OBJETIVOS

En la presente lección se pretende analizar los principales métodos

espectroscópicos. Así, en primer lugar, se describen algunas propiedades de la radiación
electromagnética y se definen los diferentes coeficientes de absorción y emisión de
radiación, así como la ley de Lambert-Beer.
A continuación, se describen las principales características de las espectroscopias
de rotación, vibración y electrónica, y dentro de esta última se analizan las
espectroscopias de fluorescencia y fosforescencia. Por último, se discuten algunos
aspectos relacionados con el empleo de láseres en espectroscopia.
ESPECTROSCOPÍA MOLECULAR

Es el estudio cualitativo y cuantitativo de moléculas orgánicas e inorgánicas en estado sólido,

liquido, gaseoso, en la franja del ultravioleta, visible e infrarrojo.
Permite procedimientos habituales en los campos de la biología, química, farmacia, físicas,
etc.

LA RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA Y SU INTERACCIÓN CON LA

MATERIA.

La radiación electromagnética esta compuesta de una serie de partículas denominadas fotones.

Estas partículas viajan a la velocidad de la luz c = 2.998 x 10 8m/s, y poseen una energía igual a
hv, donde h es la constante de Planck y v es la frecuencia de oscilación de los campos eléctricos y magnéticos
asociados a dicho fotón, que oscilan transversalmente a la dirección de propagación de la onda.
Los campos eléctricos y magnéticos de la radiación, sobre todo el eléctrico que es el más
intenso, interaccionan con la materia, debido al carácter eléctrico que esta posee. Los
principales fenómenos. Aunque no los únicos, originados por la interacción luz-materia, son
(ver figura 1):

- Reflexión: en un sólido especular I0 ≈ IR

- Dispersión
- Transmisión: con ángulos de incidencia diferentes de 90°, la radiación emitida es además
refractada.
- Absorción: esta componente puede ser estimada por diferencia: IA = I0 - IR - ID - IT

Por espectroscopía se entiende todos los fenómenos de absorción y emisión de radiación por
parte de la materia. En la medida de IA, se basan las espectroscopías de absorción
(microondas, IR y electrónica), aunque existen otras técnicas que se basan en las medidas de
ID (Rayos X), o de IR.
Existe otro conjunto de espectroscopías denominadas de emisión, en las que las moléculas son
previamente excitadas, analizándose a continuación la radiación que estas emiten al retornar a
su estado fundamental. Las moléculas pueden ser excitadas de diferentes formas:
- Por una reacción química (quimioluminiscencia)
- Por absorción de radiación (fluorescencia y fosforescencia)
- Mediante el paso de una corriente eléctrica (descarga voltaica en un medio enrarecido)
- Aplicación de campos magnéticos (técnicas de resonancia)

REGIONES DEL ESPECTRO Y TIPOS DE ESPECTROSCOPÍAS.

En la figura 2 se muestra las diferentes regiones del espectro en función de su energía. La

ecuación de Planck puede expresarse en función de la longitud de onda de la radiación,   c
/del número de ondas ῡ = 1/ . Por lo tanto, la radiación electromagnética puede
caracterizarse por su frecuencia, v, por su longitud de onda, , o su número de ondas, ῡ. A
medida que es menor, la energía es mayor, mientras que  y ῡ, son proporcionales a la
energía.
En la región UV y visible, es común caracterizar el espectro mediante la longitud de onda en
manómetros (1nm=10-9). El visible abarca desde 700 a 400 nm.

Rayo
Cósmicos Rayo1 Rayos UV Infrarroj Radar 1m
UHF Onda OndaOnda Frecuancia
1 -15 1 A1 nm10 10-410-310-2 10-1 1 mm 1 cm 1 105106 107
Longitu 10 s 10-1410-13s
fmgamma
10-12 10-11
pm X
10-10 -9 10-8 A/B/
10-7 C 10-610-5
o
10
VHF
10110210media
corta 3104 larga
km
extremadam
ente baja
d Ultravioleta Microondas 0
Radio
1 μm 1 Mm

Figura 2

En la región del IR, se suele utilizar el micrómetro (1µm = 10 -6m), o número de ondas ῡ, en
cm-1.
Las moléculas en estado gaseoso absorben radiación, al menos, en tres regiones del espectro,
microondas, IR y UV-visible. Una molécula absorbe un fotón solo si la energía de la radiación
incidente coincide exactamente con la separación entre dos niveles energéticos de la molécula.
Esta condición es necesaria, aunque no suficiente, ya que deben cumplirse otra serie de
requisitos (regla de selección).
En la figura 3 se muestra un esquema simplificado de la estructura energética de una molécula
en estado gaseoso.

