UNIVERSIDAD JUAREZ AUTÓNOMA DE

TABASCO
DIVISIÓN ACADÉMICA DE INGENIERÍA Y ARQUITECTURA

Materia: Bioprocesos de separación

Catedrático: Yolanda Córdova Bautista

Alumna: Martha Cecilia López Vasconcelos

Asunto: Reporte de práctica de laboratorio

Fecha: 10 de junio del 2019

~1~
Estudio de la cinética de crecimiento y consumo de sustrato
en el proceso de fermentación del jugo del cacao bajo en
modelo de Monnod.
Resumen

El objetivo de la práctica es determinar el consumo de sustrato del jugo del cacao

el cual se sometió a una fermentación. También se desea evaluar el estudio de la
cinética en el proceso del crecimiento microbiano. Todo en un medio anaerobio.

Introducción

La fermentación es un proceso catabólico de oxidación incompleta, totalmente

anaeróbico, siendo el producto final un compuesto orgánico. Estos productos
finales son los que caracterizan los diversos tipos de fermentaciones. En este caso
la fermentación alcohólica es perfecta para observar la transformación de
azucares (glucosa) en un compuesto orgánico (etanol).

La ecuación general es la siguiente:

C6H12O6 →2C2H5OH+2CO2

C6H12O6: Glucosa

2C2H5OH: Etanol

CO2: Dióxido de carbono

Este proceso es llevado por medio de la adición de una levadura. la cual a nivel
industrial proceso es generalmente S. cerevisiae. Adicionalmente, cuando S.
cerevisiae se encuentra bajo condiciones de alta concentración de oxígeno
disuelto [5] y la concentración de azúcares supera 0,16g/L o 9g/L , la levadura
convierte su metabolismo oxidativo a oxidoreductivo o fermentativo
incrementándose la producción de etanol. Dicho fenómeno se conoce como efecto
Crabtree.

Actualmente, el bioetanol es producido por fermentación alcohólica de los

azúcares presentes en materiales renovables. Dicha fermentación está
influenciada por factores como la concentración de azúcares del sustrato y el
microorganismo fermentador que se emplee.

~2~
Materiales y métodos

Preparación del jugo del cacao

Para la realización del jugo del cacao se utilizaron 4 mazorcas de cacao (cabe mencionar
que estaban en estado maduro) y 4.7 L de agua. Las mazorcas fueron amasadas en el
agua y luego coladas perfectamente para no llevar ningún residuo no deseado.

Construcción de los bioreactores

Los bioreactores fueron utilizados para llevar acabo la fermentación del jugo del cacao.

Se montaron 2 bioreactores, a los que se le agregaron la levadura y el jugo del cacao

previamente preparado.

I. En la fabricación de los bioreactores, se utilizaron tubos de acrílico con las

siguientes características:
 Alto: 30 cm
 Diámetro: 10cm
 Material: acrílico
II. Se le realizó una inspección para descartar posibles fugas de líquido, con las que
se obtuvieron resultados positivos de fugas en las partes del soporte de la válvula,
optando por eliminar los residuos que se formaron al perforar el tubo de acrílico,
utilizando un artefacto punzo cortante expuesto a altas temperaturas,
permitiéndonos derretir todas las imperfecciones del tubo, a lo que procedimos a
instalar nuevamente la válvula aplicando un pegamento especial para peceras que
nos dio una mejor adherencia y sellado de la válvula, por lo que al realizar una
última inspección pudimos darnos cuenta que no se presentó más derrame de
líquido.
III. En la parte superior se le coloco una cubierta de forma circular con una
perforación en el centro de 6 milímetros para sellar el bioreactor, la perforación fue
realizada para la inducción de las mangueras que funcionarían para la extracción
de los gases.

~3~
IV. Al término del bioreactor se procedió a realizar una limpieza y esterilización con
alcohol para su posterior utilización.

Mediciones

El procedimiento para las mediciones de la biomasa es la siguiente:

I. Se sacaron alrededor de 10ml de muestra de cada reactor.

II. La muestra se colocó en el equipo de centrifugación por 10 minutos a 4000 de
potencia.
III. Se colocó 1ml de la muestra en dos tubos de ensaye.
IV. Se midieron en el espectrofotómetro UV-VIS (antes de medir las muestras de
biomasa se calibro el equipo con una muestra en blanco “la muestra en blanco se
refiere a agua destilada”) a 600 nm.

El procedimiento para las mediciones de glucosa:

I. Se saca alrededor de 10ml de muestra de cada reactor.

V. La muestra se colocó en el equipo de centrifugación por 10 minutos a 4000 de
potencia.
II. Se colocó 1ml de la muestra en dos tubos de ensaye a las cuales se les agrega
0.6ml de fenol(al 5%) y 3ml de ácido sulfúrico.
III. Se miden en el espectrofotómetro UV-VIS (antes de medir las muestras de se
calibra el equipo con una muestra en blanco “la muestra en blanco se refiere a
agua destilada”) a 540 nm.

