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ESTERILIZACIÓN

Destrucción, inactivación o remoción (asepsia) de


toda forma de vida microbiana.

Esterilización de:

•Medios de cultivo
•Aire
•Equipos e instrumentos
Métodos

1. Físicos
• Calor
• Húmedo: vapor a presión
• Seco: llama, resistencias eléctricas, aire
caliente
• Filtración (aire)
• Radiaciones: ionizantes, UV.

2. Químicos
Sustancias químicas líquidas o gaseosas.
Esterilización por Calor

Muerte térmica de microorganismos:

dN/dt = - kN (Ec.1)

N: número de microorganismos viables en el tiempo t


t: tiempo
k: rata específica de muerte celular (tiempo-1)

k = f(T)
− Ea / RT
k (T ) = Ae (Ec. de Arrhenius)

A: constante
Ea: energía de activación (cal/mol)
R: constante de los gases ideales (1.98 cal/mol-K)
T: temperatura absoluta (K)
Integrando la Ec.1, con t(0) = 0 y k = cte., obtenemos:

N (t ) = N 0 e − kt (Ec.2)

Tiempo de Reducción Decimal (D):Tiempo de exposición


al calor necesario para que haya una reducción de m.o.
viables a 1/10 de su valor inicial.

Es decir: si N/N0 = 1/10, entonces, t = D.

N 1 − kD
Por tanto: = e
No 10
de donde: D = 2.303/k
Esterilización de líquidos por el calor

Técnicas de esterilización de líquidos

-Esterilización Discontinua o Batch


-Esterilización Continua

Esterilización Discontinua

• Calentamiento con vapor


-Inyección directa de vapor
-Circulación de vapor por serpentines o chaquetas

• Calentamiento eléctrico (resistencias eléctricas)


El perfil de la curva de temperatura (T) vs. tiempo (t o θ) depende
del tipo de calentamiento así:
• Calentamiento eléctrico: Perfil Lineal
• Calentamiento indirecto con vapor: Perfil Exponencial
• Calentamiento directo con vapor (inyección): Perfil Hiperbólico
Observaciones a la esterilización batch

• Tiempos de calentamiento y enfriamiento apre-


ciables (horas).

• Hay muerte térmica de m.o. al final del calenta-


miento, durante la permanencia a la tempera-
tura de esterilización (Te)y al inicio del enfria-
miento.

• Se debe estimar el tiempo de permanencia a la


temperatura de esterilización (Te) para alcanzar
el nivel deseado de destrucción térmica de las
células.
Desventajas de la esterilización discontinua

•Mantenimiento del medio a altas temperaturas por largos


periodos de tiempo.
•Consumos elevados de vapor y agua de refrigeración.
•Problemas de corrosión por contacto prolongado de los
equipos con el medio caliente.
•Tiempo ocioso grande del fermentador industrial.

Ventajas

•Esterilización conjunta del medio con el fermentador y la


instrumentación.
•Reducción de riesgos de contaminación durante el
transporte del medio al fermentador.
Cálculo del tiempo de mantenimiento a la temperatura de
esterilización (Te)

Sean:
N0 : número de m.o. presentes en el medio no estéril.
Nf : número de m.o. viables presentes al final de la este-
rilización.

De la Ec.2 : N (t ) = N 0 e − kt
Idealmente: Nf = 0

Nf = 0 implica que t = ∞
Un solo microorganismo viable al final de la esterilización
(Nf = 1), es suficiente para que se contamine la fermenta-
ción.

Normalmente, se admite un valor de Nf tal que: 0 < Nf < 1

Este valor de Nf (“criterio de esterilización”) significa la pro-


babilidad de que una fermentación se contamine entre un
número dado de fermentaciones.

