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Directora:
Doctora Carolina Chegwin Angarita
Línea de Investigación:
Productos Naturales
Grupo de Investigación:
Química de Hongos Macromicetos de Colombia
Mario Benedetti
Agradecimientos
A mi madre Ana Lucía González por la confianza que deposita en mí y en cada uno de los
proyectos que comienzo, por su apoyo, paciencia, colaboración y entusiasmo ya que gracias a
esto puedo culminarlos. A toda mi familia que en su silencio o distancia se sienten orgullosos de
cada paso que doy.
A la vida por permitirme conocer personas maravillosas durante todo este proceso, A Leonardo
Bravo, Daniel Maldonado, Diego Rubiano, Carolina Vega y Manuel Gastelbondo de quienes
aprendí que la alegría, la exigencia, el esfuerzo, la dedicación y disciplina son una combinación
necesaria para formarnos como seres humanos, científicos y sociales. Gracias compañeros
porque siempre estuvieron para brindarme su apoyo en el laboratorio, en la parte académica y en
lo personal.
A mi directora y profesora Carolina Chegwin Angarita quien respaldó la idea de este proyecto
desde el inicio, por su paciencia, dedicación y sabiduría, por el tiempo que se tomó para asesorar
cada una de las etapas de este trabajo y por despertar en mí el amor a los Hongos. Un gran ser
humano a quien le guardo mi más sincera gratitud y admiración. Al profesor Pedro Filipe de Brito
Brandão del laboratorio de Microbiología Ambiental del departamento de química, (mi co-director)
a quien le agradezco por asesorar mi trabajo en cada una de las etapas, por su tiempo, por poner
a mi disposición su laboratorio y por forjar con sus palabras mi espíritu investigativo. Y a quien
admiro además por su amor a los animales. A la profesora Yih Wen Fung del departamento de
Biología, por asesorar la parte experimental de mi trabajo con su inmenso conocimiento sobre los
Hongos, por haber donado la cepa de P. ostreatus a quien vimos crecer exitosamente sobre
nuestras colillas. Finalmente a la profesora Ivonne Jeanette Nieto, directora del grupo de
investigación de Química de Hongos Macromicetos del departamento de Química, por compartir
su amplio conocimiento en la química de hongos, por abrirme las puertas de su laboratorio y
permitirme desarrollar el trabajo que aquí presento. Mil gracias a todos.
Resumen y Abstract IX
Resumen
Abstract
Conventional methods such as incineration and solvent extraction have been used to
treat most waste and pollutants, which, in addition to being costly, generate
environmental problems. As an alternative for the degradation, transformation or
mineralization of this type of substances, in recent years the study of processes involving
the use of living organisms has been encouraged. With the objective of documenting the
current state of the subject, a broad bibliographic review of the bioremediation processes
applied in general terms to solid wastes was carried out, to later focus on cigarette butts
(CB) and their treatment using mycorremediation. As results it was found that
bioremediation has been successfully applied to contaminated soils, but the works
focused on their use in the treatment of butts are scarce and even less particularly using
micorremediation. Ligninolytic fungi are characterized by a powerful enzymatic pool,
which facilitates the degradation of a wide variety of substances, so that micorremediation
represents an alternative for the treatment of CB. In addition to this, it was determined,
through an in vitro laboratory-scale preliminary test, that cigarette butts can be used as a
substrate for the growth of a commercial strain of Pleurotus ostreatus, requiring the use of
carboxymethylcellulose medium in activation phase, which let fungal adaptation on the
butts, allowing the conditions of growth and therefore the biodegradation efficiency of the
pollutant residue. The results of this review, as well as the preliminary laboratory tests,
represent an important advance for the study of the potential use of Basidiomycetes as
bioremediation organisms of the CB, being this the first report on this subject in our
country.
Contenido
Pág.
Contenido
1. Biorremediación ........................................................................................................... 5
1.1 Definición ................................................................................................................ 5
1.2 Biorremediación vs técnicas convencionales ........................................................ 7
1.3 Estrategias de biorremediación ........................................................................... 10
1.3.1 Atenuación natural............................................................................................. 10
1.3.2 Bioestimulación.................................................................................................. 13
1.3.3 Bioaumentación ................................................................................................. 13
1.4 Mecanismos que se llevan a cabo durante la biorremediación .......................... 16
1.4.1 Mineralización .................................................................................................... 16
1.4.2 Biotransformación .............................................................................................. 17
1.4.3 Bioacumulación ................................................................................................. 18
1.5 Factores que determinan la eficacia de la biorremediación ................................ 19
2. El Reino Fungi............................................................................................................. 23
2.1 Generalidades del reino ....................................................................................... 23
2.2 Aplicaciones ambientales de productos obtenidos con especímenes del reino
Fungi 26
2.2.1 Micofiltración ...................................................................................................... 26
2.2.2 Micopesticidas ................................................................................................... 27
2.2.3 Micorreforestación ............................................................................................. 28
2.2.4 Micorremediación .............................................................................................. 29
2.2.5 Complejo enzimático de los hongos ................................................................. 31
2.2.6 Ventajas y limitaciones del empleo de la micorremediación ............................ 36
2.2.7 Estudios de caso ............................................................................................... 37
3. Cigarrillo ...................................................................................................................... 42
3.1 Generalidades ...................................................................................................... 42
3.2 Sustancias químicas que contiene el cigarrillo .................................................... 44
3.3 Residuos sólidos generados por el consumo del cigarrillo ................................. 46
3.4 Las colillas de cigarrillo ........................................................................................ 48
3.4.1 Subproductos de interés comercial con el uso de colillas de cigarrillo ............ 54
3.4.2 Tratamientos químicos ...................................................................................... 55
3.4.3 Tratamientos Biológicos .................................................................................... 57
Lista de figuras
Pág.
Figura 4-6: Crecimiento de P. ostreatus activado en CMC sobre MC1 después de 4 días
de cultivo ............................................................................................................................. 69
Figura 4-7: Crecimiento del P. ostreatus sobre colillas de cigarrillo sin procesamiento
(MC2) previamente activado en a) PDA y b) CMC. ............................................................ 70
Contenido XV
Lista de tablas
Pág.
Abreviaturas
Abreviatura Término
AC Acetato de Celulosa
ADN Ácido desoxiribonucléico
AV Alcohol veratrílico
BPCs Bifenilos Policlorados
BTEX Benceno, Tolueno, Etilbenceno, Xileno
CC Colilla de cigarrillo
CMC Carboximetilcelulosa
DDT Dicloro difenil tricloroetano
DMB Dimetoxibenceno
EC50 Concentración media efectiva máxima
EEUU Estados Unidos de América
EurLex Legislación de la Unión Europea
FBC Factor de bioconcentración
FESup Fermentación en estado superficial
HAPs Hidrocarburos aromáticos policíclicos
HTP Hidrocarburos del petróleo totales
Lac Lacasa
LiP Lignino peroxidasa
MC1 Medio de cultivo 1
MC2 Medio de cultivo 2
MCS Medio de cultivo suplementado
MnP Manganeso peroxidasa
O1 Cepa commercial de Pleurotus ostreatus
PCP Pentaclorofenol
PDA Agar papa dextrosa
SDL Sistema de degradación de la lignina
U.S.EPA Agencia de protección ambiental de los Estados Unidos
Introducción
Uno de los problemas que enfrenta el mundo hoy en día es la contaminación del suelo,
agua y aire por el aumento de la actividad industrial y la generación de productos que
tienen efectos tóxicos sobre el medio ambiente y la salud humana. Particularmente, la
industria del tabaco es una de las responsables de numerosos daños de este tipo, no
sólo durante el proceso de producción, sino también durante y después de su consumo.
La deforestación, la contaminación de suelos y agua por el uso extensivo de plaguicidas,
la salud de los consumidores, y la producción de residuos como gases, cenizas, tabaco y
colillas, son ejemplo de los principales aspectos que contribuyen al aumento de dicha
problemática.