~4~
Resultados de las mediciones

Nota: los resultados mostrados son solo del reactor (A) al cual se le lograron hacer varias
mediciones, ya que reactor (B) consumió su azúcar demasiado rápido y no se pudieron
hacer las mediciones necesarias.

BIOMASA
Medición Tiempo Absorbancia(600nm)
(Horas)
1 0 0.0191 A
2 25.5 0.01933 A
3 35 0.01940 A
4 45 0.01946 A
5 48.5 0.01943 A
6 59 0.01934 A
7 69.5 0.01924 A

GLUCOSA
Medición Tiempo Absorbancia(540nm)
(Horas)
1 0 3.432 A
2 25.5 3.355 A
3 35 3.227 A
4 45 3.099 A
5 48.5 1.181 A
6 59 0.615 A
7 69.5 0.049 A

Teniendo los resultados de la absorbancia se calcularon las concentraciones mediante

ecuaciones y curvas de calibración tanto de la glucosa como de la biomasa.

~5~
Curva de calibración de la biomasa

Para la curva de calibración de la biomasa se sacaron los siguientes datos en dos rondas
de mediciones:

No TUBO P. INICIAL P.TUBO + BIOMASA GRAMOS/ML

1.1 13.598 13.6015 0.00035
1.2 13.6685 13.6745 0.0006
1.3 13.6052 13.6074 0.00022
1.4 13.6144 13.6167 0.00023
1.5 13.5855 13.5872 0.00017
1.6 13.4417 13.4421 0.00004

No TUBO P. INICIAL P.TUBO + BIOMASA GRAMOS/ML

2.1 13.5959 13.5988 0.00029
2.2 13.7384 13.7398 0.00014
2.3 13.5049 13.5068 0.00019
2.4 13.6369 13.6384 0.00015
2.5 13.4759 13.4765 0.00006
2.6 13.5938 13.5944 0.00006

Se promediaron los datos de GRAMOS/ML de las dos rondas para obtener los datos
siguientes:

DENSIDAD OPTICA BIOMASA(GR/ML)

0.147 0.00032
0.118 0.00037
0.088 0.000205
0.059 0.00019
0.013 0.000115
0.007 0.00005

~6~
Con estos datos se obtuvo la curva de calibración que se muestra en el siguiente gráfico:

Curva de calibracion de la biomasa

0.0004

0.00035

0.0003
Densidad optica

0.00025

0.0002

0.00015

0.0001

0.00005

0
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16
Biomasa g/ml

Como resultado tenemos obtuvimos la siguiente ecuación:

𝐴𝑏𝑠 = 0.9446 ∗ 𝐶𝑜𝑐. 𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 + 0.0191

Con la que se calcularon las concentraciones de los resultados obtenidos en la práctica:

Biomasa
Tiempo (horas) Concentración (g/l)
0 0.00006199
25.5 0.000247289
35 0.000319348
45 0.000391408
48.5 0.000352519
59 0.000254152
69.5 0.000155785

~7~
Curva de calibración de la glucosa

Concentración con
Solución Absorbancia Concentración factor de corrección
0 0 -6.3634 0
1 1.229 -2.9324 0.2
2 2.29 0.0295 0.4
3 2.449 0.4734 0.6
4 2.739 1.283 0.8
5 2.535 0.7135 1
6 2.86 1.6208 1.2
7 2.874 1.6599 1.4
8 2.893 1.713 1.6
9 2.814 1.4924 1.8
10 2.929 1.8135 2

Curva de calibracionde la glucosa con la concentracion

3
2
1
Concentracion (g/ml)

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
-1
-2
-3
-4
-5
-6
-7
Absorbancia

~8~
 Curva de calibracion de la glucosa con la concentracion con el factor de
coreccion

2.5

2
Concentracion (g/ml)

1.5

0.5

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Absorbancia

Como resultado tenemos obtuvimos la siguiente ecuación:

𝐴𝑏𝑠 = 0.9446 ∗ 𝐶𝑜𝑐. 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 + 0.036

Con la que se calcularon las concentraciones de los resultados obtenidos en la práctica:

Consumo de sustrato
Tiempo (horas) Concentración (mg/l)
0 3.5951726
25.5 3.5147152
35 3.3792081
45 3.243701
48.5 1.2121533
59 0.6132225
69.5 0.0142918

~9~
Aplicando el modelo de Monod

TIEMPO S X 1/S SO-S X X/(SO-S)

0 3.5951726 6.199E-05 0.2781 0 0 0
25.5 3.5147152 0.0002473 0.2845 0.0804 0.006305 0.078375
35 3.3792081 0.0003193 0.2959 0.2159 0.011177 0.051754
45 3.243701 0.0003914 0.3082 0.3514 0.017613 0.050113
48.5 1.2121533 0.0003525 0.8249 2.383 0.017097 0.007174
59 0.6132225 0.0002542 1.6307 2.9819 0.014994 0.005028
69.5 0.0142918 0.0001558 69.97 3.5808 0.010827 0.003023

