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Biosensors and Bioelectronics 26 (2011) 3666–3669

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Biosensors and Bioelectronics


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Short communication

Sensor de guía de ondas de polímero para el diagnóstico precoz y la


monitorización del bienestar.
R. Irawan∗, Y.H. Cheng, W.M. Ng, M.M. Aung, I.K. Lao, V. Thaveeprungsriporn
Nitto Denko Asia Technical Centre, 3 Fusionopolis Way, #05-21, Singapore 138633, Singapore

a r t i c l e i n f o a b s t r a c t

Article history: Este documento presenta una plataforma para desarrollar un dispositivo de análisis de orina portátil
Received 18 August 2010 compacto, simple, reutilizable y desechable, y rentable para usos de atención médica en el hogar y
Received in revised form consultorios médicos. Como sensor óptico y modo de detección se utilizaron una guía de ondas óptica
29 September 2010
polimérica y absorción colorimétrica, respectivamente. Los resultados de las pruebas muestran que el
Accepted 2 October 2010
dispositivo fue capaz de ofrecer resultados cuantitativos con los límites de detección superiores a 0,1 g/L,
Available online 1 March 2011
0,2 g/L, 0,025 g/L y 0,1 g/L para glucosa, creatinina, albúmina y proteína total, respectivamente. Hay
algunas superioridades de este dispositivo en comparación con la contraparte tubo de inmersión que son,
Keywords:
Urinalysis mejor sensibilidad, capacidad para ofrecer resultados cuantitativos y reutilización. El dispositivo se está
Waveguide sensor miniaturizando aún más para utilizar un LED y un fotodiodo como fuente de luz y detector,
Absorption respectivamente. Se cree que el dispositivo tiene potencial para el diagnóstico temprano y herramienta
Polymer de monitoreo de bienestar.
© 2011 Elsevier B.V. All rights reserved.