Se considera que las colillas de cigarrillo son uno de los residuos más comunes en el
mundo. Representan un riesgo toxicológico para el medio ambiente por su composición y
la cantidad de sustancias químicas que son retenidas en el filtro y parte del tabaco
cuando éste entra en combustión. De este proceso se generan aproximadamente 4.000
compuestos o grupos de ellos, de los que por lo menos 50 son carcinogénicos, entre los
cuales se encuentran: el cianuro de hidrógeno, nitratos, amonio, acetaldehído,
formaldehído, benceno, fenoles, piridinas y monóxido de carbono. Además, se ha
determinado la presencia de metales y metaloides como el Cd, As, Pb y Ni, los cuales
tienden a bioacumularse y, junto con el alquitrán y la nicotina, causan graves impactos
sobre el ambiente.
En este sentido, el uso de organismos vivos, como los hongos, para la degradación de
compuestos químicos xenobióticos resulta útil para disminuir su concentración a niveles
no tóxicos de manera natural, similar a como se hace en la naturaleza. Este tipo de
organismos, tienen la ventaja de ser fácilmente adaptables y pueden degradar una
inmensa variedad de moléculas bajo condiciones muy diferentes. Se ha demostrado que
las especies del género Pleurotus son capaces de transformar, a través de
mineralización y biotransformación, una amplia gama de contaminantes orgánicos
altamente recalcitrantes con similitudes estructurales a la lignina, su principal fuente de
carbono y energía.
A pesar de que el problema de las colillas y el tratamiento de las mismas con hongos, no
ha sido abordado de manera particular en ningún trabajo, se han reportado numerosos
estudios en los que se ha demostrado que los hongos, en su mayoría pertenecientes a
los basidiomicetos catalogados como hongos de pudrición blanca, son poderosos
descomponedores de compuestos contaminantes, como los que se encuentran en las
colillas. Entre los principales organismos utilizados para este fin están: Chrysosporium
Introducción 3
En este sentido, el objetivo del presente trabajo es realizar una revisión sobre las
principales técnicas de biorremediación en el tratamiento de residuos, específicamente
de las colillas de cigarrillo. Así mismo se pretende evaluar, a través de ensayos a escala
de laboratorio (fermentación en estado superficial in vitro), la eficiencia de este residuo
como sustrato para el crecimiento de una cepa de Pleurotus ostreatus, como una etapa
inicial con miras a determinar su potencial aplicabilidad en un proceso de
micorremediación.
1. Biorremediación
1.1 Definición
Los avances tecnológicos y los procesos químicos utilizados en la actualidad, han dado
lugar a nuevos productos y, por tanto, a nuevos contaminantes que en su mayoría
tienden a acumularse y sobrepasar la capacidad de resiliencia y de auto-limpieza del
medio ambiente (Fulekar, 2010). La contaminación de las aguas subterráneas, las aguas
superficiales, el suelo y el aire con sustancias químicas peligrosas y tóxicos, es uno de
los principales problemas que el mundo industrializado enfrenta hoy día. Por ello, existe
la necesidad urgente de desarrollar tecnologías de remediación que consuman menos
recursos, que sean efectivas en menor tiempo y que sean más respetuosas con el medio
ambiente.
El término biorremediación proviene de las palabras bio que significa vida y remediación
que significa arreglo (Evans & Furlong, 2011). Se puede definir como un proceso de
tratamiento biológico, espontáneo o controlado, que implica el uso de organismos vivos
(bacterias, hongos y/o plantas), para reducir o eliminar de manera natural, la acumulación
de compuestos químicos tóxicos o residuos peligrosos presentes en el aire, suelo y agua
(Alvarez & Illman, 2006).
Agencia de Protección Ambiental de los Estados Unidos (U.S. EPA), por la Agencia
Ambiental de Canadá, y otras entidades reguladoras en todo el mundo (Iwamoto & Nasu,
2001), como tecnologías de remediación viables. De hecho, se ha demostrado la eficacia
y el éxito de la aplicación de los procesos de biorremediación en el tratamiento del suelo
contaminado por derrames de productos químicos, fugas en tanques de almacenamiento
subterráneo de gasolina (Schnoor, 1997; Boopathy, 2000; U.S. EPA, 2001b; Alvarez &
Illman, 2006; Fulekar, 2010) y la contaminación del agua por efluentes industriales
tóxicos, en numerosos lugares en todo el mundo.
Los estudios desarrollados en los últimos años relacionados con los procesos de
biorremediación, demuestran el éxito no solo en la aplicación de esta tecnología, sino en
la cantidad y variedad de trabajos de investigación que se han desarrollado, por citar
algunos ejemplos se resalta en trabajo de autores como Gianfreda & Nannipieri, (2001)
quienes realizaron un análisis de los microorganismos que atacan enzimáticamente los
contaminantes del suelo, estudiando sus vías de biodegradación. Alvarez & Illman,
(2006) quienes presentan una amplia perspectiva de los procesos de biorremediación,
así como la caracterización y comparación con los métodos tradicionales, sobre los
cuales se precisará más adelante. Fulekar, (2010), que reporta un completo estudio
sobre los avances que en la última década se han realizado en la tecnología de
biorremediación y las técnicas de restauración de suelos y aguas contaminadas. Y más
recientemente, Scazzocchio, (2014) quien resalta el empleo de ADN recombinante para
el uso de microorganismos modificados genéticamente en la restauración de sitios
contaminados.
fiable y de común aplicación. Es un reto hoy en día proporcionar datos e información para
resolver cuestiones relacionadas con el comportamiento de los organismos, la
degradación de los contaminantes, conocer los cambios que le ocurren durante la
remediación a los organismos y a los compuestos químicos como tal, esto con el fin de
consolidar mejor el uso de esta tecnología.
Hasta hace unos años, resultaba más económico llevarse los suelos contaminados a un
vertedero que pensar en la posibilidad de descontaminarlos. Hoy en día esta situación se
ha revertido, la legislación de la Unión Europea (EUR-Lex) para vertidos de residuos,
considera que es más favorable (económica y ambientalmente) la descontaminación de
los mismos a través de métodos biológicos que físicos o químicos. Las tecnologías
utilizadas en la actualidad tienen como fin el de remediar un sitio contaminado
8 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos de cigarrillo
VENTAJAS DESVENTAJAS
Al igual que algunas técnicas convencionales, también No ha sido posible determinar la efectividad en muchos
pueden aplicarse in-situ o ex-situ. [1][5] tipos de vertidos. [4]
La calidad del suelo no se ve alterada durante el proceso; no
Su aplicación resulta más fácil en suelos que en aire y
se perjudican ni la estructura ni las características biológicas.
agua. [2]
[5]
Dificultad o imposibilidad de degradar contaminantes
Se genera poco o ningún residuos peligrosos.[3]
inorgánicos (y algunos orgánicos). [5]
Pueden generarse compuestos intermediarios o
Pueden obtenerse subproductos útiles para la agricultura. [1] metabolitos secundarios con un potencial similar o incluso
superior al producto de partida. [3]
Se ha demostrado su utilidad en la eliminación de una amplia No es efectiva en la eliminación de elementos como
variedad de compuestos tóxicos [1] [5] Mercurio, Plomo y Cadmio. [4]
La implementación es específica al medio o lugar
Dependiendo del tipo de compuesto, puede lograrse la
contaminado, deben tenerse en cuenta factores
detoxificación completa del sitio contaminado. [4]
específicos para la selección del tipo de biorremediación.
10 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos de cigarrillo
Condiciones aerobias:
Condiciones anaerobias:
Sustrato + (NO3-, SO4 2-, Fe3+, Mn4+, CO2) → Biomasa + CO2 +(N2, Mn2+, S2+, Fe2+, CH4)
Cabe resaltar que para utilizar esta estrategia como una técnica de remediación, será
necesario que existan en el medio unas condiciones físico-químicas específicas de pH
(entre 6-8), nutrientes, temperatura (15 y 45 ºC), humedad, textura, estructura del suelo y
concentración de los contaminantes (Arroyo, n.d.).
