Informe de Laboratorio Análisis Instrumental

Informe Nº 2: Determinación de Cobre (II) con la formación

de un complejo amoniacal: cuantificación por adición patrón
Allan Cortes, Gabriela Gallardo, María Angélica Saavedra 1
1
Análisis Instrumental, Ingeniería Ambiental
Universidad de Valparaíso. Avenida Gran Bretaña 1111, Playa Ancha, Valparaíso.

Fecha de sesión de laboratorio: 20 de Agosto 2013, Fecha de entrega de informe: 27 de Agosto2013.

Palabras clave: Espectro de absorción, Cuantificación por adición patrón, Absorbancia, Complejo Amoniacal, Analito, Concentración

RESUMEN

En la práctica realizada se obtuvo un espectro de absorción del complejo de cobre amoniacal, con el fin de determinar el máximo de
absorción del complejo de Cu (II) para luego cuantificar una muestra problema por método de adición patrón para saber la cantidad de
cobre que posee. El método, adición patrón, consiste agregar concentraciones crecientes del análito que se está midiendo (muestra
problema), con lo que se obtiene una recta entre las concentraciones agregadas y sus respuestas. La concentración es estimada en el
punto de corte de la prolongación de la recta en el eje de la abscisa [1]. Con la información obtenida se puede determinar el límite de
detección y cuantificación.