Las moléculas son pequeños acumuladores de energía, pudiendo almacenar, aproximadamente,

una cantidad de energía igual a k BT. Las moléculas pueden modificar su energía mediante
choques con otras moléculas, o mediante emisión o absorción de radiación.

La intensidad de una banda en espectroscopía depende, fundamentalmente de dos factores. El

primero es un factor de probabilidad relacionado con el valor del integral dipolo de transición.
El segundo factor depende de la población del nivel energético considerado; es decir, una
banda será tanto más intensa cuanto más poblado este el nivel de partida, que denominaremos
En. El de moléculas que pueblan un nivel energético viene dado por una ecuación que se
denomina ley de distribución de Maxwell-Boltmann:

Donde N es el número total de moléculas, g es la degeneración del nivel, y Z una constante, a

temperatura constante, que se denomina función de partición. Esta ecuación nos indica que si
En ˂˂ kBT, debe cumplirse que; Nn ≠ 0, es decir, el nivel estará poblado, mientras que si E n >>
kBT, entonces Nn = 0, por lo que el nivel estará vacío.

Para T = 25° C, kBT = 4.11x10-21 Julios/molécula. Esta es equivalente a v = kBT/h = 6.2 x 1012
 s-1, frecuencia que corresponde al IR lejano. Por dicha razón, a temperatura ambiente, las
moléculas pueden situarse en estados excitados de traslación y rotación, pero están en los
estados fundamentales de los modos de vibración y electrónicos, ya que no tienen energía
suficiente como para situarse en estados excitados de estos modos. La ecuación hv = kBT, nos
permite, además, crear una escala del espectro de radiación electromagnética en función de la
temperatura, T = E/kB = hv /kB.

ABSORCIÓN Y EMISIÓN DE RADIACIÓN

La absorción de radiación es un fenómeno inducido por la presencia de fotones. El campo

eléctrico del fotón ( ⃗
E ) interacciona con el momento dipolar de la molécula ( µ
⃗ )
perturbando el Hamiltoniano del sistema:

Según la teoría de perturbaciones, la probabilidad de que tenga lugar la transición, desde un

nivel  n hasta otro nivel  m (ver Figura 4), está relacionado con la integral:

a µn,m se le denomina dipolo de transición. La probabilidad del salto espectroscópico viene

dada por el coeficiente de absorción inducida de Einstein:

La absorción solo tiene lugar de forma inducida, sin embargo, la emisión de radiación puede
tener lugar mediante dos mecanismos diferentes, de forma espontánea, o de forma inducida por
la presencia de otro fotón de la misma energía (ver figura 5). En este ultimo caso, el campo
eléctrico del fotón incidente entra en resonancia con el sistema molecular provocando la
emisión.

Supongamos que hacemos incidir de forma continua radiación de densidad ρ, sobre una muestra

en la que las moléculas son excitadas desde el nivel  n + hv  m. paralelamente a este

proceso, parte de las moléculas excitadas retornaran al nivel fundamental  m   n + hv, pero
al estar aplicando radiación de forma continua se alcanzará un estado estacionario, en el que las
velocidades de absorción y emisión de radiación se igualarán:

Donde Ni es la población de cada nivel en el estado estacionario, B nm = Bmn es el coeficiente de

absorción inducida de Einstein y Amn el coeficiente de emisión espontánea. Las velocidades de
los procesos de absorción y emisión inducida son de segundo orden, es decir, producto de
concentración de moléculas (Nn) por concentración de fotones (ρ), y por una constante de
probabilidad (Bnm). Sin embargo, la velocidad de emisión espontánea es un proceso de primer
orden, concentración de moléculas (Nm) por la constante de probabilidad (A mn). Reordenando La
ecuación anterior:
Si la fuente de radiación incidente es térmica, la densidad de radiación puede expresarse
mediante la ecuación de Planck de radiación del cuerpo negro:

Además, si se tiene en cuenta la ley de distribución de Maxwell-Boltzmann:

Por lo que:

Luego, Amn puede escribirse como:

Donde v ha sido sustituida por vnm, la frecuencia a la que tiene lugar la transición. Por lo tanto,

el coeficiente de emisión espontánea depende de la frecuencia al cubo, mientras que el de

emisión inducida independiente de la frecuencia. En líneas generales, si la frecuencia es alta

(UV-visible e IR cercano), domina la emisión espontánea, mientras que si la frecuencia es baja

(IR lejano, microondas, radioondas, etc.), la emisión es fundamentalmente inducida. De hecho,

para v ˂ 1012 s-1 puede despreciarse la emisión espontánea. La emisión espontánea tiene lugar

con una dirección al azar, mientras que la emisión inducida está en fase y posee la misma

dirección que la radiación incidente (figura 6). Las técnicas de resonancia (RMN RSE), y el
efecto Laser, están basados en las propiedades de la emisión inducida. Cuando vnm pequeño, las

moléculas pueden permanecer en estado excitados durante periodos de tiempo indefinidos, ya

que la probabilidad de emisión espontánea es despreciable.