12 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos de cigarrillo
Un caso específico de la aplicación de esta estrategia, fue desarrollado por Corona &
Argüelles, (2005) quienes realizaron un experimento con suelo contaminado proveniente
de una refinería que contaba con concentraciones elevadas de HAPs de bajo peso
molecular como el naftaleno, fenantreno y antraceno y de alto peso molecular como el
criseno y benzo(a)pireno. En condiciones específicas de variación de humedad, aire,
adición de nutrientes, adición de surfactantes, tiempo (6, 24 y 48 h) y la presencia de
bacterias heterótrofas en el suelo contaminado (106–108 ufc/g), los autores determinaron
que la concentración de los HAPs disminuyó en más de 90% con respecto a la que se
tenía en el suelo inicialmente, siendo el alto contenido de agua un factor importante para
favorecer la tasa de degradación en un menor período de tiempo.
específicamente cuáles podrían haber sido los mecanismos por los cuales las bacterias
lograron utilizar los HAPs del suelo como sustrato y de esta manera degradarlos.
1.3.2 Bioestimulación
La bioestimulación consiste en la modificación de las condiciones ambientales del medio
contaminado, para favorecer o potenciar la atenuación natural. Se lleva a cabo mediante
el aporte de nutrientes (como nitrógeno y fósforo), aireación (O 2), donantes de electrones
(como compuestos de hierro o nitratos para los procesos anaerobios y etanol o ácido
láctico para procesos aerobios), aceptores de electrones (como oxígeno y nitratos para
procesos aerobios) o por el ajuste del pH.
La U.S. EPA, (1995) recopila diferentes estudios en donde se demuestra que, en casos
específicos la bioestimulación puede ser necesaria para promover la biorremediación, en
especial cuando las concentraciones de contaminantes no son lo suficientemente altas
como para ser eliminadas de manera natural. Adicional a esto, el estudio menciona los
parámetros generales para la aplicación de diferentes procesos de biorremediación sobre
fuentes hídricas y suelos.
1.3.3 Bioaumentación
Consiste en la adición de microorganismos especializados al medio (suelo o agua) con el
fin de potenciar la remediación y de esta manera destruir, inmovilizar o minimizar la
concentración de los contaminantes de interés (Sánchez & Rodríguez, 2010). El objeto
es optimizar la biodegradación de microorganismos autóctonos especializados, para que
la eficiencia sea la mejor.
14 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos de cigarrillo
Actividad polifenoloxidasa,
capaz de oxidar
compuestos aromáticos.
Degradación de:
Suelo /
Matriz compleja de HTP: 68,90%
Degradación por
Bioestimulació hidrocarburos del HAPs de 3 anillos :
hongos autóctonos
n clásica y petróleo, rica en 86,03%
(19 cepas
Bioaumentació fracciones saturadas HAPs de 6 anillos: Medaura, M., 2013
identificadas);
n fúngica pesadas y aromáticos 28,27%
División Ascomycota
de elevado peso
molecular (HMW-HAPs) Disminución de la
toxicidad de los lixiviados
del suelo.
Cambio en las
poblaciones bacterianas
determinadas por cultivo.
Para comprender un poco más a fondo qué es lo que sucede con las sustancias
contaminadas cuando se usa un organismo biológico en su tratamiento, a continuación
se explicarán cada uno de los mecanismos que pueden presentarse en este proceso.
1.4.1 Mineralización
El proceso por el cual se degradan compuestos orgánicos en materiales menos tóxicos
como metano, dióxido de carbono, agua y sales inorgánicas (Alvarez & Illman, 2006), se
conoce como mineralización. Este mecanismo, se basa en el hecho de que la materia en
la naturaleza se transforma mediante conversiones biológicas en condiciones específicas
de temperatura y en presencia de oxígeno, tal como en la estrategia de atenuación
natural (Mulas, 2008).
Se han desarrollado numerosos trabajos basados en este mecanismo (Woo et al., 2016;
Quintero, 2011; Cerniglia, 1997; Deshmukh et al., 2016; Schnoor, 1997; entre otros)
específicamente por la acción de hongos de la pudrición blanca, de los cuales se hará
énfasis en el numeral 2.2.4.
1.4.2 Biotransformación
Algunas veces, los compuestos en la naturaleza no se mineralizan, sino que se
transforman en otros diferentes que pueden ser incorporados por el propio organismo
que los transforma o secretados al medio ambiente (Casal & Rojo, 2004), a este
mecanismo se le conoce como biotransformación (Castillo, et al, 2005).
18 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos de cigarrillo
1.4.3 Bioacumulación
El mecanismo por el cual algunos compuestos contaminantes que no se degradan o
presentan mayor resistencia a la biodegradación (recalcitrancia), se acumulan en una
Capítulo 1 19
producen cambios genéticos, que les proporciona una capacidad metabólica nueva para
degradar sustancias nocivas para el medio ambiente. Señala Posada (2011), que en
ambientes severamente contaminados, la ausencia de otras fuentes de nutrientes obliga
a los microorganismos mejor dotados a degradar los contaminantes.
Para que un proceso de biorremediación sea efectivo, debe tenerse en cuenta que gran
parte de los microorganismos aislados deben pasar por un proceso de adaptación.
Comúnmente se prueban los límites de tolerancia y la capacidad de biodegradación en
condiciones específicas de laboratorio para luego ser usados en condiciones de campo
(Evans & Furlong, 2011), lo que causa una disminución o eliminación de su potencial
metabólico.
Caso contrario suele suceder con las plantas superiores, las cuales se pueden adaptar a
las condiciones del entorno en zonas contaminadas y al no incorporar los contaminantes
en su metabolismo, utilizan diferentes mecanismos para aislar o retener los
contaminantes en sus tejidos (Posada, 2011). Otros factores que deben ser tenidos en
cuenta para aumentar la eficacia de la biorremediación, se describen en la tabla 1-3
(Evans & Furlong, 2011; Mulas, 2008).
organismos pertenecientes al reino fungi, para entender un poco más el por qué su gran
potencial en la biorremediación.
2. El Reino Fungi
Los hongos son organismos eucariotas de los cuales se han descrito aproximadamente
500.000 especies pero se estima que pueden existir entre 1 y 1,5 millones en todo el
mundo, de los cuales 140.000 producen cuerpo fructífero lo suficientemente grande y una
estructura adecuada para ser considerados macrohongos (Miles & Chang, 2004). Son
uno de los organismos más versátiles de la naturaleza en su estructura, metabolismo,
ecología y genómica (Herrera, et al. 2015).
Terrestres
Carecen de septos Phizopus stolonifer
Zigomycetes Zigomicetos
Sustrato: materia vegetal o animal
Reproducción asexual
Hifas con septos
Sustrato: madera , materia orgánica muerta,
estiércol, agua dulce o marina
Ascomycetes Ascomicetos Claviceps purpura
Forma líquenes en asociación con algas.
Reproducción sexual
Desarrollan cuerpo fructífero
Hifas con septos
Pared de quitina y glucosa
Sustrato: generalmente sobre materia
orgánica en descomposición Pleurotus ostreatus
Basidiomycetes Basidiomicetos
Reproducción sexual
Algunos son comestibles con aporte
nutricional, actividades biológicas y
propiedades medicinales.
Hifas con septos
Mecanismo sexual no definido
Deuteromycetes Deuteromicetos Aspergillus niger
Parásitos de plantas y animales
Patógenos
El reino fungi representa un grupo de organismos con una gran variedad de estructuras.
Dentro de ellas está el micelio que crece de sus extremidades como árboles de división
binaria (hifas), las cuales pueden presentar paredes transversales que reciben el nombre
de septos. Presentan básicamente dos tipos de morfologías: una multicelular
denominada filamentosa y otra unicelular denominada levaduriforme. Los hongos
filamentosos (miceliares o mohos), son aerobios y representan el crecimiento más común
de los hongos microscópicos (Singh, 2006). Sus requerimientos de temperatura y de pH
son poco exigentes y la mayoría crecen en un rango de pH de 2 a 9 y a temperaturas
entre 10 y 40 °C.
encuentran en los tejidos vivos o muertos de plantas y animales (Miles & Chang, 2004)
P y
energía y el carbono de compuestos orgánicos sintetizados por otros organismos. Este
hecho condiciona su modo de vida, obligándolos a que en la naturaleza se encuentran
asociados a la materia orgánica como simbiontes, parásitos y saprófitos, participando en
los ciclos naturales de reciclado del carbono y otros elementos (Quintero, 2011).
