Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Química
Departamento de Alientos y Biotecnología
Ejemplo de Cálculo de la DL50 por el método estadístico de Litchfield y Wilcoxon
Material elaborado por la M. en C. J. Adriana Aguilar Navarro y Q.A. J. Antonio Beaz Rivera

Se realizo un estudio de toxicidad aguda para determinar el DL 50 de un plaguicida en ratones

macho por vía oral, se trabajaron siete dosis distintas con 15 ratones inicialmente para cada
dosis. Transcurridas las 48 h de observación después de haber dosificado a los ratones, se
obtuvieron los siguientes resultados:

Dosis Animales Animales % de mortalidad

(mg/kg p.c) tratados muertos observado
100 15 0 0.0
250 9 2 22.2
400 15 9 60.0
550 12 8 66.7
700 12 9 75.0
800 12 12 100.0
900 14 14 100.0

Cuando encontramos dos o más valores de 100% y/o 0% de mortalidad descartamos los datos
de las dosis más altas (100%) y de las dosis más bajas (0%).

Dosis Animales Animales % de mortalidad

(mg/kg p.c) tratados muertos observado
100 15 0 0.0
250 9 2 22.2
400 15 9 60.0
550 12 8 66.7
700 12 9 75.0
800 12 12 100.0

Debemos graficar las dosis contra los porcentajes de mortalidad observados en el papel
semilogaritmico-probabilidad omitiendo los valores de 0% y 100%, ya que en la escala de la
gráfica no aparecen estos puntos.

Una vez que se han localizado los puntos en la gráfica se debe trazar una línea recta
provisional (Azul) que pase lo más cerca de dichos puntos.
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Mortalidad (%)
100

400

500

800
200

300

600
700

900
1000

% observado
Dosis (mg/kg p.c.)
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Una vez trazada la línea recta provisional se deberá encontrar el % esperado de

mortalidad, extrapolando los datos para cada dosis.

Mortalidad (%)
100

400

500

800
200

300

600
700

900
1000

% observado % esperado para

0% y 100% de
Dosis (mg/kg p.c.) % esperado mortalidad
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Dosis Animales Animales % de mortalidad % de mortalidad

(mg/kg p.c) tratados muertos observado esperado
100 15 0
250 9 2 22.2 36
400 15 9 60.0 56
550 12 8 66.7 70
700 12 9 75.0 78
800 12 12

Para el 0 y el 100% de mortalidad, se leerán posteriormente como valor esperado en la

recta provisional y se corregirán como el valor observado de acuerdo a las fórmulas
propuestas por Miller y Tainter:
Para 0% de mortalidad: 100 (0.25/n)
Para 100% de mortalidad: 100 [(n-0.25)/n]
En donde n es el número de animales en los lotes en donde se observó el 0 y el 100% de
mortalidad, respectivamente y deberán ser considerados como % mortalidad esperado

Para 0% n= 15 100 (0.25/15)= 1.7

Para 100% n= 12 100 [(n-0.25)/12]= 97.9

Dosis Animales Animales % de mortalidad % de mortalidad

(mg/kg p.c) tratados muertos observado esperado
100 15 0 1.7 9.0
250 9 2 22.2 36
400 15 9 60.0 56
550 12 8 66.7 70
700 12 9 75.0 78
800 12 12 97.9 82

A continuación, se deberá realizar la prueba de CHI2 para lo cual se requiere de los

valores observados y esperados de cada una de las dosis probadas:

 n (%obsesrvado − %esperado) 2   N 
(CHI2) =  i 
 
i =1 (%esperado)(100 − %esperado)   K 
Donde:
N = número de animales tratados
K = número de dosis analizadas

 (1.7 − 9.0) 2 (22.2 − 36) 2 (97.9 − 82) 2   75 

 + + ... + 
 9.0  (100 − 9.0) 36  (100 − 36) 82  (100 − 82)   6 

CHI2= 4.20
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La CHI2 de la línea experimental se compara con la CHI2 crítica (obtenida de una tabla
con g.l. = K – 2 y p= 0.05). Si la CHI2 experimental es menor a la CHI2 crítica, los
datos son homogéneos, y la recta se considera adecuada. En caso contrario, es necesario
volver a trazar la gráfica y realizar nuevamente los cálculos hasta obtener datos
homogéneos.

Si trabajamos con 6 dosis los grados de libertad son 4 y para una p= 0.05 el valor de
CHI2 crítica es de 9.49. y la experimental es de 4.20 por lo que nuestros datos son
homogéneos.
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Una vez que comprobamos que los obtenidos son homogéneos se obtiene por
interpolación de la línea recta trazada en la gráfica el valor de la DL50, además, también
se debe calcular su intervalo de confianza.

Por lo que primero se calculará la pendiente (s) de la línea recta trazada con la siguiente
fórmula:

DL84 DL50 + DL50 DL16

S=
2
Por lo que los valores de DL16 y DL84 también se obtendrán por interpolación de la línea
recta trazada en la gráfica
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Mortalidad (%)
100

400

500

800
200

300

600
700

900
1000

Dosis (mg/kg p.c.)

Dosis (mg/kg p.c.)

DL16 140
DL50 340
DL84 880
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880 mg / kgpc 340 mg / kgpc

+
340 mg / kgpc 140 mg / kgpc
S= = 2.51
2

Para poder calcular los límites de confianza para la DL50 con una p = 0.05, es necesario
obtener el siguiente factor (f):

2.77
N'
fDL50 = S
Donde:
f = factor para obtener el intervalo de confianza
N’= número de animales tratados entre 16% y 84% de respuesta esperada
S= función pendiente

Para Calcular N’

Dosis (mg/ kg pc) 100 250 499 550 700 800

Animales tratados 15 9 15 12 12 12

DL16 = 140 mg/kg pc DL84 = 840 mg/kg pc

Los animales tratados son 60

Por lo que:
2.77
fDL50 = 2.51 60
= 1.39

Límite superior = DL50 x fDL50

LS=340 mg/kg pc X 1.39 = 472.6 mg/kg pc

Límite inferior = DL50 / fDL50

LI=340 mg/kg pc /1.39= 244.6 mg/ kg pc

EL DL50 es de 340 (244.6-472.6) mg/kg pc de plaguicida para ratón macho por vía oral