GUÍA No 7: SEPARACIÓN DE AMINOACIDOS POR CROMATOGRAFÍA EN PLACA FINA

INFORME NOTA: 3.5/5.0

Nombres: David Alejandro Mendez Torres , Jorge Andres Forero, Heidy Daniela Pinilla

1. Determine la cantidad de aminoácidos diferentes que encontró por cromatografía en la

muestra problema y en muestra de espinaca, naranja y mandarina.

Solo se trabajó con extracto de naranja.

De acuerdo a la cromatografía se encontraron 16 aminoácidos

1. Acido aspártico 10. Metionina

2. Glicina 11. Treonina
3. Leucina 12. Alanina
4. Tirosina 13. Prolina
5. Valina 14. Fenilalanalina
6. Histidina 15. Arginina
7. Ácido glutámico 16. cistina
8. Triptófano
9. Lisina

2. Calcule los valores de Rf de todas las señales obtenidas de los patrones y las muestras.
Compare los valores de Rf de las señales obtenidas en la muestra problema y la espinaca,
mandarina o naranja, con los correspondientes patrones e identifique hasta donde sea
posible los componentes de cada muestra.

Aminoácido Distancia al centro valor de RF Distancia alcanzada

de la mancha (cm) por el solvente
Tirosina 1.9 0.2638 7.2
Valina 3.6 0.5 7.2
Fenilalanina 4.4 0.61 7.2
Lisina 1.2 0.16 7.2
Metionina 3.7 0.5138 7.2
Glicina 1.5 0.2083 7.2
Triptofano 4.1 0.5694 7.2
Treonina 2.0 0.27 7.2
Serina 1.4 0.186 7.5
Arginina 1.4 0.186 7.5
Acido glutámico 1.9 0.253 7.5
Prolina 2.5 0.3 7.5
Leucina 4.5 0.6 7.5
Acido aspártico 0.9 0.12 7.5
Isoleucina 4.4 0.596 7.5
Histidina 1.1 0.146 7.5
Alanina 2.2 0.293 7.5
 Muestra problema(naranja) Distancia al centro valor de RF Distancia
de la mancha (cm) alcanzada por el
solvente
1 0.9 0.125 7.2
2 1.3 0.1805 7.2
3 1.8 0.25 7.2
4 2.1 0.2916 7.2
5 2.6 0.361 7.2
6 3.6 0.5 7.2
7 4.6 0.638 7.2
R// De acuerdo a los RF en la muestra problema (extracto de naranja) podemos llegar a afirmar
que siguientes aminoácidos se encuentran en la muestra son:

Haciendo una comparación de los RF encontrados en la muestra problema con los patrones
trabajados de los aminoácidos esenciales, podemos dar una hipótesis de que aminoácido
puede llegar a ser cada uno de los puntos de la muestra de naranja.

Punto de la muestra problema Aminoácido(s) más aproximado

1 Ácido Aspártico
2 Serina o Arginina
3 Tirosina
4 Alanina
5 Prolina
6 Valina
7 Fenilalalina

3. Consulte en la literatura, los valores de Rf para sistemas cromatográficos similares (fase

estacionaria y fase móvil similar) y analice qué tan válida es la comparación con los valores
por usted obtenidos.
R//Según los datos de la literatura podemos decir que aunque algunos datos de la literatura
están algo desfasados esto se puede deber a que la fase móvil de nuestro sistema lleva en
mayor proporción butanol, acetona y agua, en comparación a los sistemas consultados.

4. Realice y explique la reacción de la ninhidrina CON UNO DE LOS AMINOÁCIDOS

IDENTIFICADOS EN LA MUESTRA PROBLEMA.

REACCION DE AMINOACIDO (GLICINA) CON NINHIDRINA

Explicación:

En un primer momento la glicina (aminoácido) se oxida, descarboxilandose y liberando

amoniaco; mientras que la ninhidrina se reduce a Hindrina.

En un segundo momento la Hindrina y el equivalente de ninhidrina, reaccionan con el

amoniaco, formando un complejo color purpura, conocido como purpura de Rohemann.

5. Realice las estructuras de todos los aminoácidos usados en la práctica, analice las
estructuras y establezca cuál fue el orden de migración, es decir ¿cuáles aminoácidos
migraron más, los más polares o los menos polares y por qué cree usted que fue así de
acuerdo con las condiciones de la cromatografía en cuanto a polaridad de la fase
estacionaria y móvil?

Aminoácido Estructura polaridad

Acido glutámico
(glu) acido

Acido aspártico acido

(asp)

Glicina
(gly) no polar

Leucina
(leu) no polar

Cistina polar
(cys)

Tirosina polar
(tyr)
 Valina no polar
(val)

Isoleucina no polar
(lle)

Histidina
(his) base

Triptófano
(trp o w) no polar

Lisina base
(lys)
Metionina no polar
(met)

Fenilalanina
(phe) no polar

Prolina no polar
(pro)

Arginina base
(arg)

Alanina
(ala) no polar

Treonina no polar

(thr)
 polar
Asparginina
(asn)

Entre más polar sea un compuesto, más fuertemente se adsorbe en la fase estacionaria, por lo
que su migración a lo largo de ella es menor, siendo diluido (arrastrado) más lentamente por la
fase móvil, que los compuestos menos polares. De este modo, la separación selectiva de los
componentes de una muestra, por cromatografía, se debe a las diferencias en la migración de
los componentes individuales a lo largo de la fase estacionaria. Como en este caso lo más
polares y con menos migración fueron: lisina, arginina, ácido aspártico, histidina, ácido
glutámico.

BIBLIOGRAFIA

Información recuperada de:

 https://books.google.com.co/books?id=htRP2dHJkXgC&pg=PA344&lpg=PA344&dq=val
ores+de+rf+de+aminoacidos&source=bl&ots=zoNpV574sX&sig=8O-
QoZj3iKNGgjKd1yKzH3chlIc&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwiqkNOumKPJAhVG5SYKHVBpB
wAQ6AEILDAG#v=onepage&q=valores%20de%20rf%20de%20aminoacidos&f=false
 http://s268.photobucket.com/user/angel_of_silence88/media/Paso1.jpg.html
 http://s268.photobucket.com/user/angel_of_silence88/media/Paso2.jpg.html