Capítulo 2 25
Los hongos son especialistas en descomponer material vegetal (Mulas, 2008) y muchos
compuestos que tienen cierta similitud estructural con componentes de la misma, por lo
que son hábiles en el empleo de estos como fuente de carbono y energía (Stamets,
2005).
degradar una amplia variedad de HAPs (Sack, 1993) en suelos no estériles aún en
presencia de cadmio y mercurio, así como de tener la propiedad de catalizar la
humificación de antraceno y benzo(a)pireno en suelos contaminados (Bojan et al., 1999).
El uso de productos obtenidos del reino Fungi ha incrementado progresivamente por sus
aplicaciones medicinales, biotecnológicas y ambientales (Ghorai et al., 2009; Shu, 2007;
Singh, 2006; Zaidman et al., 2005). En la presente revisión el enfoque está dado sobre
sus usos para el tratamiento de ambientes contaminados, razón por la que a
continuación se hará una breve descripción de algunas de las aplicaciones más comunes
en esta área.
2.2.1 Micofiltración
El crecimiento vegetativo de hongos sobre sustratos de madera o fuentes de carbono
para obtener filtros biológicamente activos, hace parte de lo que hoy se conoce como
micofiltración. Es una tecnología promisoria para mejorar la biofiltración de aguas
pluviales, aguas negras y escorrentía agrícola. Estudios recientes (Taylor & Stamets,
2014) documentan que es posible eliminar aproximadamente el 20% de Escherichia coli
de aguas lluvia contaminadas usando micofiltración en diferentes condiciones de
temperatura. Adicional a esto, discuten el estado actual de la investigación, describen
Capítulo 2 27
Stamets, (2005) afirma que en los hábitats donde crecen hongos con micelio, se reduce
notoriamente el flujo de partículas a través del agua, mitiga la erosión, filtra algunas
bacterias, virus y protozoos y modula el flujo de agua a través del suelo. El uso de
membranas formadas con el micelio de los hongos, se ha implementado en granjas
suburbanas, áreas urbanas, cuencas de agua, fábricas, carreteras y hábitats dañados
para limpiar, reducir y recuperar determinados lugares de patógenos, sedimentos y
toxinas químicas.
2.2.2 Micopesticidas
La acumulación de compuestos contaminantes en la biósfera por la utilización de
pesticidas, herbicidas, insecticidas, metales, materiales sintéticos y productos
radioactivos, afectan la calidad de vida dentro del planeta. Muchos de los químicos
usados en los pesticidas para controlar la cantidad de insectos y proteger los cultivos,
especialmente los compuestos organofosforados, causan daños no específicos en los
organismos vivos, contaminan el agua y afectan la salud humana.
Hoy en día está prohibido el uso de muchas de estas sustancias y limitado el uso de
pesticidas considerados como tóxicos (EPA, 2004). Con el objetivo de encontrar
alternativas para esta problemática, se vienen desarrollando métodos para el control de
insectos ecológicamente amigables, enfocados en la utilización de los llamados
biopesticidas.
Dicha relación entre los organismos, ocurre cuando los insectos entran en contacto con
las esporas del hongo. Éstas se unen a los insectos y germinan, perforando a través del
28 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos del cigarrillo
exoesqueleto del insecto usando enzimas que disuelven la quitina. Los hongos también
interactúan con los insectos a través del tracto respiratorio, el ano y la boca. Una vez
dentro, el micelio se bifurca y corre a través de los órganos internos, interfiriendo con el
metabolismo de la criatura, causando malestar, necrosis y la muerte en pocos días
(Deshmukh et al., 2016; Goltapeh, 2013)..
Uno de los casos más comunes ocurre entre la especie Cordyceps lloydii y la hormiga
Camponotus sp. La hormiga, una vez infectada, tiene el irresistible impulso de subir a la
cima de los árboles, luego de haber ascendido, entierra su mandíbula en una hoja, muere
y posteriormente el hongo brota de su cadáver. Este comportamiento asegura que las
esporas del hongo se extiendan por los vientos y continúe el ciclo reproductivo y
disminuye a su vez la población de dicho insecto.
Stamets, (2005) afirma que los biopesticidas, especialmente los que involucran hongos,
no representan un daño ambiental persistente en contraste con los tratamientos químicos
convencionales, con pesticidas que causan daños a largo plazo en las diferentes
matrices ambientales.
2.2.3 Micorreforestación
Como se ha mencionado, los hongos intervienen en los ciclos biogeoquímicos de
elementos como C, O, N y P, regulando el flujo de nutrientes y energía, confiriéndole
grandes beneficios ecológicos al lugar en donde crecen. La micoreforestación, es una
técnica de reciente aparición, basada en la rama de las prácticas ecoforestales. Se
enfatiza en el papel benéfico de los hongos utilizado para mantener comunidades
forestales o bien acompañar la preservación de bosques nativos, recuperar y reciclar
restos de árboles, mejorar los procesos de replantado y fortalecer la sostenibilidad de los
ecosistemas (Stamets, 2005).
Las setas de Termitomyces, por ejemplo, forman asociaciones simbióticas con las
termitas, las cuales son importantes ecológica y económicamente. Ellas tienen una
relación simbiótica con los hongos, recogiendo madera y materia orgánica para llevarla a
sus nidos, como alimento y uso para sus crías, y los residuos son aprovechados por el
hongo el cual incorpora algunos de los nutrientes a través de sus micelios y recicla otros
Capítulo 2 29
2.2.4 Micorremediación
El uso de géneros bacterianos en los procesos de biorremediación sobre diferentes
matrices ha sido ya bastante estudiado. La mayoría de los procesos involucrados en
biorremediación, utilizan organismos procariotas como bacterias y plantas y son
fácilmente aplicables sobre matrices sólidas a través de biorreactores, biopilas,
compostaje, landfarming, etc. Estas medidas biocorrectivas, en la actualidad ya están
establecidas, han sido evaluadas y se aplican en diferentes contextos de
descontaminación (Reddy et al., 1982; Cerniglia, 1984; Cerniglia, 1992; Wilson & Jones,
1993; Kanaly & Harayama, 2000; Johnsen et al., 2005; entre otros).
El estudio de los hongos como biorremediadores, es un campo menos explorado que con
otros organismos, pero ha venido tomando fuerza desde ñ 90’ (Aust
& Benson, 1993) y por ende el número de publicaciones ha aumentado
considerablemente en la última década. Con respecto a la dilucidación de las rutas
metabólicas para la transformación de compuestos químicos contaminantes, es un
campo en desarrollo que, si bien se ha trabajado, los mecanismos aún son de carácter
propositivo y no tanto demostrativo.
Figura 2-1: Vía metabólica propuesta para la transformación del fenantreno en cultivos de
P. ostreatus
Las rutas que se proponen en la literatura están guiadas por una serie de reacciones
químicas asociadas al complejo enzimático que poseen los hongos. Este complejo le
confiere a los hongos la propiedad de biotransformar o mineralizar una gran cantidad de
sustancias químicas contaminantes, como se verá en el siguiente numeral con más
detalle.
Figura 2-2: Compuestos que pueden ser mineralizados por el sistema enzimático
ligninolítico de hongos de podredumbre blanca
32 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos del cigarrillo
Los radicales libres generados por las enzimas LiP y MnP hacen parte del sistema de
degradación de la lignina (SDL) en el cual se realizan ataques oxidativos a moléculas
orgánicas (Drevinskas et al., 2016; Hansen, 2012; Jebapriya et al., 2013; Kirk et al., 1992;
U.S. EPA, 1995). Generalmente este SDL es inducido por deficiencia o limitación de
nutrientes, principalmente nitrógeno y carbono en el medio sobre el cual crece el hongo.