1. Introducción Debido a algunas ventajas, como la sensibilidad, la simplicidad y la


inmunidad a las interferencias de las ondas electromagnéticas, los
Point of Care Systems (POCS) proporciona diagnóstico, pruebas biosensores ópticos representan una de las principales familias de
de laboratorio y otros servicios a los pacientes. Ha revolucionado el biosensores que han sido explotados para aplicaciones de diagnóstico
proceso de atención a los pacientes proporcionando resultados de clínico (Prasad, 2003). Entre los muchos tipos de técnicas ópticas que
laboratorio de manera eficiente y rápida en la cabecera del paciente, se utilizan comúnmente para aplicaciones de biosensores, los sensores
consultorio médico o hogar. Los POCS pueden ser utilizados como basados en la absorción de luz, en los que el método colorimétrico es
una herramienta de detección y/o diagnóstico por los proveedores uno de ellos, son los más desarrollados debido a su simplicidad,
de atención primaria para mejorar la calidad de la atención médica sensibilidad, versatilidad, precisión y selectividad. El método de
ofrecida a los municipios, y también como una herramienta de absorción también es muy adecuado para la miniaturización (Minas et
autocontrol para monitorear el bienestar de los pacientes (Daw y al., 2006; Ribeiro et al., 2005; Sharma et al., 2009; Zhao et al., 2009).
Finkelstein, 2006; Yager et al., 2006, 2008). El rendimiento actual del Las técnicas de detección de absorción óptica permitirán que una guía
diagnóstico cuantitativo, como el análisis de orina, se restringe en de onda se utilice como guía de luz y como parte sensor de las
gran medida a los laboratorios centralizados debido a la aplicaciones de biosensores. Usando el polímero como material de guía
necesidad de largos tiempos de proceso y equipos relativamente de onda y la técnica de detección de absorción óptica como modo de
voluminosos, complejos y costosos, así como personal capacitado detección, se cree que se pueden fabricar dispositivos compactos,
(Janasek et al., 2006; Yager et al., 2006; Julian et al., 2009a). La baratos y robustos para una producción en masa. El análisis de orina se
mayoría de las herramientas de diagnóstico cuantitativo ha utilizado como una medida de detección y/o diagnóstico para
permanecen dentro de las paredes de los laboratorios revelar condiciones de ciertos órganos internos (Simerville et al., 2005;
centralizados, lejos de los pacientes cuyas muestras se miden. Si Julian et al., 2009a; Sahsi y Carpenter, 2009; Keller et al., 2009; Wu,
se pudiera utilizar una gama más amplia de herramientas de 2010). Debido a razones similares a las de la mayoría de las otras
diagnóstico de manera más sencilla, menos costosa y en el punto técnicas de chequeo y diagnóstico, las herramientas cuantitativas
de atención o en la atención sanitaria domiciliaria, la salud de actuales para el análisis de orina también están restringidas en gran
millones de pacientes podría mejorar anualmente, en particular medida a los laboratorios centralizados (Julian et al., 2009b). Además,
en los países en desarrollo, donde millones de personas no tienen la ejecución del análisis cuantitativo a menudo se limita a personal
acceso a instalaciones sanitarias adecuadas (Yager et al., 2006). altamente capacitado. Existe, sin embargo, otro medio bien conocido
Para lograr este objetivo, se requiere un dispositivo simple, para el análisis de orina, y es la prueba del tubo de inmersión (Dolley y
compacto, inteligente, robusto y económico que proporcione Nelligan, 2003; Simerville et al., 2005; Wilde et al., 2008; Sahsi y
resultados de alta calidad. La detección de moléculas biológicas Carpenter, 2009; Keller et al., 2009; Rao et al., 2010). La principal
con muy alta sensibilidad se ha vuelto cada vez más importante desventaja de la barra de análisis de orina es que los resultados siguen
en campos como el cribado/diagnóstico clínico. siendo en gran medida cualitativos, lo que hace que la decisión sea
ambigua sin mediciones precisas de la anormalidad.
La glucosa, la creatinina, la albúmina y la proteína total se encuentran generar una fotomáscara para la fabricación.
entre los analitos habituales medidos en orina. La glucosa en la orina
se filtra de la sangre, por lo que el sensor de glucosa en orina debe ser
capaz de medir un nivel bajo de concentraciones de glucosa e
informar las concentraciones cuantitativas. El personal médico
generalmente está interesado en conocer las proporciones de
concentración de creatinina, albúmina y proteína total (Wilde et al.,
2008), en lugar de simplemente concentraciones de creatinina,
albúmina y proteína total. Las proporciones de estos analitos
permitirán a los médicos diagnosticar ciertos órganos internos de los Fig. 1. Illustration of the side view of the sensing system.