1. Introducción que absorbe a una longitud de onda determinada por

La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis
más usados, y se basa en la relación que existe entre la
absorción de luz por parte de un compuesto
y su concentración. Cuando se hace
incidir luz monocromática (de una sola
longitud de onda) sobre un medio
homogéneo, una parte de la luz incidente
es absorbida por el medio y otra
transmitida, como consecuencia de la
intensidad del rayo de luz sea atenuada
desde Po a P, siendo Po la intensidad de
la luz incidente y P la intensidad del rayo
de luz transmitido.
Cada sustancia tiene su propio espectro
de absorción, el cual es una curva que
muestra la cantidad de energía radiante
absorbida, Absorbancia, por la sustancia
en cada longitud de onda del espectro
electromagnético, es decir, a una
determinada longitud de onda de la
energía radiante, cada sustancia absorbe
una cantidad de radiación que es distinta
a la que absorbe otro compuesto.
La absorbancia está relacionada con la concentración de la
sustancia, c, por la ley de Lambert-Beer, que se resume con
la ecuación: A = ε b c , donde c se expresa en mol/L, b es
la longitud del camino óptico (anchura de la célula que
contiene la disolución de la sustancia) y se expresa en cm,
y ε es la absortividad molar, propiedad característica de
cada sustancia correspondiente a la cantidad de radiación
unidad de concentración, siendo sus unidades L mol-1cm-1
Para poder aplicar la ley de Lambert-Beer es necesario
seleccionar previamente una longitud de onda puesto que
tanto A como ε varían con ella. Para ello se obtiene
previamente el espectro de absorción de la sustancia, que
consiste en una representación de los valores de
absorbancia frente a la longitud de onda expresada en
nanómetros (nm).
Del espectro de absorción puede
seleccionarse el valor de longitud de
onda para el cual la absorbancia es
máxima.
Uno de los métodos más utilizados para determinar la
concentración de una muestra problema, es el método de la
curva de calibración. Esta curva de calibración es una
gráfica que relaciona la concentración de al menos cinco
soluciones de estándar de concentraciones conocidas, con
la absorbancia de cada uno de ellos a la longitud de onda
máxima (λ max).
Una vez obtenida la gráfica se determina la función
matemática que presenta dicha recta a través del
tratamiento estadístico de regresión de los mínimos
cuadrados, la cual relaciona la absorbancia y la
concentración de un analito. La siguiente ecuación
matemática corresponde a dicha función:
A = mc + n (ecuación 1)
Donde, A: Absorbancia.
N: Intercepto de la recta
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m : Pendiente de la recta y que corresponde al producto Se agregan 3 ml de solución de cobre a 16 M, 6 ml de NH 3
entre absortividad a de la muestra y el espesor b de la (c) y agua destilada hasta aforar un matraz de 25 ml; para
cubeta. luego trazar el espectro de esta solución, configurando el
Luego se mide la absorbancia de la solución problema y se espectrofotómetro en un rango de 200- 700 nm, y de esta
interpola su valor en la gráfica o se reemplaza en la forma obtener la longitud de onda de máxima absorción.
ecuación (1), para obtener el valor de concentración del Por otro lado preparan un blanco que constará con agua
analito. La concentración de la solución problema debe destilada y amoniaco.
estar comprendida en el rango de concentración que
comprende la curva de calibración. Si la concentración de 2.2 Determinación de los volúmenes de trabajo, para la
la solución problema es menor que la concentración del adición patrón.
estándar más diluido, debe usarse el método de adición En un matraz de aforo de 25 mL se agregan 5 mL de
estándar, que consiste en adicionar un volumen muestra problema, 6 ml de NH 3 (c) y se afora. Se
determinado de un estándar concentrado a la solución determina la absorbancia, la cual deberá ser entre los
problema, antes de realizar la lectura y que permite que valores de 0,3 a 0,5, si no se logra se deberá ajustar la
esta lectura este dentro de las obtenidas para la curva de dilución y repetir el proceso.
calibración. En el caso contrario, si la concentración del Luego, en base a lo determinado, agregue un volumen de
analito es mayor que la concentración del estándar más la solución de cobre que permita el incremento en 0,2 UA
concentrado la solución problema deberá ser diluida. (unidades de absorbancia) en un volumen final de 25 mL.
El método adición patrón consiste en tomar alícuotas Preparar cuatro puntos con la información que permita
iguales de muestra, se le añade a cada una por separado construir una recta para la cuantificación de adición patrón.
cantidades diferentes de analito, excepto a una de ellas y se
realiza la medida (blanco).
La escala de concentración (x) se define con las 2.3 Determinación del límite de detección y
concentraciones de analito agregadas a las alícuotas de cuantificación.
muestra, por tanto, la concentración desconocida está dada
por el punto en el cual la línea extrapolada corta al efe de Determinar el límite de detección y cuantificación
concentración. La recta de regresión se establece mediante instrumental de esta metodología a través de la siguiente
mínimos cuadrados. formula:
En la práctica que realizaremos a continuación se
determinará la concentración de cobre presente en una
determinada muestra por espectrofotometría. Para ello se
formará previamente el complejo con amoniaco, es decir,
Cu(NH3)4+2. Por otro lado, se medirá la
absorbancia de una serie de disoluciones
cuya concentración de Cu(NH3)4+2. es Tabla nº1 Materiales y reactivos químicos utilizados junto
perfectamente conocida, a su clasificación de seguridad.
representándose el valor de absorbancia
Materiales Reactivos
obtenida frente a la concentración (recta
de calibrado). Por último, a partir del
valor de absorbancia medido para la Piseta Nombre, Tipo de sustancia.
muestra problema y utilizando la recta de Fórmula Manipulación
calibrado se determinará la cantidad de Cobre 16 M Manipulación: Sin
cobre presente en la muestra problema. Pipetas granuladas Cu indicaciones
El complejo formado Cu(NH3)4+2 presenta color particulares
azul. Para que una sustancia sea Propipeta
coloreada debe absorber luz visible,
provocándose como consecuencia Matraz de aforo 25
tránsitos electrónicos. En el caso del ml Amoniaco Es corrosivo para la
complejo amoniacal de cobre, la Concentrado piel, los ojos y los
presencia de los ligandos (NH 3) alrededor Vaso Precipitado NH3 pulmones [2].
del ion Cu+2 provoca que los orbitales 3d Manipulación bajo
Gotario campana
del Cu2+ se diferencien energéticamente,
posibilitando la absorción de un fotón de Celdas
energía adecuada que provoca un Espectrofotométricas
tránsito electrónico.