La LiP puede ejercer por sí misma la acción oxidativa o formar radicales libres a partir de
algunos compuestos orgánicos como el alcohol veratrílico (AV) o el dimetoxibenceno
(DMB) de manera análoga a como ocurre con las MnP (Cameron et al., 2000). Estos
radicales libres, son sustancias altamente oxidantes que pueden difundirse y penetrar en
matrices en las que las propias enzimas (MnP y LiP) no lo pueden hacer y así aumentar
la biodisponibilidad de sustratos y xenobióticos implicados en este tipo de metabolismo
Capítulo 2 33
microbiano. Los ciclos catalíticos de las enzimas peroxidasas (LiP y MnP) en su reacción
con H2O2 para formar los radicales libres Mn+3 y AV+ se presentan a continuación:
El mecanismo de radicales libres, por otra parte, proporciona la base para la naturaleza
inespecífica de la degradación de una variedad de contaminantes estructuralmente
diversos, obviando la necesidad de que estos organismos se adapten al producto
químico que está siendo degradado (Gadd, 2001; Reddy & Gold, 2001). En la figura 2-3
se muestra la ruta propuesta por varios autores para la producción de OH- por la LiP.
De acuerdo con la literatura revisada, las enzimas extracelulares no son las únicas que
contribuyen en la degradación de contaminantes. Para el caso de compuestos tales
como el fenantreno, benzo(a)pireno y el DDT, estos son degradados por el complejo
citocromo P-450 monooxigenasas (Quintero, 2011) a través de la reacción general
propuesta por el autor, como se muestra a continuación:
En la figura 2-4 se muestra cómo es el ciclo catalítico del complejo cotocromo P-450
monooxigenasas. Se conoce que estas enzimas oxidan más de 200.000 sustancias
químicas exógenas y endógenas diferentes, siendo altamente específicas en procariotas
e inespecíficas en eucariotas. Este complejo puede ser entendido como una súper familia
de biocatalizadores que introducen un átomo de oxígeno en un amplio rango de
moléculas para producir un epóxido (Quintero, 2011).
En la tabla 2-5 se hace una lista de algunas especies que han demostrado tener
actividad enzimática para la degradación de diferentes compuestos, considerados como
tóxicos para el ambiente (Stamets, 2005).
La extensión de las hifas desarrolladas por los macromicetos, les permiten alcanzar
contaminantes en el suelo, que no están biodisponibles para ser biodegradados por otros
organismos. Aunado a esto, por el requerimiento de sustratos ligninocelulósicos para su
crecimiento, es posible adicionar a los sitios contaminados residuos de muy bajo costo
como viruta de madera, carozo de maíz o paja de trigo, para promover su crecimiento,
provocar la secreción de enzimas (Chegwin, 2010) e incrementar la degradación de los
contaminantes (Aust & Benson, 1993), (Barr & Aust, 1994).
VENTAJAS DESVENTAJAS
La naturaleza extracelular de sus enzimas (Lacasa, La inoculación del micelio sobre sustratos pobres en
LiP, MnP) hace que la acción degradativa sea materia orgánica puede dificultar su crecimiento por
superior sobre las bacterias. la demanda de alimento.
Especies como Agaricus macrosporus o Agaricus La contaminación sobre un sustrato líquido es más
arvensis son perfectamente cultivables con altas eficiente con el uso de bacterias, quienes son las
producciones de carpóforos (cuerpos responsables de la mayor parte de la degradación
reproductivos). de compuestos en aguas contaminadas.
El cuerpo constituido por hifas es más pequeño en Las rutas metabólicas en géneros bacterianos han
diámetro que las raíces de las plantas, por lo que la sido bastante estudiadas, sin embargo en hongos
infiltración del hongo al sustrato es superior hasta ahora se vienen determinando.
En el documento publicado por esta misma agencia (U.S. EPA, 2001) se recopila una
gran cantidad de datos sobre el rendimiento de la biorremediación en tratamientos ex-
situ, tratamiento de suelos, biorremediación en fase de purga y de compostaje. Cabe
resaltar de este trabajo que la aplicación de proyectos de biorremediación, redujo
considerablemente las concentraciones de HAPs en suelos y lodos. Las metas de
limpieza para los HAP se cumplieron para 3 de los 4 proyectos de tratamiento de la tierra.
Figura 2-5: Vía metabólica para la biodegradación del insecticida Endosulfan por P.
chrysosporium
Las líneas sólidas indican el metabolismo principal, las líneas punteadas son vías metabólicas menos
probables.
Figura 2-6: Etapas iniciales en las vías microbianas para la oxidación de hidrocarburos
aromáticos policíclicos.
De acuerdo con la figura, las bacterias oxidan inicialmente los hidrocarburos aromáticos a
cis-dihidrodioles, lo que implica la incorporación de oxígeno en el sustrato y posterior
producción de dioxigenasas, que incorporan dos átomos de oxígeno en el núcleo
aromático. La oxidación adicional conduce a las formación de catecoles provocando el
rompimiento del anillo aromático y estos a su vez se pueden oxidar por dos vías (orto y
meta), para la obtención de compuestos intermedios del ciclo del ácido tricarboxílico
(ácidos cis-mucónico, succínico, fumárico, pirúvico y acético) y aldehídos, todos ellos
utilizados por el microorganismo para la síntesis de constituyentes celulares y energía
(Wilson & Jones, 1993).
Capítulo 2 41
3.1 Generalidades
El cultivo y consumo de las plantas del género Nicotiana se remonta hace unos 3,000
años atrás. Los antiguos habitantes de América las utilizaban principalmente con fines
y S z ñ 50’ J
Nicot, a quien se le atribuye el nombre de la planta y de su componente activo (Rubio &
Rubio, 2006). Desde entonces, la comercialización del tabaco en forma de cigarrillo y la
cantidad de personas que lo consumen ha venido en aumento. En la actualidad se
estima que unos 1,300 millones de personas fuman en el mundo (Novotny et al., 2015).
Este producto de consumo masivo, con efectos estimulantes y sedantes, afecta la salud
no solo de quienes lo consumen, sino de aquellos considerados como fumadores
pasivos. Además es considerado como una fuente significativa de contaminación
ambiental (Healton et al., 2011; Martín, 2004; Talhout et al., 2011).
que lo envuelve. En la figura 3-1 se observan estas partes y otras más específicas
publicadas por la marca Philip Morris.
Dependiendo del tipo de cigarrillo y de quién lo fabrica, los componentes son modificados
tanto cualitativa como cuantitativamente. Estos aditivos están directamente relacionados
con la producción de sustancias secundarias durante la combustión y consecuente
formación de residuos tóxicos y/o contaminantes que, como se verá, tienen un efecto
importante sobre el consumidor y el medio ambiente.
44 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos del cigarrillo
Se estima que gran parte de las sustancias utilizadas en el cultivo del tabaco y la
fabricación de los cigarrillos, son las responsables de la formación de aproximadamente
5,000 compuestos cuando el cigarrillo entra en combustión (Fowles et al., 2000b;
Hoffmann, D., 2001; Hoffmann et al., 1997; Schmeltz et al., 1978).
Según datos del Departamento de Salud y Servicios Humanos de los Estados Unidos
(USDHHS, 2010) estas sustancias tienen potenciales efectos carcinogénicos,
cardiovasculares y respiratorios en los humanos, 98 de ellas representan un riesgo para
la salud por inhalación y de acuerdo con la Agencia Internacional para la Investigación
del Cáncer (IARC), 45 de ellas son conocidas como agentes carcinogénicos (como la
nicotina, el benzopireno, la acroleína y nitrosaminas); de hecho se sabe que la planta por
sus características particulares, puede incluso acumular compuestos radiactivos como
plomo-210 y polonio-210 en cantidades que ponen en riesgo la salud (Lecours et al.,
2012)
Según la Unión Europea, está permitido añadir aproximadamente 600 sustancias a los
productos del tabaco, todas ellas consideradas por la i “ ”
ser humano cuyas funciones principales son tres: aumentar la absorción de la nicotina
del tabaco, aumentar la adicción de los consumidores y modificar el sabor y el aroma de
los cigarrillos (Bates et al., 1999). El amoniaco, endulzantes como jarabe de sacarosa y
el mentol cumplen con estos objetivos (Connolly et al.,, 2000).