pacientes, como el riñón, midiendo los analitos de la muestra de orina


de la mañana temprano solamente, en lugar de las pruebas de orina La guía de onda se fabricó utilizando la técnica de fotolitografía
de 24 horas (Ruggenenti et al., 1998; Mattix et al., 2002; Price et al., en la oblea (Si) con 5 m de espesor bajo el revestimiento.
2002; Azim et al., 2003). La medición de los analitos de la primera
muestra de orina de la mañana dará resultados inmediatos y precisos. 2.3. Detection system and procedure
Para superar estas deficiencias, se ha desarrollado un dispositivo de
análisis de orina compacto, económico, robusto, fácil de usar y La Fig. 1 ilustra el sistema de detección utilizado para las pruebas. Consistía
portátil que potencialmente tiene un mejor rendimiento en en una fuente de luz compacta de banda ancha, una guía de ondas óptica
comparación con el rendimiento actual del palillo de orina. Este polimérica como sensor y un fotodetector. El reactivo se introdujo en la
dispositivo de análisis de orina, basado en la guía de onda óptica abertura de detección de la guía de onda. La señal de corriente oscura se
polimérica reutilizable y desechable, presenta resultados recogió antes de encender la fuente de luz. Los datos de la señal en blanco se
cuantitativos que se pueden utilizar como medida adecuada para tomaron después de encender la luz y sólo se tomó el reactivo apropiado en
proporcionar recomendaciones al usuario. Por lo tanto, tiene el la abertura de detección, es decir, antes de introducir las muestras en la
potencial de descentralizar las mediciones cuantitativas de análisis de abertura de detección. Se mezclaron diferentes concentraciones de analito en
orina de laboratorios centralizados a consultorios médicos o de orina artificial con reactivo en la brecha de detección con un volumen total de
médicos generales. El dispositivo también se puede utilizar para la 50L. Las señales de las diferentes concentraciones de las muestras fueron
leídas a la consistencia tiempos de reacción particulares. Todas las señales
monitorización autocontrolada de las personas en el hogar. El
tomadas para diversas concentraciones de analitos se corrigieron y
dispositivo desarrollado ha sido probado para medir algunos
compararon, respectivamente, con las señales de corriente oscura y las señales
analitos de orina comunes, como la glucosa, la creatinina, la albúmina
en blanco. Se aplicó el método de detección de dos puntos a la detección total
y la proteína total.
de glucosa y proteínas. Las absorciones se calcularon tomando las
proporciones de intensidades de estos conjuntos de dos puntos de datos en
2. Materials and methods los primeros 8 y 3 min para la glucosa y la proteína total, respectivamente. La
comparación de conjuntos de dos puntos de datos ayudó a minimizar el efecto
2.1. Sustancias químicas de errores leves en el tiempo de lectura de los datos. En los experimentos de
creatinina y albúmina, se aplicó el método de detección cinética. Los datos de
la región lineal de las tasas de absorción entre estos dos analitos y sus reactivos
Los reactivos para la glucosa, la albúmina y las proteínas se
dentro de los primeros 2 minutos se utilizaron para desarrollar las curvas de
adquieren en Roche Diagnostic (Basilea, Suiza), Biosystem SA
calibración.
(Barcelona, España) y Sigma (St. Louis, MO, EE. UU.),
respectivamente. El reactivo de la creatinina se autohizo 3. Results and discusión
mezclando 0,45 mol/L KOH y 3,5-dinitrobenzoic acid 17.68
mmol/L (Narayanan y Appleton, 1980). Estos reactivos La curva de calibración de la glucosa en la Fig. 2(A) muestra que el
cambiarán los colores de las muestras cuando reaccionen con dispositivo fue capaz de medir la concentración de glucosa al menos
glucosa, albúmina, creatinina y proteína total. Glucosa, hasta 0,1 g/L. Esta sensibilidad es mejor que la sensibilidad del palillo
creatinina, proteína total y albúmina fueron comprados a Sigma de orina que es comúnmente de aproximadamente 0,4 g/L El bajo
(St. Louis, MO, USA). El líquido que contiene cloruro de sodio límite de detección y la linealidad de la curva de calibración en el rango
0.123 mol/L, cloruro de potasio 0.058 mol/L, urea 0.291 mol/L, de baja concentración de glucosa hacen que el dispositivo sea útil para
creatinina 0.011 mol/L, ácido úrico 0.0028 mol/L, fosfato de el diagnóstico precoz del nivel de glucosa en sangre, ya que la
sodio 0.028 mol/L y agua desionizada se usó para imitar el concentración de glucosa en la orina es significativamente inferior a la
líquido urinario con un pH en el rango de 4.4-8 y una gravedad de la sangre. Por lo tanto, en la práctica no esperamos ver una alta
específica. 1.018. concentración de glucosa en la orina.
Los barnices del núcleo de la guía de onda y los materiales de La Fig. 2(B) muestra que el dispositivo fue capaz de medir la creatinina
revestimiento son propiedad de Nitto Denko Corporation (Osaka, en por lo menos hasta 0,2 g/l. Esta sensibilidad es relativamente mejor
Japón). Estos barnices se filtraron a fondo utilizando membranas que la del dip-stick de creatinina para análisis de orina que es
comúnmente capaz de grado creatinina hasta 0,25 g/l. Además, 0.2
filtrantes de 1,0 y 0,45 m de tamaño de poro y gas N2 a 0,1 MPa. Los
g/L de creatinina sigue siendo significativamente inferior a la de la
barnices filtrados se almacenaban en desecadores con control de
creatinina normal en la orina, como se muestra en la Tabla 1. La
humedad y sala de secado temperatura para uso futuro.
calibración de creatinina mostrada en la Fig. 2(B) también revela que la
2.2. Design and fabrication of waveguide sensor
curva proporcional relación entre las absorciones de luz y la
concentración de creatinina en nuestra técnica es lo suficientemente
La guía de onda fue diseñada usando Zemax (Bellevue, WA, EUA) bueno como para ser cubierto por un segundo orden polinomio, al
para obtener una baja pérdida de acoplamiento, pero una larga longitud menos en el rango de 0.2 g/L a 2 g/L de creatinina concentración. El
de camino óptico en la brecha de detección. El sensor de guía de onda rango dinámico es suficiente para capturar la información clínica.
constaba de dos partes con un espacio de detección entre ellas, como se rango de medición del análisis de creatinina en orina, que es inferior a
muestra en la Fig. 1. Las secciones transversales de la primera×parte y la 3 g/l. El dispositivo fue capaz de medir la concentración de albúmina
segunda parte × de la guía de onda fueron 1000m×250m y 3600m×250m, hasta 0.025 g/L como se muestra en la Fig. 2(C). Este límite de
respectivamente, mientras que la longitud de la brecha de detección fue detección puede ser suficiente para detectar el nivel normal de
de unos 2500m. La forma de la superficie frontal de la segunda parte de albúmina en la orina, que es de alrededor de 0.025 g/L. Además, este
la guía de onda fue diseñada para tener una pérdida mínima de límite de detección es comparable a el límite de detección de la mayoría
reflexión y maximizar la captura de la luz de la brecha de detección. de los dip-stick de análisis de orina, que por lo general sólo muestra
Después de su diseño, el diseño de la guía de onda se utilizó para normal o por encima de lo normal.
3668 R. Irawan et al. / Biosensors and Bioelectronics 26 (2011) 3666–3669