0.09

0.08

0.07 y = -1.1786x + 0.4092

R² = 0.7754
0.06

0.05
1/S

0.04

0.03

0.02

0.01

0
0.28 0.285 0.29 0.295 0.3 0.305 0.31
Xq/(SO-S)

~ 10 ~
Respiración microbiana en mg de co2 mediante una titulación

Materiales

o Matraz Erlenmeyer de 200 ml

o Bureta 50 ml
o Pinza de mariposa
o Soporte universal
Soluciones

o 30 ml de Hidróxido de Sodio
o 2 gotas Fenolftaleína
o 2 ml de Cloruro de Bario
o 50 ml de Ácido Clorhídrico (por reactor)
Metodología
I. Se tomaron las muestras de los tubos con Hidróxido de Sodio (NaOH) c/u con
10 ml de la sustancia, se vertieron en el matraz Erlenmeyer.
II. Se colocaron 50 mL de acido clorhidrico en la bureta.
III. Se añadieron 2 gotas de fenolftaleína y 2 ml de Cloruro de Bario en el matraz
Erlenmeyer que contenía el Hidróxido
IV. Se titularon las muestras hasta que se obtuvo un leve color rosado y se tomo nota
de lo gastado del NaOH.

~ 11 ~
Resultados de la titulación en un periodo de 24 hrs

Día Hora ml gastados de HCl Tipo de muestra

Día 1 miércoles 12:00 hrs 24.7mL Muestra blanca

Día 1 miércoles 11:00 hrs 24.1mL Alícuota

Día 2 jueves 11:00 hrs 24.6mL Alícuota

El CO2 liberado durante la respiración aeróbica en la fermentación puede ser absorbido en

solución alcalina y medida como un índice de la tasa de respiración en la cual el CO2 es
absorbido por dos moléculas de NaOH que produce Na2CO3 más agua. La cantidad de
CO2 absorbido es equivalente a la cantidad de NaOH consumido para determinar esto, se
precipito el carbonato con BaCl2 y se titula el NaOH restante con HCl, usando como
indicador fenolftaleína al 1%.

Para determinar la respiración microbiana en mg de CO2 se utilizó la formula R= (B-M)

NE. En donde B es el volumen de ácido gastado para la titulación de NaOH al 2N como
muestra blanca, y M es la cantidad de ácido utilizado para neutralizar el NaOH de la
muestra, N siendo la normalidad del ácido y E es el peso equivalente del CO2. Aplicando
la fórmula de obtuvieron los resultados que la respiración microbiana en la fermentación
del jugo 33.6 mg/día de CO2

Cálculos para determinar los gramos de las sustancias para la concentración

normal

Fórmula general
𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 = 𝑃. 𝑀.× 𝑉(𝐿) × 𝑁

Datos
P.M.= Peso Molecular
V (L)= Volumen en Litros
N= Normalidad

Para el Hidróxido de Sodio (NaOH) al 2N

𝑔 = 𝑃. 𝑀.× 𝑉 (𝐿) × 𝑁

𝑔
𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 = 40 × 0.5 × 2 = 40 𝑔
𝑚𝑜𝑙

Para Ácido clorhídrico (HCl) al 2N

~ 12 ~
Se sabe que M=N solo para este caso, ya que el equivalente químico es igual a 1.

𝑁𝑜 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠
𝑀=
𝑉(𝐿)

Despejando el número de moles:

𝑁𝑜 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 = 𝑀 × 𝑉(𝐿)

Sustituyendo:

𝑁𝑜 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 = 2𝑀 × 0.5𝐿 = 1.0𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠

Sabiendo los números de moles podemos hacer la relación en la que se involucra los gr
de HCl.
𝑔
𝑁𝑜 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 =
𝑃. 𝑀.

𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 = 𝑁𝑜 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 × 𝑃. 𝑀.

36.46𝑔
𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 = 1.0𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 × 𝑚𝑜𝑙
= 37.38𝑔 𝑑𝑒 𝐻𝐶𝑙

Sabiendo que la densidad del ácido es 1.18gr/ml podemos determinar el volumen a

utilizar.

37.38𝑔 𝑑𝑒 𝐻𝐶𝑙 × 1 𝑚𝐿
𝑉= = 31.68𝑚𝑙
1.18𝑔

Si la pureza del HCl es de 36% en P/V podemos determinar los ml de HCl que se
requieren agregar para obtener una pureza de 100%.

31.68𝑚𝐿 × 100%
𝑉= = 88𝑚𝐿
36%

~ 13 ~
Evidencias

~ 14 ~
Conclusiones

En la práctica pudimos ver que las bacterias consumen de manera acelerada la glucosa
en una fermentación. El reactor (B) consumió su glucosa a las 25 horas y el reactor (A) si
tardo un poco más. Además que observamos la producción de etanol en el proceso. Y
una disminución. Aunque también podemos concluir que este estudio es de más tiempo y
dedicación para obtener datos más exacto y precisos. Si queremos un mejor resultado
tendremos que medir cada hora la glucosa y en nuestro caso falto mediciones debido al
tiempo y organización.

~ 15 ~