Tabla 3-1: Constituyentes tóxicos de la corriente principal del humo del cigarrillo fumado
bajo condiciones estándar que inciden en el padecimiento de cáncer
Sustancia Química
Riesgo de cáncer
en la corriente
(cigarrillo/día)*
principal
-04
1,3-butadieno 8.6 x10
Tabla 3-2: Constituyentes tóxicos de la corriente secundaria del humo del cigarrillo
fumado bajo condiciones estándar que inciden en el padecimiento de cáncer
Escala de riesgo Clasificación según
Sustancia Química en la corriente
relativo IARC/USEPA (1999)
secundaria
** ***
1,3-butadieno 100% 2A
Acrilonitrilo 13.3% 2B
N-Nitrosonornicotina 10.7% 2B
Benceno 4.2% 1
N-Nitroso-dimetilamina 3.5% 2A
Acetaldehído 2.4% 2B
Formaldehído 1.3% 2A
Cromo 0.43% 1
Benzo(a)pireno 0.09% 2A
*Las estimaciones de riesgo se calculan sobre una base de cigarrillos/día para una persona de 70 kg con tabaquismo
durante 35 años con un promedio de 70 años de vida y absorción del 100% de las mediciones de entrega de humo en
condiciones estándar.
46 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos del cigarrillo
** El riesgo relativo es proporcional a la relación de concentraciones reportadas en los niveles de exposición de referencia
suponiendo un promedio de 20m por día. La escala se normaliza a la sustancia química con mayor riesgo al 100%.
*** Clasificación según la IARC/USEPA:
1: Conocido como carcinogénico en humanos.
2A: Probables carcinógenos humanos.
2B: Posibles carcinógenos humanos.
3: No clasificables como carcinógenos humanos.
Se consideran como residuos a todos aquellos restos y sobrantes que quedan del
consumo que el ser humano hace de determinado producto y es descartado, por haber
cumplido con su función. Los productos de desecho para este caso particular son las
colillas, los paquetes, las envolturas de celofán y los cartones, todos ellos formas
omnipresentes de basura (Smith & McDaniel, 2011). Estos residuos son claramente
visibles en especial en zonas de una alta concentración de la población, como ciudades
principales, zonas sociales, parques, playas, etc.
Al respecto, otros estudios como el reportado por Novotny & Zhao, (1999) mencionan
una larga lista de la cantidad de cartones, filtros y paquetes producidos en 49 países, con
el fin de estimar el total de residuos producidos en el mundo. Se utilizaron los datos del
Proyecto de Limpieza Costera Internacional del Centro para la Conservación Marina,
para describir algunos impactos ambientales de basura relacionada con el tabaco, así
como datos del inventario de emisiones de tóxicos de la U.S. EPA y los totales mundiales
Capítulo 3 47
Tabla 3-3: Prevalencia de los desechos reportados en las calles de la ciudad de San
Francisco, 2009
CATEGORÍA PORCENTAJE
Vidrio 37.5%
Productos del Tabaco 24.6%
Papel 16.6%
Plásticos Pesados 6.6%
Envolturas 3.6%
Películas de Plástico 3.0%
Metales (No Al) 2.4%
Aluminio 1.8%
Otros materiales 1.2%
Espumas de Polietileno 1.0%
Tapas de Botellas 0.6%
Caucho 0.5%
Pitillos 0.5%
Espuma de polipropileno 0.1%
TOTAL 100%
Estos últimos hacen especial énfasis en las CC recolectadas en un solo día de limpieza
en Australia (figura 3-2), con porcentajes que están casi al mismo nivel de otras formas
de residuos, consideradas como comunes, como el caso de las bolsas plásticas de
supermercado.
48 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos del cigarrillo
Para el caso de Colombia, se sabe que 19,800 millones de cigarrillos son consumidos al
año, de los cuales el 85,1% corresponde a cigarrillos con filtro (16,859 millones de filtros),
99 millones de cartones y 990 millones de paquetes. En Bogotá se realizó un estudio, en
el que se estimó la cantidad de colillas de cigarrillo desechadas en las calles en 5 zonas
sociales nocturnas de la ciudad y recolectadas únicamente de jueves a sábado durante 4
horas (Lozano-Rivas et al., 2015).
Aunque los componentes de papel y tabaco son biodegradables, los filtros y las
envolturas de plástico se mantienen en el medio ambiente durante largos períodos de
tiempo. El acetato de celulosa del que están hechos los filtros de cigarrillo puede persistir
durante 18 meses o más (hasta 10 años), dependiendo de las condiciones ambientales
(Smith & McDaniel, 2011).
Estudios similares han sido reportados por diferentes autores, con valores cercanos de la
concentración de metales en lixiviados no solo de colillas, sino de tabaco de diferentes
marcas de cigarrillo, de tabaco remanente y filtros limpios (Ajab et al., 2014; Iskander,
Bauer, & Klein, 1986; Ryan & Clark, 2010; Wang & Finlayson, 2003).
El tabaco contiene entre 0,6-3,0% de nicotina, para el caso del cigarrillo este rango está
entre 9-30 mg y un consumidor promedio puede ingerir entre 0,5-2 mg por cigarrillo. Sin
embargo, cuando una colilla es ingerida accidentalmente por humanos o animales, se
estima que la dosis letal está entre 40-60 mg y 9,2 mg para animales. Los síntomas por
ingestión de la nicotina se pueden desarrollar rápidamente en adultos entre 4-8 mg, en
Capítulo 3 51
niños y animales entre 1-2 mg, entre los cuales se incluyen náuseas, vómitos, salivación
y diaforesis. Con intoxicación grave, puede haber convulsiones, bradicardia con
hipotensión, arritmias cardíacas y depresión respiratoria (Novotny et al., 2011).
Slaughter et al., (2011) demostraron que la dosis letal media es aproximadamente una
colilla de cigarrillo por litro de agua para especies de peces pequeños de agua dulce y
salada. En este estudio se prepararon lixiviados de filtros de cigarrillo sin fumar sin
tabaco (USF), filtros de cigarrillo fumados sin tabaco (SF) y colillas de cigarrillo (SCB)
(filtro fumado + tabaco) (tabla 3-5).
Tabla 3-5: Toxicidad de las colillas de cigarrillo para algunos organismos acuáticos.
Colillas de Cigarrillo/L
Especie USF SF SCB
Topsmelt LC50 5.1 (4.6 – 5.7) 1.8 (1.5 – 2.0) 1.1 (0.95 – 1.3)
Fathead minnow LC50 13.5 (11.4 – 15.9) 4.3 (3.7 – 5.1) 0.97 (0.84 – 1.1)
Daphnid (D magna)* LC50 >16 1.0 – 2.0 0.125 – 0.25 Ɨ
D phnid (C cf dubi ) ‡ EC50 NA NA 0.03 – 0.08 (0.02 – 0.12)
(Immobilización)
D phnid (C cf dubi ) ₴ EC50 1.7 (1.4 – 2.06) 0.16 (0.09 – 0.27) 0.06 (0.05 – 0.08)
52 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos del cigarrillo
(Immobilización)
Marine Bacterium (V fischen) NA NA 0.3 – 2.7 (0.3-3.5)
‡ EC50 (Bioluminiscence)
Marine Bacterium (V fischen) >970 1.25 (1.21 – 1.33) 0.58 (0.53 – 0.63)
₴ EC50 (Bioluminiscencia)
Valores de LC50 y EC50 para lixiviados provenientes de Filtros de cigarrillo sin fumar (USF) sin tabaco, Filtros de Cigarrillo
fumados (SF) sin tabaco y Colillas de Cigarrillo (SCB) (filtro fumado + tabaco).
Adaptada de: (Slaughter et al., 2011)
Curtis et al., (2014) publican un extenso documento, en el cual abordan los criterios
específicos que se aplican para decidir si un determinado producto tóxico debe adherirse
a principios normativos. Presentan tres estudios de caso de enfoques similares a otros
productos tóxicos y/o perjudiciales para el medio ambiente; y describen 10 posibles
intervenciones o acciones de políticas que pueden ayudar a prevenir, reducir y mitigar los
efectos de los residuos de la industria del tabaco.