Fig. 2. The calibration curves of four prominent urinalysis analytes: (A) glucose analyte; (B) creatinine analyte; (C) albumin analyte; a nd (D) protein analyte.

La curva de la Fig. 2(C) también muestra que la relación entre Los resultados de las mediciones de las Fig. 2(A)-(D) muestran que
la diferencia de absorción de la luz y las concentraciones de la fue capaz de medir los principales analitos en orina, glucosa y
albúmina también fueron suficientes para ser cubiertas por el creatinina, albúmina y proteína, con un rendimiento relativamente
segundo polinomio de orden, al menos en el rango entre 0.025 mejor como comparado con el del dip-stick para el análisis de
g/L y 0.025 g/L. 0.3 g/L. Este rango dinámico es suficiente orina. Su sensibilidad fue también suficiente para cubrir la mayoría
para cubrir la medición para el diagnóstico de de los niveles de umbral de los analitos como se muestra en la Tabla
microalbuminuria, que está por debajo de 0,15 g/l. 1. En la actualidad, también se están llevando a cabo algunas
actividades para aumentar aún más la sensibilidad y el rango
La Fig. 2(D) muestra que el dispositivo fue capaz de medir la
dinámico. Una de las mayores superioridades del dispositivo en
concentración de proteínas al menos hasta 0,1 g/l. Esta
comparación con el dip-stick de análisis de orina es su capacidad
sensibilidad es significativamente más baja que el límite de
para proporcionar datos cuantitativos que pueden informar la
detección del dip-stick de análisis de orina principal que es de
concentración exacta de los analitos en la orina, mientras que el
aproximadamente 0.3 g/L. Al igual que el analito de glucosa,
dip-stick se basa generalmente en la comparación de los colores en
la relación entre la proteína y el nivel de absorción de la luz
él y las cartas de colores proporcionadas por el fabricante. El el
también fue muy alto lineal. El rango de linealidad de la
método de color utilizado en el dip-stick no es inusual para llevar
medición de la proteína total de este que se muestra en la Fig.
a cabo interpretaciones erróneas de los resultados de la medición
2(D) es suficiente para acomodar la concentración rango de
que a menudo causan falsos positivos o resultados negativos falsos
interés del análisis de proteína de orina, que está por debajo
del análisis de orina que hacen que los resultados del dip-stick
de 3 g/L.
cuestionable (Simerville et al., 2005).
La especificidad de la técnica se probó probando las
La información cuantitativa para la medición de la glucosa
interferencias entre esos cuatro analitos y la urobilina. La
esimportante para la monitorización continua del nivel de glucosa
interferencia de la urobilina también fue probada aquí porque
en pacientes diabéticos crónicos. Actualmente, la mayoría de los
es el principal químico que causa la pigmentación amarilla en
medidores de glucosa que pueden proporcionar datos
la orina. La Tabla 2 muestra que no hubo interferencias
cuantitativos están destinados sólo a la muestra de sangre.
excepto por la alta concentración de proteína total, por encima
de 2 g/L, que fue afectado por la creatinina. Los resultados
demuestran que el dispositivo tiene una especificidad
alentadora para aplicaciones reales.
.