Esto sucede en la técnica de RMN (ver figura 7). En esta técnica una muestra es sometida a la
acción de un campo magnético B 0, el cual orienta los spines nucleares en dos direcciones, o a
favor, o en contra. Estas dos orientaciones son energéticamente diferentes, si bien la diferencia
de energías entre ellas es muy pequeña, hv0 ˂˂ kBT, donde, hv0 = Em – En, es la separación
energética entre ambos niveles, por lo que las moléculas se distribuyen casi al 50% entre los dos
niveles. Además, las moléculas situadas en el estado excitado no emiten radiación de forma
espontánea para retornar al estado fundamental, ya que la frecuencia es muy baja y la
probabilidad de emisión muy pequeña. Para que la emisión se produzca, esta debe ser inducida
mediante la aplicación externa de radiación de la misma frecuencia.
Para inducir la emisión, se sitúa una bobina a lo largo del eje x (90° con respecto a la dirección
del campo magnético B0) y se hace pasar por ella una corriente alterna de frecuencia variable,
  2, próxima a 0  20. Esta corriente alterna genera una pequeña radiación
electromagnética de la misma frecuencia, y cuando la energía de esta coincide con h v0, se
produce la emisión inducida, la cual es recogida como una corriente eléctrica alterna en el
circuito receptor.

LA LEY DE LAMBERT-BEER Y ANCHURA DE BANDA ESPECTRAL

En la figura 8 se muestra un esquema que representa un método sencillo, aunque no el único de

realizar un espectro de absorción. La radiación procede de una fuente térmica, lo que nos
permite seleccionar, en función de la temperatura, la región del espectro deseada.

La radiación se descompone en sus diferentes frecuencias, obteniéndose el espectro de

referencia F0. Seguidamente se interpone en el paso óptico de la radiación una muestra
problema obteniéndose el espectro F. en este espectro puede observarse como la señal
disminuye en ciertas regiones, debido a la absorción molecular. A la relación entre la intensidad
de radiacion de salida, F, y la intensidad de radiación de entrada, F 0, se le conoce como
transmisión T =F/F0. La absorción se define como uno menos la transmisión  = 1-T = (F0 -
F)/F0. La absorbancia es el logaritmo decimal cambiado de signo de la transmisión A = -
log(T). en un medio en el que la densidad molecular sea constante, se comprueba que la
absorbancia es proporcional a la concentración y a la longitud del paso óptico que atraviesa la
muestra, ∆x, es decir: A   cx, donde c, es la concentración y  es una constante de
proporcionalidad denominada absortividad molar o coeficiente de extinción molar, que es
función de la frecuencia. A la ecuación anterior se le conoce como Ley de Lambert-Beer.
en los espectros aparecen bandas de anchura muy variable, es decir, la absorción tiene lugar en
un cierto rango de frecuencias. Este hecho se debe a varios fenómenos:
- En la espectroscopía electrónica tienen lugar simultáneamente, transiciones vibracionales
y rotacionales, lo que origina bandas muy anchas. Lo mismo sucede en la espectroscopía
atómica los saltos entre estado simples aparecen como bandas y no como líneas, lo que
sebe a:

- Efecto Doppler en sistemas gaseosos. Las moléculas no están en reposo y se mueven a

favor o en contra de la dirección de incidencia de la radiación, lo que contribuye a
disminuir o aumentar la energía necesaria para la transición.

- Indeterminación en la energía de los estados, lo que se expresa como:

Esta ecuación puede interpretarse como sigue; para un estado determinado, la

indeterminación en el valor de su energía, ∆E, es inversamente proporcional a la
incertidumbre en el tiempo de vida media de dicho estado. Si el tiempo de vida media de
un estado es infinito (estado estable) su energía puede conocerse exactamente. Cuando los
tiempos de vida media son muy pequeños, la indeterminación en la energía es grande
(figura 9), lo que se aprecia como una cierta de banda espectral.