Javadian et al., (2015) publican algunas perspectivas sobre los residuos de los
productos del tabaco, proponen que las empresas fabricantes de cigarrillos, deben
hacerse responsables de la recolección, transporte, procesamiento y eliminación segura
de los residuos, a través de leyes que en la actualidad son aplicables a otros productos
considerados como tóxicos y peligrosos, como es el caso de las pinturas, contenedores
de pesticidas y productos farmacéuticos
Kadir & Mohajerani, (2008) presentan algunos resultados de un estudio sobre el reciclaje
de CC para la elaboración de ladrillos de arcilla cocida. Un completo estudio en el que se
discuten las propiedades físico-mecánicas de los ladrillos, incluyendo resistencia a la
compresión, resistencia a la flexión, densidad, absorción de agua y conductividad
térmica. Los resultados demuestran que la densidad de los ladrillos se reduce
significativamente en comparación con los ladrillos convencionales, hasta un 30%
dependiendo del porcentaje de CC incorporadas. La resistencia a la compresión también
disminuyó, al igual que la conductividad térmica, sin embargo son una alternativa
bastante viable para ser utilizados en construcción. En la Figura 3-3, tomada del artículo,
se muestra la apariencia física de los ladrillos con diferentes porcentajes de CC
añadidos.
De igual forma los autores cuantificaron los metales presentes en los lixiviados del
proceso, determinando que únicamente habían trazas de metales pesados, por lo que la
posibilidad de utilizar colillas de cigarrillos en la producción de ladrillos, no mostró ningún
peligro por la generación de metales al medio ambiente.
Aunque el hecho de que exista la posibilidad técnica y tecnológica de utilizar estos
residuos como producto de construcción, esto requiere de una evaluación cuidadosa, ya
que no se exime la posibilidad de que algunos residuos puedan ser fuentes de
contaminación en interiores.
Capítulo 3 55
Otra de las aplicaciones con interés comercial para el reciclado de las colillas de
cigarrillo, es la propuesta por Luna (2009). El objetivo del autor fue incorporar las CC en
un sistema de paneles que pudieran utilizarse como muros divisorios en construcción. El
reaprovechamiento de la CC utilizando procesos de reciclaje, permitió generar materiales
alternativos, que al contrario de contaminar, podrían contribuir con la reducción de la
contaminación del suelo por este tipo de desechos.
Después de filtrar la mezcla resultante, se obtuvo una pasta de celulosa, que se puede
utilizar en la industria del papel, y un licor oscuro viscoso que contiene lignina, carbonilos,
metales, nicotina y nitrosaminas específicas de tabaco y que por ende requiere algún tipo
de tratamiento. Este líquido presentó una alta demanda química de oxígeno (DQO:
29,986 mg/L), que fue parcialmente eliminado por precipitación (20%), coagulación de
quitosano (66%) y ozonización (45,8%). Como el DQO restante seguía siendo alto, se
propuso reutilizar el efluente clarificado en la pulpa alcalina, lo que parecía ser el
procedimiento más fácil y eficiente con el costo más bajo.
Finalmente este proceso se presenta como una alternativa a la eliminación final
ambientalmente amigable de las CC como se observa en la figura 3-4. Es importante
mencionar que el proceso desarrollado aquí fue licenciado a una empresa de reciclaje, la
cual puso en marcha una planta piloto ( ’H T x et al., 2016).
Figura 3-4: Proceso propuesto para la producción de pulpa de celulosa a partir de colillas
de cigarrillo.
Gu et al., (1993) encontraron que si hay un grado de sustitución 1,7, este puede
degradarse en subproductos del metano, luego de permanecer 30 días en un biorreactor
por la acción de las Pseudomonas Gram negativas presentes en el agua. Filtros de
58 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos del cigarrillo
cigarrillo con un grado de sustitución del polímero de 2,45, han sido degradados
anaeróbicamente (Zenjian et al., 2003) y otras bacterias como la Gram negativa
Neisseria sicca y la Alcaligenes xylosoxidans, han sido utilizadas para degradar el
acetato de celulosa.
Uno de los primeros trabajos en los que se hace referencia al tratamiento biológico con
hongos de colillas de cigarrillo, fue encontrado en un documento que hace parte del
Primer Encuentro Nacional de Expertos de Residuos Sólidos llevado a cabo en la
Universidad Autónoma de México (UNAM) en el año 2007, (Benitez & Esparza, 2007). El
“D
de Pleurotus ostreatus y Trametes versicolor” v
mejor cepa y el tratamiento para la rápida y eficiente degradación de estos residuos
sólidos, así como contar con una alternativa de innovación biotecnológica para resolver
este problema de contaminación mundial.
En su trabajo, los autores afirman que las especies de basidiomicetos evaluadas, son
eficientes degradadores de las CC, logrando mejores resultados con P. ostreatus la cual
al fructificar sobre las colillas, cambia la estructura fibrilar del acetato de celulosa y
reduce el peso del sustrato. A pesar de estas afirmaciones, la veracidad de las
conclusiones extraídas por los autores, es discutible ya que para el primer caso, la única
evidencia de degradación son fotografías (por barrido electrónico, aunque no se
especifica la técnica), en donde se muestra más bien un desgaste en las fibras de AC
antes y después del tratamiento con ambas especies, y no es posible determinar si hubo
o no cambios en la estructura del acetato de celulosa y menos degradación del material
(Figura 3-5).
Figura 3-5: Acetato de celulosa (500X) con 70 días de tratamiento, donde 1: Sin
tratamiento, 2: cultivo de Pleurotus ostreatus, 3: cultivo de Trametes versicolor.
1 2 3
Capítulo 3 59
Con respecto al peso del sustrato, se afirma que este se reduce, sin embargo, no se
especifica cómo lo determinaron, si se tuvo en cuenta o no la cantidad de micelio que
invadió el sustrato, si se separó del micelio, si se pesó con la paja de trigo o si se pesó
con las fructificaciones obtenidas, por lo que los datos en este caso de igual forma no son
precisos.
Otra de las variables analizadas en esta investigación, es la composición del sustrato,
afirmando que es conveniente una mezcla entre paja de trigo y colillas de cigarrillo (75%-
25% ó 50%-50% respectivamente), ya que la paja puede aportar el contenido de lignina y
activar la secreción de enzimas. No obstante, los autores no especifican con cuál de los
porcentajes evaluados se obtuvieron los mejores resultados. Finalmente, se reportan
también diferentes parámetros para evaluar la eficiencia del proceso, pero la discusión es
bastante deficiente, debido a que los autores solo se limitan a mostrar en la tabla 3-6:
Tabla 3-6: Parámetros y resultados del crecimiento de las dos especies de hongos
Pleurotus ostreatus Trametes Versicolor
A B C K A B C K
CRECIMIENTO MICELAR
pH 7,2 7 6,9 6,7 7,2 7 6,9 6,7
FRUCTIFICACION
EB 128 161 133 140 NO FRUCTIFICACION
P 51 64 53 56
CIN 29 20 19 18
T.F 24 42 44 24
Sustratos:
A:100% colillas B: 75% colillas y 25% paja, C: 50% colillas y 50% paja K: grupo control (solo con paja de trigo)
Parámetros de fructificación:
EB: Eficiencia biológica (%) P: Producción (g) CIN: Cinética del cultivo (días) TF: Tiempo hasta la fructificación
(días)
Adaptado de (Benitez & Esparza, 2007)
Los valores de clasificación parecen ser bastante arbitrarios, ya que la apreciación del
micelio es altamente subjetiva y sumado a esto la clasificación 1 y 2 podrían
corresponder al mismo criterio, pues no es posible diferenciar el micelio de las hifas en
este tipo de cultivos. Adicionalmente se pueden apreciar en la gráfica valores de 1,11,
0,78 y 1,56 para la calidad promedio de cada uno de los hongos, lo que lleva a cuestionar
cómo al ser un parámetro cualitativo, pudieron obtenerse estos valores con cifras
decimales.
El valor de R2 fue 0,2289, lo que muestra poca o ninguna correlación entre el micelio de
la superficie y la biodegradación del material. Los datos de los pesos obtenidos en cada
momento no fueron reportados en el estudio, por lo que no es claro cómo se
construyeron las gráficas en las que se reportan los resultados de este criterio.
Es importante resaltar que en el estudio se obtuvieron resultados positivos para las tres
especies y los tres sustratos, sin embargo, para que esta práctica pueda aplicarse en el
tratamiento de las CC, sea sostenible y permita mitigar los impactos sociales y
ambientales de este residuo, en futuras aplicaciones se requiere de la obtención de
datos, de la optimización de procedimientos y el análisis de resultados más rigurosos que
permitan validar y reproducir las metodologías utilizadas en el proceso.