La medición de la glucosa a partir de una muestra de sangre que 4. Conclusions


requiere que los usuarios tomen la sangre fresca de los pacientes Se ha desarrollado un dispositivo de análisis de orina compacto y
puede asustar a algunos pacientes. Algunos medidores de relativamente simple que tiene la capacidad de ser utilizado en el hogar
glucosa en sangre pueden requerir que los usuarios que buscan y en los consultorios médicos. Puede ser como una base para un
ayuda de otra persona les ayuden a punzar sus dedos y presionar dispositivo de análisis de orina manual de bajo costo. El dispositivo ha
la sangre hacia afuera. Estos problemas pueden crear molestias a sido probado para medir pocos analitos de orina prominentes, glucosa,
algunos pacientes que pueden impedirles realizar un control albúmina, creatinina y proteína. La sensibilidad del dispositivo para
esos analitos es mejor que la mayoría de los un dip-stick para análisis
continuo del nivel de glucosa. La capacidad de este dispositivo
de orina. A diferencia de la mayoría de los dip-stick de análisis de orina
para suministrar datos cuantitativos de glucosa a partir de la
que sólo puede entregar los datos cualitativamente, el dispositivo
orina puede ayudar a estos pacientes.
reportado aquí es capaz de proporcionar datos cuantitativos.
Las proporciones de proteína-creatinina y albúmina-creatinina,
Los datos cuantitativos no sólo proporcionar resultados más exactos,
en lugar de simplemente datos de creatinina, albúmina y pero también hacer los cálculos de la del contenido del analito en la
proteínas, son más informativo para diagnosticar a los pacientes. orina. Esta capacidad hacer que el dispositivo sea más interesante y útil
Las proporciones de estos analitos apresurará al personal médico para el personal médico, ya que las proporciones de creatinina,
a diagnosticar ciertas enfermedades internas de las condiciones albúmina y proteína total ayudan médicos para diagnosticar la
de los órganos. Por ejemplo, ayudará a identificar si los pacientes condición de ciertos órganos internos de los pacientes de la primera
en riesgo de desarrollar enfermedad renal y preeclampsia. La prueba de muestra de orina de la mañana, en lugar de llevar a cabo una
obtención de las proporciones de estos analitos permitirá medir prueba de orina de 24 horas.
los analitos de la muestra de orina de la mañana temprano
solamente (Ruggenenti y otros, 1998; Mattix y otros, 2002; Price y
otros, 2002; Azim y otros, 2003). De lo contrario, tiene que hacer
un análisis de orina de 24 horas, que es costoso y engorroso. tanto
para los pacientes como para el personal médico. Es obvio que las
proporciones pueden calcularse siempre y cuando las
concentraciones cuantitativas de esos tres analitos de orina se
conocen con precisión. Las necesidades de tales aplicaciones en el
análisis de orina hacen que el dispositivo reportado aquí con un
rendimiento inigualable en comparación con el rendimiento de
de análisis de orina cualitativo. Está previsto realizar el estudio
clínico ensayos para el dispositivo en una clínica u hospital con
orina humana muestras. Los ensayos clínicos son pasos
necesarios antes de que el dispositivo puede ser aplicado para
aplicaciones de campo reales. El dispositivo aquí reportado
utiliza una guía de onda polimérica como sensor.
La guía de onda polimérica es relativamente barata y fácil para la
fabricación en masa. El sensor de guía de ondas polimérico
también hace que el sensor se vuelve reutilizables y desechables.
Estas ventajas, junto con la compacidad, simplicidad y robustez,
hacen que el dispositivo desarrollado tenga un gran potencial
para el cuidado de la salud en el hogar o el uso en consultorios
médicos.