Espectrofotómetro
2. Parte experimental
2.1 Espectro de absorción del complejo de cobre Agua Destilada Manipulación: Sin
amoniacal H2O indicaciones
particulares

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Para obtener la concentración de Cu+ (II) que se debe

agregar a las muestras para obtener un aumento de 0,2 UA
se realiza la siguiente relación:

3. Resultados Donde [X] representa la concentración a agregar, y resulta

ser un valor de 3,2x10-3 M.
3.1 Espectro de absorción del Finalmente para saber cuanto volumen en mL se debe
complejo de Cobre Amoniacal agregar a la muestras para que la recta de adición patrón
tenga un incremento de 0,2 UA se realiza la siguiente
analogía

= 0,5 mL

Es decir se debe agregar un volumen de 0,5 mL de patrón

Imagen 1: Espectro de absorción complejo. para que el incremento sea de 0,2 UA.

El espectro de absorción del complejo señala que:
• Longitud de onda máxima: 624,00 nm
• Absorción máxima: 1,186 UA.
Finalmente obtengo los siguientes datos:
Tabla 2: Información de contenido que cada muestra para
construir recta de adición patrón

Aforo 1 2 3 4
Muestra 8,0 8,0 8,0 8,0
problema
3.2 Determinación de los volúmenes de (mL)
trabajo, para la adición patrón. Cu (II) 0 0,5 1,0 1,5
0,16 M
Para obtener el valor de absorbancia entre 0,3 a 0,5 UA se (mL)
diluye la muestra considerando aforar los matraces de 25 H2O 11,0 10,5 10,0 9,5
mL con 8 ml de muestra problema. destilada
Para conseguir el aumento de 0,2 UA en cada muestra (mL)
para generar la recta de adición patrón se realiza la NH3 6,0 6,0 6,0 6,0
siguiente relación para conocer que concentración de cobre
(II) posee la muestra De los cuales podemos calcular la concentración
( utilizando la relación: ) de cada muestra
y su unidad de absorcion arrojada por el espectofotometro

= 0,0193 M
Obtenemos:
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Tabla 3: Datos de concentración y unidad de absorción

Concentración de Cu+ (II) Unidad de Absorción (UA)

M Como el límite de detección es tres veces la señal-ruido
0 0,370
3,2x10-3 0,520
6,4 x10-3 0,755
9,6 x10-3 1,038

Graficamente:

Grafico1 : Concentracion versus unidad de absorción Límite de detección= 6,217 x10-3

1.2 Y como el límite de cuantificación es 10 veces la señal

ruido:
1
0.8
0.6
0.4
0.2
Límite de cuantificación = 0,0200073
0
0 0.0032 0.0064 0.0096

Donde el eje Y corresponde a la unidad de absorvancia 4. Discusión

(UA) y el eje X corresponde a concentración de cobre en
cada muestra.
R2= 0,982 indica que corresponde a una recta de forma
lineal, por lo tanto se asume una ecuación de la siguiente
forma:
A = mc + n
Absorbancia = m*concentración + n
Absorbancia =68,97X + 0,3349
Para calcular la concentración en Molar de la muestra
problema se asume que la absorbancia es igual a cero.
Por lo tanto la concentración es:
La onda de longitud máxima, y el máximo de absorción
resultaron valiosos datos entregados por el
espectrofotómetro para el estudio de la relación entre la
absorción (unidades de absorción) y la concentración
(Molar); lo cual resultó una correlación lineal
Con una onda de longitud máxima de 624,00 nm y un
máximo de absorción de 1,186 UA se pudo lograr el
estudio de la muestra problema de cobre.
Una vez obtenida la recta de adición patrón, realizada
previo análisis y relaciones matemáticas, se logró asumir el
tipo de correlación que está entre la absorbancia y la
concentración, obtenido una ecuación de recta como la
siguiente:

Absorbancia =69,97X + 0,3349

Donde 69,97 es la pendiente y 0,0349 el intercepto, con

una correlación ajustada de valor 0,982.
Entregándonos la concentración de cobre de la muestra
-3
[Muestra problema] = 4,78x10 M problema de un valor de 4,78x10-3 M.
Por lo tanto se aprende que la concentración desconocida
de alguna muestra puede ser calculada mediante la el
3.3 Determinación del límite de detección método del adición patrón.
y cuantificación.
También podemos deducir que el límite de detección de la
muestra, es decir la concentración mínima obtenida a partir
de la medida de una muestra (que contiene el analito) que
fuimos capaces de discriminar de la concentración
obtenida a partir de la medida de un blanco, ósea de una

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muestra sin analito presente es de 6,217 x10-3; y que el [1] Quiroz R. 2013.Guia de laboratorio de análisis,
límite de cuantificación de la muestra, que debe ser mayor “Determinación del Cobre (II) con la Formación de un
Complejo Amoniacal: Cuantificación por Adición Patrón”:
al de detección un valor de0,0200073, indicando que el 1-2
límite de detección debe ser menor a la especificación de la [2] State Compensation Insure Fund. 2000-2010. Seguridad en el
prueba de impurezas límite y que el límite de uso del amoniaco. Consultado a 24 agosto. 2013. Disponible
cuantificación debe ser menor a la especificación del en:
contenido / valoración de la prueba de impurezas. http://www.statefundca.com/safety/safetymeeting/SafetyMe
etingArticle.aspx?ArticleID=440
Además es necesario mencionar que la adición de volumen [3] Daniel C. Harris, Análisis químico cuantitativo, 3° Edición,
para obtener el aumento necesario en la recta fue calculado Editorial Reverté, SA, Barcelona, España, 2007.
por una regla de tres simple que fue iterado gracias a la
primera prueba no mencionada en los resultados donde al
añadir solo 5ml de muestra problema la unidad de
absorbancia no se encontraba en el rango requerido, por lo
tanto se adhiere más concentración de la que se aconsejaba
en la guía de trabajo, así también se aumentó el rango de
longitud de onda del espectrofotómetro para un resultado
más claro de la longitud de onda máxima de la muestra.

5. Conclusiones
La onda de longitud máxima, y el máximo de absorción
resultaron valiosos datos entregados por el
espectrofotómetro para el estudio de la relación entre la
absorción (unidades de absorción) y la concentración
(Molar); lo cual resultó una correlación lineal.
Datos anteriores fueron calculados gracias al
procedimiento experimental de adición patrón, técnica
consistente en medir primero la señal analítica debida a la
muestra problema, y después el aumento de señal debida
una cantidad conocida de analito añadida. Suponiendo
respuesta lineal, es posible calcular cuánto analito había en
la muestra problema y que por esto se diferencia de la
curva de calibrado, gráfico que representa el valor de
alguna propiedad frente a la concentración del analito.
Cuando se mide esa propiedad en una muestra problema,
se puede determinar su concentración a partir del gráfico.
[3]
La mayor dificultad de este método es encontrar un patrón
adecuado, con señal reproducible y que genere una señal
similar a la del analito.

Existen muchos métodos analíticos que requieren de

adicionar un patrón para poder ser cuantificados ya que los
errores pueden llegar a ser grandes, agregando el patrón la
exactitud y precisión del método se hacen muy buenos,
esto se aprecia en los valores resultantes de los límites de
detección y cuantificación
Finalmente se asimila que para el método de adición
patrón la calibración supone representar la razón entre la
señal del analito y la del estándar interno como una
función de la concentración del analito, por lo tanto puede
compensar distintos tipos de errores indeterminados y
sistemáticos

6. Referencias

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