En consecuencia, teniendo en cuenta que los anteriores fueron los únicos trabajos
encontrados en la revisión bibliográfica y que no tienen la rigurosidad científica requerida,
se propone un capítulo adicional en el que se busca establecer una base experimental, a
escala de laboratorio, que permita evaluar si las CC pueden utilizarse como sustrato para
el crecimiento de P. ostreatus empleando la fermentación en estado superficial in vitro y
abrir la puerta a trabajos de investigación posteriores. Siendo este, el primer trabajo en el
uso de que aportan resultados para la aplicación de la micorremediación sobre colillas de
cigarrillo. A continuación se describirá la parte experimental de la propuesta.
4. Parte Experimental
4.1 Metodología
Para obtener los medios MCS y MC2, las colillas (filtro, cenizas, tabaco y papel), fueron
procesadas en una licuadora con el objetivo de reducir el tamaño de partícula, tenerlo
más homogéneo y facilitar el crecimiento del hongo. Como se muestra en la figura 4-1b),
las colillas fueron almacenadas en bolsas de plástico para su posterior utilización.
Se colocaron 400 mL de agua sobre una estufa de calentamiento con agitación continua,
se adicionó la mezcla del medio de cultivo y se calentó por 15 minutos a una temperatura
de 90°C. Posteriormente se esterilizó durante un tiempo de 40 minutos, se dejó enfriar
por 30 minutos y se sirvieron las cajas de Petri que posteriormente fueron inoculadas con
discos de 0,5 cm de diámetro con micelio crecido en PDA y CMC. Los cultivos se
realizaron por duplicado y fueron incubados a 26°C, en la oscuridad por
aproximadamente 15 días, después de los cuales se evaluó cualitativamente el
crecimiento del micelio.
Capítulo 4 65
La fase de cultivo in vitro se llevó a cabo transfiriendo los inóculos provenientes de PDA a
dos cajas con MCS, medio estandarizado en el grupo de investigación de Química de
Hongos Macromicetos y en el que generalmente se cambia el tipo de fuente de carbono y
nitrógeno (para este caso son las colillas de cigarrillo), siempre conservando los 30 g/L
(Chegwin & Nieto 2014). Este ensayo de exploración se realizó con el fin de determinar si
la cepa del hongo empleado, podía crecer o no sobre un medio de cultivo con colillas de
cigarrillo como principal fuente de carbono. Se realizó un seguimiento diario para evaluar
si el hongo se adaptaba a este nuevo medio y de manera cualitativa se determinó si
había o no crecimiento de micelio.
Como se muestra en la figura 4-2 en una de las cajas se desarrolló otro organismo en la
parte superficial del medio de cultivo al cuarto día de inoculación, invadiendo por
completo el sustrato e impidiendo el crecimiento del micelio del Pleurotus. Esta caja se
retiró de inmediato de incubación y se dejó la segunda para realizar el seguimiento.
66 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos del cigarrillo
a b
Con el fin de hacer un acercamiento preliminar al tipo de organismo que invadió la caja
número 1, se tomó un trozo de la parte superficial del medio y se realizó un montaje en
un portaobjetos empleando tinción de Gram, con lo que se pudo establecer que el
contaminante era una bacteria Gram positiva con forma de bacilo alongado (Figura 4-3).
Con respecto a la caja número 2, que continuó en incubación, se observó que a los 15
días hubo crecimiento del micelio con una baja densidad y llenado casi total, sin la
presencia de otros organismos. No obstante al comparar el crecimiento micelial con otros
medios que ya se han empleado en el grupo con la misma cepa, se evidenció que el
desarrollo del organismo era débil y seguramente al intentar extrapolar estas condiciones
a un cultivo en bloques o a una fermentación a mayor escala, el hongo no sobreviviría a
dichas condiciones.
Capítulo 4 67
Teniendo en cuenta que las CC al ser un sustrato bastante complejo por su procedencia
y composición, se tomó la determinación de prolongar el tiempo de esterilización del
medio para evitar posibles problemas de contaminación en ensayos futuros y favorecer la
biodegradación del desecho. Se modificó el tiempo de esterilización, de 40 a 60 y por
último a 90 minutos, siendo este último el tiempo ideal en el que no se contaminó
ninguna de las cajas. En adelante, se implementó el uso de cajas para control ambiental
(abierta durante el proceso de inoculación) y control de esterilidad del medio de cultivo.
De igual manera se concluyó que la inoculación debía hacerse con todas las medidas de
seguridad y asepsia necesarias para manejar un residuo peligroso logrando las
condiciones estériles requeridas para facilitar el crecimiento del macromiceto.
a b
68 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos del cigarrillo
Se transfirió entonces un inóculo de la cepa original al medio con CMC y se incubó hasta
el llenado total de la caja, en comparación con el tiempo de crecimiento en PDA, el
crecimiento sobre este sustrato tardó 5 días más (total de 20 días), lo que indica que el
hongo tuvo que tomar un tiempo más prolongado para activar las enzimas necesarias
para usar este sustrato como fuente de carbono y energía y adaptarse a las nuevas
condiciones.
Con respecto a la densidad del micelio desarrollado, ésta fue mayor en PDA,
probablemente porque es el medio sobre el cual ya está acostumbrado a crecer. Sobre
CMC, la densidad micelial fue menor, sin embargo se obtuvo el llenado completo de la
caja (figura 4-5).
a b
Figura 4-6: Crecimiento de P. ostreatus activado en CMC sobre MC1 después de 4 días
de cultivo
Con miras a hacer de esta, una metodología aplicable a mayor escala para su potencial
uso en biorremediación, así como para reducir los costos de operación, se hizo una
última modificación al ensayo. Se preparó el MC 2, en donde se usaron las colillas de
cigarrillo completas y se inocularon con O1 activado en CMC. Como se observa en la
figura 4-7, el hongo desarrolló micelio sobre las CC, de hecho con un mejor rendimiento
para la cepa activada en CMC que en PDA, que también se realizó para utilizar como
punto de comparación.
70 Procesos de biorremediación en el tratamiento de residuos sólidos del cigarrillo
Figura 4-7: Crecimiento del P. ostreatus sobre colillas de cigarrillo sin procesamiento
(MC2) previamente activado en a) PDA y b) CMC.
a b
Los resultados para este ensayo preliminar, fueron bastante positivos, logrando
estandarizar una técnica fácil y rápida que permitió determinar el uso eficiente de las
colillas de cigarrillo, con un procesamiento mínimo y su empleo como único componente
del sustrato para el crecimiento in vitro de una cepa comercial de P. ostreatus, en un
tiempo que se encuentra dentro de lo esperado para este tipo de procesos.
5. Conclusiones y recomendaciones
5.1 Conclusiones
La información relacionada con la aplicación de los procesos de biorremediación sobre
matrices sólidas es muy completa sin embargo, para el caso específico de su utilización
en colillas de cigarrillo es poca, y más escasa particularmente la relacionada con
micorremediación.
5.2 Recomendaciones
Con la base propuesta en el presente trabajo, se abre la ventana a un gran número de
trabajos que pueda dar respuesta a las siguientes preguntas:
¿Es posible emplear las colillas de cigarrillo como sustrato para obtener fructificaciones
del P. ostreatus? En caso de ser así, ¿Cuál será el efecto sobre la comestibilidad de las
fructificaciones obtenidas?
¿Los hongos tienen la capacidad de incorporar y/o degradar las sustancias que están
contenidas en las colillas de cigarrillo?
Dentro de los mecanismos conocidos para la degradación de diferentes contaminantes,
¿Cuál es el empleado por los hongos para incorporar y/o degradar las sustancias
presentes en las colillas del cigarrillo?
¿Qué sucede con la colilla de cigarrillo cuando se ha alcanzado la fructificación del
hongo?
El proceso de biorremediación de las colillas se podría mejorar empleando estrategias
como la bioaumentación o la bioestimulación?
En cuanto a la atenuación natural de este tipo de residuos, empleando estudios de
ecología microbiana, es factible determinar qué organismos forman parte del proceso de
degradación?
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