Es práctica común tomar Nf = 10-3 ó 10-4

Estos valores significan que la probabilidad de que se con-


tamine una fermentación, luego de la esterilización, es de
1en 1000 ó de 1 en 10000, respectivamente.
El tiempo de mantenimiento a la temperatura de esterili-
zación se obtiene de integrar la Ec.1 con: N(t=0) = N0 y
N(t=tf) = Nf ; es decir :
Nf tf tf Ea
dN dN −
= − kd N   = −  k d dt = A  e RT ( t )
dt
dt N0
N t0 t0

Por tanto :
t1 t2 tf
N0
ln =  k d dt +  k d dt +  k d dt
N f t0 t1 t2
Llamando : N0
ln =  TOTAL
Nf

Podemos escribir : 
TOTAL =  CALENT . +  MANTEN . +  ENFRIAM .

t1
Donde :
 CALENT . =  k (T ) dt
t0

t2

 MANTEN . =  k (T ) dt = k (t 2 − t1 ) = k t m
t1

tf

 ENFRIAM . =  k (T ) dt
t2

donde tm es el tiempo de mantenimiento a la temperatura constante


de esterilización Te.
Las integrales 1 y 3 deben evaluarse sustituyendo k(T) por la ecuación
de Arrhenius y expresando en ésta a T(t) en función del perfil de cam-
bio de la temperatura con el tiempo, de acuerdo con la forma de calen-
tamiento (resistencia eléctrica, vapor indirecto o vapor directo). Ver:

• Aiba, S., Humphrey, A. y Millis, N. Biochemical Engineering.


Academic Press, N.Y. (1965).
• Richards, J.W. Introduction to Industrial Sterilization. Academic
Press, London (1968).
Esterilización Continua (HTST: High Temperature Short Time)

Calentamiento casi instantáneo del medio a la temperatura de


esterilización por:

- Inyección directa de vapor al medio


- Calentamiento del medio a través de intercambiadores de calor

Ventajas

• Tiempos de mantenimiento considerablemente menores (2-3 min.) a


temperaturas más elevadas (130-165 oC).
• Menores consumos de vapor (20-25% esterilización discontinua) y
de agua de refrigeración.
• Mejor control de las temperaturas.
• Facilidad de control automático.
• Reducción del tiempo ocioso de los fermentadores industriales.
• Escalado más confiable.
Cálculo del tiempo de esterilización (tm)

1. Considerando flujo pistón o tapón ideal (Plug flow)

El flujo pistón (patrón de flujo ideal) se caracteriza porque no hay


mezcla axial del fluido a lo largo de la tubería, aunque sí se pue-
de presentar mezcla radial.
Despreciando los tiempos de calentamiento y enfriamiento durante la
esterilización:
1 N
t m = ln 0
k N

Conocido el valor de k, se puede calcular el tiempo necesario para re-


ducir el número de m.o. viables de N0 a N

2. Considerando flujo real

• En la práctica se presenta mezcla axial del fluido a lo largo de la tu-


bería (dispersión axial).
• El grado de dispersión axial mide el grado de desviación del flujo real
con respecto al flujo ideal o pistón.
• El grado de dispersión axial está dado por el “coeficiente de disper-
sión axial” (Dz). Así, Dz = 0 para flujo pistón (ideal).
Número de Péclet (Pe): Es un número adimensional que mide la im-
portancia relativa de la dispersión axial del flujo a lo largo de una tu-
bería.
uL
Pe =
DZ

Donde:
Dz : coeficiente de dispersión axial (tiempo-1)
u: velocidad lineal media del fluido en la tubería
L: longitud de la tubería

Dz = f (Re, geometría del sistema)

• Flujo pistón: Dz = 0  Pe ⎯⎯→ 


• Flujo real: 3 ≤ Pe ≤ 6000 (normalmente)
Número de Damköler (Da):

Da = kdL/u

kd: constante específica de muerte térmica


L: longitud sección de esterilización
u: velocidad del líquido

Existen gráficas de Re vs. 1/Pe y de Da vs. ln N0/N teniendo Pe como


parámetro. A partir de estos gráficos se puede calcular la longitud de
la tubería o el tiempo de mantenimiento a la temperatura de esteriliza-
ción en un proceso de esterilización continua.