflamatorios de
próstata y/o vesículas seminales.
– ASPERMIA: es la NO producción de eyaculado.
 EVALUACIÓN DEL VOLUMEN
(procedimiento de laboratorio)
1. Pesar el recipiente
vacío con la etiqueta
2. Pesar recipiente +
muestra
3. Se resta el valor del
peso del recipiente
vacío – recipiente +
muestra
4. Se obtiene la
diferencia de peso y
el resultado se da en
gramos (1 g = 1 mL)
 6. pH
• El pH del semen es determinado por la cantidad
de iones H contenidos en las secreciones de la
próstata (ácidas), de las vesículas seminales
(alcalinas) y de la evaporación del CO2 después
de la eyaculación.
• Un semen recién eyaculado el valor del pH se
encuentra entre 7.2 – 8, sin embargo con el
tiempo se alcaliniza por la pérdida de CO2.
• PROCESOS PATOLÓGICOS
– pH ácido (<7): prostatitis
– pH alcalino (>8): vesiculitis, epididimitis
 EVALUACIÓN DEL pH
(procedimiento de laboratorio)

1. Se debe medir inmediatamente después de

la licuefacción.
2. Se homogeniza la muestra de semen y se
toma con pipeta Pasteur una gota pequeña
de semen.
3. Colocar la gota con pipeta Pasteur sobre una
tira reactiva para pH.
4. Comparar el color de la tira con el control
que viene en la caja de las tiras reactivas.
ANÁLISIS MICROSCÓPICO DEL SEMEN
• FASE ANALÍTICA
Parámetros del examen microscópico

Movilidad Vitalidad
espermática espermática

Concentración Morfología
espermática espermática
Aseguramiento de la calidad

APLICABLE PARA
MOVILIDAD,
VITALIDAD Y
MORFOLOGIA
 EJEMPLO 1 DE APLICACIÓN DE LA TABLA:
CONTEO 1 CONTEO Conteo total de spz =
2
200 por duplicado:
PR= 30 % PR = 50 %
NP = 5 % NP = 15 %
IM = 65 % IM = 35 %
La categoría más común del 1er conteo son IM, por lo
tanto calculo el promedio:
(65% + 35% ) / 2 = 50 % y calculo la diferencia (resta) :
65% – 35% = 30%. Ir a la tabla:
De acuerdo a la tabla tiene una diferencia de 10%. Esta
diferencia excede el criterio del cuadro. Los resultados
son descartados y se vuelve a realizar nuevas alícuotas.
 EJEMPLO 2 DE APLICACIÓN DE LA TABLA:
CONTEO 1 CONTEO Conteo total de spz =
2
200 por duplicado:
PR= 37 % PR = 28 %
NP = 3 % NP = 6 %
IM = 60 % IM = 66 %
La categoría más común del 1er conteo son IM, por lo
tanto calculo el promedio:
(60% + 66% ) / 2 = 63 % y calculo la diferencia (resta) :
66% – 60% = 6 %. Ir a la tabla:
De acuerdo a la tabla tiene una diferencia de 10%. Esta
diferencia está dentro del criterio del cuadro. Los
resultados son aceptados y se reportan los promedios.
MOVILIDAD ESPERMÁTICA
 ASPECTOS BÁSICOS DE LA MOVILIDAD ESPERMÁTICA

• La estructura básica del

espermatozoide consta
de dos partes:
– Cabeza
– Flagelo o cola

– LA MOVILIDAD DEL
SPZ ES UNA
CARÁCTERÍSTICA
CRÍTICA PARA QUE SE
LLEVE A CABO LA
FERTILIZACIÓN Y ES EL
PARÁMETRO MÁS
UTILIZADO PARA
EVALUAR LA CALIDAD
DEL SEMEN.
ANTES DE ANALIZAR LA MOVILDAD ES IMPORTANTE:
Saber si la muestra de semen ha sido expuesta a:
✓ cambios bruscos de T
✓Residuos tóxicos en el recipiente
✓Luz UV
✓Cambios de pH
✓Varones que no han eyaculado por periodos
largos
✓Homogeneizar 10 veces aproximadamente la
muestra muy suavemente dentro del recipiente
sin hacer burbujas
✓Preparar una alícuota: CANTIDAD TAMAÑO DEL
CUBREOBJETOS

ES IMPORTANTE QUE LA EVALUACIÓN SE 10 uL 22 x 22 mm

REALICE A T 22 – 37 ºC. 11 uL 21 x 26 mm
SE DEBEN EVALUAR 2 CONTEOS EN 2
ALÍCUOTAS Y SE DEBE ESPERAR A QUE LA 6.5 uL 18 x 18 mm
MUESTRA SE ESTABILICE Y LEER CADA UNA Se debe estabilizar la
CON OBJETIVOS DE 40 x. muestra 1 min a 37 ºC
 CLASIFICACIÓN DE LA MOVILIDAD ESPERMÁTICA
La movilidad espermática se clasifica en porcentaje, de
acuerdo a las siguientes categorías:

Movilidad Spz con movimiento activo, lineal o en

Progresiva círculos grandes independientemente de
(PR):
la velocidad
Movilidad No TODOS los patrones de movilidad con
Progresiva ausencia de progresión, p.ej: nado en
(NP):
círculos pequeños, únicamente se
observa el batimiento del flagelo
Inmóviles Sin movimiento
(IM):
 Procedimiento para la evaluación de la
movilidad
1. Se deben contar mínimo
200 spz COMPLETOS y
mínimo 5 campos
diferentes.
2. Contar primero en
c/campo spz PR, después
NP y finalmente IM.
– PR = 80 / 200 x 100 = 40 %
– NP = 30 / 200 x 100 = 15 %
– IM = 90 / 200 x 100 = 45 %
 Aglutinación espermática
Unión entre sí de al menos 10 spz principalmente
debido a la presencia de Ac antiespermáticos
multivalentes.
Tipo de unión:
Cabeza – cabeza
Cola – cola
Pieza intermedia – cola
De dos o más spz móviles, lo que dificulta la
progresividad del movimiento.
Es evaluada al determinar la movilidad.
Vitalidad espermática
• La membrana de una célula muerta no está
intacta. Esto significa que los colorantes
podrán entrar en el núcleo de un spz muerto.
• Una tinción supravital es la eosina.
 Procedimiento
1. La muestra de semen deberá estar
completamente licuada
2. Colocar 50 uL de semen homogeneizado y 50 uL
de la solución de eosina – nigrosina e incubar 30
segundos en un tubo cónico pequeño
3. Transferir de 12 a 15 uL de la mezcla a un
portaobjetos limpio y hacer un frotis uniforme
sobre el área completa del portaobjetos.
4. Secar al aire y evaluar el mismo día.
5. Examinar 200 spz y expresar el % de spz vivos.

% vitalidad = (# Spz vivos / # Total spz) x 100 %

 Concentración espermática [spz]
• Parámetro que refleja la eficiencia del proceso
espermatogénico, así como del funcionamiento
de todas las estructuras anatómicas que
promueven la formación del eyaculado. Si es
adecuada, se logrará una fertilización exitosa.

La [spz] puede variar según:

• La edad, sector geográfico y época del año;
Infecciones bacterianas y virales relacionadas con
el aparato genitourinario;
• Exposición a fármacos y químicos tóxicos.
 DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN ESPERMÁTICA
(Preparación de la dilución)

1. Homogeneizar la muestra de semen

para la toma de la alícuota.
2. Observar 10 uL de semen en 40 x.
3. Contar el número total de spz por lo
menos en 3 campos y obtener la
media. (ir a la tabla)
IMPORTANTE:

Para diluciones 1:20 y 1:5 se deben de contar filas completas (20

nL). Si se cuenta 200 spz y no se ha terminado la fila (20 nL) es
necesario terminar el conteo de la fila para que sea aplicable la
fórmula. el mismo número de filas que se cuente en la cámara A, se
deberá contar en la cámara B.

Para bajas diluciones (1:2) se debe de contar cuadrículas

completas (100 nL). Aunque se hayan contado 200 spz antes de
terminar la cuadrícula, se debe de terminar el conteo de la
cuadrícula.

En bajas concentraciones, cuando el conteo es menor a 25 spz en

cada cámara, la concentración puede ser reportada como < 56,000
spz/mL con el comentario: “No se pudo determinar la [spz] exacta
porque se encontraron pocos spz”.
4. Realizar la dilución correspondiente
por duplicado (en 2 tubos por
separado).
5. Homogeneizar la dilución y llenar
con 10 uL en cámara A (dil 1) y B (dil
2). Evitando hacer burbujas en el
llenado de la cámara.
6. Contar como mínimo 200 spz
completos en cada cámara (A y B).
 Conteo en la cámara de Neubauer
(Hemocitómetro)
• Empezar el conteo de spz en la cuadrícula
central (no. 5) con el objetivo del microscopio
40 x ó 20 x.

• Recuerda que a la tabla anterior de diluciones

se decide qué área se cuenta:
– FILAS (20 nL)
– CUADRÍCULAS COMPLETAS (100 nL)
– CÁMARA COMPLETA (900 nL)
Se realiza
tradicionalmente en la
cámara de Neubauer
empezando por
cuadrícula central (5).
7. Obtener la suma y diferencia de los 2 conteos de acuerdo al
sig.
AUSENCIA DE ESPERMATOZOIDES
CRIPTOZOOSPERMIA: Cuando no hay spz en el
eyaculado pero si son observados tras
centrifugación.
• Técnica de reproducción asistida ICSI

AZOOSPERMIA: Cuando hay ausencia de spz

incluso tras usar un método de análisis validado.

• OBSTRUCTIVA. Biopsia. Estudia la existencia o no de spz.

• EYACULACIÓN RETRÓGRADA. Técnica de reproducción
asistida ICSI
MORFOLOGÍA ESPERMÁTICA